基于癥狀.藥物網(wǎng)絡(luò)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討中醫(yī)藥治療慢性心力衰竭的癥藥對(duì)應(yīng)關(guān)系及機(jī)制

孫梓宜 王天琳 贠張君 林建國(guó) 孫曉寧 段錦龍 姚魁武

摘要 目的： 探討當(dāng)代醫(yī)家治療慢性心力衰竭（CHF）臨床驗(yàn)案中的驅(qū)動(dòng)型藥物及癥狀.藥物的對(duì)應(yīng)關(guān)系，并借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)揭示相關(guān)機(jī)制。 方法： 檢索中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)知識(shí)服務(wù)平臺(tái)與維普數(shù)據(jù)庫(kù)中當(dāng)代醫(yī)家以中藥方劑治療CHF的有效臨床驗(yàn)案。驗(yàn)案中包含的中醫(yī)四診信息及中藥處方利用FangNet平臺(tái)進(jìn)行驅(qū)動(dòng)型藥物的篩選及“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建。進(jìn)一步借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)構(gòu)建“藥物.成分.癥狀.疾病.靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，揭示藥物干預(yù)疾病癥狀的相關(guān)機(jī)制。 結(jié)果： 共獲得226例臨床驗(yàn)案，涉及268味藥物，其中23味為驅(qū)動(dòng)型藥物?！鞍Y狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)包含下肢腫脹、水腫、胸悶、氣喘、氣短、尿少等38個(gè)CHF常見(jiàn)癥狀；與茯苓、黃芪、白術(shù)、附子、丹參、桂枝等10味驅(qū)動(dòng)型中藥的對(duì)應(yīng)關(guān)系。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)構(gòu)建了“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)中胸悶對(duì)應(yīng)的丹參、葶藶子“藥物.成分.癥狀.疾病.靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，其中槲皮素、木犀草素、山柰酚、丹參酮ⅡA為篩選出的關(guān)鍵成分，G1/S期特異性細(xì)胞周期蛋白.D1（CCND1）、低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1A）、轉(zhuǎn)錄因子Jun（JUN）、蛋白激酶B1（AKT1）、轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶.3（CASP3）、Myc原癌蛋白（MYC）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）為篩選的關(guān)鍵靶點(diǎn)。富集分析顯示，丹參、葶藶子改善CHF病人胸悶癥狀的機(jī)制可能涉及凋亡信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控、細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶復(fù)合物、磷脂酰肌醇3.激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信號(hào)通路、腫瘤抑制基因p53信號(hào)通路、表皮生長(zhǎng)因子受體（ErbB）信號(hào)通路等生物學(xué)過(guò)程。 結(jié)論： 基于FangNet平臺(tái)構(gòu)建了當(dāng)代醫(yī)家治療CHF驗(yàn)案集合的“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)，發(fā)掘了CHF常用藥物與疾病癥狀之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，其中丹參、葶藶子改善胸悶的機(jī)制可能涉及抑制心肌細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)及促進(jìn)新生血管生成。

關(guān)鍵詞 ?慢性心力衰竭；“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)；數(shù)據(jù)挖掘；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；分子對(duì)接

doi： ?10.12102/j.issn.1672.1349.2024.10.001

Symptom.drug Correspondence and Mechanism of Traditional Chinese Medicine for the Treatment of Chronic Heart Failure Based on Symptom.drug Network and Network Pharmacology

SUN Ziyi， WANG Tianlin， YUN Zhangjun， LIN Jianguo， SUN Xiaoning， DUAN Jinlong， YAO Kuiwu

Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China; Guang′anmen Hospital， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100053， China

Corresponding Author ?YAO Kuiwu， E.mail： yaokuiwu@126.com

Abstract Objective： To explore the driving drugs and the symptom.drug relationship in the clinical cases of chronic heart failure（CHF），and to reveal the related mechanisms based on network pharmacology. ?Methods： The effective clinical cases of CHF with traditional Chinese medicine prescriptions were searched from CNKI，WanFang Data Knowledge Service platform and VIP databases.The FangNet platform was used to screen the driving drugs and construct the "symptom.drug" network for the four traditional Chinese medicine diagnosis information and traditional Chinese medicine prescription contained from these cases.The "drug.component.symptom.disease.target" network was constructed to reveal the relevant mechanism of drug intervention in disease symptoms by network pharmacology. ?Results： A total of 226 clinical cases were obtained，involving 268 flavors of drugs，23 of which were driving drugs.The "symptom.drug" network included 38 common CHF symptoms including lower limb swelling，edema，chest oppression，asthma，shortness of breath，and oliguria，which correspond to 10 driving Chinese medicines，including Poria cocos，Astragalus membranaceus，Atractylodes macrocephala，Radix et Rhizoma Polygoni Multiflori，Radix et Rhizoma Polygoni Multiflori，Radix et Rhizoma Polygoni Multiflori，Radix et Rhizoma Polygoni Multiflori and Radix et ?Rhizoma ?Polygoni.Through ?network ?pharmacology，a "drug.composition.symptom.symptom.disease.target" network corresponding to chest oppression in the "symptom.drug" network of salvia miltiorrhiza and semen lepidii was constructed，in which quercetin，luteolin，kaempferol and tanshinone ⅡA were selected as key components.G1/S phase specific cyclin.D1（CCND1），hypoxic inducible factor 1α（HIF1A），transcription factor Jun（JUN），protein kinase B1（AKT1），transcriptional activator 3（STAT3），cysteine aspartate proteinase.3（CASP3），Myc proto.oncoprotein（MYC），vascular endothelial growth factor A（VEGFA） were selected as key target.Enrichment analysis showed that the mechanism of salvia miltiorrhiza and semen lepidii to improve chest oppression in CHF patients might involve biological processes such as negative regulation of apoptosis signaling pathway，cyclin .dependent protein kinase enzyme complex，phosphatidylinosiol 3 kinase/protein kinase B（PI3K/AKT） ?signaling pathway，tumor suppressor gene p53 signaling pathway，epidermal growth factor receptor（ErbB） signaling pathway. ?Conclusion： Based on the FangNet platform，"symptom.drug" network was constructed for the collection of clinical cases of CHF treated by contemporary physicians，and the corresponding relationship between commonly used drugs of CHF and disease symptoms was explored.The mechanism of ameliorating chest oppression by salvia miltiorrhiza and semen lepidii might involve inhibiting cardiomyocyte apoptosis，inflammatory response and promoting neovascularization.

Keywords ?chronic heart failure; "symptom.drug" network; data mining; network pharmacology; molecular docking

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是多種心血管疾病的終末階段，2021年，我國(guó)約有400萬(wàn)例CHF病人 ?［1］ 。中醫(yī)藥為治療CHF的常用手段，臨床療效確切 ?［2.3］ ，具有簡(jiǎn)、驗(yàn)、便、廉的優(yōu)勢(shì)。中藥療效的發(fā)揮是在辨證論治基礎(chǔ)上對(duì)機(jī)體證候的準(zhǔn)確把握，癥狀作為證候的基礎(chǔ)，了解癥狀與藥物之間的關(guān)系對(duì)中藥作用機(jī)制的闡明及新藥的開(kāi)發(fā)具有重要的意義。目前處在數(shù)字化時(shí)代，大量名醫(yī)的有效醫(yī)案被儲(chǔ)存下來(lái)，其中包含的藥物信息與臨床癥狀具有挖掘價(jià)值。近代中醫(yī)學(xué)者提出了“病證結(jié)合”“方證對(duì)應(yīng)”的理念，推動(dòng)了對(duì)中醫(yī)藥理念的解釋與現(xiàn)代運(yùn)用 ?［4］ 。深入探索中藥與癥狀之間的內(nèi)在邏輯，從而進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)“藥癥對(duì)應(yīng)”，也是中醫(yī)藥從宏觀到微觀的縱深發(fā)展。

FangNet平臺(tái)（http：//mingyi.bucm.edu.cn/en/）運(yùn)用多種網(wǎng)絡(luò)算法，從中藥處方集合中挖掘中藥的隱藏信息，從而識(shí)別出網(wǎng)絡(luò)中驅(qū)動(dòng)型中藥、中藥與癥狀之間的關(guān)聯(lián) ?［5］ 。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)可呈現(xiàn)藥物、靶標(biāo)蛋白與疾病之間的相互關(guān)系，基于癥狀的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)可全面揭示中藥活性成分干預(yù)疾病某一癥狀影響的靶標(biāo)蛋白與相關(guān)機(jī)制?；诖耍狙芯繉?shù)據(jù)挖掘與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合，以當(dāng)代醫(yī)家治療CHF的臨床驗(yàn)案為基礎(chǔ)，利用數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)探討處方集合中的驅(qū)動(dòng)型藥物及“癥狀.藥物”之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)揭示“癥.藥”關(guān)系的潛在機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源

以“慢性心力衰竭”“慢性心衰”“心衰”“心力衰竭”“心水”“中醫(yī)”“經(jīng)驗(yàn)”“個(gè)案”“總結(jié)”為主題詞，檢索中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)知識(shí)服務(wù)平臺(tái)及維普網(wǎng)中收錄的公開(kāi)發(fā)表的論文，檢索時(shí)限為建庫(kù)至2022年12月11日。以上述主題詞共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)438篇，其中中國(guó)知網(wǎng)135篇、萬(wàn)方數(shù)據(jù)知識(shí)服務(wù)平臺(tái)238篇、維普數(shù)據(jù)庫(kù)65篇，合并去重后共獲得189篇文獻(xiàn)， 逐一閱讀文獻(xiàn)后剔除不符合標(biāo)準(zhǔn)的病例，共獲得有效病例226例。

1.2 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)

納入記載名老中醫(yī)師以中藥方劑治療明確診斷為CHF的真實(shí)病例文獻(xiàn)，病例包含明確的中西醫(yī)診斷、癥狀、舌象、脈象及處方藥物組成。逐一閱讀文獻(xiàn)，將病人的癥狀信息及治療顯效的處方藥物組成錄入數(shù)據(jù)庫(kù)中。信息的錄入由雙人獨(dú)立完成，將數(shù)據(jù)儲(chǔ)存至Microsoft Excel 2019軟件，最后進(jìn)行統(tǒng)一核對(duì)。

1.3 數(shù)據(jù)規(guī)范化

參照《中醫(yī)臨床常見(jiàn)術(shù)語(yǔ)規(guī)范》 ?［6］ 對(duì)文獻(xiàn)中出現(xiàn)的四診信息進(jìn)行規(guī)范統(tǒng)一；參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版 ?［7］ 對(duì)文獻(xiàn) 中的中藥名稱進(jìn)行統(tǒng)一與規(guī)范化，對(duì)藥典中未納入的中藥參照第4版《中藥學(xué)》 ?［8］ 進(jìn)行補(bǔ)充。

1.4 數(shù)據(jù)的錄入與分析

使用FangNet平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入和分析。將每份符合相關(guān)選擇標(biāo)準(zhǔn)的完整病案作為病例分別錄入到“刻下癥”“舌象”“脈象”和“中藥處方”的模塊中，并進(jìn)行編號(hào)，之后運(yùn)用平臺(tái)提取四診信息及藥物的標(biāo)簽。完整錄入全部醫(yī)案后運(yùn)用FangNet平臺(tái)進(jìn)行驅(qū)動(dòng)型藥物的篩選及“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建。驅(qū)動(dòng)型中藥指處方集合中常被選擇的關(guān)鍵藥物，其確定是依據(jù)PageRank（PR）算法。區(qū)別以往依據(jù)頻次確定網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵中藥，PR算法是依據(jù)某一節(jié)點(diǎn)的所有連接確定節(jié)點(diǎn)的重要性 ?［9］ ?！鞍Y狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)是在驅(qū)動(dòng)型中藥基礎(chǔ)上的延伸，癥狀與藥物之間的關(guān)系是依據(jù)兩者相互作用的權(quán)重及共發(fā)生事件確定。癥狀支持度指所有處方集合中該癥狀的出現(xiàn)頻率，藥物支持度為處方集合中該藥物出現(xiàn)的頻率 ?［5］ 。依據(jù)平臺(tái)中的說(shuō)明文件，設(shè)定藥物的支持 度＞0.3，且藥物.癥狀關(guān)聯(lián) ?P ＜0.05為篩選條件 ?［5］ ，構(gòu)建CHF處方集合的“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)。

1.5 藥物活性成分及對(duì)應(yīng)疾病癥狀靶點(diǎn)的獲取

1.5.1 藥物活性成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的篩選

“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)中包含的藥物利用TCMSP平臺(tái)（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）以口服生物利用度 （oral bioavailability，OB）≥30%，類藥性（drug.likeness， DL）≥0.18為篩選條件 ?［10］ ，篩選出符合條件的中藥活性成分及其對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)。

1.5.2 CHF靶點(diǎn)的篩選

以“chronic heart failure”為檢索詞，分別在GeneCards （https：//www.genecards.org/）、OMIM（https：//www.omim.org/）、TTD（http：//db. idrblab.net/ttd/）和DisGeNet （https：//www.disgenet.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索與CHF相關(guān)的靶標(biāo)蛋白，之后對(duì)結(jié)果進(jìn)行匯總、去重得到CHF對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)。

1.5.3 特定癥狀靶點(diǎn)的確定

SymMap數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.symmap.org/）是一個(gè)中醫(yī)藥證候關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)庫(kù)，包含2 518個(gè)中醫(yī)證候/癥狀對(duì)應(yīng)的20 965個(gè)靶點(diǎn)信息，可獲取癥狀對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn) ?［11］ 。利用SymMap數(shù)據(jù)庫(kù)獲取“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)中癥狀對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息，之后將篩選得到的藥物、癥狀與CHF對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)三者取交集。

1.6 “藥物.活性成分.疾病.癥狀.靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

依據(jù)“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)中的癥狀.藥物對(duì)應(yīng)關(guān)系，將對(duì)應(yīng)信息導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2中，構(gòu)建“藥物.活性成分.癥狀.疾病.靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，可視化展示藥物活性成分及調(diào)節(jié)CHF特定癥狀的靶標(biāo)蛋白。

1.7 蛋白.蛋白互作（protein.protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與核心靶點(diǎn)的篩選

利用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//cn.string.db.org/）構(gòu)建交集靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)，設(shè)定置信度＞0.4，并將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape軟件中進(jìn)行可視化分析。CytoHubba插件用于識(shí)別生物網(wǎng)絡(luò)中的核心蛋白，其中最大團(tuán)中心性（maximal clique centrality，MCC）算法預(yù)測(cè)的精度較高，但由于生物網(wǎng)絡(luò)是異質(zhì)的，因此，選用了最大鄰域組分（maximum neighborhood component，MNC）、邊緣滲透組分（edge percolated component，EPC）和度值（Degree值）3種算法進(jìn)行比較與補(bǔ)充 ?［12］ 。依據(jù)以上算法，分別篩選出PPI網(wǎng)絡(luò)中 排名居前10位的關(guān)鍵靶點(diǎn)后對(duì)結(jié)果取交集，最終確定核心靶點(diǎn)。

1.8 功能富集分析

將癥狀對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息分別導(dǎo)入Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//metascape.org/）進(jìn)行基因本體（gene ontology，GO）、京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析，揭示藥物發(fā)揮調(diào)節(jié)疾病癥狀的生物學(xué)機(jī)制。

1.9 關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接

將“藥物.活性成分.疾病.癥狀.靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)中Degree值排名居前列的活性成分與篩選得到的核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。分別在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）與AlphaFold ?Protein Structure數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.alphafold.ebi.ac.uk/） 中獲取關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)的3D結(jié)構(gòu)，利用AutoDock Tool 1.5.6軟件進(jìn)行去水、加氫等常規(guī)處理后，利用AutoDock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接。對(duì)接結(jié)合能結(jié)果繪制熱圖進(jìn)行展示，對(duì)接結(jié)果利用PyMOL軟件進(jìn)行可視化分析。

2 結(jié) 果

2.1 驅(qū)動(dòng)型中藥的確定

藥物頻次統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，涉及中藥268種，總中藥數(shù)3 171種，總頻次7 676次。其中驅(qū)動(dòng)型中藥23味，分別為人參、黃芪、黨參、炙甘草、白術(shù)、麥冬、干姜、附子、桂枝、丹參、川芎、紅花、益母草、豬苓、澤瀉、茯苓、車(chē)前子、葶藶子、生姜、五味子、山茱萸、白芍、甘草。驅(qū)動(dòng)型中藥的支持度及共現(xiàn)藥物見(jiàn)表1、圖1。

2.2 “癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)共篩選得到下肢腫脹、水腫、舌紫、胸悶、脈沉、氣喘、氣短、尿少、乏力等38個(gè)癥狀，與茯苓、黃芪、白術(shù)、附子、丹參、桂枝、澤瀉、葶藶子、人參、豬苓共10味中藥存在不同程度的對(duì)應(yīng)關(guān)系。詳見(jiàn)表2、圖2。

2.3 藥物活性成分及對(duì)應(yīng)疾病癥狀靶點(diǎn)的獲取

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)共篩選得到10種藥物的119種活性成分及對(duì)應(yīng)的234個(gè)靶點(diǎn)；在4個(gè)疾病數(shù)據(jù) 庫(kù)中獲得CHF相關(guān)靶點(diǎn)11 223個(gè)，去重后共得到11 216 個(gè)疾病相關(guān)靶點(diǎn)；在SymMap數(shù)據(jù)庫(kù)獲取癥狀對(duì)應(yīng)的靶標(biāo)蛋白，剔除無(wú)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)信息的癥狀后，僅下肢浮腫、水腫、乏力、氣短、氣喘和胸悶可獲得癥狀對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，去重后得到882個(gè)癥狀相關(guān)靶點(diǎn)。將藥物、疾病及癥狀對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)三者取交集后，獲得三者的交集靶標(biāo)51個(gè)。詳見(jiàn)圖3。

2.4 “藥物.活性成分.癥狀.疾病.靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

因氣短與水腫對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息較少，故僅選取了胸悶及其對(duì)應(yīng)的丹參、葶藶子2味藥物構(gòu)建了“藥物.活性成分.疾病.癥狀.靶點(diǎn)”的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。此網(wǎng)絡(luò)包含108個(gè)節(jié)點(diǎn)、287條邊，包括與胸悶相關(guān)的48個(gè)靶點(diǎn)，丹參、葶藶子包含的58種活性成分。藥物活性成分與靶點(diǎn)的對(duì)應(yīng)信息見(jiàn)表3，形成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖4?？梢?jiàn)丹參、葶藶子改善CHF病人胸悶癥狀可能通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同發(fā)揮作用。

2.5 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與關(guān)鍵靶點(diǎn)的篩選

將胸悶對(duì)應(yīng)的48個(gè)靶點(diǎn)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，詳見(jiàn)圖5。此網(wǎng)絡(luò)共包含45個(gè)節(jié)點(diǎn)、468條邊。依據(jù)4種算法，共獲得40個(gè)靶點(diǎn)，對(duì)其取交集后發(fā)現(xiàn)其重合度較高，其中8個(gè)靶點(diǎn)均出現(xiàn)在4種算法的篩選結(jié)果中，分別是G1/S期特異性細(xì)胞周期蛋白.D1（G1/S.specific cyclin.D1，CCND1）、低氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia.inducible factor 1.alpha，HIF1A）、轉(zhuǎn)錄因子Jun（transcription factor Jun，JUN）、蛋白激酶B1（protein kinase B1，AKT1）、轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶.3（Caspase.3，CASP3）、Myc原癌蛋白（Myc proto.oncogene protein，MYC）、 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）， 因此將其確定為發(fā)揮作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

2.6 功能富集分析

胸悶相關(guān)靶點(diǎn)的富集分析結(jié)果顯示：有60條GO途徑被顯著富集，包含20個(gè)生物過(guò)程（biological processes，BP）、20個(gè)細(xì)胞組分（cellular components，CC）、20個(gè)分子功能（molecular function，MF）。 BP主要涉及對(duì)無(wú)機(jī)物的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)氮化合物的反應(yīng)、凋亡過(guò)程中半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性的調(diào)節(jié)、凋亡信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控等；CC主要涉及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物、細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶復(fù)合物、膜筏等；MF主要涉及激酶結(jié)合、蛋白激酶活性、激酶調(diào)節(jié)活性等。KEGG富集分析顯示，共富集出20條信號(hào)通路，除癌癥相關(guān)通路外，主要涉及磷脂酰肌醇 3.激酶（phosphatidylinositol.3.kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、表皮生長(zhǎng)因子受體（ErbB）信號(hào)通路、腫瘤抑制基因p53（tumor suppressor gene p53，p53）信號(hào)通路等。詳見(jiàn)圖6。表明丹參、葶藶子改善CHF病人胸悶癥狀可能與上述途徑相關(guān)。

2.7 關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接

依據(jù)網(wǎng)絡(luò)中活性成分的Degree值，最終確定槲皮素、木犀草素、山柰酚及丹參酮ⅡA為關(guān)鍵活性成分，與8個(gè)核心靶點(diǎn)共進(jìn)行了32組對(duì)接。詳見(jiàn)圖7。其中槲皮素與AKT1結(jié)合能最低，為－36.40 kJ/mol，平均結(jié)合能為－28.97 kJ/mol，提示關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)對(duì)接良好。槲皮素與AKT1的對(duì)接結(jié)果見(jiàn)圖8。

3 討 論

中醫(yī)驗(yàn)案是醫(yī)家臨床思想的凝練，通過(guò)挖掘臨床驗(yàn)案中包含的信息，對(duì)學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)的繼承與發(fā)展、新藥研發(fā)均具有重要的臨床意義。目前常用的數(shù)據(jù)挖掘方法多數(shù)是基于頻數(shù)統(tǒng)計(jì)、關(guān)聯(lián)規(guī)則與聚類分析對(duì)藥物組合規(guī)律的研究，某些情況下基于頻次的統(tǒng)計(jì)常與臨床實(shí)際不符，關(guān)注疾病癥狀與中藥間關(guān)聯(lián)的研究較少。基于此，本研究借助FangNet平臺(tái)，通過(guò)PR算法與分段線性回歸對(duì)中藥的重要性進(jìn)行排序，從而得到網(wǎng)絡(luò)中的驅(qū)動(dòng)型藥物。充分利用臨床驗(yàn)案中癥狀與藥物的信息，構(gòu)建了“癥狀.藥物”網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討藥癥對(duì)應(yīng)的相關(guān)機(jī)制，以期為中藥處方的深入挖掘提供新思路。

基于結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)算法，本研究得到了226例臨床驗(yàn)案中的驅(qū)動(dòng)型中藥及藥.癥對(duì)應(yīng)關(guān)系的信息。驅(qū)動(dòng)型中藥主要為益氣養(yǎng)陰藥（人參、黃芪、黨參、炙甘草、白術(shù)、麥冬）、溫補(bǔ)藥（干姜、附子、桂枝）、活血化瘀藥（丹參、川芎、紅花、益母草）、利水藥（豬苓、澤瀉、茯苓、車(chē)前子）、化痰藥（葶藶子、生姜）、收澀藥（五味子、山茱萸、白芍）。其中包含了6首治療CHF的經(jīng)典方劑，分別為生脈散、四君子湯、理中丸、參附湯、苓桂術(shù)甘湯及五苓散。通過(guò)對(duì)驅(qū)動(dòng)型中藥分析可見(jiàn)，治療以益氣、養(yǎng)陰、溫陽(yáng)、利水為主，以活血化瘀為輔，符合CHF“氣虛.血瘀.水?！钡暮诵牟C(jī)。相關(guān)的臨床與基礎(chǔ)研究證實(shí)了上述方劑具有提高CHF病人左室射血分?jǐn)?shù)、6 min步行距離， 降低N末端腦鈉肽前體（N.terminal pro.brain ?natriuretic peptide，NT.proBNP）水平，改善生活質(zhì)量的作用 ?［13.16］ ，其機(jī)制涉及改善心肌纖維化、抑制炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等 ?［17.19］ 。驅(qū)動(dòng)型中藥的共現(xiàn)藥物結(jié)果顯示，茯苓、白芍、黨參、桂枝、附子、白術(shù)為常共同配伍出現(xiàn)的藥物。其中包含臨床常用于治療CHF的術(shù)附湯、溫陽(yáng)利水湯及苓桂術(shù)甘湯中的核心藥物組成。一項(xiàng)研究顯示，術(shù)附湯聯(lián)合西藥治療可顯著降低CHF病人NT.proBNP水平，提高左室射血分?jǐn)?shù)，改善心功能 ?［20］ 。上述結(jié)果表明，本研究篩選出的驅(qū)動(dòng)型中藥既貼合經(jīng)典方劑又符合臨床關(guān)于CHF治療方劑的選擇，可信度良好。

臨床診療過(guò)程中，藥物的選擇多是在主方基礎(chǔ)上依據(jù)癥狀的變化進(jìn)行化裁，因此，發(fā)掘癥狀與藥物之間的潛在聯(lián)系及其背后的生物學(xué)機(jī)制具有重要的意義。在驅(qū)動(dòng)型藥物的基礎(chǔ)上，本研究基于FangNet平臺(tái)的結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)算法，共得到29種CHF常見(jiàn)癥狀與10味驅(qū)動(dòng)型中藥的對(duì)應(yīng)關(guān)系。如下肢腫脹對(duì)應(yīng)附子、澤瀉，乏力對(duì)應(yīng)黃芪，胸悶對(duì)應(yīng)丹參、葶藶子等，與臨床實(shí)際符合。以丹參、葶藶子治療胸悶為例，《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載丹參“治心腹邪氣，寒熱積聚，破癥除瘕，止煩滿，益氣”。丹參入心經(jīng)而通血脈，以丹參為君藥的丹參飲在臨床中廣泛用于改善心血管疾病病人胸悶、胸痛的癥狀，更有“一味丹參飲，功同四物湯”之說(shuō)。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，丹參中含有的丹參酮、丹酚酸等具有抑制動(dòng)脈粥樣硬化、血小板聚集、心肌纖維化、心肌肥大等多種心臟保護(hù)作用 ?［21］ ?！堕_(kāi)寶本草》論述葶藶子“療肺壅上氣咳嗽，止喘促，除胸中痰飲”。葶藶子味苦、辛，具有瀉肺平喘、利水消腫之效，可開(kāi)通上焦之閉塞，使心血得以運(yùn)行調(diào)暢，從而緩解咳嗽、 氣喘、胸悶等癥狀。楊明等 ?［22］ 研究顯示，葶藶子提取液通過(guò)改善PI3K/AKT/ 雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路，抑制心肌細(xì)胞凋亡，從而改善心力衰竭大鼠的心室重構(gòu)。上述結(jié)果表明，對(duì)疾病癥狀與藥物對(duì)應(yīng)關(guān)系的研究是可行的，且具有臨床價(jià)值，有助于進(jìn)一步把握“癥.藥”對(duì)應(yīng)的規(guī)律。

為了初步探討丹參、葶藶子治療CHF病人胸悶癥狀的相關(guān)機(jī)制，對(duì)其進(jìn)行了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究。結(jié)果表明，丹參、葶藶子發(fā)揮調(diào)節(jié)CHF病人胸悶癥狀的關(guān)鍵活性成分主要是黃酮類化合物，如槲皮素、木犀草素、山柰酚和丹參提取物丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅳ、隱丹參酮等。這些活性成分對(duì)于心血管的有益作用被相關(guān)研究 ?［23.24］ 證實(shí)。進(jìn)一步篩選得到了可能與丹參、葶藶子治療CHF病人胸悶癥狀相關(guān)的CCND1、JUN、AKT1、CASP3、VEGFA、MYC、HIF1A和STAT3共8個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，結(jié)合關(guān)鍵通路的富集分析結(jié)果，涉及的生物學(xué)機(jī)制主要包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、血管生成與炎癥反應(yīng)。CCND1、JUN主要參與細(xì)胞周期與轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)。有研究表明，心肌細(xì)胞在有絲分裂完成后，較多細(xì)胞周期蛋白有表達(dá)，此時(shí)細(xì)胞周期蛋白水平升高通常不會(huì)誘導(dǎo)增殖，但會(huì)導(dǎo)致異常的細(xì)胞周期再次啟動(dòng)，從而引起細(xì)胞凋亡 ?［25］ 。相關(guān)研究顯示，細(xì)胞周期蛋白主要通過(guò)線粒體途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致CASP3的激活與細(xì)胞凋亡的發(fā)生 ?［26］ 。Xiao等 ?［27］ 研究顯示，關(guān)鍵活性成分山柰酚通過(guò)抑制線粒體依賴性凋亡信號(hào)傳導(dǎo)，從而減弱多柔比星誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡和線粒體功能障礙。VEGFA在血管新生中具有重要的作用，在CHF中展現(xiàn)出潛在的應(yīng)用前景 ?［28］ 。有研究顯示，MYC與VEGFA的啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)VEGFA產(chǎn)生之后的血管新生 ?［29］ 。在缺氧條件下，HIF1A可激活VEGFA轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)血管生成 ?［30］ 。研究顯示，對(duì)心肌梗死小鼠應(yīng)用丹參酮ⅡA磺酸鈉后，小鼠心臟功能顯著改善，心臟瘢痕面積縮小，HIF1A、VEGFA表達(dá)升高，血管密度增加，提示丹參酮ⅡA磺酸鈉具有促進(jìn)血管新生的作用 ?［31］ 。炎癥在CHF的發(fā)病過(guò)程中的作用已被證實(shí) ?［32］ 。Huo等 ?［33］ 研究顯示，抑制心力 衰竭大鼠白細(xì)胞介素6（IL6）/STAT3信號(hào)可減輕心肌炎癥，抑制心臟重塑。

綜上所述，本研究以當(dāng)代醫(yī)家治療CHF的臨床驗(yàn)案為基礎(chǔ)，基于數(shù)據(jù)挖掘與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)對(duì)CHF臨床處方中的驅(qū)動(dòng)型藥物、“癥狀.藥物”對(duì)應(yīng)關(guān)系及對(duì)應(yīng)關(guān)系的相關(guān)機(jī)制進(jìn)行分析，以期為中醫(yī)藥的深入挖掘提供新角度。本研究存在一定局限：由于臨床病人的復(fù)雜性及中藥功效的多樣性，運(yùn)用結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)算法得到部分結(jié)論與臨床實(shí)際情況存在偏差。部分癥狀無(wú)對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息，未完全揭示藥物發(fā)揮作用影響的全部過(guò)程，藥物發(fā)揮作用的具體機(jī)制需進(jìn)一步驗(yàn)證。

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（收稿日期：2023.07.18）

（本文編輯 薛妮）