基于樞機(jī)理論探討電針對(duì)PCPA致失眠大鼠MFG-E8的影響

摘要：目的 探討電針對(duì)對(duì)氯苯丙氨酸（4-chloro-DL-phenylalanine，PCPA）致失眠大鼠乳脂球表皮生長(zhǎng)因子 VIII（Milk fat globule-epidermal growth factor VIII，MFG-E8）的影響。方法 50只SD大鼠（雌雄各半）隨機(jī)抽取10只作為空白組，除空白組外，剩余40只均腹腔注射PCPA建立失眠模型，經(jīng)造模、篩選隨機(jī)分為模型組、電針組、艾司唑侖組，每組10只，觀察大鼠一般情況變化，戊巴比妥鈉睡眠試驗(yàn)觀察大鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間，經(jīng)電針、艾司唑侖藥物干預(yù)7d后，酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)大鼠血清中MFG-E8含量，Western blot法檢測(cè)下丘腦組織中MFG-E8蛋白表達(dá)。結(jié)果 經(jīng)PCPA造模干預(yù)的失眠模型大鼠，戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)顯示，睡眠潛伏期延長(zhǎng)（P<0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間縮短（P<0.05）；與空白組比，模型組大鼠血清MFG-E8水平降低（P<0.05），下丘腦中MFG-E8蛋白相對(duì)表達(dá)量下降（P<0.01）；經(jīng)電針、艾司唑侖藥物干預(yù)后，失眠大鼠晝夜節(jié)律明顯改善，體質(zhì)量明顯升高（P<0.05），血清中MFG-E8水平升高（P<0.01）；下丘腦中MFG-E8蛋白相對(duì)表達(dá)增高（P<0.01）；電針組與艾司唑侖組之間MFG-E8含量無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。結(jié)論 電針對(duì)PCPA致失眠大鼠睡眠障礙具有改善作用，揭示電針可上調(diào)MFG-E8的表達(dá)，其可能機(jī)制與MFG-E8調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)M1表型極化，降低致炎因子水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞：失眠；炎癥；電針；MFG-E8；小膠質(zhì)細(xì)胞

中圖分類(lèi)號(hào)：R246 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2024）11-0069-06

Exploration of the Effect of Electroacupuncture on MFG-E8 in PCPA-Induced Insomnia Rats Based on the Pivot Theory

TAN Tian1， ZHANG Meng1， WU Yuan1， LIU Lian2， SHI Xue-hui2

（1. The Second Clinical College of Traditional Chinese Medicine， Hunan University of Traditional Chinese Medicine， Changsha 410005， China; 2. The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine， Changsha 410005， China）

【Abstract】Objective： To study the effect of electroacupuncture on milk fat globule-epidermal growth factor VIII（MFG-E8） in rats with insomnia induced by 4-chloro-DL-phenylalanine（PCPA）. Methods： Fifty SD rats（equally divided by gender） were randomly selected， with 10 rats serving as the blank group. The remaining 40 rats were administered PCPA via intraperitoneal injection to establish an insomnia model. After modeling， the rats were randomly divided into the model group， electroacupuncture group， and estazolam group， 10 rats each group. The general conditions of the rats were observed， and the pentobarbital sodium sleep test was used to measure sleep latency and sleep duration. After 7 days of intervention with electroacupuncture or estazolam， MFG-E8 levels in the serum of the rats were measured by using ELISA， and the relative expression of MFG-E8 protein in the hypothalamus was detected by Western blot. Results： In the PCPA-induced insomnia model rats， the pentobarbital sodium sleep test showed prolonged sleep latency（P<0.01） and shortened sleep duration（P<0.05）. Compared with that of the blank group， the serum MFG-E8 levels in the model group were reduced（P<0.05）， and the relative expression of MFG-E8 protein in the hypothalamus decreased（P<0.01）. After intervention with electroacupuncture and estazolam， the circadian rhythm of insomnia rats significantly improved， and body weight increased（P<0.05）. MFG-E8 levels in the serum increased（P<0.01）， and the relative expression of MFG-E8 protein in the hypothalamus also increased（P<0.01）. No significant statistical difference in MFG-E8 levels was observed between the electroacupuncture and estazolam groups（P>0.05）. Conclusion： Electroacupuncture improves sleep disorders in PCPA-induced insomnia rats， suggesting that electroacupuncture may upregulate the expression of MFG-E8. The underlying mechanism might be related to MFG-E8s regulation of microglial cells， reversal of M1 phenotype polarization and reduction of pro-inflammatory cytokine levels.

【Key words】Insomnia; Inflammation; Electroacupuncture; MFG-E8; Microglial Cells

失眠以睡眠難以啟動(dòng)或難以維持為主要特點(diǎn)，并伴有焦慮易怒、疲勞、記憶障礙等癥狀^［1］，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量，長(zhǎng)期睡眠不足會(huì)造成體內(nèi)慢性炎癥，增加心肌損傷、動(dòng)脈粥樣硬化、患糖尿病、阿爾茨海默病等疾病的風(fēng)險(xiǎn)^［2-3］，對(duì)神經(jīng)免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、精神等多個(gè)方面的健康造成威脅。目前失眠的發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明。慢性炎癥、神經(jīng)遞質(zhì)異常改變與失眠、抑郁、阿爾茲海默癥和帕金森病等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)^［4-5］，影響神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)。小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化后誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥可導(dǎo)致突觸變性、神經(jīng)細(xì)胞死亡和認(rèn)知功能障礙^［6］?；谛∧z質(zhì)細(xì)胞角度，其介導(dǎo)的炎癥與失眠的發(fā)生發(fā)展聯(lián)系密切，小膠質(zhì)細(xì)胞兩種表型M1、M2在機(jī)體受到刺激時(shí)分泌炎癥因子，發(fā)揮著致炎與抗炎的作用共同調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)環(huán)境，失去平衡時(shí)，持續(xù)神經(jīng)炎癥進(jìn)展進(jìn)而誘發(fā)失眠，當(dāng)機(jī)體處于失眠狀態(tài)時(shí)又會(huì)加速致炎因子的釋放。同時(shí)，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)PCPA致失眠大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞明顯活化，血清及下丘腦的腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）表達(dá)明顯增加，結(jié)合現(xiàn)有研究提示，失眠使得機(jī)體內(nèi)促炎與抗炎的平衡被打破，再次驗(yàn)證失眠與小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥息息相關(guān)。

乳脂球表皮生長(zhǎng)因子 VIII（MFG-E8）是一種分泌性糖蛋白，具有廣泛的細(xì)胞功能，包括吞噬凋亡細(xì)胞、抗炎、組織再生和體內(nèi)平衡。它可以由多種細(xì)胞類(lèi)型如小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞等分泌，在預(yù)防神經(jīng)元性疾病中起著關(guān)鍵作用^［7-9］；有研究顯示，MFG-E8可通過(guò)各種途徑如上調(diào) PI3K-Akt 通路（抑制炎癥損傷起保護(hù)作用）^［10］并下調(diào) NF-KB 信號(hào)通路（炎癥反應(yīng)的重要參與者）^［11］，逆轉(zhuǎn)小膠質(zhì)細(xì)胞 M1表型極化，以及提升小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬速率等，調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的功能、調(diào)控炎癥因子水平。神經(jīng)炎癥在失眠的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，通過(guò)MFG-E8干預(yù)小膠質(zhì)細(xì)胞功能從而減少神經(jīng)炎癥可成為治療失眠有前景的策略。

針灸作為一種非藥物治療手段，其不良反應(yīng)少，療效可靠，不存在藥物依賴(lài)和戒斷反應(yīng)。已有研究證實(shí)，針刺治療能夠顯著改善失眠患者入睡困難、易醒、焦慮、抑郁癥狀^［12］。同時(shí)證實(shí)電針可通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)炎癥信號(hào)通路，如NF-KB信號(hào)通路等調(diào)控炎癥因子水平來(lái)減輕神經(jīng)炎癥改善睡眠^［13］。失眠屬中醫(yī)之“不寐”，關(guān)鍵病機(jī)在于“陰陽(yáng)失交”，陰陽(yáng)的出入運(yùn)動(dòng)又與三陰三陽(yáng)開(kāi)闔樞密切相關(guān)?；跇袡C(jī)理論，調(diào)節(jié)少陽(yáng)、少陰之樞機(jī)是解決陰陽(yáng)失交的關(guān)鍵之法。再者，名醫(yī)臨證經(jīng)驗(yàn)證實(shí)^［14］以調(diào)樞安神為切入點(diǎn)，以少陰、少陽(yáng)經(jīng)穴及督脈腧穴為主，選取神門(mén)、三陰交、百會(huì)、本神四穴臨床上治療失眠及改善其伴隨癥狀療效顯著。

本研究采用對(duì)氯苯丙氨酸（PCPA）建立失眠大鼠模型，選用電針刺激神門(mén)、三陰交、百會(huì)、本神穴位，觀察大鼠一般行為學(xué)變化和血清、下丘腦的MFG-E8表達(dá)，探究電針對(duì)失眠模型大鼠MFG-E8的影響，探索MFG-E8與小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥之間的聯(lián)系，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 購(gòu)入SPF級(jí)健康大鼠50只（雌雄各半），體質(zhì)量（170±10）g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK（湘）2019-0009。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)編號(hào)：LLBH-202211080001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 對(duì)氯苯丙氨酸（PCPA）（HY-B1368 美國(guó)MCE公司）、戊巴比妥鈉（P3761 美國(guó)西格瑪奧德里奇公司）、艾司唑侖片（規(guī)格1mg/粒，華中藥業(yè)）。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 阿拉伯膠水溶液、NaHCO3溶液、水合氯醛溶液均購(gòu)于北京雷根生物技術(shù)有限公司（批號(hào)分別為IH0262、CC0141、R00635）、PH精密試紙（H821220上海麥克林生化科技有限公司）、超聲機(jī)（F-010S 深圳福洋科技有限公司）、針灸針（0.25×25MM 蘇州針灸用品有限公司）、電子針療儀（SDZ-V型 蘇州醫(yī)療用品廠(chǎng)有限公司），乳脂球表皮生長(zhǎng)因子-8（milk fat globule-epidermal growth factor-8，MFG-E8）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Elisa）試劑盒，購(gòu)于江蘇菲亞生物科技有限公司（批號(hào)：2401R28）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及造模方法 選取50只大鼠于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室內(nèi)動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度24℃～26℃，濕度40%～60%，配有獨(dú)立通風(fēng)系統(tǒng)。動(dòng)物運(yùn)抵飼養(yǎng)房后，適應(yīng)性喂養(yǎng) 7d后隨機(jī)分為空白組（10只）和模型組（40只），篩選出造模成功后的30只大鼠與空白組10只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本研究最終采用實(shí)驗(yàn)大鼠共40只，分為空白組、模型組、電針組、艾司唑侖組4組。造模方法^［15］：模型組大鼠每天上午8點(diǎn)腹腔注射PCPA（500 mg/kg·d，1 mL/100 g）混懸液，以制備失眠模型，每日1次，連續(xù)2 d。造模成功的大鼠表現(xiàn)為晝夜節(jié)律消失、白天活動(dòng)增多、對(duì)聲響異常敏感、躁動(dòng)、攻擊性及興奮性增加等行為^［16］，同時(shí)予以戊巴比妥鈉睡眠試驗(yàn)再次驗(yàn)證。

2.2 動(dòng)物行為學(xué)觀察 觀察大鼠一般情況變化，包括晝夜節(jié)律、體質(zhì)量變化、精神狀況、活動(dòng)性、皮毛情況等。

2.3 戊巴比妥鈉睡眠試驗(yàn)^［17］ 第1次腹腔注射 36h 后，正常組和造模組大鼠均腹腔注射戊巴比妥鈉（50 mg/kg，1%濃度），當(dāng)大鼠剛?cè)胨瘯r(shí)，將大鼠放墊塊上，腹部朝上，定義翻正反射消失持續(xù)1min為進(jìn)入睡眠，翻正反射恢復(fù)為覺(jué)醒，記錄每只大鼠從給藥開(kāi)始到翻正反射消失的時(shí)長(zhǎng)作為睡眠潛伏期，從翻正反射消失到恢復(fù)的時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間，比較正常組和造模組在以上兩個(gè)指標(biāo)的差異。

2.4 干預(yù)方法及取材 造模成功后稱(chēng)重，第2 d開(kāi)始干預(yù)，電針組刺激大鼠的神門(mén)、三陰交、百會(huì)、本神穴位，20 min/次；其中，百會(huì)、本神穴平刺，神門(mén)、三陰交直刺，針刺得氣后，電針儀連接同側(cè)神門(mén)、三陰交，共 2組，選用連續(xù)波、頻率為2Hz，電流強(qiáng)度以局部皮膚肌肉輕微顫動(dòng)為度；艾司唑侖組（0.2 mg/kg）溶液灌胃，所有治療均1次/d，持續(xù)7d。模型組制備模型成功后正常喂養(yǎng)至取材，空白組不做治療。所有治療結(jié)束后，將大鼠稱(chēng)重后麻醉，取腹主動(dòng)脈血，室溫自然凝固10-20 min，3000 r/min離心10 min，收集上清液；取完腹主動(dòng)脈血之后，斷頭取腦，參照大鼠大腦立體定位圖，剝離下丘腦結(jié)構(gòu)，在生理鹽水中輕輕漂洗后，置于無(wú)菌凍存管中，血清和腦組織保存于-80°C冰箱。

2.5 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清中MFG-E8 采用ELISA法測(cè)定血清中MFG-E8含量，取腹主動(dòng)脈血上清液于EP管中，嚴(yán)格遵照試劑盒操作指南，在酶標(biāo)儀上讀取450nm波長(zhǎng)吸光度值并記錄。

2.6 Western blot法檢測(cè)下丘腦組織中MFG-E8蛋白表達(dá) 取下丘腦組織，冰上研磨，加入細(xì)胞裂解液，超聲組織破碎儀提取蛋白，10 min 后，12000r/min 離心 15min，取上清液，采用 Western blot 技術(shù)檢測(cè)MFG-E8表達(dá)情況。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0和GraphPad Prism 9軟件分析處理數(shù)據(jù)及作圖，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠一般情況變化 空白組大鼠表現(xiàn)為正常晝夜活動(dòng)模式，精神良好，毛發(fā)白皙且有光澤；與空白組對(duì)比，失眠模型組出現(xiàn)白天活動(dòng)變多，易激惹，毛發(fā)發(fā)黃失去光澤，興奮性及攻擊性增強(qiáng)，同時(shí)體質(zhì)量顯著降低；與失眠模型組比較，電針組和艾司唑侖組大鼠上述情況均得到不同程度改善，見(jiàn)表1。

造模前后，與空白組比較，其余各組大鼠體質(zhì)量均不同程度下降（P<0.05），造模組間大鼠體質(zhì)量變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療前后比較，各組大鼠體質(zhì)量均有增長(zhǎng)，與空白組比較，失眠模型組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)較緩（P<0.05），與失眠模型組比較，電針組大鼠體質(zhì)量明顯增長(zhǎng)（P<0.05），艾司唑侖組大鼠體質(zhì)量有所增長(zhǎng)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

3.2 造模期各組大鼠睡眠實(shí)驗(yàn) 戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)：與空白組對(duì)比，模型組大鼠睡眠潛伏期延長(zhǎng)（P<0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間縮短（P<0.05），見(jiàn)表3。結(jié)合大鼠一般情況及體質(zhì)量變化，進(jìn)一步驗(yàn)證失眠模型造模成功。

3.3 電針對(duì)失眠大鼠血清MFG-E8的影響 與空白組對(duì)比，模型組大鼠血清MFG-E8水平顯著降低（P<0.05）；與模型組比較，電針、艾司唑侖組大鼠血清中MFG-E8水平升高（P<0.01）；與電針組比較，艾司唑侖組大鼠血清中MFG-E8水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表4、圖1。

3.4 電針對(duì)失眠大鼠下丘腦組織MFG-E8的影響 Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與空白組比較，失眠模型組大鼠下丘腦中MFG-E8蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著下降（P<0.01）；與失眠模型組大鼠比較，電針組與艾司唑侖組大鼠下丘腦中MFG-E8蛋白相對(duì)表達(dá)量均增高（P<0.01）；電針組與艾司唑侖組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)圖2。

4 討論

失眠屬中醫(yī)之“不寐”，關(guān)鍵病機(jī)在于“陰陽(yáng)失交”，針灸治療失眠療效顯著且安全性較高?！端貑?wèn)·陰陽(yáng)離合論篇》中提到：“太陽(yáng)為開(kāi)，陽(yáng)明為闔，少陽(yáng)為樞”，“太陰為開(kāi)，厥陰為闔，少陰為樞”^［18］，“樞”包含陰陽(yáng)兩個(gè)方面，少陽(yáng)樞機(jī)為陽(yáng)樞，少陰樞機(jī)為陰樞，樞機(jī)功能失常，人體陰陽(yáng)失和則出現(xiàn)失眠。基于此，樞轉(zhuǎn)陰陽(yáng)之氣、調(diào)樞安神是治療失眠的關(guān)鍵，在臨床實(shí)踐上，名醫(yī)經(jīng)驗(yàn)^［14］及導(dǎo)師臨證經(jīng)驗(yàn)應(yīng)用神門(mén)、三陰交、百會(huì)、本神等治療失眠療效顯著。在文獻(xiàn)報(bào)道中顯示，電針治療百會(huì)、神門(mén)、三陰交等穴可調(diào)節(jié)失眠患者炎癥因子及睡眠因子^［19-20］，能夠明顯改善失眠患者入睡困難、易醒、焦慮、抑郁等伴隨癥狀。

本次實(shí)驗(yàn)顯示，空白組大鼠表現(xiàn)為正常晝夜活動(dòng)模式，精神良好，毛發(fā)白皙且有光澤；失眠模型組出現(xiàn)白天活動(dòng)變多，易激惹，毛發(fā)發(fā)黃失去光澤，興奮性及攻擊性增強(qiáng)，同時(shí)體質(zhì)量顯著下降；戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)顯示，失眠模型組大鼠睡眠潛伏期延長(zhǎng)，睡眠持續(xù)時(shí)間縮短，提示實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)PCPA造模成功，出現(xiàn)明顯睡眠障礙。經(jīng)電針及藥物干預(yù)后，大鼠的一般狀況明顯改善，體重穩(wěn)步增長(zhǎng)，躁動(dòng)減少，睡眠障礙得到明顯改善，表示以調(diào)樞安神為切入點(diǎn)，選取神門(mén)、三陰交、百會(huì)、本神進(jìn)行電針刺激可明顯改善失眠。

失眠的病因復(fù)雜，其發(fā)病機(jī)制多涉及神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)。近年來(lái)越來(lái)越多研究者將睡眠與覺(jué)醒機(jī)制的研究放在小膠質(zhì)細(xì)胞上，小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)固有免疫細(xì)胞，可參與免疫調(diào)節(jié)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等來(lái)影響包括睡眠在內(nèi)的生理結(jié)果和病理狀態(tài)。Wadhwa等^［21］研究發(fā)現(xiàn)48 h 的睡眠剝奪小鼠海馬內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞特異性表達(dá)Iba-1增多，TNF-α、IL-6 和 IL-1β等炎癥因子的濃度顯著升高。白細(xì)胞介素（IL）和TNF-α的水平變化在睡眠調(diào)節(jié)中起重要作用^［22］；臨床研究顯示在失眠患者體內(nèi)通?？蓹z測(cè)到水平明顯升高的炎性反應(yīng)因子^［23］，隨著炎癥因子的堆積，非快速眼動(dòng)（NREM）和快速眼動(dòng)期（REM）睡眠均減少，可進(jìn)一步導(dǎo)致失眠發(fā)生。由此可見(jiàn)，失眠的發(fā)生發(fā)展與小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥密切相關(guān)。同時(shí)，有研究顯示^［24］，艾司唑侖屬苯二氮·類(lèi)藥物的一種，可參與到與氧化應(yīng)激、神經(jīng)炎癥相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病中。羅佳佳^［25］在應(yīng)用加味酸棗仁湯對(duì)阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響及機(jī)制研究中，選取艾司唑侖作為西藥對(duì)照組，結(jié)果顯示艾司唑侖組同樣對(duì)大鼠腦區(qū)及血清中炎癥因子如IL-1β、TNF-α有下調(diào)作用。課題組前期研究同樣發(fā)現(xiàn)經(jīng)電針與艾司唑侖藥物干預(yù)后的失眠模型大鼠，炎癥因子IL-6、TNF-α水平均有不同程度下降，實(shí)驗(yàn)選用艾司唑侖作為藥物對(duì)照，揭示電針同艾司唑侖藥物比，兩者均對(duì)失眠具有明顯改善效應(yīng)，其作用機(jī)制涉及神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)，由此可用來(lái)探究中樞神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞功能與炎性因子之間的關(guān)系。

根據(jù)分泌的細(xì)胞炎癥因子的不同，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞分為M1型和 M2型，M1型主要分泌一系列促炎因子，包括TNF-α、IL-6、IL-1β、一氧化氮合酶（iNOS）等，誘導(dǎo)白細(xì)胞遷移，推進(jìn)炎癥進(jìn)程；M2型主要分泌抗炎因子，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、精氨酸酶1（Arg1）和IL-10等，發(fā)揮促進(jìn)神經(jīng)再生修復(fù)、吞噬壞死組織碎片的重要作用^［26］。文獻(xiàn)報(bào)道，慢性睡眠剝奪會(huì)使小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度激活^［27］。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在PCPA致失眠大鼠體內(nèi)，小膠質(zhì)細(xì)胞明顯活化，致炎因子IL-6、TNF-α表達(dá)顯著升高；結(jié)合本次研究顯示，失眠模型大鼠MFG-E8水平及蛋白相對(duì)表達(dá)量下降，提示處于失眠狀態(tài)的機(jī)體內(nèi)保護(hù)性因子受到影響而減少，失眠大鼠體內(nèi)致炎因子水平升高，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞以M1表型為主，小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能及機(jī)體抗炎癥能力下降。

MFG-E8具有多種生物學(xué)功能，可刺激巨噬細(xì)胞增強(qiáng)吞噬功能、有效清除凋亡細(xì)胞及碎片、避免毒性物質(zhì)積累從而維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞功能進(jìn)行調(diào)節(jié)等；有研究^［28］發(fā)現(xiàn)將重組 MFG-E8（rmMFG-E8）注入被氧糖剝奪后的小膠質(zhì)細(xì)胞后，可逆轉(zhuǎn)細(xì)胞凋亡從而促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2極化，起到抗炎作用并促進(jìn)組織修復(fù)。同時(shí)，MFG-E8 作為調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的重要信號(hào)分子，在調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬功能中發(fā)揮重要作用，MFG-E8表達(dá)增強(qiáng)可顯著提升其吞噬速率^［29］。對(duì)于一些會(huì)持續(xù)激活小膠質(zhì)細(xì)胞的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，MFG-E8 可以平衡小膠質(zhì)細(xì)胞極化過(guò)程，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)^［30］。本次研究顯示，與失眠模型組大鼠比較，電針組與艾司唑侖組大鼠血清及下丘腦區(qū)域中MFG-E8水平顯著升高，提示電針與艾司唑侖藥物可增加Mfk1dK9E74nwDI6jNgL470A==FG-E8水平，影響小膠質(zhì)細(xì)胞功能從而降低炎癥水平，一方面驗(yàn)證了小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥與失眠的緊密聯(lián)系，另一方面，這也是電針治療失眠的干預(yù)機(jī)制之一，通過(guò)調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞功能，逆轉(zhuǎn)小膠質(zhì)細(xì)胞M1表型極化，減少致炎因子的釋放，從而減輕神經(jīng)炎癥以改善失眠。邵敬芝等^［31］在體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)TNF-α和白細(xì)胞介素（IL）在小膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)隨著 MFG-E8 的增加或減少而減少或增加，其整體結(jié)果趨勢(shì)與本次實(shí)驗(yàn)大致一致。

綜上所述，電針對(duì)PCPA致失眠大鼠睡眠障礙具有改善作用，可上調(diào)MFG-E8表達(dá)，其可能機(jī)制與調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化功能，逆轉(zhuǎn)M1型極化相關(guān)，降低致炎因子水平，減輕神經(jīng)炎癥，為針灸治療失眠尋找治療靶點(diǎn)提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但電針影響MFG-E8調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化及炎癥因子的具體通路尚未闡明，MFG-E8的更多生物學(xué)功能有待探aROLfHzteEQ3x3j57C2HIw==索，未來(lái)研究可利用MFG-E8 對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，挖掘其在神經(jīng)保護(hù)等方面的潛力，探尋MFG-E8 成為治療更多疾病的新靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2024-06-26）