兒童EBV傳染性單核細胞增多癥細胞因子IL-6、γ-IFN、IL-10的改變

【摘要】 目的 探討EB病毒（EBV）感染的傳染性單核細胞增多癥（IM）患兒淋巴細胞亞群和細胞因子IL-6、γ-IFN、IL-10的變化及臨床意義。

方法 選擇2018年9月至2020年8月蘇州大學附屬兒童醫(yī)院感染科收治的EBV感染的IM患兒100例作為病例組。同期在蘇州大學附屬兒童醫(yī)院兒童保健科體檢的健康兒童60名作為對照組。采用流式細胞術和酶聯(lián)免疫吸附試驗分別檢測IM患兒及對照組的外周血淋巴細胞亞群和細胞因子（IL-6、IL-10、γ-IFN）水平。

結果 病例組細胞因子IL-6、IL-10、γ-IFN高于對照組（P＜0.05或0.001）。病例組CD3+、CD3+CD8+百分比高于對照組，而CD3+CD4+、CD19+CD23+、CD3-CD（16+56）+、CD3-CD19+百分比、CD4+/CD8+比值低于對照組，兩組差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.001）。兩組間異型淋巴細胞百分比、WBC、ALT、AST、LDH差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05或0.01）。病例組IL-6與異型淋巴細胞百分比、WBC、血漿EBV-DNA病毒載量、ALT、LDH無相關性（P＞0.05），與AST呈正相關（P＜0.05）。病例組IL-10與異型淋巴細胞百分比、WBC、血漿EBV-DNA病毒載量、ALT、AST、LDH均無相關性（P＞0.05）。病例組γ-IFN與異型淋巴細胞百分比、WBC、ALT、LDH無相關性（P＞0.05），與血漿EBV-DNA病毒載量和AST呈正相關（P＜0.05）。病例組IL-6與CD3+、CD3+CD8+百分比呈負相關（P＜0.05或0.001），與CD3+CD4+、CD3-CD19+百分比、CD4+/CD8+呈正相關（P＜0.05或0.001），與CD19+CD23+、CD3-CD（16+56）+百分比無相關性（P＞0.05）。病例組IL-10與CD19+CD23+、CD3-CD19+百分比呈正相關（P＜0.05），與CD3+呈負相關（P＜0.05），與CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD（16+56）+百分比、CD4+/CD8+無相關性（P＞0.05）。病例組γ-IFN與CD3+、CD3+CD8+百分比呈負相關（P＜0.05），與CD19+CD23+、CD3+CD4+、CD3-CD（16+56）+、CD3-CD19+百分比、CD4+/CD8+無相關性（P＞0.05）。

結論 EBV感染的傳染性單核細胞增多癥患兒的免疫改變和炎癥反應與疾病的發(fā)生、發(fā)展有關，IL-6、IL-10、γ-IFN參與傳染性單核細胞增多癥的免疫發(fā)病過程。

【關鍵詞】 兒童；EB病毒；傳染性單核細胞增多癥；淋巴細胞亞群；細胞因子

中圖分類號：R725.5"" 文獻標志碼：A"" DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2024.07.005

Changes of cytokines IL-6， γ-IFN， IL-10 in EBV infectious mononucleosis in children

JIN Dandan， ZHOU Weifang▲

（Department of Infectious Disease， Children's Hospital of Soochow University/Suzhou Key Laboratory of

Accurate Diagnosis and Treatment of Infectious Diseases in Children， Suzhou 215000， Jiangsu， China）

【Abstract】 Objective To investigate the changes of lymphocyte subsets， cytokines IL-6， γ-IFN and IL-10 in infectious mononucleosis （IM） children infected with Epstein-Barr virus （EBV） and their clinical significance.

Methods A total of 100 children with EBV infected IM who were admitted to the Infectious Diseases Department of Children's Hospital of Soochow University from September 2018 to August 2020 were selected as case group. A total of 60 healthy children who underwent physical examination in the child health care department in the same hospital during the same period were selected as control group. The levels of lymphocyte subsets and cytokines （IL-6， IL-10， and γ-IFN） in peripheral blood of the children with IM and the control group were tested by flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay， respectively.

Results The cytokine levels of IL-6， IL-10， and γ - IFN in the case group were higher than those in the control group （Plt;0.05 or 0.001）. CD3+and the percentage of CD3+CD8+in the case group were higher than those in the control group， while the percentages of CD3+CD4+， CD19+CD23+， CD3-CD （16+56）+， CD3-CD19+， and CD4+/CD8+ratio were lower than those in the control group， and the differences between the two groups were statistically significant （Plt;0.001）. There were all statistically significant differences in the percentage of atypical lymphocytes， WBC， ALT， AST， and LDH between the two groups （Plt;0.05 or 0.01）. There was no correlation between IL-6 and the percentage of atypical lymphocytes， WBC， plasma EBV-DNA viral load， ALT， and LDH in the case group （Pgt;0.05）， but there was a positive correlation with AST （Plt;0.05）. There was no correlation between IL-10 and the percentage of atypical lymphocytes， WBC， plasma EBV-DNA viral load， ALT， AST， and LDH in the case group （Pgt;0.05）. In the case group， γ-IFN had no correlation with the percentage of atypical lymphocytes， WBC， ALT， LDH （Pgt;0.05）， but it was positively correlated with plasma EBV-DNA viral load and AST （Plt;0.05）. In the case group， IL-6 was negatively correlated with CD3+， the percentage of CD3+CD8+ （Plt;0.05 or 0.001）， positively correlated with the percentages of CD3+CD4+， CD3-CD19+ and CD4+/CD8+ （Plt;0.05 or 0.001）， but it was not correlated with the percentages of CD19+ CD23+， and CD3-CD （16+56）+ （Pgt;0.05）. In the case group， IL-10 was positively associated with the percentages of CD19+CD23+， CD3-CD19+ percentage （Plt;0.05）， negatively with CD3+ （Plt;0.05）， and it was not correlated with the percentages of CD3+CD4+， CD3+CD8+， CD3-CD （16+56）+， and CD4+/ CD8+（Pgt;0.05）. In the case group， γ -IFN was negatively associated with CD3+ and" the percentage of CD3+CD8+ （Plt;0.05）， but it had no correlation with the percentages of CD19+CD23+， CD3+CD4+， CD3-CD （16+56）+， CD3-CD19+， and CD4+/CD8+ （Pgt;0.05）.

Conclusion The immune changes and inflammatory response of EBV-infected children with IM are related to the occurrence and development of the disease， IL-6， IL-10 and γ-IFN are involved in the immunological pathogenesis of IM.

【Keywords】 children; Epstein-Barr virus（EBV）; infectious mononucleosis（IM）; lymphocyte subsets; cytokines

傳染性單核細胞增多癥（infectious mononucleosis，IM）通常引起一定程度的免疫功能紊亂，以細胞免疫為主，其水平變化在一定程度上能反映疾病的進展［1］?；純簷C體的免疫功能直接決定了其臨床預后，免疫功能紊亂影響器官功能，過度免疫反應甚至導致死亡。因此，監(jiān)測患者免疫功能的變化對于疾病的診治和轉歸具有重要的指導意義。EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染后機體可釋放細胞因子產(chǎn)生高細胞因子血癥及巨噬細胞活化，細胞因子既可以參與抗病毒過程，又可以參與人體的免疫損傷過程，從而導致組織損傷，甚至出現(xiàn)嚴重的噬血細胞綜合征（hemophagocytic lymphohistiocytosis，HLH）［2］。因此本文分析了IM兒童的細胞免疫功能及細胞因子γ-IFN、IL-6、IL-10的變化和它們的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年9月至2020年8月蘇州大學附屬兒童醫(yī)院感染性疾病科收治的EBV感染的IM兒童100名作為病例組，其中男60名，女40名，平均年齡（4.69±2.65）歲，入組標準：年齡≤18歲，IM診斷均參照《兒童主要非腫瘤性EB病毒感染相關疾病的診斷和治療原則建議》［3］的診斷標準，且通過臨床癥狀、血常規(guī)、異型淋巴細胞檢測、血漿EB病毒核酸、EB病毒抗體等檢查明確診斷，近半年無其他病毒感染。對照組為同期在本院兒童保健科行體檢的60名健康兒童，其中男32名，女28名，平均年齡（4.57±2.04）歲，入組標準：1個月內(nèi)無發(fā)熱、無淋巴結腫大；肝功能正常；近半年內(nèi)無病毒感染。所有入組兒童的排除標準：①先天性畸形者；②嚴重臟器功能障礙者；③合并惡性腫瘤者；④入組前接受過相關治療；⑤已接受糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、干擾素等藥物治療。研究經(jīng)蘇州大學附屬兒童醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，入組兒童經(jīng)監(jiān)護人知情同意。

1.2 方法

采用流式細胞術和酶聯(lián)免疫吸附試驗分別檢測IM患兒及對照組的外周血淋巴細胞亞群和細胞因子（IL-6、IL-10、γ-IFN）水平。病例組和對照組兒童均分別無菌抽取靜脈血，全血和血清置于-80 ℃冰箱保存，分別用于淋巴細胞亞群、血清細胞因子水平、外周血異型淋巴細胞比例、WBC、肝功能及血漿EBV-DNA病毒載量檢測。細胞因子檢測：采用ELISA抗體雙夾心法檢測IL-6、IL-10、γ-IFN，試劑盒由欣博盛生物科技有限公司生產(chǎn)，儀器為美國Thermo Scientific公司酶標儀，嚴格按照試劑和儀器說明書進行操作。

1.3 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 24.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料用頻數(shù)（n）或百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）“M（P75-P25）”表示，組間比較采用秩和檢驗，使用Pearson或Spearman相關分析進行相關性檢驗。檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。

2 結" 果

2.1 兩組兒童一般情況比較

病例組100名，其中男60名，女40名，平均年齡（4.69±2.65）歲，對照組60名，其中男32名，女28名，平均年齡（4.57±2.04）歲，兩組年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），具有可比性。

2.2 兩組兒童細胞因子IL-6、IL-10和γ-IFN的比較

病例組細胞因子IL-6、IL-10、γ-IFN高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或0.001）。見表1。

2.3 兩組兒童外周血淋巴細胞亞群的比較

病例組CD3+、CD3+CD8+百分比高于對照組，而CD3+CD4+、CD19+CD23+、CD3-CD（16+56）+、CD3-CD19+百分比和CD4+/CD8+比值低于對照組，兩組差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.001）。見表2。

2.4 兩組兒童異型淋巴細胞百分比、WBC、ALT、AST、LDH比較

兩組間異型淋巴細胞百分比、WBC、ALT、AST、LDH差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05或0.01）。見表3。

2.5 IM病例組IL-6與異型淋巴細胞百分比、WBC、血漿EBV-DNA病毒載量、ALT、AST、LDH相關性分析

病例組IL-6與異型淋巴細胞百分比、WBC、血漿EBV-DNA病毒載量、ALT、LDH無相關性（P＞0.05），與AST呈正相關（P＜0.05）。見表4。

2.6 IM病例組IL-10與異型淋巴細胞百分比、WBC、血漿EBV-DNA病毒載量、ALT、AST、LDH相關性分析

病例組IL-10與異型淋巴細胞百分比、WBC、血漿EBV-DNA病毒載量、ALT、AST、LDH均無相關性（P＞0.05）。見表5。

2.7 IM病例組γ-IFN與異型淋巴細胞百分比、WBC、血漿EBV-DNA病毒載量、ALT、AST、LDH相關性分析

病例組γ-IFN與異型淋巴細胞百分比、WBC、ALT、LDH無相關性（P＞0.05），與血漿EBV-DNA病毒載量和AST呈正相關（P＜0.05）。見表6。

2.8 IM病例組IL-6與淋巴細胞亞群的相關性分析

病例組IL-6與CD3+、CD3+CD8+百分比呈負相關（P＜0.05或0.001），與CD3+CD4+、CD3-CD19+百分比及CD4+/CD8+呈正相關，與CD19+CD23+、CD3-CD（16+56）+百分比無相關性（P＞0.05）。見表7。

2.9 IM病例組IL-10與淋巴細胞亞群相關性分析

病例組IL-10與CD19+CD23+、CD3-CD19+百分比呈正相關（P＜0.05），與CD3+呈負相關（P＜0.05），與CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD（16+56）+百分比、CD4+/CD8+無相關性（P＞0.05）。見表8。

2.10 IM病例組γ-IFN與淋巴細胞亞群的相關性分析

病例組γ-IFN與CD3+、CD3+CD8+百分比呈負相關（P＜0.05），與CD19+CD23+、CD3+CD4+、CD3-CD（16+56）+、CD3-CD19+百分比、CD4+/CD8+無相關性（P＞0.05）。見表9。

3 討" 論

本研究發(fā)現(xiàn)，病例組CD3+、CD3+CD8+百分比較對照組明顯升高，CD3+CD4+、CD19+CD23+、CD3-CD19+、CD3-CD（16+56）+百分比及CD4+/CD8+明顯低于對照組，提示患兒感染EBV后，致T細胞產(chǎn)生強烈的免疫反應使T淋巴細胞總數(shù)增加，但增加的T細胞為抑制性T細胞和細胞毒性T細胞，而CD4+/CD8+比值下降代表患兒免疫系統(tǒng)功能紊亂，免疫受損，從而抗病毒能力下降，因此患兒病情可能會加重［4］。而CD19+細胞減少可能與EBV的靶細胞為B細胞有關，EBV感染B細胞后，它可以表達特定的蛋白并改變其表面抗原，使B細胞成為CD3+CD8+細胞的靶細胞，從而使CD19+細胞減少［5］。我們的研究結果與張莉等人［6］報道的相似。

分泌IL-6的細胞主要是單核細胞、T細胞（Th2細胞）及成纖維細胞等，IL-6屬于免疫抑制因子，可以發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用，具有較強的免疫抗感染能力，且當機體感染巨細胞病毒后呈高水平表達［7］。IL-10主要由T細胞、單核細胞、巨噬細胞等產(chǎn)生，有免疫抑制作用，可對免疫反應進行負性調(diào)節(jié)［8］，發(fā)揮抑制和終止炎癥反應的生物學功能。γ-IFN主要由淋巴細胞分泌，能作用于干擾素受體，通過激活信號通道表達抗病毒蛋白來阻止病毒復制［9］，發(fā)揮抗病毒作用。張文良等［10］報道腸道病毒71型導致的手足口病患兒血清中γ-IFN、IL-6、IL-10、IL-2、IL-4的濃度均高于健康組，且重癥組這幾種細胞因子含量高于普通組。HLH存在高細胞因子血癥，血清γ-IFN、IL-10顯著升高，IL-6輕度升高的細胞因子譜對HLH病例可以提前做出診斷已有文獻報道［11］。兒童慢性活動性EBV感染（chronic active EBV infection，CAEBV）病例系列報告［12］顯示發(fā)病時IL-4、IL-10、IFN-γ升高發(fā)生率較高。本組病例IL-6、IL-10和γ-IFN水平較對照組明顯升高，提示它們參與了IM的免疫發(fā)病過程。其機制有待于我們今后進一步進行大樣本、多中心的研究進一步探討。異型淋巴細胞百分比、WBC、ALT、AST、LDH在病例組與對照組之間差異均有統(tǒng)計學意義，證實了病毒感染后機體免疫的改變和對組織器官的影響。

相關性分析發(fā)現(xiàn)，γ-IFN與血漿EBV-DNA病毒載量呈正相關，提示由于γ-IFN的抗病毒作用，EBV感染后機體抗病毒機制啟動，EBV的負載量越高，會引發(fā)更強的炎癥反應。IL-6、γ-IFN與AST呈正相關，雖然AST受影響因素較多，但可能有一定臨床意義，提示EBV感染通過細胞免疫參與、細胞因子的釋放增多，引發(fā)機體炎癥反應，致肝損害，AST的變化較ALT敏感。

對IL-6、IL-10、γ-IFN與淋巴細胞亞群的相關性分析發(fā)現(xiàn)，IL-6與CD3+、CD3+CD8+百分比呈負相關，與CD3+CD4+、CD3-CD19+百分比及CD4+/CD8+呈正相關；IL-10與CD19+CD23+、CD3-CD19+百分比呈正相關，與CD3+百分比呈負相關；γ-IFN與CD3+、CD3+CD8+百分比呈負相關。提示IL-6、IL-10、γ-IFN與CD3+T細胞、CD8+T細胞在IM的發(fā)生發(fā)展過程中具有協(xié)同作用。CD19+為B細胞表面標志，B細胞因表面有EBV抗體而成為EBV感染的靶細胞，而細胞毒性T細胞（CD8+細胞）識別并溶解受感染的B細胞來殺傷病毒［13］，本研究發(fā)現(xiàn)IL-10與B細胞呈正相關，提示EBV可通過細胞因子誘導機體B細胞增殖，IL-6、γ-IFN與CD8+呈負相關，提示EBV可通過細胞因子分泌增多來抑制CD8+細胞對病毒的殺傷作用，這也證實了EBV感染可誘導機體產(chǎn)生炎癥反應和細胞因子，并可借助細胞因子逃避宿主的免疫殺傷作用。

綜上所述，淋巴細胞亞群和血清學細胞因子的檢測對IM的診治具有重要意義。多指標聯(lián)合應用可大大提高對IM病情的判斷準確性，減少臨床對病情的誤判。給予IM患兒抗病毒藥物治療的同時，還可研究探索使用免疫系統(tǒng)激活類藥物，改變機體免疫紊亂狀態(tài)，提高患兒的免疫屏障功能來治療疾病，這為IM的臨床治療工作提供了新思路和新參考。

參 考 文 獻

［1］" 張余轉，游海星，李燕.匹多莫德聯(lián)合注射用更昔洛韋治療傳染性單核細胞增多癥的臨床研究［J］.中國臨床藥理學雜志，2018，34（9）：1014-1017.

［2］" TASCINI G， LANCIOTTI L， SEBASTIANI L， et al. Complex investigation of a pediatric haematological case： haemophagocytic syndrome associated with visceral leishmaniasis and Epstein—Barr （EBV） co-infection［J］. Int J Environ Res Public Health， 2018，15（12）：2672.

［3］" 中華醫(yī)學會兒科學分會感染學組，全國兒童EB病毒感染協(xié)作組.兒童主要非腫瘤性EB病毒感染相關疾病的診斷和治療原則建議［J］.中華兒科雜志，2016，54（8）：563-568.

［4］" 呂海濤，沈騰騰，鄭吉善，等.匹多莫德口服液輔助治療傳染性單核細胞增多癥的療效分析［J］.中國當代兒科雜志，2018，20（7）：563-566.

［5］" 劉璐瑤，孫金嶠，王曉川.EB病毒感染的免疫機制研究進展［J］.中國循證兒科雜志，2017，12（3）：219-232.

［6］" 張莉，朱紅勝，馬鈞，等.血清ADA、LDH及外周血淋巴細胞亞群比例聯(lián)合檢測對傳染性單核細胞增多癥的診斷價值［J］.檢驗醫(yī)學，2020，35（9）：881-884.

［7］" 劉曉宇，張俊紅，王丹丹，等.T細胞亞群檢測對傳染性單核細胞增多癥診斷的價值研究［J］.人民軍醫(yī)，2017，60（2）：166-167.

［8］" 謝付靜，孫紅娟，楊亞培，等.血漿白細胞抗原G、白細胞介素10水平在傳染性單核細胞增多癥診斷中的價值［J］.山東醫(yī)藥，2017，57（40）：95-96.

［9］" 張帆，安學芳，趙赫，等.Ⅰ型干擾素受體缺失小鼠體外受精實驗研究［J］.中國實驗動物學報，2020，28（3）：351-357.

［10］"" 張文良，甘海忠，吳飛，等.腸道病毒71型感染手足口病患兒Th1/Th2細胞因子變化［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2020，30（7）：1062-1065.

［11］"" 張垚，湯永民.兒童噬血細胞綜合征的研究進展［J］.中國小兒血液與腫瘤雜志，2020，25（2）：112-117.

［12］"" 胡波飛，張麗，施丹，等.兒童慢性活動性EB病毒感染18例病例系列報告［J］.中國循證兒科雜志，2019，14（6）：434-437.

［13］"" OTROLA B D， TRONCOSO L N， LVAREZ C D， et al. Hemophagocytic syndrome，current diagnostic and therapeutic approach［J］. Rev Med Chil， 2020，148（3）：371-380.

（收稿日期：2023-06-08 修回日期：2024-01-13）