丹曲膠囊對高脂血癥模型大鼠血脂及肝臟組織病理學(xué)的影響

摘要目的：觀察丹曲膠囊對高脂血癥模型大鼠血脂以及肝臟組織病理學(xué)的影響。方法：選取100只足月SD大鼠，用高脂飼料對90只SD大鼠造模，其余10只作為空白對照組，4周后將造模成功SD大鼠擇優(yōu)選取60只，隨機(jī)分為丹曲低劑量組（0.6 g/kg）、丹曲中劑量組（1.2 g/kg）、丹曲高劑量組（2.4 g/kg）、模型組、阿托伐他汀鈣組（10 mg/kg）、血脂康組（1.2 g/kg），每組10只。經(jīng)口飼分別給藥4周后，檢測各組大鼠血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測各組大鼠血清脂蛋白脂肪酶（LPL）、肝脂酶（HL）、脂肪酸合成酶（FAS）水平；計(jì)算大鼠肝臟系數(shù)；蘇木精-伊紅（HE）染色觀察肝臟組織病理學(xué)形態(tài)，油紅O染色觀察動脈組織病理學(xué)形態(tài)。結(jié)果：與空白對照組比較，模型組血清TC、LDL-C水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，丹曲高劑量組、中劑量組血清TC、LDL-C、HDL-C水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與血脂康組比較，丹曲高劑量組、中劑量組TC、TG、LDL-C水平明顯降低（P＜0.05），丹曲低劑量組TG明顯降低（P＜0.01）。各組血清LPL、HL、FAS水平以及肝臟系數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。肝臟組織病理學(xué)觀察顯示：與模型組比較，丹曲低劑量組肝細(xì)胞空泡變性減輕，多發(fā)片狀壞死消失；丹曲高劑量組、中劑量組以及阿托伐他汀鈣組肝細(xì)胞空泡變性減輕，多發(fā)片狀壞死、炎細(xì)胞浸潤消失。結(jié)論：丹曲膠囊通過降低血清TC和LDL-C水平，及時(shí)清掃多余的膽固醇，改善肝臟組織學(xué)病理病變情況，有效調(diào)節(jié)高脂血癥大鼠血脂水平。

關(guān)鍵詞高脂血癥；丹曲膠囊；血脂；肝臟組織病理學(xué)；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.15.010

丹曲膠囊源自雷忠義國醫(yī)大師針對胸痹心痛痰瘀毒互結(jié)證創(chuàng)立的丹曲方，為陜西省中醫(yī)醫(yī)院生產(chǎn)的院內(nèi)制劑，主要功效是宣痹散結(jié)、化瘀解毒，用于治療冠心病心絞痛胸痛、胸悶、煩躁、口苦、發(fā)熱等，中醫(yī)辨證為痰瘀毒互結(jié)證的病人［1］。臨床研究顯示，丹曲膠囊治療冠心病心絞痛、急性冠脈綜合征、心律失常、心力衰竭等痰瘀化熱郁毒證病人有很好的效果［2］。前期基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，丹曲膠囊對麻醉大鼠的收縮壓、舒張壓、脈壓、心率、心肌張力時(shí)間指數(shù)有一定的影響［3］，后期實(shí)驗(yàn)研究觀察丹曲膠囊對昆明小鼠的活動耐力、體質(zhì)量、骨、器官、組織的影響，發(fā)現(xiàn)其可以抗疲勞、改善骨質(zhì)疏松，且無重要器官損傷。本研究觀察丹曲膠囊對雄性高脂血癥大鼠血脂以及肝臟組織病理學(xué)的影響。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物

實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK（陜）2021-009。雄性SD大鼠100只，購于斯貝福（北京）。

1.1.2飼養(yǎng)環(huán)境

晝夜明暗交替時(shí)間：12 h/12 h，換氣次數(shù)：≥15次/h，溫度：20～26 ℃，壓強(qiáng)梯度≥10 Pa，相對濕度：40%～70%，并每天監(jiān)測記錄。

1.1.3飼料、墊料、飲用水

Co60輻照大小鼠維持飼料、高脂飼料（在維持飼料中添加20%蔗糖、15%豬油、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉，另加適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等），由江蘇省協(xié)同生物工程有限責(zé)任公司生產(chǎn)。滅菌玉米芯墊料，由德州谷美農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)。飲水為陜西國聯(lián)動物實(shí)驗(yàn)檢測中心BIST-WD-S500型動物飲水在線滅菌設(shè)備制取，動物飲水不限量，自由攝取。

1.1.4儀器

5 mL注射器、研缽、手術(shù)鑷、天平、手術(shù)剪、手術(shù)刀、止血鉗、紗布；RM6240BD型多道生理信號采集處理系統(tǒng)、YPJ01型壓力換能轉(zhuǎn)換器均由成都儀器廠生產(chǎn)。

1.1.5實(shí)驗(yàn)藥物及試劑

丹曲膠囊（陜藥制字Z20150054），陜西省中醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供；阿托伐他汀鈣片（北京嘉林藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H19050258）；血脂康膠囊（北大維信，國藥準(zhǔn)字Z10950029）；肝素鈉注射液（上海第一生化藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：31022051）；0.9%氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字51021158）；氨基甲酸乙酯（中國曹楊第二試劑廠，滬Q/HG22-771-68）。

1.1.6溶媒

純水：自制（超純水儀制備），保存條件：常溫10～30 ℃，現(xiàn)制現(xiàn)用。

1.2造模、分組及給藥方法

將100只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，隨機(jī)選取10只大鼠作為空白對照組，以普通飼料喂養(yǎng)，其余大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)，建立高脂血癥大鼠模型。4周后，所有大鼠均禁食，頸外靜脈采血，分離血清，用全自動生化分析儀測定血清三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。根據(jù)（TG＋TC）值將成功造模大鼠遴選60只，隨機(jī)分為模型組、丹曲低劑量組、丹曲中劑量組、丹曲高劑量組、阿托伐他汀鈣組、血脂康組，每組10只。丹曲膠囊小劑量組、中劑量組、大劑量組分別給予丹曲膠囊0.6、1.2、2.4 g/kg；阿托伐他汀鈣組給予阿托伐他汀鈣10 mg/kg；血脂康組給予血脂康1.2 g/kg；模型組給予生理鹽水1 mL/100 g體質(zhì)量。連續(xù)給藥4周后，腹主動脈采血離心得到血清備用，取肝臟，于10%甲醛溶液中固定，取動脈并置于包埋盒中－40 ℃冷藏。

1.3檢測指標(biāo)

1）體質(zhì)量測定：每周進(jìn)行1次體質(zhì)量稱量，按照最新體質(zhì)量計(jì)算給藥量。2）血脂檢測：全自動生化分析儀檢測造模后及給藥后大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。3）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測：采用ELISA試劑盒檢測血清脂蛋白脂肪酶（LPL）、肝脂酶（HL）、脂肪酸合成酶（FAS）的含量。4）計(jì)算肝臟系數(shù)：肝臟系數(shù)＝（肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量）×100%。5）組織病理學(xué)：各組大鼠肝臟組織用10%甲醛溶液固定后，經(jīng)脫水、透明、包埋、切片等步驟制作病理切片，進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）常規(guī)染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟組織的病理變化。各組大鼠動脈組織制備冰凍組織切片，油紅O染色，觀察動脈組織中脂質(zhì)沉積狀況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用IBM SPSS Statistics 20軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠體質(zhì)量比較

各組大鼠造模前體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；造模后、給藥末期，模型組、丹曲低劑量組體質(zhì)量均高于空白對照組（P＜0.05）；給藥末期，丹曲中劑量組、高劑量組大鼠體質(zhì)量與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1。

2.2各組血脂指標(biāo)比較

與空白對照組比較，模型組血清TC、LDL-C水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，丹曲高劑量組、中劑量組血清TC、LDL-C、HDL-C水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；丹曲各劑量組血脂指標(biāo)與阿托伐他汀鈣組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與血脂康組比較，丹曲高劑量組、中劑量組TC、TG、LDL-C水平明顯降低（P＜0.05），丹曲低劑量組TG明顯降低（P＜0.01）。詳見表2。

2.3各組血清LPL、HL、FAS水平以及肝臟系數(shù)比較

各組血清LPL、HL、FAS水平以及肝臟系數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表3。

2.4肝臟組織病理學(xué)觀察

肝臟組織病理學(xué)觀察顯示：空白對照組肝細(xì)胞排列整齊，大小形態(tài)正常，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，無病變和脂肪滴存在；模型組肝細(xì)胞廣泛空泡變性（＋＋＋＋）、多發(fā)片狀壞死（＋＋）、炎細(xì)胞浸潤（＋）；丹曲低劑量組肝細(xì)胞空泡變性（＋＋＋）、炎細(xì)胞浸潤（＋）；丹曲高劑量組、中劑量組以及阿托伐他汀鈣組肝細(xì)胞空泡變性（＋＋）；血脂康組大鼠肝細(xì)胞空泡變性（＋＋）、多發(fā)片狀壞死（＋）。詳見圖1。 圖1各組肝臟組織病理學(xué)變化

3討論

高脂血癥是一種通過繼發(fā)或原發(fā)引起血液中血脂過高，引起一些嚴(yán)重危害人體健康的脂質(zhì)代謝紊亂疾?。?］，如動脈粥樣硬化、冠心病、胰腺炎等。在中醫(yī)基礎(chǔ)理論中，認(rèn)為高脂血癥與痰、瘀、虛有關(guān)，與肝、脾、腎有密切關(guān)聯(lián)［5］。病因多為脾虛痰盛，恣食肥甘，痰濁內(nèi)生；或年老體虛，臟氣衰減，陰虛痰滯，終致痰積血瘀，化為脂濁，滯留體內(nèi)。針對高脂血癥，臨床上常使用的他汀類降脂藥雖然療效顯著，但是可能引發(fā)肝損傷等副作用［6］。在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，中藥已廣泛應(yīng)用于治療高脂血癥，具有療效好、毒副作用小等獨(dú)特的優(yōu)勢［7-8］。丹曲膠囊由丹參、紅曲、赤芍、牡丹皮、炙黃芪、法半夏、瓜蔞皮、水蛭、葛根、銀杏葉、三七、黃連、薤白組成。丹參素是從丹參中分離出的一種酚性芳香酸類化合物，可以降低TC含量，并通過降低FAS mRNA表達(dá)減少脂肪酸的合成，抑制內(nèi)源性膽固醇的合成［9］；夏莉等［10］研究表明，丹參多酚酸鹽可調(diào)節(jié)血脂水平、抑制炎性因子。紅曲是具有降脂作用的中藥，其有效降脂成分主要為酸式洛伐他汀，可以有效抑制體內(nèi)膽固醇合成酶3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMG-CoA），有降低血清TC、TG的作用［11］；貢覺央宗等［12］的研究表明，藏紅曲可以降低TC、TG、LDL-C 水平。丹皮酚具有抑制主動脈平滑肌細(xì)胞增殖及抗自由基作用，可抑制粥樣硬化斑塊形成［13］。劉鵬等［14］研究表明，丹皮酚異丁酸酯類衍生物 2c、2f 能明顯降低TC、TG、LDL-C水平。三七被廣泛用于治療心血管疾病，具有調(diào)節(jié)血脂、抑制肝損傷的作用［15］；吳志煥等［16］的研究表明，三七丹參片可以通過上調(diào)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1（ABCA1）、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1（ABCG1）表達(dá)，調(diào)控載脂蛋白水平來降低高脂血癥小鼠血脂水平，并能一定程度避免肝臟細(xì)胞脂肪樣病變。何小芳等［17］的研究表明，三七莖和葉水提物能降低高脂飲食小鼠TG、TC、LDL-C、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平，對高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪肝也有明顯的改善作用。銀杏葉能有效改善血脂、抑制動脈粥樣硬化形成［18］。許麥成等［19］的研究表明，銀杏葉提取物有降血脂的作用。陳焱［20］的研究表明，赤芍提取物能有效地調(diào)節(jié)早期糖尿病腎病大鼠的血脂，對糖尿病腎病大鼠腎損傷有一定的保護(hù)作用。王紅松等［21］的研究表明，半夏白術(shù)天麻湯對載脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠動脈粥樣硬化主動脈斑塊形成有一定的干預(yù)作用，其機(jī)制可能與半夏、白術(shù)降低血清 TG 和 LDL-C 水平發(fā)揮降血脂作用，下調(diào) MMP-9、TNF-α、IL-6 等保護(hù)血管免受炎癥損傷，降低氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、丙二醛（MDA）水平及提高超氧化物歧化酶（SOD）活性發(fā)揮抗氧化有關(guān)。封芬等［22］研究表明，黃連素與葛根素聯(lián)合應(yīng)用能降低糖尿病大鼠空腹血糖，改善糖耐量和血脂異常。楊震等［23］研究表明，瓜蔞皮可升高急性心肌梗死模型大鼠自由基氧化酶活性、總抗氧化能力，有效逆轉(zhuǎn)其體內(nèi)異常的氧化應(yīng)激狀態(tài)，瓜蔞皮可減輕急性心肌梗死各種癥狀，明顯降低血脂水平。周遵明等［24］研究表明，黃芪葛根湯對高脂飲食誘導(dǎo)的高脂血癥大鼠具有降血脂作用，并通過激活核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）/血紅素加氧酶1（HO-1） 通路改善高脂血癥大鼠的氧化應(yīng)激狀態(tài)。韓紫陽等［25］的研究表明，水蛭能夠通過改善血脂水平，降低氧化應(yīng)激，改善高脂血癥大鼠勃起功能，其作用通路可能涉及核因子κB（NF-κB）信號通路。鞠楷等［26］的研究表明，薤白具有較好的降血脂作用，其機(jī)制可能與上調(diào)肝組織中低密度脂蛋白受體（LDLR）、肝X受體α（LXRα）mRNA的表達(dá)有關(guān)。以上研究都證實(shí)丹曲膠囊中藥物組成有降低血脂的作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹曲膠囊低劑量（0.6 g/kg）、中劑量（1.2 g/kg）、高劑量（2.4 g/kg）對高脂血癥模型大鼠具有明顯的降脂作用。丹曲膠囊通過降低高脂血癥模型大鼠血清TC、LDL-C水平，調(diào)節(jié)高脂血癥大鼠血脂水平；通過改善肝的空泡變性、炎性細(xì)胞浸潤來減輕肝損傷。丹曲膠囊作為中成藥可以有效發(fā)揮降脂的作用，其在脂類代謝相關(guān)疾病方面的研究和具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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（收稿日期：2023-01-06）

（本文編輯郭懷印）