超聲提取–毛細(xì)管氣相色譜法檢測(cè)醬腌菜中對(duì)羥基苯甲酸酯

張全美，黃錦燕 王守卿

(淄博市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，山東淄博 255033) (淄博市淄川區(qū)農(nóng)業(yè)局，山東淄博 255033)

對(duì)羥基苯甲酸酯(Paraben)也稱為尼泊金酯，因非揮發(fā)性、良好的殺菌能力和穩(wěn)定性，而被用作防腐劑。對(duì)羥基苯甲酸酯類是世界上用量較大的防腐劑，它具有高效、低毒、廣譜、易配伍的優(yōu)點(diǎn)，其毒性比苯甲酸鈉低，且pH應(yīng)用范圍廣，在pH 4～8時(shí)，其抑菌作用基本不受pH的影響，對(duì)霉菌、酵母、細(xì)菌等具有廣泛的抗菌作用。我國(guó)于2002年3月批準(zhǔn)對(duì)羥基苯甲酸甲酯鈉、對(duì)羥基苯甲酸乙酯鈉和對(duì)羥基苯甲酸丙酯鈉作為食品防腐劑。近年來(lái)的研究表明，對(duì)羥基苯甲酸丙酯危害較大，吸入、攝入或經(jīng)皮膚吸收對(duì)身體有害，對(duì)眼、粘膜和上呼吸道和皮膚有刺激作用[1]，因此GB 2760-2011標(biāo)準(zhǔn)不再支持對(duì)羥基苯甲酸丙酯作為食品添加劑使用[2]。建立一個(gè)高選擇性和高靈敏度的方法來(lái)檢測(cè)食品中的對(duì)羥基苯甲酸酯，對(duì)于確保食品安全具有非常重要的意義。目前對(duì)羥基苯甲酸酯的檢測(cè)方法有固相萃取-高效液相色譜法[3]、超聲萃取-高效液相色譜法[4]、毛細(xì)管氣相色譜法[5]和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法 GB／T 5009.31-2003[6]。GB／T 5009.31-2003 規(guī)定用氣相色譜法測(cè)定對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯，適合醬油、醋、水果汁及果醬中對(duì)羥基苯甲酸酯的測(cè)定，不適合醬腌菜中對(duì)羥基苯甲酸酯的測(cè)定，且樣品前處理方法繁瑣耗時(shí)，無(wú)法滿足大批量檢測(cè)的需要。筆者采用超聲提取-毛細(xì)管氣相色譜法檢測(cè)醬腌菜中對(duì)羥基苯甲酸酯，前處理簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，靈敏度高，重現(xiàn)性好，適合大批量檢測(cè)的需要。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：6890型，配FID檢測(cè)器、7890A色譜工作站、G4513A自動(dòng)進(jìn)樣器，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

離心機(jī)：TGL-16M型,長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)有限公司；

漩渦混合器：GL-88B型，海門麒麟醫(yī)用儀器廠；

超聲波儀：SK 2200H型，廣州滬瑞明儀器有限公司；

乙醚：重蒸；

鹽酸溶液：取50 mL鹽酸，用水稀釋至100 mL；

對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度分別為99.8%，99.7%，99.2%，上海安普科學(xué)儀器有限公司。

1.2 樣品處理

將樣品在組織粉碎機(jī)中搗碎，稱取5.0 g試樣于25 mL容量瓶中，加入1 mL 1∶1鹽酸溶液酸化，漩渦混合2 min，再加入20 mL乙醚溶液，在超聲波水浴中超聲提取20 min，用乙醚溶液定容至標(biāo)線，搖勻。將溶液轉(zhuǎn)移至離心管，以3000 r／min離心10 min，取上清液上機(jī)測(cè)定。

1.3 氣相色譜條件

毛細(xì)管柱：SE30型(33 m×0.53 mm，2.65 μm)；柱溫：170℃；進(jìn)樣口、檢測(cè)器溫度：220℃；載氣：氮?dú)猓魉贋?5.1 mL／min；氫氣流速：40 mL／min，空氣流速：350 mL／min；進(jìn)樣體積：1 μL。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

對(duì)羥基苯甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取對(duì)羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸乙酯、羥基苯甲酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)品各0.2000 g，混合后用乙醚溶解，定容至200 mL，此溶液中對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯的含量均為1.0 mg／mL。

對(duì)羥基苯甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：各取對(duì)羥基苯甲酸酯類混合標(biāo)準(zhǔn)液 0，5，10，25，50，75 mL，分別移入100 mL容量瓶中，以乙醚定容，此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度分別為 0，50，100，250，500，750 μg／mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性范圍及檢出限

將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣1 μL進(jìn)行氣相色譜分析，色譜圖如圖1。

從圖1可見(jiàn)，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸乙酯、羥基苯甲酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)樣品在1.3色譜條件下都得到了較好分離，出峰保留時(shí)間在3～6 min之間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸乙酯、羥基苯甲酸丙酯在0～750 μg／mL濃度(X)范圍內(nèi)與色譜峰面積(Y)呈良好的線性關(guān)系，線性方程與相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1。由表1可知，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸乙酯、羥基苯甲酸丙酯的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999。

按照3倍信噪比計(jì)算，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯的檢出限分別為0.1，0.1，0.2 μg／mL。

表1 線性方程和相關(guān)系數(shù)

2.2 精密度試驗(yàn)

以超聲波浸提離心的方法進(jìn)行樣品前處理，各連續(xù)測(cè)定11次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定結(jié)果列于表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯的平均值分別為 0.068，0.084，0.054 g／kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.22%，2.61%，3.57%。

2.3 回收試驗(yàn)

稱取不含對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯的醬腌菜5.0 g于25 mL容量瓶中，分別加入對(duì)羥基苯甲酸酯類混合標(biāo)準(zhǔn)液 0.5，2，4，8 mL，濃度分別為20，80，160，320 μg／mL。按 1.2 樣品處理方法處理樣品并分離提取后，經(jīng)氣相色譜儀分析測(cè)定，測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 回收試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，對(duì)羥基苯甲酸甲酯的平均回收率在87.5%～95.4%之間，對(duì)羥基苯甲酸乙酯的平均回收率在84.5%～94.8%之間，對(duì)羥基苯甲酸丙酯的平均回收率在86.5%～97.1%之間，表明該法準(zhǔn)確度較高。

3 結(jié)語(yǔ)

采用超聲提取和離心處理醬腌菜樣品，氣相色譜法檢測(cè)對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯，方法的精密度、準(zhǔn)確度均較好。該方法快速簡(jiǎn)便、使用溶劑較少，適合日常大批量檢測(cè)工作的需要。

[1]黃輝，曹小彥，彭新凱.氣相色譜法快速測(cè)定檳榔中的對(duì)羥基苯甲酸酯[J].食品科技，2010(8): 336-338.

[2]GB 2760-2011 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]陳春祝，謝維平，曾志定.固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定6種常見(jiàn)食品添加劑[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2006(6): 49-50.

[4]劉文杰，萬(wàn)英，馬玲.超聲萃取-液相色譜法測(cè)定食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類防腐劑[J].塔里木大學(xué)學(xué)報(bào)，2006 (3): 18-20.

[5]陳利國(guó)，曹小彥，黃輝，等.毛細(xì)管氣相色譜法直接測(cè)定食品中4種對(duì)羥基苯甲酸酯[J].食品與機(jī)械，2010(1): 67-69.

[6]GB／T 5009.31-2003 食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類的測(cè)定[S].