微囊藻毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展*

崔萌萌，馬康，何雅娟，楊蘭

（1.中國計(jì)量科學(xué)研究院，化學(xué)計(jì)量與分析科學(xué)研究所，北京 100013； 2.北京化工大學(xué)化工資源有效利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100029）

藍(lán)藻是現(xiàn)存研究發(fā)現(xiàn)的毒性最高、污染范圍最大的淡水藻類之一。水體中的藍(lán)藻在非常短的時(shí)間內(nèi)大量生長并聚集就會(huì)產(chǎn)生一種異常生態(tài)現(xiàn)象，稱為水華。藻類生長繁殖速度會(huì)在水體富營養(yǎng)化的情況下異常加快，水華在這種情況下就會(huì)爆發(fā)，這已經(jīng)成為了一個(gè)全球性的問題［1］。有關(guān)組織通過數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，亞州地區(qū)和歐洲地區(qū)湖泊富營養(yǎng)化已經(jīng)超過了50%，北美洲和南美洲略微低點(diǎn)，分別是48%和41%，我國則高達(dá)67%［2］。近年來，我國幾大淡水湖泊都發(fā)生過藍(lán)藻水華大量爆發(fā)的情況。雖然藻類植物釋放到天然水體中的藻毒素含量非常低，但由于藻類水華非常嚴(yán)重而且范圍較廣，使水體中的藻毒素的含量呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，從而危及人們的飲水安全和健康。藍(lán)藻中最典型的毒素就是微囊藻毒素（MC），它是一類肝毒素，它們的結(jié)構(gòu)是由7個(gè)氨基酸組成的環(huán)狀多肽［3］，結(jié)構(gòu)通式：環(huán)-（D-丙氨酸-L-X-D-赤-甲基-β-D-異天冬氨酸-L-Z-Adda-D-異谷氨酸-N-甲基脫氫丙氨酸），包括3個(gè)右旋（D-）氨基酸、兩個(gè)可以改變的左旋（L-）氨基酸，其中N-甲基脫氫丙氨酸是一種含有α、β不飽和雙鍵的特殊的氨基酸；Adda結(jié)構(gòu)為3-氨基-9-甲氧基-2，6，8-三基酸-10-苯基-4（E），6（E）-二烯酸。

在MC中表達(dá)生理活性的必需基團(tuán)是Adda結(jié)構(gòu)，由于Adda部分含有共軛雙鍵，MC在某些條件下會(huì)轉(zhuǎn)化為［4（E），6（E）-Adda］MC和［4（Z），6（E）-Adda］MC兩種空間異構(gòu)體，［4（Z），6（Z）-Adda］MC還未見報(bào)道。研究者至今已發(fā)現(xiàn)了80多種MC的同分異構(gòu)體，其中存在普遍、毒性較強(qiáng)的是MC–LR，MC–RR，MC–YR，（L，R，Y—亮氨酸、精氨酸和酪氨酸）［4–5］，對(duì)它們的研究也較多。MC–LF和MC–LW分別含有苯丙氨酸和色氨酸。在MC同分異構(gòu)體的分子結(jié)構(gòu)中，Adda側(cè)鏈?zhǔn)荕C中毒性表達(dá)的重要基團(tuán)，失去Adda側(cè)鏈后MCs的毒性會(huì)降低［6］。MC中常見的具有代表性的異構(gòu)體分子結(jié)構(gòu)如圖1所示。

對(duì)比圖1中MC同分異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)可以看出雖然它們的結(jié)構(gòu)大體相同，但卻存在著明顯的區(qū)別，因而物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)都會(huì)存在較大的區(qū)別，分離時(shí)難度較大。

MC是具有非常強(qiáng)烈毒性的肝毒素，同樣具有促癌作用，很少的量就會(huì)對(duì)人和生物體的安全構(gòu)成威脅。其化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定，在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和高溫條件下都不易分解，而且其具有強(qiáng)致毒性，又因其分布較廣，故其危害性不容忽視。醫(yī)學(xué)研究顯示，我國江蘇和廣西很多地區(qū)的居民由于長期飲用含微量MC的飲用水而導(dǎo)致肝癌發(fā)病率較高。

人們對(duì)MC–LR和總MC限量分別為0.32 μg／L和0.88 μg／L（以成年人為標(biāo)準(zhǔn)）。因?yàn)镸C–LR在MC中的毒性是最大的，而且促腫瘤作用也非常明顯，其它的藻毒素可能不具有較強(qiáng)的代表性，所以目前人們大多都以MC–LR作為代表用于飲用水中藻毒素含量的限制。世界衛(wèi)生組織認(rèn)定飲用水中藻毒素的標(biāo)準(zhǔn)限值為1.0 μg／L（以MC–LR為代表），國家環(huán)境保護(hù)總局近期頒布的《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)》（GB 3838–2002）中就指出：“居民集中式生活飲用水和地表水源地中MC以MC–LR代表的限值為1.0 μg／L”。

對(duì)MC的分離和檢測(cè)方法的研究之前已經(jīng)有許多報(bào)道。目前普遍采用的方法可以將其歸納為化學(xué)分析法、生物法和生物化學(xué)法［7］等。

1 化學(xué)分析檢測(cè)法

化學(xué)分析檢測(cè)法主要有高效液相色譜（HPLC）、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC–MS）、薄層層析色譜（TLC）［8］、氣相色譜［9］串聯(lián)質(zhì)譜（GC–MS）聯(lián)用、毛細(xì)管電泳（CE）［10］等方法。

1.1 高效液相色譜法

在化學(xué)檢測(cè)方法中目前使用最為普遍是HPLC法［11–12］。目前，WHO、美歐等工業(yè)發(fā)達(dá)國家和地區(qū)以及我國權(quán)威機(jī)構(gòu)多數(shù)推薦使用HPLC法對(duì)MC進(jìn)行檢測(cè)分析。該方法具有重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度和靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，且能同時(shí)對(duì)不同的MC同分異構(gòu)體進(jìn)行分析。目前研究報(bào)告中有很多關(guān)于HPLC檢測(cè)MC都集中在對(duì)樣品的前處理、色譜分析條件、淋洗劑、洗脫液、SPE柱、濃縮定容過程等的優(yōu)化處理上。

分離MC的固定相有很多種，其中有報(bào)道的包括反相C18柱、離子交換柱、酰胺C16柱、內(nèi)部界面反相柱、XAD–2等大孔吸附樹脂［13］等，研究中大多選用反相C18柱，此種色譜柱的優(yōu)點(diǎn)是其固定相穩(wěn)定、應(yīng)用廣泛、可在多種溶劑中使用，一般的C18柱pH范圍通常保持在2～8。在檢測(cè)MC的實(shí)驗(yàn)中，流動(dòng)相多采用甲酸或三氟乙酸酸化的水溶液和乙腈或甲醇的梯度洗脫，這可以使大多數(shù)MC分離。Esme［14］等在用HPLC檢測(cè)MC時(shí)就只采用甲醇作為流動(dòng)相的有機(jī)相，并對(duì)MC的一系列異構(gòu)體進(jìn)行了分離。房祥軍［15］等在檢測(cè)MC時(shí)發(fā)現(xiàn)在238 nm下甲醇的本體吸收值高于乙腈。但采用乙腈做流動(dòng)相時(shí)，分離藻毒素柱壓小，基線穩(wěn)定，峰形尖銳，分離效果明顯優(yōu)于甲醇–水流動(dòng)相。當(dāng)流動(dòng)相中加入一定量的三氟乙酸后，峰形較好，分離度提高。而且酸度越低，對(duì)色譜柱的保護(hù)越有利。通常高效液相色譜儀都連接有不同檢測(cè)器，其中使用最多的是紫外（UV）和光電二極管陣列檢測(cè)器（DAD）用紫外檢測(cè)器進(jìn)行高效液相色譜分析，能為定量定性提供有效的數(shù)據(jù)，成為鑒定MC的一種可行的方法。Christine等［16］用DAD檢測(cè)器對(duì)MC進(jìn)行純度檢測(cè)時(shí)，證實(shí)比用其它檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)得到的結(jié)果更精確。由于MC上特殊氨基酸Adda上的烯烴作為主要的發(fā)色團(tuán)，通常在238 nm處MC有最大吸收的特征光譜，在222 nm處產(chǎn)生最大吸收的色氨酸［17］。閆海等［18］在使用二級(jí)管紫外檢測(cè)器的液相色譜上進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)MC–LR和MC–RR在238 nm波長下吸收峰均最大。

MC在HPLC條件下的檢出限為1 mg／L，而MC在天然水體中含量僅為μg／L水平，故水樣一般都要進(jìn)行前處理，具體方法是通過富集柱進(jìn)行濃縮洗脫后用HPLC進(jìn)行測(cè)定。Lee［19］等用高效液相色譜方法檢測(cè)水樣中的MC–LR，MC–RR及MC–YR時(shí)，發(fā)明了一種可以改變柱效的新方法，在不需要對(duì)水樣進(jìn)行預(yù)凈化的情況下，將過濾后的水樣直接在Zorbax CN預(yù)置柱進(jìn)行在線濃縮，濃縮后的被分析物經(jīng)過反相洗脫，在Luna C18柱上分離，這種方法的分析速度、準(zhǔn)確度和精密度都非常好，通過將被測(cè)毒素的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)毒素的峰面積進(jìn)行比較可對(duì)MC定量。

HPLC分析檢測(cè)MC的缺點(diǎn)：需要大型貴重儀器，且檢測(cè)過程復(fù)雜耗時(shí)，檢測(cè)時(shí)需要MC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，目前已發(fā)現(xiàn)的80多種MC同分異構(gòu)體大多數(shù)缺乏標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，MC同系物的定量只能參照MC–LR。由于各實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)程序和條件的差異性，可能對(duì)MC分析測(cè)定對(duì)比分析產(chǎn)生一定的影響。

1.2 液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

高效液相色譜–質(zhì)譜法簡便、靈敏，廣泛用于監(jiān)測(cè)含有MC的環(huán)境樣品。液相色譜–質(zhì)譜技術(shù)具有良好的選擇性，該方法對(duì)含有多種藻類毒素的復(fù)雜樣品進(jìn)行分離和鑒定時(shí)可以使用。目前只有很少的藻毒素有相應(yīng)的毒素標(biāo)準(zhǔn)品，但當(dāng)被測(cè)毒素分子量已知時(shí)，就可通過準(zhǔn)確檢測(cè)出檢測(cè)物的結(jié)構(gòu)信息對(duì)其進(jìn)行定性分析，對(duì)毒素定量分析時(shí)可以達(dá)到更高的精度和準(zhǔn)確度［20］。此法的優(yōu)點(diǎn)是在質(zhì)譜檢測(cè)器上測(cè)定分子量和洗脫化合物，其檢測(cè)結(jié)果具有較好的特異性，不足之處是實(shí)驗(yàn)成本較高。之前在只用光電二極管陣列檢測(cè)器（PDA）下不能分辨得到不同多肽類藻毒素的情況下，現(xiàn)在運(yùn)用質(zhì)譜檢測(cè)器都可以區(qū)分開來，其結(jié)果如下：MC–LR，MC–YR，MC–RR的檢測(cè)下限分別為37，42，23 ng／L［21］。

虞銳鵬［22］等用水–甲酸–乙腈作為流動(dòng)相，采用液相色譜–電噴霧質(zhì)譜（HPLC–MS–ESI）法對(duì)水中的MC進(jìn)行測(cè)定，此方法的檢出限達(dá)到0.01 μg／L，線性定量范圍為0.02～20.0 μg／L。此種實(shí)驗(yàn)的研究可為水質(zhì)檢測(cè)領(lǐng)域提供快速、靈敏和準(zhǔn)確的分析方法。Werawan［23］等利用液相色譜–電噴霧質(zhì)譜檢測(cè)了MC–LR的含量。采用氨水–乙腈溶液在pH 9.7的條件下進(jìn)行線性洗脫，方法檢出限達(dá)到0.1 μg／mL。

張昱等［24］通過固相萃取法對(duì)MC進(jìn)行提取和富集，然后使用HPLC／ESI–MS測(cè)定水中的MC–RR，MC–YR和MC–LR，回收率接近90%，線性范圍達(dá)到3個(gè)數(shù)量級(jí)以上（0.5～500 ng／L）。王超［25］等建立了一種液相色譜–二極管陣列檢測(cè)器（LC–DAD）／離子阱質(zhì)譜（ITMS）對(duì)水中5種MC的分析方法。水中的MC經(jīng)固相萃取富集和純化，經(jīng)液相色譜分離后，采用DAD和ITMS定性分析和AD定量分析。水中5種MC的檢出限為0.1 μg／L，3個(gè)質(zhì)量濃度加標(biāo)水平（0.2，0.8，5 μg／L）的平均回收率為（52.2%～115.2%），相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～10.0%。該方法在進(jìn)行定性定量分析時(shí)可以多種角度同時(shí)進(jìn)行，并可對(duì)水中不同的MC進(jìn)行檢測(cè)。超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC–MS／MS）技術(shù)是近幾年來才發(fā)展起來的，此方法對(duì)分析速度的提高有很大的改善。王靜等［26］在檢測(cè)水體中MC–LR，MC–RR，MC–LW，MC–LF時(shí)，樣品經(jīng)SPE小柱后，UPLC–MS／MS進(jìn)行檢測(cè)，4種MCs的分離與檢測(cè)在5 min之內(nèi)就可完成。Ortelli等［27］運(yùn)用超高液相色譜–飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC–Q–TOF）測(cè)定了MC的含量，該方法簡便、快速、穩(wěn)定，樣品經(jīng)超聲波提取、過濾后無需任何純化步驟，直接進(jìn)儀器分析，而且檢測(cè)的靈敏度高，水中的MC檢出限為0.1 μg／L，微藻樣品中的MC檢出限達(dá)0.1～0.2 μg／g。茅海瓊等［28］發(fā)展了超高效液相色譜–電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜快速測(cè)定水中MC–LR的方法。水樣經(jīng)過前處理后，應(yīng)用超高效液相色譜–電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）對(duì)MC–LR進(jìn)行定量檢測(cè)，該方法靈敏度較高，快速簡單易于操作，有利于進(jìn)行寬濃度范圍準(zhǔn)確定量。張明［29］等研究固相萃取–超高效液相色譜–電噴霧串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析水中9種MC的方法。樣品經(jīng)SPE提取和凈化后，以UPLCTMBEH C18色譜柱為分離柱，以0.1%甲酸乙腈溶液作為有機(jī)流動(dòng)相和0.1%甲酸水溶液作為水相進(jìn)行梯度洗脫，采用正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行定性和定量分析。該方法能進(jìn)行快速分析，檢測(cè)范圍更廣，較之前靈敏、準(zhǔn)確。運(yùn)用上述實(shí)驗(yàn)方法分別對(duì)杭州市兩處水庫水樣中的MC進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示分別有3種和8種MC被檢測(cè)出來。

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)較好地解決了單純使用高效液相色譜儀檢測(cè)時(shí)的部分問題，其缺點(diǎn)是缺少各種MC的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，且實(shí)驗(yàn)成本較高。

1.3 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管區(qū)帶電泳、膠束電動(dòng)毛細(xì)管與紫外、熒光、質(zhì)譜檢測(cè)器串接也被用于微囊藻毒素的檢測(cè)，該方法具有自動(dòng)化、檢測(cè)樣品量多、用量少等優(yōu)點(diǎn),且此方法具有柱上富集的功能。同生物法相比，該方法自動(dòng)化程度更高，且在實(shí)驗(yàn)中不使用放射性物質(zhì)。但是其靈敏度沒有HPLC高，檢測(cè)下限僅為l mg／L［30］。應(yīng)用激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器可提高檢測(cè)靈敏度［31］，但是還需進(jìn)行進(jìn)一步的研究和探索。Siren等［32］在對(duì)藍(lán)藻肝毒素進(jìn)行分離、純化和鑒別時(shí)使用了毛細(xì)管電泳和電淋洗質(zhì)譜技術(shù)。首先利用HPLC方法把受試化合物進(jìn)行預(yù)分離，然后在膠束電動(dòng)色譜（MECC）方法下將這些受試物逐一分離，最后用離線電質(zhì)譜對(duì)分離后的微囊藻毒素進(jìn)行鑒別和高靈敏度純化驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得出MC的檢出限低于1 μg／L。此方法的特點(diǎn)是樣品用量小、分離效率高、分析時(shí)間短且柱上富集功能強(qiáng)。但由于重現(xiàn)性差，且缺少M(fèi)C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，所以目前毛細(xì)管電泳法還暫時(shí)不能作為水體檢測(cè)藻類毒素的常規(guī)手段。

1.4 氣相色譜法

GC–MS聯(lián)用技術(shù)主要用于MC總量測(cè)定，其檢出限可達(dá)到ng／L級(jí)。Tsuji［33］等發(fā)明了2-甲基-3-甲氨基-4-氨基鉻酸（MMPB）檢測(cè)方法，利用碘酸鈉和高錳酸鉀對(duì)提取后樣品進(jìn)行氧化的原理。MMPB是與MC共同氧化的中間產(chǎn)物，利用GC測(cè)定MMPB的含量即可間接獲得MC的總含量，該方法的缺點(diǎn)是只能測(cè)MC的總量，無法定量不同的MC異構(gòu)體。Harada等［34］實(shí)現(xiàn)了利用臭氧分解產(chǎn)生MMPB的方法，將存在于甲醇溶液中的藻細(xì)胞在–78℃的低溫條件下直接進(jìn)行臭氧分解，然后用氣相色譜–質(zhì)譜（GC–MS）進(jìn)行檢測(cè)，30 min內(nèi)完成整個(gè)檢測(cè)過程，其檢出限能達(dá)到ng／L級(jí)。GC–MS的優(yōu)點(diǎn)是能夠靈敏、快速、準(zhǔn)確地對(duì)痕量MC進(jìn)行定量，其缺點(diǎn)是儀器設(shè)備價(jià)格昂貴、不易普及，技術(shù)含量高，操作復(fù)雜，在缺少標(biāo)準(zhǔn)品的情況下不能對(duì)微囊藻毒素進(jìn)行定性定量，前處理過程也較為復(fù)雜，各實(shí)驗(yàn)室的條件和檢測(cè)程序千差萬別，對(duì)數(shù)據(jù)的分析和判斷都有影響?，F(xiàn)階段的研究顯示，在高靈敏度下進(jìn)行檢測(cè)同樣也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，樣品很快會(huì)被實(shí)驗(yàn)用品、試劑甚至外界的空氣等污染，而且由于MC本身具有毒性，其氣化進(jìn)入空氣中也會(huì)對(duì)人類造成危害。

1.5 薄層色譜法

薄層色譜法（TLC）是將固定相涂布在平板（玻璃板、鋁箔等）上，點(diǎn)樣后在合適的流動(dòng)相條件下進(jìn)行洗脫，平板上不同組分的毒素就會(huì)逐漸分離。此方法是利用MC及其衍生物與有色或熒光物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的一種檢測(cè)技術(shù)，目前，它正向聯(lián)用的方向發(fā)展，如薄層色譜–氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用（TLC–GC–MS），或薄層色譜–紅外光譜（TLC–IR）等的聯(lián)用。Pelander等［35］使用N，N-二甲基-1，4-苯二胺二氯化物（N，N-DPDD）可以優(yōu)化TLC法檢測(cè)MCs，能夠達(dá)到WHO規(guī)定的1 μg／L的檢測(cè)極限。薄層色譜的優(yōu)點(diǎn)是具有較高的靈敏度及分辨率，可進(jìn)行快速分離，易于操作，多個(gè)樣品的分離可同時(shí)進(jìn)行，樣品預(yù)處理簡單。但由于薄層色譜法在檢測(cè)水體中藻毒素時(shí)無法達(dá)到高檢出限、準(zhǔn)確定量等實(shí)驗(yàn)的需求，至今未被廣泛應(yīng)用于實(shí)際生活中，只能用于小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室科研工作。

2 生物法

生物法是檢測(cè)MC實(shí)施最早，最普遍的方法。它通過急性毒素實(shí)驗(yàn)對(duì)MC進(jìn)行定性和半定量檢測(cè)。它可快速直觀檢測(cè)到新的不同藻毒素，但消耗的毒素量較多，且靈敏度和專一性都不高，不能運(yùn)用該方法對(duì)藻毒素進(jìn)行準(zhǔn)確地定量測(cè)定，更不能對(duì)不同的同分異構(gòu)體進(jìn)行分離和辨認(rèn)。且當(dāng)樣品中神經(jīng)毒素和MC同時(shí)存在時(shí)，肝毒素的毒性就不能顯示。用口腔灌喂法或鼠腹腔注射法是判斷MC的毒性的一種傳統(tǒng)方法。目前，已建立許多種生物系統(tǒng)來監(jiān)測(cè)MC，有利用無脊椎動(dòng)物對(duì)毒性評(píng)價(jià)進(jìn)行研究，也有利用細(xì)菌進(jìn)行毒性試驗(yàn)研究［36］。由于MCs能阻礙費(fèi)舍爾弧菌或明亮發(fā)光桿菌等一些發(fā)光菌發(fā)光，Lawton［37］等利用這一特性檢測(cè)了MC–LR和含有5種MCs的藍(lán)藻樣品，其LD50的檢測(cè)范圍為0.02～0.46 μg／mL。Gehringer等［38］運(yùn)用植物試驗(yàn)來檢測(cè)水體中的MC，實(shí)驗(yàn)中把家獨(dú)行菜作為檢測(cè)的物質(zhì)，將秧苗持續(xù)放置在在1 μg／L MC–LR中2～6 d時(shí)，根和葉部都出現(xiàn)了不同的變化。

3 生物化學(xué)法

在MC的檢測(cè)方法中，生物化學(xué)法也是開展比較早的方法。它在檢測(cè)MC對(duì)人或其它生物的生理活性方面有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。生物化學(xué)的方法主要分為蛋白磷酸酶抑制檢測(cè)法（PPIA）和酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法（ELISA）。

MC對(duì)蛋白磷酸酶活性具有專一性抑制的特性，PPIA就是依據(jù)酶活性抑制和MC含量之間的相關(guān)關(guān)系來測(cè)定毒素含量的一種方法［39］。常用的方法包括微量比色法和同位素標(biāo)記法。該法具有較高的靈敏度，檢測(cè)下限可以達(dá)到1 ng／mL～1 pg／mL。PPIA方法的缺陷是待測(cè)樣品處理需要較高技術(shù)，而且常出現(xiàn)MC含量高估計(jì)誤差。目前，PPIA常與色譜（如HPLC）結(jié)合使用，主要用于水樣和動(dòng)物組織樣品中痕量MC的檢測(cè)。

酶聯(lián)免疫法的原理是用制備的MC單克隆或多克隆抗體，通過免疫顯色反應(yīng)來測(cè)定MC含量。該方法多用于對(duì)MC的總量進(jìn)行測(cè)定，最近ELISA方法得到了改進(jìn)和發(fā)展，現(xiàn)已廣泛用于各種動(dòng)植物組織細(xì)胞樣品、實(shí)驗(yàn)室藍(lán)藻培養(yǎng)物和藍(lán)藻水華水樣中MC含量的測(cè)定。ELISA方法具有高靈敏度，通常能檢測(cè)到1 ng／mL，有些能達(dá)到1 pg／mL，但由于其較低的選擇性，對(duì)MC異構(gòu)體尚不能進(jìn)行區(qū)分，只能測(cè)定總MC含量。因此，目前ELISA一般在水樣和動(dòng)物組織樣品中微量MC的檢測(cè)及MC快速檢測(cè)時(shí)使用。

表1中列出了8種常用的MC檢測(cè)方法比較結(jié)果。

表1 8種常用分析檢測(cè)方法比較結(jié)果

4 展望

目前，MC檢測(cè)技術(shù)種類繁多，不同的分析檢測(cè)方法利用自身的特點(diǎn)都在追求著多方向的發(fā)展。但是因?yàn)楦鞣N分析技術(shù)及各種條件都存在差異，對(duì)MC的測(cè)定結(jié)果沒有達(dá)成統(tǒng)一?，F(xiàn)在，許多研究機(jī)構(gòu)致力于對(duì)藻毒素的檢測(cè)和分離方法的研究，他們提出了各種不同的思路和方法，但均有各自的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)。生物法雖然簡單快速，但靈敏度低，沒有特異性；色譜–質(zhì)譜技術(shù)雖然能夠精確定量，但儀器昂貴，技術(shù)要求高；生化檢測(cè)雖然靈敏度較高，且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，檢測(cè)比較迅速，但目前仍無法解決的是商用試劑盒廣泛供應(yīng)問題。在定量檢測(cè)和分析MC時(shí)，高效液相色譜法作為最經(jīng)典可靠的技術(shù)，其檢出限可達(dá)到ng及以下水平，同時(shí)具有選擇性好，結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。所以開展有關(guān)HPLC檢測(cè)MC的方法學(xué)研究，用以對(duì)各種MC的同分異構(gòu)體進(jìn)行分離，盡快研制MC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，從而為進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)并鑒定新毒素，分析其結(jié)構(gòu)特性，為對(duì)水質(zhì)和生物體中MC的研究和控制消除提供更強(qiáng)有力的依據(jù)。

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