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    蘇子降氣湯調(diào)控MAPK信號通路改善COPD患者炎癥狀態(tài)的研究

    2024-12-03 00:00:00葉旭星馬雙雙盛琳陳慧王曉波
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2024年32期

    [摘要]目的旨在探討蘇子降氣湯通過調(diào)控絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)信號通路對慢性阻塞性肺疾?。╟hronicobstructivepulmonarydisease,COPD)患者炎癥狀態(tài)的影響。方法選取2023年4月至2024年4月在浙江省金華市中心醫(yī)院傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中心及呼吸內(nèi)科門診治療的COPD穩(wěn)定期E組患者70例,采用隨機數(shù)字表法分為觀察組和對照組,每組35例。對照組接受噻托溴銨粉霧劑聯(lián)合布地奈德福莫特羅粉吸入治療,觀察組在對照組基礎(chǔ)上加用中藥蘇子降氣湯治療。治療12周后,通過肺功能檢查、氣道黏液高分泌評價,白細胞介素(interleukin,IL)-17、IL-6、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)-α水平測定,CT定量參數(shù),痰中IL-17、p38MAPK、核因子κB(nuclearfactorkappa-B,NF-κB)及C-X-C基序趨化因子配體8(C-X-Cmotifchemokineligand8,CXCL8)的mRNA表達水平檢測來評估療效。結(jié)果治療后兩組患者的肺功能指標(biāo)第一秒用力呼氣容積與用力肺活量的比值、咳嗽評分、咯痰難度評分、痰液性狀評分及痰量評分均顯著改善,觀察組改善更明顯(P<0.05)。治療后兩組血清IL-17、IL-6、TNF-α水平均下降,觀察組下降更明顯(P<0.05)。治療后觀察組肺CT定量參數(shù)肺葉低衰減區(qū)占肺體積的百分比、肺氣腫指數(shù)均明顯下降(P<0.05)。觀察組治療后痰中IL-17、p38MAPK、NF-κB及CXCL8mRNA表達水平也顯著降低(P<0.05)。結(jié)論蘇子降氣湯可通過調(diào)節(jié)IL-17介導(dǎo)的MAPK信號通路改善COPD患者的肺功能及炎癥狀態(tài),對COPD的治療有積極療效。

    [關(guān)鍵詞]慢性阻塞性肺疾病;細胞因子;絲裂原活化蛋白激酶

    [中圖分類號]R256.14;R563[文獻標(biāo)識碼]A[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.32.018

    ResearchontheregulationoftheMAPKsignalingpathwaybySuziJiangqidecoctiontoimprovetheinflammatorystateofCOPDpatients

    YEXuxing1,MAShuangshuang2,SHENGLin3,CHENHui3,WANGXiaobo4

    1.DepartmentofTraditionalChineseMedicine,AffiliatedJinhuaHospital,SchoolofMedicineZhejiangUniversity,Jinhua321000,&nbsp;Zhejiang,China;2.HemodialysisCenter,AffiliatedJinhuaHospital,SchoolofMedicineZhejiangUniversity,Jinhua321000,Zhejiang,China;3.DepartmentofRespiratory,AffiliatedJinhuaHospital,SchoolofMedicineZhejiangUniversity,Jinhua321000,Zhejiang,China;4.theFourthSchoolofClinicalMedicine,ZhejiangChineseMedicalUniversity,Hangzhou310000,Zhejiang,China

    [Abstract]ObjectiveToexploretheimpactofSuziJiangqidecoction(SJD)ontheinflammatorystateofpatientswithchronicobstructivepulmonarydisease(COPD)throughtheregulationofthemitogen-activatedproteinkinase(MAPK)signalingpathway.MethodsAtotalof70patientswithstableCOPD,treatedfromApril2023toApril2024attheDepartmentofTraditionalChineseMedicineandDepartmentofRespiratory37a99665ee9157cdd7250f97bab42148outpatientclinicofAffiliatedJinhuaHospital,SchoolofMedicineZhejiangUniversitywereselectedandrandomlydividedintoobservationgroupandcontrolgroup,with35casesineachgroup.Thecontrolgroupreceivedtiotropiumbromidepowderinhalationcombinedwithbudesonide/formoterolpowderinhalationtreatment,whiletheobservationgroupwasgivenSJDinadditiontotreatmentofcontrolgroup.After12weeksoftreatment,thetherapeuticeffectswereevaluatedbyassessinglungfunction,airwaymucushypersecretion,levelsofinterleukin(IL)-17,IL-6,andtumornecrosisfactor(TNF)-α,CTquantitativeparametersofthelung,aswellastheexpressionlevelsofIL-17,p38MAPK,nuclearfactorkappa-B(NF-κB)andC-X-Cmotifchemokineligand8(CXCL8)mRNAinsputum.ResultsFollowingtreatment,therewasasignificantimprovementinlungfunctionindicatorssuchasfirstsecondexpiratoryvolume/forcedvitalcapacity%,coughscore,sputumdifficultyscore,sputumqualityscore,andsputumvolumescoreforpatientsinbothgroups,withmorepronouncedimprovementsobservedinobservationgroup(P<0.05).ThelevelsofserumcytokinesIL-17,IL-6andTNF-αdecreasedinbothgroupsaftertreatment,withobservationgroupshowingamoresignificantreduction(P<0.05).Additionally,thepercentageratiooflowattenuationareatolungarea(LAA%),emphysemaindexoflungCTinobservationgroupsignificantlydecreasedaftertreatment(P<0.05).Similarly,theexpressionlevelsofIL-17,p38MAPK,NF-κBandCXCL8mRNAinsputumwerealsosignificantlyreducedaftertreatmentinobservationgroup(P<0.05).ConclusionSJDmayimprovelungfunctionandinflammatorystatusinCOPDpatientsbyregulatingtheMAPKsignalingpathwaymediatedbyIL-17,demonstratingapositivetherapeuticeffectonthetreatmentofCOPD.

    [Keywords]Chronicobstructivepulmonarydisease;Cytokines;Mitogen-activatedproteinkinase

    慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD)是一種慢性炎癥性氣道疾病,其特征表現(xiàn)為持續(xù)的氣流受限,發(fā)病機制涉及多種炎癥細胞和介質(zhì)。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)信號通路在COPD炎癥反應(yīng)中扮演關(guān)鍵角色。目前,普遍認為白細胞介素(interleukin,IL)-17可激活MAPK信號通路,并通過一系列級聯(lián)反應(yīng),將細胞膜表面受體接收的信號放大并傳遞至細胞核,進而調(diào)控炎癥因子、細胞因子和黏附分子的表達,參與氣道炎癥反應(yīng)[1]。特別是p38MAPK參與炎癥反應(yīng)和細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),在COPD發(fā)病機制中尤為關(guān)鍵[2]。研究表明在COPD患者的肺組織中,p38MAPK的磷酸化水平顯著升高,且與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[3]。此外,p38MAPK還能激活下游核因子κB(nuclearfactorkappa-B,NF-κB)及C-X-C基序趨化因子配體8(C-X-Cmotifchemokineligand8,CXCL8),從而促進腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)-α、IL-6等炎癥因子的轉(zhuǎn)錄[4]。抑制p38MAPK信號通路可顯著降低COPD小鼠模型肺組織中的炎癥細胞浸潤和炎癥因子表達,緩解氣道炎癥和氣流受限[5]。鑒于此,MAPK信號通路已成為COPD藥物研發(fā)的潛在靶點。

    中藥復(fù)方蘇子降氣湯,以其降氣平喘、祛痰止咳之效著稱,在COPD治療中得到廣泛應(yīng)用[6]。研究表明蘇子降氣湯可調(diào)節(jié)輔助性T細胞17(Thelpercell17,Th17)/調(diào)節(jié)性T細胞(regulatoryTcells,Treg)的平衡,抑制COPD大鼠模型肺組織中的IL-6、IL-17表達,從而減輕炎癥反應(yīng),但其具體的作用機制尚未完全明確[7]。本研究旨在通過分析蘇子降氣湯對MAPK信號通路相關(guān)炎癥因子及mRNA表達的影響,探討其改善COPD炎癥狀態(tài)的分子機制,旨在為中醫(yī)藥防治COPD提供實驗依據(jù)。

    1對象與方法

    1.1研究對象

    選取2023年4月至2024年4月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金華醫(yī)院傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中心及呼吸內(nèi)科門診治療的COPD穩(wěn)定期E組(≥2次中度急性加重或1次導(dǎo)致入院的急性加重)患者70例。采用隨機數(shù)字表法將其分為觀察組與對照組,每組35例。兩組患者在年齡、性別、病程、吸煙史、肺功能指標(biāo)及伴隨的基礎(chǔ)疾病(包括高血壓、糖尿病、冠心?。┑确矫娌町悷o統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性,見表1。西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn):參照《2023版慢性阻塞性肺疾病全球倡議》[8]中關(guān)于COPD穩(wěn)定期綜合評估分組標(biāo)準(zhǔn)E組的分組標(biāo)準(zhǔn)。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn):依據(jù)《慢性阻塞性肺疾病中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)(2011版)》[9]符合肺脹上實下虛(痰濁阻肺兼有腎氣虧虛)的臨床表現(xiàn):痰涎壅盛,胸膈滿悶,喘咳短氣,呼多吸少,或腰疼腳弱、肢體倦怠,或肢體浮腫,舌苔白滑或白膩,脈弦滑。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合中、西醫(yī)診斷及辨證標(biāo)準(zhǔn);②年齡40~80歲;③未合并其他氣流阻塞性疾病;④無蘇子降氣湯使用禁忌者;⑤患者自愿接受治療并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有氣流受限的其他因素;②患有重度心腦血管疾病、重度神經(jīng)及精神類疾病、重度肝功能不全及腎功能不全的患者;③依從性差的患者。所有患者均簽署知情同意書,本研究經(jīng)浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金華醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)[倫理審批號:(研)2022-倫理審查-62]。

    1.2研究方法

    對照組給予噻托溴銨粉霧劑(批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字H20060454,生產(chǎn)單位:江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司,規(guī)格:18μg/粒)吸入,1粒/次,1次/d,聯(lián)合布地奈德福莫特羅粉吸入劑(批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字H20160447,生產(chǎn)單位:AstraZenecaAB公司,規(guī)格:320μg),2吸/次,2次/d。觀察組患者在對照組治療方案的基礎(chǔ)上,給予口服蘇子降氣湯。組方:蘇子9g、制半夏9g、當(dāng)歸12g、前胡9g、肉桂3g、厚樸10g、生甘草6g。每日1劑,水煎400ml,分早晚兩次溫服。療程均為12周。

    1.3療效評判

    1.3.1肺功能評估治療前后受試者均實施標(biāo)準(zhǔn)化的肺功能評估,其中包括對第1秒用力呼氣容積(firstsecondexpiratoryvolume,F(xiàn)EV1)與用力肺活量(forcedvitalcapacity,F(xiàn)VC)比值的測定,即FEV1/FVC百分比評估治療效果。

    1.3.2氣道黏液高分泌評價采用咳嗽和咯痰評估問卷(coughandsputumassessmentquestionnaire,CASA-Q)作為評估氣道黏液高分泌的工具。評估指標(biāo)包括咳嗽頻率、咯痰難度、晝夜痰量及痰液性狀,每項指標(biāo)均根據(jù)其嚴(yán)重程度細分為4個等級。具體分級標(biāo)準(zhǔn):①咳嗽評分按咳嗽頻率分為無咳嗽、間歇性輕咳、中等程度咳嗽及晝夜頻繁或劇烈咳嗽;②咯痰難度分為無痰、易咳出、較難咳出及難以咳出;③痰量評分按24h痰量多少分為<10ml、10~50ml、51~100ml及>100ml;④痰液性狀評分根據(jù)痰液的純凈度和膿性成分,分為純凈透明非膿性痰、少許膿性透明痰、膿性成分<2/3的黏痰及膿性成分≥2/3的黏痰。各項指標(biāo)分別賦予0、2、4、6分的評分,累計得分越高,表明患者的氣道黏液高分泌癥狀越嚴(yán)重。

    1.3.3血清IL-17、IL-6、TNF-α檢測兩組患者分別在治療前后進行空腹肘靜脈血液樣本的采集,每次采集量為5ml。采集后的血液樣本在4℃條件下進行離心處理,3000轉(zhuǎn)/min,離心半徑13.5cm,10min,分離出血清。分離得到的血清樣本儲存于–80℃的低溫環(huán)境中,以備后續(xù)分析使用。分析時采用酶聯(lián)免疫吸附測定法,對每份血清樣本中的IL-17、IL-6、TNF-α水平進行定量測定。

    1.3.4COPD肺CT定量參數(shù)評估所有病例在治療前和治療后均進行肺CT掃描評估肺部狀況。采用CT圖像分析軟件,對掃描結(jié)果進行分析并記錄以下CT定量參數(shù):肺葉低衰減區(qū)占肺體積的百分比(thepercentageratiooflowattenuationareatolungarea,LAA%)、肺氣腫指數(shù)(emphysemaIndex,EI)及空氣潴留指數(shù)(airtrappingindex,ATI)。

    1.3.5痰中IL-17、p38MAPK、NF-κB及CXCL8mRNA表達檢測在治療前及治療12周后,患者被指導(dǎo)在晨起時使用清水漱口,盡量避免口腔微生物的污染。隨后用力咳出肺部深處的第一口痰液。采集到的痰液樣本以2000~3000轉(zhuǎn)/min的速度離心20min,分離、提取上清液。離心完成后,上清液被小心收集并轉(zhuǎn)移到新的無菌管中。最后將樣本儲存在–80℃的低溫環(huán)境中保存以備后續(xù)分析使用。檢索美國國家生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI)的基因組數(shù)據(jù)庫,應(yīng)用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計各聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)引物。使用Trizol方法提取mRNA,采用RT-PCR法檢測痰液中IL-17、p38MAPK、NF-κB及CXCL8的mRNA表達,以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)作為內(nèi)參基因。IL-17、p38MAPK、NF-κB、CXCL8及GAPDH引物設(shè)計,見表2。

    1.4統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料以例數(shù)(百分率)[n(%)]表示,組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1兩組患者治療前后的肺功能及氣道黏液高分泌指標(biāo)比較

    治療后兩組患者的肺功能指標(biāo)FEV1/FVC%、氣道黏液高分泌各項指標(biāo)均較治療前有顯著改善,且觀察組改善更明顯(P<0.05),見表3。

    2.2兩組患者的血清IL-17、IL-6、TNF-α水平比較

    治療后兩組患者的血清IL-17、IL-6、TNF-α水平均下降,且觀察組下降更明顯(P<0.05),見表4。

    2.3兩組患者的定量CT參數(shù)比較

    治療后觀察組患者的肺CT參數(shù)LAA%、EI均較治療前下降(P<0.05),見表5。

    2.5兩組患者痰中IL-17、p38MAPK、NF-κB及CXCL8mRNA表達水平比較

    治療后觀察組患者的痰中IL-17、p38MAPK、NF-κB及CXCL8mRNA表達水平均明顯下降(P<0.05),見圖1。

    3討論

    IL-17介導(dǎo)的MAPK信號通路在COPD的發(fā)病機制中扮演著關(guān)鍵角色[10]。研究表明,COPD患者支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中促炎細胞因子IL-17的水平顯著升高[11]。Jiang等[12]通過免疫組化染色技術(shù)發(fā)現(xiàn)COPD患者肺組織中IL-17A的表達顯著增加。Higham等[13]研究證實COPD患者肺組織活化的p38MAPK增加,促使炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展。IL-17介導(dǎo)的MAPK信號通路可能是COPD治療的潛在靶點,主要依據(jù)包括:①IL-17中和抗體能顯著減少COPD模型小鼠BALF中的白細胞計數(shù)[14];②選擇性p38MAPK抑制劑可有效抑制COPD模型小鼠肺部的炎癥反應(yīng)[15];③p38MAPK抑制劑可減少COPD患者BALF中巨噬細胞和外周血單個核細胞的細胞因子釋放[16];④Ⅱ期臨床試驗表明,口服p38MAPK抑制劑PH-797804可改善中、重度COPD患者的肺功能[17];⑤選擇性抑制MAPK靶點可減輕肺纖維化反應(yīng)[18]。由此可見,針對該通路相關(guān)抑制劑的新療法研究目前仍處于探索階段。噻托溴銨聯(lián)合布地奈德福莫特羅吸入治療是廣泛用于COPD穩(wěn)定期E組的治療方案。對COPD穩(wěn)定期E組患者推薦長效抗膽堿能藥物、長效β2腎上腺素受體激動劑和吸入性糖皮質(zhì)激素的組合治療可減少急性加重并降低住院率(證據(jù)等級A)[19]。尋找能更有效調(diào)節(jié)MAPK信號通路的中醫(yī)治療方法,提升COPD的治療效果,具有重要的臨床意義。

    本研究蘇子降氣湯能顯著改善COPD患者的肺功能、氣道黏液高分泌狀態(tài)及肺CT定量參數(shù)。蘇子降氣湯能明顯降低COPD患者血清中的IL-17、IL-6和TNF-α水平,能明顯降低痰中IL-17、p38MAPK及下游因子NF-κB、CXCL8mRNA的表達水平,從而證實其可能對IL-17介導(dǎo)的MAPK信號通路的調(diào)控作用。

    綜上所述,蘇子降氣湯可通過調(diào)節(jié)IL-17介導(dǎo)的MAPK信號通路,改善COPD患者炎癥及氣道高分泌狀態(tài)。然而,本研究存在一定的局限性。首先,由于樣本量較小,可能存在一定的偏差。其次,本研究未對患者進行長期隨訪,因此無法評估蘇子降氣湯對COPD患者長期預(yù)后的影響。未來的研究應(yīng)擴大樣本量、延長隨訪時間,以更全面地評估蘇子降氣湯治療COPD的遠期療效和安全性。深入探討蘇子降氣湯調(diào)節(jié)IL-17介導(dǎo)的MAPK信號通路的具體機制,將為中醫(yī)藥治療COPD提供更多的理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)。

    利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。

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