基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的作用機(jī)制

吳雯丹 陳洪 黃桂瓊

摘要 目的： 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的潛在作用機(jī)制。 方法： 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）檢索并篩選出鉤藤、桑寄生藥對(duì)的藥物活性成分及作用靶點(diǎn)。利用基因名片數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards）及DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)篩選原發(fā)性高血壓的疾病靶點(diǎn)。利用韋恩平臺(tái)（Venny）取活性成分作用靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)交集，得到共同靶點(diǎn)。通過(guò)Cytoscape 3.9.1軟件構(gòu)建“藥物.活性成分.靶點(diǎn).疾病”網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)；利用Cytoscape CentisCape 2.2插件提取核心靶點(diǎn)進(jìn)行分析，并構(gòu)建“有效成分.核心靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集分析，并將富集結(jié)果可視化。 結(jié)果： 共篩選出鉤藤.桑寄生的活性成分32個(gè)，作用于原發(fā)性高血壓的主要靶點(diǎn)有絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B1（AKT1）、白細(xì)胞介素（IL）.6、腫瘤壞死因子（TNF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）等；主要集中于晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGE）/糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）信號(hào)通路、脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化通路、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化通路、TNF信號(hào)通路、IL.17信號(hào)通路等。 結(jié)論： 鉤藤.桑寄生藥對(duì)可通過(guò)調(diào)節(jié)AKT1、IL.6、TNF、VEGFA等核心靶點(diǎn)調(diào)控AGE/RAGE、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、TNF、IL.17等多條信號(hào)通路，發(fā)揮治療原發(fā)性高血壓的作用。

關(guān)鍵詞 ?原發(fā)性高血壓；鉤藤；桑寄生；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；作用機(jī)制

doi： ?10.12102/j.issn.1672.1349.2024.09.001

Mechanism of Uncaria and Mulberry Parasitism for the Treatment of Essential Hypertension Based on Network Pharmacology

WU Wendan， CHEN Hong， HUANG Guiqiong

Huizhou Hospital， Guangzhou University of Chinese Medicine， Huizhou 516000， Guangdong， China

Corresponding Author ?HUANG Guiqiong， E.mail： hgqiong2005@126.com

Abstract Objective： To explore the potential mechanism of action of uncaria and mulberry parasitism for treating essential hypertension based on network pharmacology. ?Methods： Traditional Chinese medicine（TCM） system pharmacological database（TCMSP） was used to retrieve and screen the active drug components and targets of uncaria and mulberry parasitism.GeneCards and DisGeNET databases were used to search for disease targets of essential hypertension.The intersection of active ingredient components and disease targets were selected by Vennny platform.The “drug.active ingredient.target.disease” network diagram was constructed using Cytoscape 3.9.1 software.The protein interaction（PPI） network was constructed through the STRING online platform.Cytoscape CentisCape 2.2 plug.in was used to extract core targets for analysis and then constructed the “active ingredient.core target” network diagram.The DAVID database was used to perform Gene Ontology（GO） and the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG） enrichment analysis of core targets，and the enrichment results were visualized. ?Results： A total of 32 active ingredients of uncaria and mulberry parasitism were screened，and the main targets of essential hypertension were serine/threonine protein kinase B1（AKT1），interleukin（IL）.6，tumor necrosis factor（TNF） and vascular endothelial growth factor A（VEGFA），which mainly focused on advanced glycation end product（AGE）/receptor for advanced glycation end products（RAGE） signaling pathway，lipid and atherosclerosis pathway，fluid shear stress and atherosclerosis pathway，TNF signaling pathway，IL.17 signaling pathway，etc. ?Conclusion： Uncaria and mulberry parasitism can regulate AGE/RAGE，lipid and atherosclerosis，fluid shear stress，atherosclerosis，TNF，IL.17，and other signaling pathway by regulating AKT1，IL.6，TNF VEGFA and other core targets，and play some role in the treatment of essential hypertension.

Keywords ?essential hypertension; ?uncaria; ?mulberry parasitism; network pharmacology; mechanism

原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）為體循環(huán)動(dòng)脈血壓持續(xù)升高的心血管綜合征，同時(shí)也屬于 代謝性疾病范疇。《中國(guó)心血管健康與疾病報(bào)告2021》指出高血壓患病率呈逐年上升趨勢(shì)，目前我國(guó)高血壓患病人數(shù)大約有2.45億人，而原發(fā)性高血壓患病率占全部高血壓人群的90%～95% ?［1］ 。因其患病率高、控制率低、患心血管病風(fēng)險(xiǎn)高等特點(diǎn)，已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)心腦血管疾病及過(guò)早死亡的高風(fēng)險(xiǎn)因素之一 ?［2］ 。血壓的不斷增高往往會(huì)使許多重要的組織器官如心、腦、腎、視網(wǎng)膜及血管的功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，同時(shí)也會(huì)造成代謝功能紊亂。臨床上主要通過(guò)西藥控制血壓，長(zhǎng)期服用易產(chǎn)生一系列問(wèn)題。中醫(yī)藥在平穩(wěn)控制原發(fā)性高血壓病人的血壓，改善其臨床癥狀，防止心、腦、肺、腎等重要臟器受損，提高生活質(zhì)量方面發(fā)揮著重要作用。劉巍等 ?［3］ 認(rèn)為肝腎陰虛為高血壓發(fā)病之本，標(biāo)為“痰濁”“瘀血”等瘀阻脈絡(luò)，故滋養(yǎng)肝腎降壓是治療原發(fā)性高血壓的關(guān)鍵。鉤藤歸肝經(jīng)，桑寄生屬腎經(jīng)，二者在平肝降壓的同時(shí)，又起到了補(bǔ)益肝腎、活血化瘀的作用。鉤藤.桑寄生藥對(duì)是惠州市中醫(yī)醫(yī)院陳洪教授臨床治療原發(fā)性高血壓的常用藥對(duì)之一，其長(zhǎng)期的臨床觀察發(fā)現(xiàn)該藥對(duì)輔助西藥治療可平穩(wěn)降壓，同時(shí)也可改善頭暈、頭痛、腰膝酸軟等臨床癥狀。王心意等 ?［4］ 分析國(guó)醫(yī)大師治療高血壓用藥規(guī)律發(fā)現(xiàn)，鉤藤.桑寄生的用藥頻次為131次，頻率為58.91%?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明

，桑寄生具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛、降血壓、降血脂、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)等藥理作用，在治療炎癥、心腦血管系統(tǒng)疾病方面具有較好的臨床應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步研究 ?［5］ 。研究發(fā)現(xiàn)，鉤藤主要活性成分鉤藤堿、異鉤藤堿、鉤藤總堿均有降壓作用，降壓原理可能是通過(guò)抑制血管運(yùn)動(dòng)中樞，擴(kuò)張周圍血管，降低心排血量，減小阻力以達(dá)到降低血壓、減慢心率的目的 ?［6］ 。

近年來(lái)，中藥單藥及復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)、多途徑治療高血壓病及其并發(fā)癥的機(jī)制被逐漸揭示，但是鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的作用機(jī)制尚未明確。本研究在現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法在分子水平揭示鉤藤.桑寄生與原發(fā)性高血壓之間的關(guān)系，挖掘藥物的有效活性成分，預(yù)測(cè)其治療原發(fā)性高血壓的主要靶點(diǎn)及通路，為后續(xù)研究提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 鉤藤.桑寄生主要活性成分篩選及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

分別以鉤藤、桑寄生為檢索詞，以口服生物利用度（OB）≥30%和藥物相似性（DL）≥0.18為篩選條件，在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索主要活性成分。然后利用MOL ID號(hào)在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中預(yù)測(cè)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，剔除未檢索出相關(guān)靶蛋白的成分。借助UniProt蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索人類相關(guān)基因，檢索條件限定為“Reviewed”“Human”。將上述得到的靶點(diǎn)蛋白與人類相關(guān)基因相映射，獲得藥物的相關(guān)靶點(diǎn)基因。

1.2 疾病相關(guān)靶點(diǎn)的獲取

以“essential hypertension”為檢索詞，檢索基因名片數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards）和DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)中原發(fā)性高血壓的相關(guān)靶點(diǎn)，然后以Score值大于中位數(shù)為臨界值，分別對(duì)結(jié)果進(jìn)行篩選合并、去重，獲得原發(fā)性高血壓相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 交集靶點(diǎn)篩選及韋恩圖的繪制

在Venn 2.1.0平臺(tái)上傳藥物和疾病相關(guān)靶點(diǎn)基因名稱，將藥物與疾病相關(guān)靶點(diǎn)取交集，并繪制韋恩圖。

1.4 藥物.有效活性成分.靶點(diǎn).疾病網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

將交集靶點(diǎn)與藥物的主要活性成分相映射，獲得有效活性成分；將有效活性成分與交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1軟件，構(gòu)建“藥物.有效活性成分.靶 點(diǎn).疾病”網(wǎng)絡(luò)圖，并利用“Network Analyzer”進(jìn)行 分析。

1.5 交集靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)關(guān)系及“有效活性成分.核心靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING在線分析平臺(tái)，限定物種為“Homo sapiens”，互作蛋白評(píng)分＞0.4，得到蛋白 質(zhì)相互作用（PPI）關(guān)系，將所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件構(gòu)建交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖，并進(jìn)行可視化分析。利用CentisCape 2.2插件計(jì)算各節(jié)點(diǎn)的度值（Degree），并以Degree值大于平均值為篩選標(biāo)準(zhǔn)，得到鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的核心靶點(diǎn)，并構(gòu)建“有效活性成分.核心靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。

1.6 基因本體（GO）功能富集分析與京都基因和基因組百科全書（KEGG）通路富集分析

利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能與KEGG通路富集分析，將物種限定為“Homo sapiens”。以 P ＜0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn)對(duì)GO結(jié)果進(jìn)行篩選，并分別將生物過(guò)程（BP）、細(xì)胞組成（CC）、分子功能（MF）3個(gè)條目的前20條結(jié)果導(dǎo)入微生信在線平臺(tái)（www.bioinformatics.com.cn）繪制成氣泡圖展示；同時(shí)以 P ＜0.05且錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）＜0.5為限定條件對(duì)KEGG結(jié)果進(jìn)行篩選，并選取相關(guān)通路前20條，同樣通過(guò)微生信在線繪圖網(wǎng)站進(jìn)行可視化展示。

2 結(jié) 果

2.1 鉤藤.桑寄生藥對(duì)有效活性成分及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)共檢索到111個(gè)活性成分，其中鉤藤65個(gè)、桑寄生46個(gè)。以O(shè)B≥30%、DL≥0.18為篩選標(biāo)準(zhǔn)，剔除未預(yù)測(cè)到相關(guān)靶點(diǎn)的有效活性成分（MOL ID：MOL008455），篩選獲得鉤藤有效活性成分32個(gè)、桑寄生有效活性成分2個(gè)，合并去重后，共獲得32個(gè)主要的活性成分。詳見表1。通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)有效活性成分的靶點(diǎn)，檢索到鉤藤對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)792個(gè)，桑寄生相關(guān)靶點(diǎn)157個(gè)，相對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)共949個(gè)。利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)將獲得的949個(gè)靶點(diǎn)蛋白，轉(zhuǎn)換成基因名稱，得到943個(gè)主要靶點(diǎn)基因（6個(gè)靶蛋白未能找到基因名稱），去除重復(fù)項(xiàng)后得到藥物最終目標(biāo)靶點(diǎn)209個(gè)。

2.2 原發(fā)性高血壓相關(guān)靶點(diǎn)

通過(guò)檢索GeneCards和DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)，分別檢索獲得9 132、445個(gè)靶點(diǎn)，以Score大于中位數(shù)為界值，篩選合并，刪除重復(fù)靶點(diǎn)后共獲得4 581個(gè)疾病相關(guān)靶點(diǎn)。

2.3 鉤藤.桑寄生與原發(fā)性高血壓靶點(diǎn)交集韋恩圖

分別將鉤藤.桑寄生209個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)基因、原發(fā)性高血壓的4 581個(gè)疾病靶點(diǎn)導(dǎo)入至Venny 2.1.0數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析，獲得182個(gè)交集靶點(diǎn)，并制成Venn圖展示（見圖1）。說(shuō)明鉤藤.桑寄生可能通過(guò)這些靶點(diǎn)參與治療原發(fā)性高血壓。

2.4 藥物.有效活性成分.靶點(diǎn).疾病調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

基于所得數(shù)據(jù)，運(yùn)用Cytoscape 3.9.1軟件構(gòu)建藥物.有效活性成分.靶點(diǎn).疾病網(wǎng)絡(luò)關(guān)系（見圖2）。該網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖中共包含216個(gè)節(jié)點(diǎn)、867條邊，節(jié)點(diǎn)分別代表鉤藤、桑寄生、有效活性成分、疾病及其共同靶點(diǎn)，而邊則表示相互作用關(guān)系；設(shè)置紅色菱形代表疾病，紫色三角形代表鉤藤.桑寄生，綠色六邊形代表有效活性成分，藍(lán)色圓形代表靶點(diǎn)基因。β.谷甾醇、槲皮素為鉤藤與桑寄生共有的活性成分，其中，槲皮素對(duì)應(yīng)140個(gè)靶點(diǎn)，山柰酚對(duì)應(yīng)54個(gè)靶點(diǎn)。說(shuō)明鉤藤.桑寄生是通過(guò)多種成分、多種靶點(diǎn)來(lái)發(fā)揮平穩(wěn)降壓作用，其中槲皮素、山柰酚、β.谷甾醇可能是核心成分。

2.5 PPI網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建與核心靶點(diǎn)的篩選

將獲得的182個(gè)交集靶點(diǎn)上傳至STRING 11.5 數(shù)據(jù)庫(kù)，限定物種為“Homo sapiens”，互作蛋白評(píng) 分＞0.4，剔除游離節(jié)點(diǎn)，將所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入至Cytoscape 3.9.1軟件，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)（見圖3）。網(wǎng)絡(luò)中包括180個(gè)節(jié)點(diǎn)、6 640條邊；利用CentisCape 2.2插件進(jìn)行分析，得出Degree值，節(jié)點(diǎn)越大，顏色越深，Degree值越高。以Degree值＞36.89為篩選條件，獲得鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的78個(gè)核心靶點(diǎn)（見圖4），并構(gòu)建“有效活性成分.核心靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)（見圖5）。78個(gè)核心靶點(diǎn)中，蘇氨酸蛋白激酶1（AKT1）、腫瘤蛋白p53（TP53）、白細(xì)胞介素（IL）.6、腫瘤壞死因子（TNF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGFA）、半胱氨酸蛋白酶3（CASP3）位居前列，其Degree值分別為125，113，111，111，106，100，提示這些靶點(diǎn)可能為鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

2.6 GO功能富集分析與KEGG通路富集分析

將182個(gè)交集靶點(diǎn)導(dǎo)入至DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析。結(jié)果顯示，GO共富集到1 134個(gè)結(jié)果，以 P ＜0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn)，得到BP條目697條，CC條目79條，MF條目136條；其中BP主要涉及對(duì)藥物的反應(yīng)、基因表達(dá)的正向調(diào)控、RNA聚合酶Ⅱ?qū)D(zhuǎn)錄的正向調(diào)節(jié)、對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)等；CC主要涉及細(xì)胞外間隙、含蛋白質(zhì)復(fù)合物、質(zhì)膜等；MF主要涉及酶結(jié)合、蛋白質(zhì)結(jié)合和相同的蛋白質(zhì)結(jié)合等。分別選取BP、CC、MF條目前20條制成氣泡圖展示（見圖6～圖8）。KEGG通路富集得到172條結(jié)果，篩選 P ＜0.05且FDR＜0.5的主要通路，共有161條，將前20條通路繪制成氣泡圖展示（見圖9）。進(jìn)一步分析數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的靶點(diǎn)主要富集在

糖基化終末產(chǎn)物/糖基化終末產(chǎn)物受體 （AGE/RAGE）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、TNF、IL.17 等信號(hào)通路；疾病相關(guān)通路如脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬 化（lipid and atherosclerosis）、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化（fluid shear stress and atherosclerosis）等，提示鉤藤.桑寄生可能通過(guò)以上通路發(fā)揮治療原發(fā)性高血壓的作用。

3 討 論

原發(fā)性高血壓歸屬于中醫(yī)學(xué)“眩暈”“頭痛”等范疇，由于部分原發(fā)性高血壓病人無(wú)任何不適，僅以血壓升高為主，故有學(xué)者認(rèn)為也可歸屬于“脈脹”范疇 ?［7］ 。因情志失調(diào)、飲食失節(jié)、久病過(guò)勞、年老體虛等引起肝腎陰虛、肝陽(yáng)上亢、痰瘀互結(jié)而發(fā)為眩暈、頭痛 ?［8.9］ 。其病位多在肝、腎，病機(jī)特點(diǎn)為本虛標(biāo)實(shí)。因此，鉤藤、桑寄生二者配伍，共奏滋腎養(yǎng)肝之功，可有效調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽(yáng)，控制血壓。

本研究分析顯示，鉤藤.桑寄生治療原發(fā)性高血壓的有效活性成分主要為槲皮素、β.谷甾醇和山柰酚等，說(shuō)明這些有效活性成分可能是核心成分。臨床研究發(fā)現(xiàn)，高血壓與氧化應(yīng)激、血管內(nèi)皮功能障礙、慢性炎癥、胰島素抵抗、糖脂代謝紊亂密切相關(guān) ?［10.11］ 。其中，氧化應(yīng)激和慢性炎癥是引起血管內(nèi)皮損傷和血管重構(gòu)硬化的主要原因 ?［12］ 。內(nèi)皮受損、炎癥與氧化應(yīng)激三者密切相關(guān)。研究證實(shí)，抗氧化應(yīng)激能夠減輕血管內(nèi)皮損傷，促進(jìn)血管重塑，減少高血壓病的發(fā)生 ?［13］ 。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)合成和釋放血管平滑肌舒張因子一氧化氮（NO）或收縮因子內(nèi)皮素.1（ET.1）從而維持血管舒縮平衡，而內(nèi)皮功能障礙引起血管舒縮失常是高血壓的重要特征。還原型輔酶Ⅱ（NADPH）氧化酶（NOX）是體內(nèi)促進(jìn)氧自由基（ROS）生成的底物，王敏等 ?［14］ 研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素及其代謝產(chǎn)物可通過(guò)抑制血管NOX活性，減少ROS生成，抵抗氧化損傷，從而抑制血管內(nèi)皮氧化刺激，提高血管抗氧化能力，預(yù)防和治療高血壓引起的血管肥厚性重構(gòu)。與此同時(shí)，可有效下調(diào)抑制性κB激酶β（IKKβ）與核因子.κB（NF.κB）的磷酸化水平，降低IL.6和TNF.α的蛋白合成，從而發(fā)揮抑制內(nèi)皮炎性反應(yīng)的功能。因此，槲皮素可能通過(guò)抗炎、抗氧化應(yīng)激從而改善內(nèi)皮功能等多種生物活性過(guò)程參與治療高血壓病。研究發(fā)現(xiàn)，β.谷甾醇可通過(guò)抗炎、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等途徑調(diào)節(jié)血壓 ?［15］ ，這可能與β.谷甾醇抑制MAPK等炎癥信號(hào)相關(guān)通路的活化，降低IL.6、TNF.α等炎性細(xì)胞因子的分泌和表達(dá)水平 ?［16］ ，從而影響原發(fā)性高血壓發(fā)生發(fā)展的病理過(guò)程有關(guān)。山柰酚具有廣泛的藥理活性，包括抗氧化、抗炎、心臟保護(hù)、改善血脂和葡萄糖耐量等 ?［17.18］ ，其可通過(guò)降低炎性因子如TNF.α、IL.1β和細(xì)菌內(nèi)毒素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的刺激，減少血管細(xì)胞黏附分子.1（VCAM.1）、細(xì)胞間黏附分子.1（ICAM.1）和內(nèi)皮細(xì)胞選擇素等黏附分子的表達(dá)，阻止動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和進(jìn)一步發(fā)展 ?［19］ 。進(jìn)一步證實(shí)鉤藤.桑寄生藥對(duì)可能通過(guò)槲皮素、β.谷甾醇和山柰酚等有效活性成分參與治療原發(fā)性高血壓。

本研究發(fā)現(xiàn)，鉤藤.桑寄生調(diào)控原發(fā)性高血壓的核心靶點(diǎn)主要是AKT1、IL.6、TNF、VEGFA、TP53等，這些靶點(diǎn)主要涉及細(xì)胞增殖與凋亡、炎癥應(yīng)答、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，與目前研究發(fā)現(xiàn)的原發(fā)性高血壓發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。慢性炎癥通過(guò)損傷血管內(nèi)皮，引起內(nèi)皮功能障礙，最終導(dǎo)致血管重塑阻力增加而血壓升高 ?［20］ 。AKT1參與代謝、增殖、細(xì)胞存活和凋亡等多種生物學(xué)過(guò)程，對(duì)炎癥反應(yīng)的激活至關(guān)重要 ?［21］ 。也有研究認(rèn)為高血壓的發(fā)生機(jī)制與巨噬細(xì)胞極化相關(guān) ?［22］ 。脂多糖（LPS）等外來(lái)因素激活Toll樣受體4（TLR4）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)并向M1轉(zhuǎn)化，使更多的TNF、IL.17等炎性細(xì)胞因子，促進(jìn)血管炎癥反應(yīng)，對(duì)高血壓的發(fā)展起促進(jìn)作用 ?［23］ 。而研究發(fā)現(xiàn)，磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/AKT1信號(hào)通路可通過(guò)影響巨噬細(xì)胞極化 ?［24］ 、脂質(zhì)代謝 ?［25］ 、自噬 ?［26］ 等多種功能參與治療原發(fā)性高血壓。

通過(guò)分析GO條目可以發(fā)現(xiàn)，鉤藤.桑寄生在氧化應(yīng)激的反應(yīng)、細(xì)胞外刺激的反應(yīng)、基因表達(dá)的正向調(diào)控、RNA聚合酶Ⅱ?qū)D(zhuǎn)錄的正向調(diào)節(jié)等方面具有特異性作用。這些生物過(guò)程均與氧化應(yīng)激、炎癥應(yīng)答及代謝調(diào)節(jié)相關(guān)。對(duì)182個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路分析，在剔除不相關(guān)的信號(hào)通路后，發(fā)現(xiàn)鉤藤.桑寄生主要可能通過(guò)脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化通路以及一些炎癥相關(guān)通路，包括AGE/RAGE信號(hào)通路、MAPK、TNF信號(hào)通路、IL.17信號(hào)通路等途徑發(fā)揮對(duì)原發(fā)性高血壓的作用。

脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化兩條信號(hào)通路主要參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成與發(fā)展。血流剪切應(yīng)力代表血液流動(dòng)在血管壁內(nèi)皮表面施加的摩擦力，在血管生物學(xué)中起著核心作用，并有助于動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。研究表明，在血流紊亂的動(dòng)脈區(qū)域，低血流剪切應(yīng)力通過(guò)激活PI3K/AKT信號(hào)通路，抑制內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的合成來(lái)降低NO的生物利用度，從而誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞分泌內(nèi)皮素、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶、炎癥介質(zhì)等，促進(jìn)細(xì)胞增生、脂質(zhì)蓄積和白細(xì)胞黏附，使內(nèi)皮細(xì)胞受損，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。因此，低血流剪切應(yīng)力可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，分泌內(nèi)皮素、炎性介質(zhì)等因子，促使動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生及斑塊形成。另外，低的和振蕩的內(nèi)皮剪切應(yīng)力還可通過(guò)復(fù)雜的機(jī)械接收和機(jī)械轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程激活細(xì)胞因子介導(dǎo)的NF.κB信號(hào)通路，從而誘導(dǎo)促動(dòng)脈粥樣硬化基因的表達(dá)，致動(dòng)脈粥樣硬化內(nèi)皮表型和早期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成 ?［27］ 。低血流剪切應(yīng)力同時(shí)可導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（SREBPs）持續(xù)激活，上調(diào)編碼低密度脂蛋白（LDL）受體、膽固醇合成酶和脂肪酸合成酶的基因表達(dá)，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)LDL的參與和合成增加，最終促進(jìn)LDL在內(nèi)皮下蓄積。活化的SREBPs還能誘導(dǎo)IL.18，在局部炎癥過(guò)程中發(fā)揮額外的作用 ?［28］ 。氧化型低密度脂蛋白（ox.LDL）是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓病的危險(xiǎn)因素 ?［29］ 。脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路可促進(jìn)LDL的攝取、合成以及滲入內(nèi)膜下，并促進(jìn)氧化應(yīng)激增加ox.LDL的產(chǎn)生。因此，脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化通路、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化通路可通過(guò)抑制內(nèi)皮炎癥、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，從而發(fā)揮抗高血壓的作用。

AGE/RAGE、MAPK、TNF、IL.17信號(hào)通路主要參與炎癥反應(yīng)。研究表明，AGE/RAGE信號(hào)通路可激活NOX氧化酶，減少內(nèi)皮eNOS表達(dá)和NO生成，使體內(nèi)活性氧產(chǎn)生增多，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放多種炎性因子，從而引發(fā)血管內(nèi)皮炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激；還可激活 MAPK信號(hào)通路，使NF.κB磷酸化，導(dǎo)致ET.1、 ICAM.1、E.選擇素和組織因子等的表達(dá)增加，上調(diào)氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)，誘發(fā)內(nèi)皮功能障礙 ?［30］ 。研究表明，AGEs可通過(guò)激活巨噬細(xì)胞中CD 36 分子介導(dǎo)ox.LDL內(nèi)吞，減少膽固醇向高密度脂蛋白轉(zhuǎn)化，進(jìn)而影響脂質(zhì)代謝的動(dòng)態(tài)平衡，最終導(dǎo)致巨噬細(xì)胞在內(nèi)脂質(zhì)大量蓄積，形成泡沫細(xì)胞，進(jìn)而引發(fā)血管炎癥和血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和血管功能障礙 ?［31］ 。AGEs與受體RAGE結(jié)合，相互作用激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如細(xì)胞 內(nèi)氧自由基、MAPK和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）1/2， 促使相關(guān)基因表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)ROS大量生成，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激的發(fā)生 ?［32］ 。TNF、IL.17在參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控過(guò)程中能夠引起血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥性病理?yè)p害，進(jìn)而直接或間接地導(dǎo)致血壓升高。

胰島素抵抗引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、脂質(zhì)代謝紊亂等病理變化與高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，Janus激酶（JAK）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT）信號(hào)通路在全身炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗過(guò)程 中發(fā)揮重要作用 ?［33］ 。JAK/STAT信號(hào)通路是AGE/RAGE 的下游通路，其可調(diào)控體內(nèi)各種細(xì)胞因子、激素和生長(zhǎng)因子的下游介質(zhì)，可調(diào)節(jié)能量消耗、胰島素敏感性等多種代謝過(guò)程，是治療代謝綜合征、糖尿病的有效靶點(diǎn)。AGE/RAGE信號(hào)通路的激活可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、血管平滑肌的細(xì)胞代謝。于嘉祥等 ?［34］ 研究證明，通過(guò)抑制AGE/RAGE通路中的AGEs、RAGE等相關(guān)蛋白的表達(dá)，可以發(fā)揮抗炎、抑制氧化應(yīng)激的作用，進(jìn)而改善胰島素抵抗，起到預(yù)防高血壓的作用。上述研究表明，鉤藤.桑寄生中的有效活性成分可能通過(guò)以上途徑調(diào)控炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能、改善糖脂代謝等方面參與治療原發(fā)性高血壓。

4 小 結(jié)

綜上所述，本研究推測(cè)鉤藤.桑寄生可能通過(guò)槲皮素、β.谷甾醇和山柰酚等核心成分，作用于AKT1、IL.6、TNF、TP53等核心靶點(diǎn)，通過(guò)脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、AGE/RAGE、MAPK、TNF、IL.17等核心通路，發(fā)揮治療原發(fā)性高血壓的作用。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)揭示了鉤藤.桑寄生多成分、多靶點(diǎn)、多通路聯(lián)合作用調(diào)控血壓的潛在機(jī)制，為后續(xù)研究鉤藤.桑寄生提供一定的理論依據(jù)。

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（收稿日期：2023.04.25）

（本文編輯 鄒麗）