血清HBV-LP聯(lián)合PRKRA對HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌術(shù)后復發(fā)風險的預測價值

［摘要］目的分析血清乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）和干擾素誘導型雙鏈RNA依賴性蛋白激酶激活劑A（PRKRA）水平對乙型肝炎病毒相關(guān)原發(fā)性肝癌（HBV-PLC）術(shù)后復發(fā)風險評估的價值。方法收集確診為HBV-PLC病人105例，根據(jù)術(shù)后是否復發(fā)分為未復發(fā)組（38例）和復發(fā)組（67例）。比較兩組病人臨床基線資料、生化指標結(jié)果和病理資料；采用ELISA法檢測病人血清HBV-LP和PRKRA水平；采用Pearson相關(guān)性分析血清HBV-LP和PRKRA的關(guān)系，Cox回歸模型分析HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的危險因素；繪制受試者工作特征（ROC）曲線，分析HBV-LP聯(lián)合PRKRA檢測對HBV-PLC術(shù)后復發(fā)風險的預測價值。結(jié)果兩組病人性別、年齡、吸煙史、飲酒量、血清生化指標和肝硬化等差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），兩組甲胎蛋白（AFP）lt;25 μg/L、腫瘤大小、腫瘤包膜、肝轉(zhuǎn)移、血管侵襲和腫瘤分化程度差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.217～10.849，Plt;0.05）。與未復發(fā)組比較，復發(fā)組病人血清HBV-LP和PRKRA水平明顯升高（t=6.501、3.615，Plt;0.01）。HBV-PLC病人血清HBV-LP與PRKRA水平呈正相關(guān)（r=0.839，Plt;0.01）。腫瘤直徑（2～5 cm）、腫瘤包膜、腫瘤低分化、血清HBV-LP和PRKRA是HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的危險因素（HR=1.083～6.938，Plt;0.05）。ROC曲線分析顯示，血清HBV-LP和PRKRA水平及二者聯(lián)合對HBV-PLC病人術(shù)后復發(fā)有預測價值，ROC曲線下面積分別為0.796、0.685、0.822。結(jié)論血清HBV-LP和PRKRA水平升高是HBV-PLC病人術(shù)后復發(fā)的獨立危險因素，二者聯(lián)合檢測對HBV-PLC病人術(shù)后復發(fā)具有良好的預測價值。

［關(guān)鍵詞］乙型肝炎病毒；干擾素誘導的雙鏈RNA依賴激活劑；肝腫瘤；腫瘤復發(fā)，局部

［中圖分類號］R735.7［文獻標志碼］A［文章編號］2096-5532（2024）03-0407-05

doi：10.11712/jms.2096-5532.2024.60.088［開放科學（資源服務）標識碼（OSID）］

［網(wǎng)絡出版］https：//link.cnki.net/urlid/37.1517.R.20240711.1358.006;2024-07-1516：14：54

Value of serum hepatitis B virus large protein combined with interferon-inducible double-stranded RNA-dependent protein kinase activator A in predicting the risk of postoperative recurrence of hepatitis B virus-related primary liver cancerJIANG Shiyan， ZUO Li， CHEN Meili， HUANG Helong， JIAN Xueyao（Department of Immunology， School of Basic Medicine， Guizhou Medical University， Guiyang 550000， China）

［Abstract］ObjectiveTo investigate the value of the serum levels of hepatitis B virus large protein （HBV-LP） and interfe-ron-inducible double-stranded RNA-dependent protein kinase activator A （PRKRA） in predicting the risk of postoperative recurrence of hepatitis B virus-related primary liver cancer （HBV-PLC）. MethodsA totalof 105 patients who were diagnosed with HBV-PLC were enrolled， and according to the presence or absence of recurrence after surgery， they were divided into non-recurrence group with 38 patients and recurrence group with 67 patients. The two groups were compared in terms of clinical baseline data， biochemical parameters， and pathological data. ELISA was used to measure the serum levels of HBV-LP and PRKRA; a Pearson correlation analysis was used to investigate the correlation between serum HBV-LP and PRKRA， and the Cox regression model was used to analyze the risk factors for postoperative recurrence of HBV-PLC. The receiver operating characteristic （ROC） curve wasplotted to assess the value of HBV-LP combined with PRKRA in predicting the risk of postoperative recurrence of HBV-PLC.ResultsThere were no significant differences between the two groups in sex， age， smoking history， alcohol consumption， serum biochemical parameters， and liver cirrhosis （Pgt;0.05）， while there were significant differences between the two groups in alpha-fetoprotein lt;25 μg/L， tumor size， presence of capsule， liver metastasis， vascular invasion， and degree of tumor differentiation （χ2=4.217-10.849，Plt;0.05）. Compared with the non-recurrence group， the recurrence group had significant increases in the serum levels of HBV-LP and PRKRA （t=6.501，3.615;Plt;0.01）. There was a positive correlation between serum HBV-LP and PRKRA in HBV-PLC patients （r=0.839，Plt;0.01）. Tumor diameter （2-5 cm）， tumor encapsulation， poor tumor differentiation， and elevated serum levels of HBV-LP and PRKRA were risk factors for postoperative recurrence of HBV-PLC （HR=1.083-6.938，Plt;0.05）. The ROC curve analysis showed that the serum levels of HBV-LP and PRKRA used alone or in combination had a certain value in predicting postoperative recurrence in HBV-PLC patients， with an area under the ROC curve of 0.796， 0.685， and 0.822， respectively. ConclusionElevated serum levels of HBV-LP and PRKRA are independent risk factors for postoperative recurrence in HBV-PLC patients， and the combined measurement of serum HBV-LP and PRKRA has a good predictive value for postoperative recurrence in HBV-PLC patients.

［Key words］hepatitis B virus; interferon-inducible double stranded RNA-dependent protein kinase activator A; liver neoplasms; neoplasm recurrence， local

乙型肝炎病毒（HBV）是肝細胞癌（HCC）最重要的危險因素之一[1]。與非肝硬化病人相比，HBV相關(guān)肝硬化病人發(fā)生HCC的風險增加31倍，死亡率增加44倍[2]。盡管臨床上已有成熟的HBV疫苗，但全球范圍內(nèi)仍有約2.57億人感染HBV[3]。HCC早期診斷有利于預后，但目前的檢測手段存在局限性。乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）是HBV病毒粒子成熟的必需蛋白[4]。HBV-LP的濃度可能與HBV基因組的拷貝數(shù)相關(guān)[5]，而HBV基因組拷貝數(shù)又是肝癌復發(fā)的獨立危險因素，因此考慮HBV-LP可能也與HBV相關(guān)肝癌復發(fā)相關(guān)。干擾素誘導的雙鏈RNA依賴激活劑A（PRKRA）基因編碼的蛋白是RNA誘導沉默復合物。有研究發(fā)現(xiàn)，PRKRA高表達可能預示HBV相關(guān)HCC預后不良[6]。本研究探討血清HBV-LP和PRKRA對乙型肝炎病毒相關(guān)原發(fā)性肝癌（HBV-PLC）病人術(shù)后復發(fā)的預測價值，為HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的防治提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

收集2015年10月—2018年12月在本院進行手術(shù)治療的105例HBV-PLC病人臨床資料，其中男60例，女45例，年齡22～79歲，平均（53.09±16.24）歲。病人納入標準：①肝癌首次肝切除；②有乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性的慢性乙型肝炎病史；③無肝外轉(zhuǎn)移；④年齡gt;18歲。病人排除標準：①臨床數(shù)據(jù)不完整；②有肝臟惡性腫瘤的肝切除史；③有肝癌經(jīng)導管動脈化療栓塞史；④肝癌化療史；⑤肝癌結(jié)合膽管癌；⑥丙型肝炎表面抗體陽性，HCV-RNA負荷增加；⑦肝臟繼發(fā)性惡性腫瘤；⑧腫瘤直徑gt;5 cm。本文研究獲醫(yī)院倫理委員會批準，所有病人均簽署知情同意書。

1.2研究方法

所有病人均行根治性切除術(shù)，腫瘤完整切除、切緣凈，剩余肝組織無癌殘留。術(shù)后病人半年內(nèi)每個月行B超、甲胎蛋白（AFP）、肝功能復查，半年后3個月復查1次。腫瘤復發(fā)定義：①肝臟超聲檢查懷疑并經(jīng)CT或MRI檢查證實肝臟出現(xiàn)新病變，血清AFP升高或不升高；②通過肝臟超聲、CT或MRI檢測到肝臟中出現(xiàn)新病變，并在切除的標本中得到病理證實[7]。根據(jù)術(shù)后3年內(nèi)是否復發(fā)將病人分為復發(fā)組和未復發(fā)組。

1.3觀察指標

收集所有病人臨床基線資料，包括性別、年齡、抗病毒治療史、吸煙和飲酒情況。男性的飲酒量低于30 g/d或女性的飲酒量低于20 g/d定義為適度飲酒；飲酒量超過60 g/d定義為重度飲酒[8]。記錄所有病人肝腫瘤的特征，包括腫瘤直徑、分化、包膜、轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)和血管侵襲等。一夜禁食后采集病人血樣，檢測白細胞計數(shù)、血紅蛋白、血小板計數(shù)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、堿性磷酸酶（ALP）、清蛋白（ALB）、肌酐、AFP、HBsAg和乙型肝炎e抗原（HBeAg）。比較分析兩組病人臨床病理資料；另取血液樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測病人血清HBV-LP、PRKRA水平。

1.4統(tǒng)計學方法

應用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。連續(xù)變量采用±s或M（P25，P75）表示，其中正態(tài)分布的連續(xù)變量比較采用Student t檢驗，非正態(tài)分布變量比較采用Mann-Whitney非參數(shù)U檢驗；類別變量以例數(shù)和百分比表示，數(shù)據(jù)間的比較采用卡方檢驗。應用Pearson相關(guān)性分析血清HBV-LP和PRKRA的關(guān)系，Cox回歸模型分析HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的危險因素。繪制受試者工作特征（ROC）曲線，分析HBV-LP聯(lián)合PRKRA對HBV-PLC術(shù)后復發(fā)風險的預測價值。Plt;0.05為差異有顯著意義。

2結(jié)果

2.1兩組病人臨床資料比較

復發(fā)組病人67例，未復發(fā)組病人38例。兩組性別、年齡、吸煙史、飲酒量、血清生化指標和肝硬化等差異無顯著性（Pgt;0.05），AFPlt;25 μg/L、腫瘤大小、包膜、肝轉(zhuǎn)移、血管侵襲和腫瘤分化程度差異有顯著性（χ2=4.217～10.849，Plt;0.05）。見表1。

2.2兩組血清HBV-LP和PRKRA水平比較

與未復發(fā)組比較，復發(fā)組病人血清HBV-LP和PRKRA水平明顯升高（t=6.501、3.615，Plt;0.01）。見表2。

2.3HBV-PLC病人血清HBV-LP和PRKRA水平相關(guān)性

HBV-PLC病人血清HBV-LP和PRKRA水平呈正相關(guān)（r=0.839，Plt;0.01），見圖1。

多因素Cox回歸采用進入法進行變量篩選，以AFP≥25 μg/L、腫瘤直徑lt;2 cm、腫瘤無包膜、無血管侵襲、無肝轉(zhuǎn)移為參照組，腫瘤高分化為啞變量，分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑（2～5 cm）、腫瘤包膜、腫瘤低分化、血清HBV-LP和PRKRA高表達是HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的危險因素（HR=1.083～6.938，Plt;0.05），腫瘤直徑大、有包膜、低分化以及血清HBV-LP和PRKRA高表達的病人HBV-PLC術(shù)后更容易復發(fā)。見表3。

2.5HBV-LP聯(lián)合PRKRA對HBV-PLC術(shù)后復發(fā)風險的預測價值

應用ROC曲線圖評估HBV-LP、PRKRA以及HBV-LP聯(lián)合PRKRA（采用數(shù)學模型進行診斷）對HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的診斷效能，結(jié)果顯示，血清HBV-LP水平對HBV-PLC術(shù)后復發(fā)預測的曲線下面積（AUC）為0.796，靈敏度為77.6%，特異度63.2%，截斷值（Cut off值）為13.25 μg/L；血清PRKRA水平對HBV-PLC術(shù)后復發(fā)預測AUC為0.685，靈敏度82.1%，特異度47.4%，Cut off值為2.45 μg/L。HBV-LP聯(lián)合PRKRA對HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的預測價值最高，AUC為0.822，靈敏度88.1%，特異度60.5%。見圖2和表4。

3討論

HBV感染導致的HCC約占中國所有肝癌的80%[9]。肝移植和肝切除是公認的早期HCC治療方法[10]，但腫瘤的復發(fā)率很高，限制了HCC病人的長期生存率。因此，確定HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的危險因素以及有效的可預測指標，對于臨床醫(yī)生開發(fā)個體化術(shù)后輔助治療至關(guān)重要。

HBV-LP是3種病毒表面蛋白（大、中、?。┲凶畲蟮奶堑鞍?，在HBV與肝細胞的靶向、核心蛋白的相互作用以及病毒顆粒的釋放中起著至關(guān)重要的作用[11]。HBV-LP能促進病毒顆粒裝配和釋放，并與HBV DNA水平呈正相關(guān)，導致亞病毒顆粒儲存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔中，進而引起細胞應激，甚至細胞死亡或癌癥[12]。HBsAg、HBeAg和HBV DNA已被臨床用作判斷HBV感染、疾病嚴重程度和治療反應的指標[13]。研究顯示，HBV-LP可能是HBV感染的良好指標[4]。血清HBV-LP被認為是HBV感染的新標志物[14]，該標志物表明病毒復制和感染性病毒粒子的存在[15]。然而，在HBV感染人群中血清HBV-LP對HBV感染的臨床價值尚未闡明。本研究結(jié)果表明，HBV-PLC病人血清HBV-LP水平明顯升高，并且是HBV-PLC病人術(shù)后復發(fā)的獨立風險因素。

血清AFP一直是HCC篩查最常用的生物標志物，其靈敏度為41%～65%，特異度為80%～94%[16]。然而，AFP并非全部由肝癌細胞所分泌，一些肝硬化或肝炎病人血清AFP水平也可能升高[17]。研究表明，近一半的HCC病人AFP陰性，尤其是在早期和小HCC病人[17]。相關(guān)研究顯示，PRKRA可提高卵巢黏液癌細胞對奧沙利鉑的敏感性[18]。SNP rs2059691也與PRKRA mRNA表達增加和結(jié)直腸癌病人生存率下降相關(guān)[19]。然而，很少有研究關(guān)注PRKRA與HCC之間的關(guān)系，尤其是在HBV相關(guān)的HCC中。HU等[6]研究顯示，外周血中PRKRA的表達與血清AFP和CEA結(jié)合顯示出潛在的診斷效力，AUROC為0.908。另外有研究顯示，PRKRA顯示出比血清AFP更好的HBV相關(guān)HCC診斷能力[6]。DING等[20]的研究顯示，LINC00665是一種與PKR相互作用的長基因非編碼RNA，參與NF-κB信號激活并促進肝癌進展。受刺激的肝星狀細胞中的依賴雙鏈RNA的蛋白激酶（PKR）激活也可以促進HCC的發(fā)展。在丙型肝炎病毒感染的HCC中，PKR能夠上調(diào)C-Fos和C-Jun的活性，加速腫瘤發(fā)展[21]。此外，PRKRA可以與PKR激酶結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并在病毒感染的細胞中產(chǎn)生干擾素和細胞因子，通過靶向PKR和PRKRA之間的相互作用，抑制對應激的炎癥反應[22]。值得注意的是，炎癥是公認的癌癥標志物，對惡性腫瘤（包括HBV相關(guān)的HCC）的進展有重要促進作用[23]。因此，可以推測PRKRA和PKR之間的相互作用提高激活炎癥水平并導致HBV相關(guān)HCC的預后不良。本研究結(jié)果顯示，HBV-PLC病人血清PRKRA水平明顯升高，并且與血清HBV-LP呈顯著正相關(guān)；血清HBV-LP和PRKRA高表達、腫瘤包膜、腫瘤低分化以及腫瘤大?。?～5 cm）是HBV-PLC病人術(shù)后復發(fā)的獨立風險因素；血清HBV-LP水平的診斷價值優(yōu)于PRKRA，但兩者聯(lián)合診斷價值最優(yōu)。

綜上所述，腫瘤包膜、腫瘤低分化、腫瘤大?。?～5 cm）、血清HBV-LP以及PRKRA高表達是HBV-PLC術(shù)后復發(fā)的危險因素，血清HBV-LP聯(lián)合PRKRA檢測具有預測HBV-PLC病人術(shù)后復發(fā)的價值，可以為臨床個體化治療HBV-LPC提供可靠依據(jù)。

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（本文編輯黃建鄉(xiāng)）