酶免法和膠體金法對(duì)丙肝抗體的檢測(cè)結(jié)果比較分析

【摘要】目的：對(duì)比酶聯(lián)免疫吸附法（酶免法）和膠體金法檢測(cè)丙肝抗體的價(jià)值。方法：選擇2023年8月—2023年12月919例參與檢驗(yàn)的病例，對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行血液樣本采集。對(duì)所采集的血樣均分別進(jìn)行酶免法檢測(cè)和膠體金法檢測(cè)，以丙肝病毒核酸檢測(cè)結(jié)果為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，比較不同檢測(cè)方式對(duì)丙肝抗體的陽(yáng)性檢出情況，此外比較不同檢測(cè)方式的檢測(cè)時(shí)間及重復(fù)采樣情況。結(jié)果：金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)其中20份為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.18%。酶免法與膠體金法的陽(yáng)性檢出率分別為95.00%與90.00%，對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。膠體金法的檢測(cè)時(shí)間為（8.84±1.21）min，明顯短于酶免法的（31.15±4.26）min，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；膠體金法重復(fù)采樣率為0.76%，低于酶免法的2.50%，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：對(duì)于丙肝抗體檢測(cè)，應(yīng)用酶免法與膠體金法的陽(yáng)性檢出率均較高，但膠體金法的檢測(cè)速度快，重復(fù)采樣率低，因此可作為大規(guī)模篩查丙肝的首選方法。

【關(guān)鍵詞】丙肝抗體；酶免法；膠體金法

Comparative analysis of enzyme immunoassay and colloidal gold method for detecting hepatitis C antibodies

WANG Shanshan， MA Yanwei

Department of Laboratory Medicine，Beilin District Disease Prevention Center， Xi’an City， Xi’an， Shaanxi 710001， China

【Abstract】Objective：To compare the value of enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and colloidal gold method in detecting hepatitis C antibodies.Methods：919 test cases were selected from August2023 to December 2023，and blood samples were collected from the study subjects.For the collected blood samples，enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and colloidal gold method were used for detection.The results of hepatitis C virus nucleic acid testing were used as the gold standard for diagnosis to compare the positive detection of hepatitis C antibodies using different detection methods.In addition，the detection time and repeated sampling of different detection methods were compared.Results：The gold standard confirmed that 20 of them were positive，with a positive rate of 2.18%.The positive detection rates of enzyme-linked immunosorbent assay and colloidal gold assay were 95.00% and 90.00%，respectively，and there was no statistically significant difference in the comparison （P>0.05）.The detection time of colloidal gold method was （8.84±1.21） min，which was significantly shorter than （31.15±4.26） min of enzyme immunoassay method，and the difference was statistically significant （P<0.05）；The repeated sampling rate of colloidal gold method was 0.76%，which was lower than 2.50% of enzyme immunoassay method，and the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion：For the detection of hepatitis C antibodies，both enzyme immunoassay and colloidal gold method have high positive detection rates.However，colloidal gold method has a fast detection speed and low repeat sampling rate，making it the preferred method for large-scale screening of hepatitis C.

【Key Words】Hepatitis C antibody； Enzyme immunoassay； Colloidal gold method

丙肝是一種因感染丙型肝炎病毒（HCV）導(dǎo)致的以肝臟損害為主的傳染病，急性期的癥狀較輕，一般為疲乏、食欲減退、惡心等，早期檢出率較低。而較高比例的患者可持續(xù)轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿窝祝⑶疫€有一定概率進(jìn)展為肝硬化以及肝癌[1]。隨著生活水平的提高，人們對(duì)自身健康體檢的重視度提高，此外，基于對(duì)傳染病的預(yù)防干預(yù)，對(duì)丙肝的篩查也成為體檢的重要項(xiàng)目。在丙肝的診斷中，檢測(cè)丙肝抗體是重要的方式，而抗體的檢測(cè)方法中，酶聯(lián)免疫吸附法（酶免法）和膠體金法是兩種常見(jiàn)方式[2]。酶免法通過(guò)使用特殊的酶標(biāo)示劑來(lái)放大抗原抗體反應(yīng)的信號(hào)，從而提高檢測(cè)的靈敏度和特異性，該方式具有方便、靈敏等優(yōu)點(diǎn)[3]。膠體金法則利用膠體金顆粒的特殊光學(xué)性質(zhì)，將抗體或抗原標(biāo)記在膠體金顆粒上，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)形成的復(fù)合物在檢測(cè)樣本中產(chǎn)生顏色變化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的定性或定量檢測(cè)，該方法具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果直觀、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于大規(guī)模篩查和現(xiàn)場(chǎng)檢 測(cè)[4]。針對(duì)丙肝抗體的檢測(cè)，不同方式的應(yīng)用效果存在爭(zhēng)議，本次研究共納入919份待檢標(biāo)本，對(duì)比分別采取酶免法和膠體金法的檢測(cè)結(jié)果差異，以供參考借鑒，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2023年8月—2023年12月919例參與檢驗(yàn)的病例，采集其血液標(biāo)本進(jìn)行檢查?；颊咭话阗Y料如下：男512例，女407例；年齡22～71歲，平均年齡（48.12±3.46）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均在前次檢查未檢出丙肝抗體；具有良好的意識(shí)及溝通交流能力。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝腎等嚴(yán)重功能損傷者；惡性腫瘤、血液疾病或自身免疫疾病者；精神疾病及認(rèn)知障礙者。

1.2 方法

患者的樣本采集，均是安排專業(yè)采血人員按照規(guī)范及無(wú)菌原則采血。主要是經(jīng)靜脈途徑采集4mL血液樣本，置于真空采血管中。將采集的樣本及時(shí)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)前血樣置入離心機(jī)以3000r/min速度持續(xù)離心10min分離血清，分離后立即檢測(cè)，檢測(cè)完成后將剩余血清分離，置于-20℃冰箱保存。

酶免法：檢測(cè)方式應(yīng)用來(lái)源上?？迫A生物工程股份有限公司提供的ELISA檢測(cè)試劑盒。室溫下將試劑靜置30min取出板條同時(shí)設(shè)置對(duì)照孔，其中陰性2孔、陽(yáng)性2孔（分別加入100uL陰陽(yáng)性對(duì)照），空白1孔。按微孔板的順序，分別進(jìn)行試劑樣品編號(hào)，將100uL的樣本稀釋液加入相應(yīng)微孔內(nèi)，取10uL的待測(cè)樣本血清加入至各孔混勻后進(jìn)行封板，在37℃環(huán)境中持續(xù)溫育60min，在取出后借助洗板機(jī)持續(xù)清洗5遍。各孔均加100uL酶結(jié)合物混勻，封板，37℃溫育30min，取出后以洗板機(jī)持續(xù)清洗5遍。將顯色劑A、B液各50uL加入至各孔混合均勻，在37℃避光環(huán)境下顯色30min，各孔同時(shí)加50uL終止液混合均勻，酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450/630nm，獲得各孔的OD值。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：OD值/臨界值≥1.0。

膠體金法：檢測(cè)試劑由英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司提供，加入分離出的血清10uL滴加至加樣處，滴加2滴（約100uL）樣本稀釋液稀釋，稀釋15min后觀察檢測(cè)線、對(duì)照線顯色情況。檢測(cè)線、對(duì)照線分別出現(xiàn)紅色條帶視為陽(yáng)性；測(cè)試區(qū)無(wú)紅色條帶，僅對(duì)照區(qū)出現(xiàn)紅色條帶視為陰性；對(duì)照線未出現(xiàn)紅色條帶則說(shuō)明試劑失效并需重新檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

陽(yáng)性檢出率。以丙肝病毒核酸檢測(cè)結(jié)果為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比不同方式檢測(cè)丙肝抗體陽(yáng)性情況。陽(yáng)性率=陽(yáng)性例數(shù)/標(biāo)本數(shù)量×100%。（2）檢測(cè)時(shí)間和重復(fù)采樣。對(duì)比不同方式檢測(cè)花費(fèi)的時(shí)間，統(tǒng)計(jì)不同方法需要重復(fù)采樣檢測(cè)的例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，進(jìn)行x2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方式陽(yáng)性檢出率比較

金標(biāo)準(zhǔn)方式，對(duì)于919份樣本，檢出陽(yáng)性樣本20份，檢出率為2.18%。對(duì)于丙肝抗體檢出情況，酶免法與膠體金法的陽(yáng)性檢出率較高，對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2 不同檢測(cè)方式檢測(cè)時(shí)間和重復(fù)采樣比較

膠體金法檢測(cè)時(shí)間短于酶免法，重復(fù)采樣率低于酶免法，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

丙肝是傳染性疾病，人群中普遍易感，感染的人群通常早期無(wú)典型癥狀，并且很多感染者也可經(jīng)體內(nèi)抗丙肝病毒抗體清除感染源預(yù)防疾病。而病毒感染后引起丙肝者，疾病持續(xù)進(jìn)展則可引起慢性肝炎甚至肝癌，這種比例也很高。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，2015年全球大約7100萬(wàn)人受丙肝病毒感染，且大量慢性感染者可出現(xiàn)肝硬化或者肝癌，而每年死于丙肝及相關(guān)肝硬化、肝癌死亡的人數(shù)在40萬(wàn)以上[5]。基于丙肝的高流行性情況，做好疾病預(yù)防工作具有重要意義，而具體預(yù)防方式上，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查是主要的方案。

丙肝抗體檢測(cè)是用于篩查和診斷丙肝的重要檢測(cè)方法，通過(guò)檢測(cè)丙肝抗體能夠幫助確定一個(gè)人是否曾經(jīng)感染過(guò)HCV。檢測(cè)的血液中是否存在針對(duì)HCV的抗體。如果結(jié)果是陽(yáng)性，說(shuō)明曾經(jīng)感染過(guò)HCV，但并不一定意味著目前仍然有活躍的病毒感染。而如果抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，通常需要進(jìn)一步的檢測(cè)，丙肝病毒核酸檢測(cè)，通過(guò)進(jìn)一步的檢測(cè)以確定是否存在持續(xù)的病毒感染，這樣可以評(píng)估感染是急性還是慢性的，以及病毒的量和類型[6]。對(duì)檢測(cè)及篩查的結(jié)果分析，使得傳染病防控工作人員也能夠更好地了解丙肝的流行情況，有助于制定有效的公共衛(wèi)生策略和預(yù)防措施。而在對(duì)丙肝抗體的檢測(cè)方法上，常用的檢測(cè)方式主要包括酶免法和膠體金法兩種。在丙肝抗體酶免法測(cè)定中，首先將丙型肝炎病毒抗原固定在固相載體上，然后將待測(cè)樣本中的抗體與固定抗原結(jié)合。接著加入酶標(biāo)示劑，使其與結(jié)合在固相載體上的抗體結(jié)合。最后加入酶的底物，樣本中的抗體如果與固定抗原結(jié)合，就會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色或熒光。通過(guò)觀察顏色或熒光的強(qiáng)度，可以判斷樣本中是否存在丙型肝炎病毒抗體[7]。丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒（膠體金法）是專門用于檢測(cè)人體內(nèi)的丙型肝炎病毒抗體的診斷工具。該試劑盒基于膠體金技術(shù)的原理，通過(guò)特定的抗原與抗體反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)丙型肝炎病毒感染的快速、可視化檢測(cè)。膠體金法在醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，可用于醫(yī)院、診所、實(shí)驗(yàn)室等場(chǎng)所，為醫(yī)生提供快速、準(zhǔn)確的診斷依據(jù)，同時(shí)也可用于大規(guī)模人群篩查，有助于控制丙型肝炎病毒的傳播[7]。

本次研究中，對(duì)比兩種檢測(cè)方式丙肝抗體陽(yáng)性檢出率，不同檢測(cè)方法的檢出率對(duì)比無(wú)差異，說(shuō)明酶免法和膠體金法陽(yáng)性檢出率均較高，檢出率基本一致。而在檢測(cè)時(shí)間上，膠體金法時(shí)間更短，且膠體金法檢測(cè)重復(fù)采樣例數(shù)更少。這說(shuō)明膠體金法用于丙肝抗體的檢測(cè)，檢測(cè)方式所需時(shí)間短，檢測(cè)方式根據(jù)顯色的情況判定結(jié)果陽(yáng)性或陰性，相比酶聯(lián)法得出結(jié)果的時(shí)間更短，這樣對(duì)于大規(guī)模丙肝篩查更有利，因?yàn)槊坷龢颖緳z測(cè)時(shí)間短，能夠在短時(shí)間獲得具體結(jié)果，為丙肝的進(jìn)一步識(shí)別提供參考。而膠體金法較少的重復(fù)采樣例數(shù)，也可以避免反復(fù)采樣給篩查人員帶來(lái)的困擾，使得檢驗(yàn)人員的滿意度得到提高，這樣也為大規(guī)模的篩查丙肝提供重要幫助，實(shí)現(xiàn)對(duì)丙肝的有效防范干預(yù)。

綜上所述，在對(duì)丙肝疾病的診斷上，采取酶免法與膠體金法進(jìn)行丙肝抗體的檢測(cè)，兩種方式對(duì)丙肝抗體的陽(yáng)性檢出率均較高，但相比之下，應(yīng)用膠體金法檢測(cè)花費(fèi)時(shí)間更短，且重復(fù)采樣情況也更少，因此若是需進(jìn)行丙肝大規(guī)模篩查，可選擇膠體金法作為首選檢測(cè)方式。

參考文獻(xiàn)

[1] 魏利霞.酶免法和膠體金法檢測(cè)丙肝抗體的結(jié)果比較[J].現(xiàn)代醫(yī)用影像學(xué)，2018，27（4）：1350，1354.

[2] 高源.ELISA與GICA在丙肝病毒抗體檢測(cè)中的對(duì)比[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2019，13（15）：374.

[3] 武國(guó)超.分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測(cè)中的價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)療器械信息，2021，27（11）：155-156.

[4] 張良，楊蕊.ELISA實(shí)驗(yàn)中微量加樣量對(duì)檢測(cè)丙肝抗體的影響研究[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2019，23（16）：94-95.

[5] 陳劍鋒，常樂(lè)，劉虹，等.兩種化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑用于血液篩查丙肝抗體的檢測(cè)性能評(píng)價(jià)[J].中國(guó)輸血雜志，2021，34（2）：123-127.

[6] 靳秀英.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)丙肝抗體聯(lián)合丙肝核心抗原在丙型肝炎診斷中的作用[J].中國(guó)藥物與臨床，2020，20（1）：131-132.

[7] 崔莉，梁亦潔.酶免法和膠體金法檢測(cè)丙肝抗體的結(jié)果比較[J].糖尿病天地，2019，16（7）：116-117.