偽狂犬病病毒感染小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9介導(dǎo)緊密連接蛋白損傷血腦屏障的研究

摘 要： 旨在探究偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）對(duì)小鼠血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）通透性的影響及基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）與緊密連接（tight junction，TJ）的相關(guān)性。將昆明SPF小鼠96只，隨機(jī)平均分為對(duì)照組和3個(gè)試驗(yàn)組，24只對(duì)照組小鼠滴鼻生理鹽水，72只試驗(yàn)組小鼠滴鼻感染PRV，將試驗(yàn)組分為感染24 h組、感染48 h組和感染72 h組，每組24只。觀察臨床癥狀并采用Hamp;E染色觀察病理?yè)p傷情況；通過(guò)改良型神經(jīng)學(xué)評(píng)分和腦組織病毒載量測(cè)定評(píng)價(jià)PRV感染后神經(jīng)損傷情況與病毒載量的關(guān)系；通過(guò)干濕重法和伊文斯藍(lán)染色法探究血腦屏障的通透性；通過(guò)mRNA和蛋白表達(dá)差異水平探究MMP-9和TJ的相關(guān)性。結(jié)果顯示，攻毒后腦組織病變程度隨時(shí)間延長(zhǎng)而加劇，在攻毒48 h后，腦組織病毒載量出現(xiàn)顯著性差異；神經(jīng)功能損傷評(píng)分在第72小時(shí)達(dá)到最高；干/濕重值及腦組織伊文斯藍(lán)濃度呈時(shí)間依賴性；MMP-9與TJ的相關(guān)性結(jié)果表明，PRV攻毒后MMP-9表達(dá)量增加，TJ表達(dá)量減少。結(jié)果表明，PRV感染通過(guò)MMP-9介導(dǎo)的TJ蛋白表達(dá)量的降低損害BBB的完整性及通透性。綜上所述，PRV感染可能通過(guò)MMP-9介導(dǎo)的破壞來(lái)?yè)p害BBB，為進(jìn)一步闡明PRV入侵機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞： MMP-9；偽狂犬病病毒；血腦屏障；TJ蛋白

中圖分類號(hào)：S858.285.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A""" 文章編號(hào)：0366-6964（2024）05-2186-09

收稿日期：2023-08-22

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（32360903）

作者簡(jiǎn)介：張 穎（1999-），女，彝族，云南昆明人，碩士，主要從事臨床獸醫(yī)學(xué)研究，E-mail：473092808@qq.com

*通信作者：舒相華，主要從事豬重要疫病防控與創(chuàng)新、新中獸藥創(chuàng)制和養(yǎng)殖場(chǎng)服務(wù)，E-mail：1633992175@qq.com

Study on the Damage of Blood-brain Barrier by Tight Junction Protein Mediated by MMP-9 in Pseudorabies Virus-infected Mice

ZHANG" Ying1， SONG" Chunlian1，2， ZHANG" Ying1， SHEN" Hong1， SHU" Xianghua1*， YANG" Honggui3

（1.College of Veterinary Medicine， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201，" China;

2.Kunming Weimude Biotechnology Co. Ltd， Kunming 650051， China;

3.Animal Husbandry Technology Promotion Station of Luxi County，

Honghe Hani and Yi Autonomous Prefecture， Luxi" 652499，" China）

Abstract：" The experiment aims to investigate the effect of pseudorabies virus （PRV） on the permeability of blood-brain barrier in mice and the correlation between matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） and tight junction （TJ）. Ninety-six Kunming SPF mice were randomly divided into control group and experimental group. Twenty-four mice of control group received nasal saline and seventy-two mice of experimental group received nasal PRV infection. The experimental groups were divided into 24 h infection group， 48 h infection group and 72 h infection group， each group consisted of 24. The clinical symptoms and the pathological lesions were observed by Hamp;E staining. The relationship between nerve damage and viral load after PRV infection was evaluated by modified neurological score and viral load measurement in brain tissue. The permeability of blood-brain barrier was investigated by wet-dry weight method and Evans blue staining method. The correlation between MMP-9 and TJ was explored through mRNA and protein expression differences. The results showed that the degree of brain lesions increased with the extension of time， and the nerve function injury score reached the highest at the 72nd hour. There were significant differences in viral load in brain tissue 48 hours after challenge. W/D， and Evans blue concentration in brain tissue were time-dependent. The correlation between MMP-9 and TJ showed a positive correlation between MMP-9 and TJ expression. After PRV infection， the expression of MMP-9 increased， and the expression of TJ decreased. The results showed that PRV infection impairs BBB integrity and permeability through an MMP-9-mediated decrease of TJ protein expression. In summary， PRV infection may damage BBB through MMP-9-mediated destruction， which lays a foundation for further elucidation of the PRV invasion mechanism.

Key words： MMP-9; pseudorabies virus; blood-brain barrier; TJ protein

*Corresponding author：" SHU Xianghua， E-mail： 1633992175@qq.com

偽狂犬病病毒（pseudorabies virus， PRV）感染能夠引起腦膜脊髓炎和神經(jīng)節(jié)炎，是一種急性病毒性傳染?。?］。PRV臨床上引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病，導(dǎo)致腦組織出血壞死性損害，神經(jīng)功能障礙較嚴(yán)重。作為能夠引起“嗜神經(jīng)性”的一個(gè)重要疾病，該病的發(fā)生可能與血腦屏障的損傷有著密切聯(lián)系。

血腦屏障（blood-brain barrier， BBB）是建立和維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)的微環(huán)境穩(wěn)定性的重要屏障，其通過(guò)緊密連接（tight junction， TJ）及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白阻止嗜神經(jīng)性病原體及其他物質(zhì)入侵［2-3］。ZO-1（zonula occludens-1）蛋白與維持細(xì)胞骨架的緊密連接相關(guān)［4-5］。Occludin在TJ的組裝和細(xì)胞旁屏障中起重要作用［6］。Collagen IV是血腦屏障基底膜的重要組成部分，同時(shí)也是衡量TJ功能變化的重要指標(biāo)之一［3］。

基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase， MMPs）在腦損傷的疾病中受到了廣泛關(guān)注。很多研究表明，MMP-9參與神經(jīng)免疫性和中樞系統(tǒng)疾病血腦屏障的損害［7-8］。但是對(duì)于PRV侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)是否引起MMP-9表達(dá)增高，進(jìn)而破壞血腦屏障通透性的研究未見(jiàn)報(bào)道。小鼠是PRV感染相關(guān)研究的常用動(dòng)物［9］。因此，本研究探討PRV感染小鼠后MMP-9與TJ的相關(guān)性，以期通過(guò)抑制MMP-9的表達(dá)為治療PRV提供新的治療策略。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物及病毒來(lái)源

4周齡，體重為22～30 g的昆明SPF小鼠96只。購(gòu)自昆明醫(yī)科大學(xué)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滇）K20200004。PRV病毒液，由云南省高校畜禽重要疾病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存提供［10］。

1.1.2 主要試劑

伊文斯藍(lán)染料購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；TRIzol總RNA提取試劑盒購(gòu)自中國(guó)TaKaRa公司；蛋白質(zhì)定量試劑盒購(gòu)自美國(guó)Abbkine公司；β-actin （D6A8）Rabbit mAb購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling公司；MMP-9、ZO-1、Collagen IV、Occludin 抗體購(gòu)自江蘇親科生物研究中心有限公司。

1.1.3 主要儀器

全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司；熒光定量PCR儀、蛋白電泳儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)購(gòu)自上海天能生命科學(xué)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及采樣

將96只昆明SPF小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組。24只對(duì)照組：生理鹽水滴鼻60 μL·只-1；72只試驗(yàn)組：PRV滴鼻感染60 μL·只-1，將試驗(yàn)組分為感染24 h組、感染48 h組和感染72 h組，每組24只。

1.2.2 HE染色

收集PRV感染小鼠腦組織，在10%多聚甲醛中保存。每個(gè)組織被切成5 mm×5 mm×3 mm大小的切片，并按照標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行處理。取厚度為5 μm的福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，蘇木精和伊紅染色并觀察。

1.2.3 mNSS評(píng)分

采用改良的NSS（modified neurological severity scores， mNSS）評(píng)分法對(duì)小鼠神經(jīng)功能損傷程度進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分方法見(jiàn)表1。

1.2.4 干濕法測(cè)定小鼠腦組織含水量

使用2%戊巴比妥鈉50 mg·kg-1（2.5 μL·g-1）深度麻醉后斷頭，剝?nèi)⊥暾X組織，置于干凈濾紙，去除表面滲液及血液。萬(wàn)分之一天平稱濕重（WW）后置于95℃烤箱中，連續(xù)烘烤24 h后稱干重（DW）。按下述公式計(jì)算腦組織濕重/干重（wet/dry weight ratio， W/D）值。

W/D=（WW-DW）/WW×100%

1.2.5 伊文斯藍(lán)染色法檢測(cè)BBB通透性

將0.5% 伊文斯藍(lán)（Evans blue，EB）染液（4 mL·kg-1）經(jīng)尾靜脈注射，待小鼠眼球結(jié)膜、四肢呈藍(lán)色后開(kāi)始計(jì)時(shí)。2 h后，深度麻醉，斷頭取腦組織。將腦組織置于1.5 mL 50%三氯乙酸中充分勻漿，1 500 r·min-1離心10 min，取上清與無(wú)水乙醇1∶3混合，在波長(zhǎng)630 nm處測(cè)定OD值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算每克腦組織中EB含量，結(jié)果以“μg·g-1”計(jì)［11］。

1.2.6 qPCR測(cè)定小鼠腦組織PRV病毒載量和MMP-9、ZO-1、Collagen IV、Occludin mRNA水平

每組分別取8只小鼠，沿中線把腦組織分為左右半腦。用TRIzol試劑從各組小鼠腦組織中分離總核酸。一部分利用First Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。DNA與cDNA定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（qRT-PCR），采用TaKaRa biotech Co.， Ltd. One-Step SYBR PrimeScriptTM RT-PCR Kit II進(jìn)行。以管家基因β-actin作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法統(tǒng)計(jì)計(jì)算，測(cè)定gB、MMP-9、ZO-1、occludin、collagen IV mRNA水平。每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次。使用NCBI網(wǎng)站設(shè)計(jì)引物，引物序列如表2。

1.2.7 腦組織MMP-9、ZO-1、Collagen IV、Occludin蛋白相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)

采用Western blot（WB）法檢測(cè)腦組織MMP-9、ZO-1、Occludin、Collagen IV蛋白相對(duì)表達(dá)量。每組分別取小鼠8只，采用斷頭法剝?nèi)∧X組織。用RIPA裂解緩沖液裂解細(xì)胞并加入蛋白酶抑制劑。采用BCA法進(jìn)行蛋白定量。遵循標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)免疫印跡方案，按1∶2 000分別稀釋兔源MMP-9、ZO-1、Occludin、Collagen IV一抗，1∶6 000稀釋山羊抗兔二抗。以目的蛋白條帶灰度值/β-actin條帶灰度值比值計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。

1.2.8 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)

GraphPad Prism 5及SPSS 20.0用于數(shù)據(jù)分析及可視化。采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）”表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 臨床癥狀表現(xiàn)及病理變化

2.1.1 臨床癥狀表現(xiàn)

PRV攻毒小鼠臨床癥狀表現(xiàn)如圖1所示。第24小時(shí)組小鼠出現(xiàn)畏冷現(xiàn)象，第72小時(shí)組神經(jīng)癥狀最明顯，出現(xiàn)被毛混亂，弓背，表現(xiàn)出呼吸急促，戰(zhàn)栗，嗜睡現(xiàn)象，眼鼻部出血，精神極度沉郁。第48小時(shí)組開(kāi)始出現(xiàn)小鼠死亡現(xiàn)象，且所有小鼠均在80 h內(nèi)死亡。

2.1.2 病理剖檢變化

PRV攻毒小鼠病理剖檢變化如圖1所示。第48小時(shí)小鼠腦組織出現(xiàn)腦膜充血、水腫的現(xiàn)象，第72小時(shí)充血、水腫的現(xiàn)象最明顯，且腦膜出現(xiàn)明顯的血絲。

2.1.3 病理鏡檢變化

PRV攻毒小鼠病理剖檢變化如圖1所示?？瞻讓?duì)照組腦組織鏡檢顯示有較多的尼氏小體及小膠質(zhì)細(xì)胞。第24小時(shí)可見(jiàn)尼氏小體數(shù)量減少，并出現(xiàn)少量的嗜酸性包涵體和淋巴細(xì)胞。第48小時(shí)可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞溶解，神經(jīng)元溶解形成空洞。第72小時(shí)鏡下未見(jiàn)正常尼氏小體，可見(jiàn)嗜酸性包涵體和大量神經(jīng)元溶解后形成的空洞，并伴有“血管套”現(xiàn)象。

2.2 神經(jīng)功能損傷情況及腦組織中病毒載量的測(cè)定

2.2.1 神經(jīng)功能損傷情況

第24、48、72小時(shí)各組小鼠神經(jīng)功能損傷情況如圖2A所示，PRV攻毒后對(duì)小鼠神經(jīng)功能的損傷隨攻毒時(shí)間的延長(zhǎng)而加劇，與對(duì)照組相比，第24小時(shí)差異不顯著（P≥0.05）；第48和72小時(shí)差異極顯著（P＜0.01）。

2.2.2 腦組織病毒載量測(cè)定

腦組織病毒載量測(cè)定如圖2 B所示。PRV攻毒后對(duì)小鼠腦組織病毒載量隨攻毒時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，與對(duì)照組相比，第24小時(shí)差異不顯著（P≥0.05）；第48及72小時(shí)差異極顯著（P＜0.01）。

2.3 BBB通透性的影響

2.3.1 腦組織含水量測(cè)定

PRV攻毒第24、48、72小時(shí)各組小鼠W/D值如圖3 A所示。PRV攻毒后小鼠腦組織W/D值升高，且隨攻毒時(shí)間增加，W/D值越高。與對(duì)照組相比，第24小時(shí)W/D值差異顯著（P＜0.05）；第48和72小時(shí)W/D值差異極顯著（P＜0.01）。

2.3.2 伊文斯藍(lán)濃度

PRV攻毒第24、48、72小時(shí)腦組織伊文斯藍(lán)濃度如圖3 B所示。結(jié)果顯示，PRV攻毒后小鼠腦組織伊文斯藍(lán)濃度呈時(shí)間依賴性。與對(duì)照組相比，攻毒第24小時(shí)伊文斯藍(lán)含量差異不顯著（P≥0.05）；攻毒第48和72小時(shí)伊文斯藍(lán)含量差異極顯著（P＜0.01）。

2.4 PRV感染小鼠腦組織中MMP-9與TJ的相關(guān)性

2.4.1 MMP-9與TJ mRNA的相關(guān)性

PRV攻毒第24、48、72小時(shí)MMP-9、ZO-1、Occludin、Collagen IV mRNA的相關(guān)性如圖4 B所示。結(jié)果顯示，PRV攻毒后，MMP-9 mRNA表達(dá)量呈現(xiàn)先上升再趨于平穩(wěn)的趨勢(shì)，且在第72小時(shí)表達(dá)量最高，與對(duì)照組相比，MMP-9蛋白相對(duì)轉(zhuǎn)錄量在第48和72小時(shí)極顯著升高（P＜0.01）；ZO-1、Occludin、Collagen IV mRNA表達(dá)量呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢(shì)，且在第24小時(shí)轉(zhuǎn)錄量最高，第72小時(shí)轉(zhuǎn)錄量最低。第72小時(shí)組與對(duì)照組相比，差異顯著（Plt;0.05）。第72小時(shí)MMP-9與TJ mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

2.4.2 "MMP-9與TJ蛋白表達(dá)的相關(guān)性

PRV攻毒第24、48、72小時(shí)MMP-9、ZO-1、Occludin、Collagen IV蛋白表達(dá)量如圖4 A和C所示。結(jié)果顯示，PRV攻毒后，MMP-9表達(dá)量呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，且在第72小時(shí)表達(dá)量最高。第72小時(shí)與對(duì)照組相比，MMP-9蛋白相對(duì)表達(dá)量在各時(shí)間" 點(diǎn)極顯著升高（P＜0.01）；ZO-1、Occludin、Collagen IV蛋白表達(dá)量呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢(shì)，且在第24小時(shí)表達(dá)量最高，第72小時(shí)表達(dá)量最低。第72小時(shí)組與對(duì)照組相比，差異顯著或極顯著（Plt;0.05或P＜0.01）。第72小時(shí)MMP-9與TJ mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

3 討 論

PRV作為一種具有高度傳染性的嗜神經(jīng)病毒，不僅可導(dǎo)致豬的呼吸道疾病、消化系統(tǒng)疾病和流產(chǎn)，而且PRV感染還會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的急性神經(jīng)性疾?。?2］。且越來(lái)越多研究證明PRV可跨物種感染人，這使得PR成為公共衛(wèi)生問(wèn)題，需要引起極大重視［13］。但目前PRV對(duì)于MMP-9和TJ的關(guān)系尚不清楚。因此，本研究基于PRV小鼠體內(nèi)試驗(yàn)，記錄攻毒后小鼠的臨床癥狀及病理?yè)p傷情況，并對(duì)神經(jīng)癥狀進(jìn)行評(píng)分，測(cè)定腦組織病毒載量，通過(guò)伊文斯藍(lán)和腦組織含水量測(cè)定探究PRV對(duì)BBB通透性的影響，再通過(guò)qPCR和Western blot探究PRV攻毒后MMP-9與TJ表達(dá)量之間的關(guān)系。

臨床癥狀表現(xiàn)和Hamp;E染色結(jié)果均顯示，小鼠在PRV感染后出現(xiàn)了較明顯的神經(jīng)癥狀和非化膿性腦炎的現(xiàn)象。剖檢結(jié)果顯示，隨著攻毒時(shí)間的延長(zhǎng)，腦組織出現(xiàn)腦膜充血、水腫的現(xiàn)象。經(jīng)過(guò)鏡檢發(fā)現(xiàn)，腦組織血管周圍存在大量炎癥細(xì)胞，這些細(xì)胞會(huì)形成“血管套”和較多的嗜酸性包涵體。

NSS評(píng)分是評(píng)估神經(jīng)功能損傷情況的重要指標(biāo)。有文獻(xiàn)報(bào)道［14］，大鼠腦出血模型建造成功后，通過(guò)觀察其行為學(xué)的變化來(lái)判斷試驗(yàn)鼠腦水腫的演變，兩者基本成正相關(guān)關(guān)系。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRV攻毒后小鼠的神經(jīng)功能損傷情況與攻毒時(shí)間呈時(shí)間依賴性。攻毒第48小時(shí)，其中一鼠的NSS評(píng)分高于同組內(nèi)其他小鼠，作者猜測(cè)與小鼠個(gè)體免疫力差異有關(guān)。

腦組織病毒分離檢測(cè)是目前病毒性腦炎的金標(biāo)準(zhǔn)［15］。PRV作為嗜神經(jīng)性傳染病，感染小鼠后出現(xiàn)腦出血、充血及水腫等腦炎癥狀。本試驗(yàn)測(cè)定攻毒后不同時(shí)間點(diǎn)腦組織病毒載量來(lái)判斷PRV在小鼠體內(nèi)的神經(jīng)侵襲力。Zhang等［16］通過(guò)測(cè)定SARS-CoV-2感染后，K2-hACE18轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織病毒載量，判斷SARS-CoV-2的神經(jīng)侵襲力。

伊文斯藍(lán)染色法是常用的腦組織BBB通透性和損傷評(píng)價(jià)方法［17］。測(cè)定腦組織水分含量是評(píng)估腦水腫嚴(yán)重程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)［18］，其中，干濕重法是目前最常用的方法，它能夠準(zhǔn)確地反映出腦水腫的嚴(yán)重程度，從而更好地了解BBB的狀態(tài)和損害程度［19］。本研究觀察到PRV攻毒后小鼠BBB的通透性增加和腦組織水腫加重。

MMP-9是破壞血腦屏障的一種明膠酶，機(jī)體受到病原體感染后，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生病毒性腦膜炎等病理?yè)p傷，致使MMP-9在腦組織中表達(dá)水平增加。周瑜等［20］研究發(fā)現(xiàn)，在皰疹病毒感染后第3天，MMP-9表達(dá)量明顯增高，到第7天時(shí)表達(dá)量更高，相應(yīng)的，腦水腫加重。與本試驗(yàn)結(jié)果一致，表明MMP-9表達(dá)與病毒感染時(shí)間有關(guān)，間接說(shuō)明與腦組織受損程度相關(guān)。

緊密連接蛋白是BBB的重要組成部分，BBB結(jié)構(gòu)和功能的改變與緊密連接蛋白的表達(dá)息息相關(guān)［21］。病原體穿越BBB有兩種途徑，跨細(xì)胞和細(xì)胞旁途徑，后者由內(nèi)皮細(xì)胞之間的TJ調(diào)節(jié)［17］。最近的研究表明，MMP-9能夠降解血腦屏障基質(zhì)成分，導(dǎo)致緊密連接蛋白ZO-1和Occludin減少，進(jìn)而增加血腦屏障通透性，使得腦血腫和周圍水腫進(jìn)一步加重［16］。同時(shí)，Collagen IV可被MMPs降解，MMP-9介導(dǎo)的Collagen IV降解通常被認(rèn)為有助于病毒性腦病中BBB的分解［22］。本研究發(fā)現(xiàn)，PRV攻毒后，MMP-9蛋白表達(dá)量升高；攻毒后24 h內(nèi)，緊密連接蛋白表達(dá)量升高，BBB緊密連接性更好。48～72 h BBB的緊密連接受到破壞。攻毒24 h內(nèi)緊密連接蛋白表達(dá)升高，猜測(cè)與機(jī)體代償性抵抗外界損傷有關(guān)，其相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究揭示了PRV感染小鼠后，MMP-9與緊密連接蛋白ZO-1、Occludin、Collagen IV的存在相關(guān)性。提示PRV進(jìn)入機(jī)體引發(fā)神經(jīng)癥狀可能與MMP-9蛋白的表達(dá)和BBB的破壞密切相關(guān)，為治療PRV有潛在的參考意義，但其具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本研究探討了PRV感染小鼠后MMP-9與TJ的相關(guān)性，首次揭示了PRV與血腦屏障之間的關(guān)系，研究得出PRV攻毒后能夠引起小鼠的神經(jīng)功能損傷，改變小鼠血腦屏障的通透性，且MMP-9與TJ表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，由此推測(cè)PRV感染可能通過(guò)MMP-9介導(dǎo)的破壞來(lái)?yè)p害BBB，為進(jìn)一步闡明PRV入侵機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

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（編輯 "白永平）