拐棗汁加工工藝及二氫楊梅素含量測定方法研究

李曉杰 麻紀斌 舒泉湧 翟帆 李宗霖

摘要 ［目的］研究拐棗汁的加工工藝及果汁中二氫楊梅素的含量測定方法。［方法］采用單因素試驗篩選拐棗汁的加工工藝，對比煎煮法及浸提法，考察粉碎粒度、加水量、浸泡時間，建立果汁中二氫楊梅素的含量測定方法并進行方法學(xué)考察。［結(jié)果］浸提法所得果汁口感好，拐棗粉粒度為過8目篩，加水量為1.3～1.5倍，浸泡時間為18 h。二氫楊梅素含量測定方法：色譜柱為Ajilent HC-C18色譜柱，流動相為0.1%磷酸水-乙腈=18∶82，流速1 mL/min，檢測波長290 nm，柱溫30 ℃，進樣量10 μL。［結(jié)論］果汁加工工藝簡單易行，口感較好，易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。建立的二氫楊梅素含量測定方法準(zhǔn)確度、精密度高，專屬性好，為拐棗汁質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞 拐棗汁；二氫楊梅素；加工工藝；含量測定

中圖分類號 TS255? 文獻標(biāo)識碼 A? 文章編號 0517-6611（2024）10-0168-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.10.037

Study on the Processing Technology of Hovenia dulcis Juice and Determination Method of? Dihydromyricetin Content

LI Xiao-jie1， MA Ji-bin1， SHU Quan-yong2 et al

（1.Shaanxi Pharmaceutical Holding Pharmaceutical Research Institute Co.， Ltd.， Xian， Shaanxi 710075;2. Shaanxi Institute of Traditional Chinese Medicine （Shaanxi Pharmaceutical Information Center），Xianyang，Shaanxi 712000）

Abstract ［Objective］To study the processing technology of Hovenia dulcis juice and the determination method of dihydromyricetin content in the juice.［Method］A single factor experiment was used to screen the processing technology of Hovenia dulcis juice， and the decoction method and extraction method were compared. The crushing particle size， water addition amount and soaking time were examined. The determination method of dihydromyricetin content in Hovenia dulcis juice was established and methodological studies were conducted.［Result］The Hovenia dulcis juice obtained by the extraction method had a good taste， with the crushing particle size of 8 mesh sieves，the water addition amount of 1.3-1.5 times and the soaking time of 18 hours. The determination method for dihydromyricetin content was as follows： chromatographic column was Ajilent HC-C18， mobile phase was 0.1% phosphoric acid solution∶acetonitrile=18∶82， flow rate was 1 mL/min， detection wavelength was 290 nm， column temperature was 30 ℃， injection amount was 10 μL.［Conclusion］The juice processing technology is simple and feasible， the juice has a good taste and is easy to achieve industrial production. The determination method of dihydromyricetin content has high accuracy， precision and specificity， this provides a basis for the formulation of quality standards for Hovenia dulcis juice.

Key words Hovenia dulcis juice;Dihydromyricetin;Processing technology;Content determination

作者簡介 李曉杰（1982—），女，陜西富平人，工程師，碩士，從事中藥新劑型及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

收稿日期 2023-10-08

拐棗，學(xué)名枳椇（Hovenia? dulcis），是鼠李科拐棗屬落葉喬木植物［1］，其果梗膨大，是一種特色水果，俗稱“拐棗”。文獻資料顯示，拐棗中含有豐富的可溶性糖類、蛋白質(zhì)、有機酸及人體所必需的維生素、礦物質(zhì)［2］。中醫(yī)認為拐棗有清熱、利尿、解酒毒之功效，民間亦有“千杯不醉枳椇子”的說法［3-4］。我國拐棗的藥食兩用歷史已近2 000年。大量試驗結(jié)果證明拐棗具有消除宿醉、保肝護肝、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用［5-12］。目前拐棗的研究主要集中在國內(nèi)，以拐棗為原料加工的產(chǎn)品主要有拐棗醋、拐棗酒等，其加工未形成規(guī)模，產(chǎn)品的形式還是以初級加工為主，附加值不高［13］。拐棗營養(yǎng)成分豐富，解酒保肝的作用公眾認可度較高，加之獨特的風(fēng)味，適合開發(fā)成拐棗果汁。拐棗鮮果澀味較重，不易保存，但經(jīng)霜后變甜，沒有澀味。筆者以經(jīng)霜后干燥的拐棗為原料，采用浸提法加工拐棗果汁，并建立了拐棗中解酒保肝成分二氫楊梅素的含量測定方法，為拐棗果汁的開發(fā)提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗藥材及試劑

拐棗（購于陜西省旬陽縣）；二氫楊梅素對照品（含量98%，北京索萊寶科技有限公司）；棒曲霉素標(biāo)準(zhǔn)品（含量99.47%，MCE）；黃曲霉毒素B1檢測卡（檢測限10 ng/mL，深圳芬德技術(shù)有限公司）；乙腈（色譜純，Honeywell）；磷酸、乙酸、乙酸鈉、甲醇、甲酸、碳酸鈉、乙酸乙酯均為分析純。

1.2 試驗儀器

果汁壓榨機（CSOL-LX13L，長沙市歐龍機械設(shè)備有限公司）；高效液相色譜儀（Ultimate 3000，賽默飛世爾科技有限公司）；電子天平（Aj135 & PB3002-S，METTLER TOLEDO）；移液槍（1 000 μL & 100 μL，Eppendoff）；數(shù)顯糖度計（SW-32D，廣州市速為電子科技有限公司）；臺式離心機（TGL-16G，上海安亭科學(xué)儀器廠）；氮吹儀（MTN-2800W，天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（101型，北京科偉永興儀器有限公司）；快速水分測定儀（MA37-1CN，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)黏度計（NDJ-5S，上海恒平科學(xué)儀器有限公司）；pH計（pHS-3C型，上海雷磁儀器廠）；超聲清洗儀（KQ-250DE，昆山市超聲儀器有限公司）；高速多功能粉碎機（1000Y，永康市鉑歐五金制品有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)篩（8、10、14、18、200、500、800、1 000目）。

1.3 拐棗汁加工工藝

拐棗經(jīng)挑選去除雜質(zhì)及劣質(zhì)果，清洗，80 ℃干燥至含水量在10%～15%，粉碎，過8目篩網(wǎng)，加入1.3～1.5倍量煮沸后的飲用水，浸泡18 h，壓榨果汁。果汁加熱煮沸，密閉沉降12 h，取上清液灌裝，即得拐棗濃縮果汁。

果汁得率按公式Y(jié)=（M×B）/m×（1-W）進行計算，式中，Y表示果汁得率，M表示果汁質(zhì)量，B表示糖度，m表示拐棗質(zhì)量，W表示拐棗含水量。

1.4 拐棗汁中二氫楊梅素含量測定方法

1.4.1 色譜條件。色譜柱為Ajilent HC-C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流動相為乙腈∶0.1%磷酸溶液=18∶82（V∶V），流速1 mL/min，檢測波長290 nm，柱溫30 ℃，進樣量10 μL［14-15］。

1.4.2

對照品溶液的制備。取二氫楊梅素對照品5 mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，作為儲備液。精密量取儲備液1 mL置50 mL容量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻。

1.4.3 供試品溶液的制備。取拐棗汁2 g，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。備用。

1.4.4

含量測定。取供試品溶液和對照品溶液分別過0.45 μm 濾膜過濾，精密量取10 μL注入液相色譜儀，按照“1.4.1”色譜條件測定，記錄峰面積，外標(biāo)法計算含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 拐棗汁加工工藝驗證

取拐棗3份，各1 kg，按照“1.3”方法加工拐棗汁，分別測定pH、黏度、二氫楊梅素含量及棒曲霉素含量［16］，限量檢查黃曲霉毒素B1和微生物菌落數(shù)［17］，結(jié)果見表1，顯示該加工工藝穩(wěn)定性較好。

2.2 二氫楊梅素含量測定方法學(xué)考察

2.2.1 線性關(guān)系。

取二氫楊梅素儲備液2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。分別吸取0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00 mL置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，按“1.4.1”色譜條件測定，記錄峰面積。以二氫楊梅素濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得線性方程y=259.42x+0.047（R2=0.999 9），線性范圍為0.52～51.65 μg/mL。

2.2.2 專屬性。

取流動相空白溶劑、二氫楊梅素對照品溶液、拐棗汁樣品溶液，按照“1.4.1”色譜條件分別進樣，記錄色譜圖，如圖1所示。從圖1可以看出，流動相空白無干擾，樣品中二氫楊梅素與相鄰色譜峰分離度良好，表明該HPLC含量測定方法專屬性較好。

2.2.3 準(zhǔn)確度試驗。

分別取拐棗汁1 g（二氫楊梅素含量為0.005 4%），精密稱定，共9份。第1～3份精密加入二氫楊梅素儲備液50 μL，第4～6份精密加入二氫楊梅素儲備液100 μL，第7～9份精密加入二氫楊梅素儲備液150 μL，分別加流動相定容至刻度，0.45 μm濾膜過濾，按“1.4.1”色譜條件測定，記錄峰面積，代入線性方程中計算二氫楊梅素含量，結(jié)果見表2。從表2可以看出，平均回收率為96.06%，RSD為1.61%，說明該方法準(zhǔn)確度較高。

2.2.4 精密度試驗。

取10.40 μg/mL二氫楊梅素對照品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，計算6次峰面積的RSD為0.324 1%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗。

取10.40 μg/mL二氫楊梅素對照品溶液及拐棗汁供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進樣，記錄峰面積，計算峰面積的RSD分別為0.761 5%、1.324 3%，結(jié)果表明12 h內(nèi)對照品溶液和拐棗汁供試品溶液穩(wěn)定。

2.2.6 檢測限及定量限。

取0.52 μg/mL二氫楊梅素對照品溶液，定量稀釋，以S/N=10左右為定量限，S/N=3左右為檢測限。結(jié)果顯示，溶液濃度為500.78 ng/mL時S/N=10.2，溶液濃度為200.31 ng/mL時S/N=2.1，以此確定該含量測定方法的檢測限為200.31 ng/mL，定量限為500.78 ng/mL。

2.3 二氫楊梅素穩(wěn)定性研究

參考臺灣中藥典（第三版）枳椇子項下含量測定方法進行拐棗汁中二氫楊梅素含量測定并進行優(yōu)化。該標(biāo)準(zhǔn)中對照品及供試品均以甲醇為溶劑進行溶解并定容，試驗過程中發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素峰型較差，不穩(wěn)定。連續(xù)監(jiān)測16 h，發(fā)現(xiàn)7.5 min左右有一雜質(zhì)峰，隨時間推移，峰面積逐漸增大，以時間為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得線性方程y=0.007 9x+0.005 2（R2=0.994 9），雜質(zhì)的增長具有線性規(guī)律，二氫楊梅素的峰面積也相應(yīng)變小。參考文獻［14-15］及香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)枳椇子項下方法，分別以甲醇、流動相及50%甲醇（內(nèi)含0.1%甲酸）為溶劑進行定容，進行液相檢測，二氫楊梅素峰型得到顯著改善，12 h內(nèi)穩(wěn)定。色譜圖見圖2。

2.4 拐棗果汁加工工藝參數(shù)優(yōu)化

2.4.1 煎煮法與浸提法對比。

取拐棗粉（8～18目）2份，各1 kg，分別加入2 kg水，一份浸泡18 h，壓榨果汁。另一份煎煮1 h，壓榨果汁，果渣再加入2 kg水，煎煮1 h，合并2次煎煮的果汁，測定糖度，計算果汁得率，結(jié)果如表3所示。從表3可以看出，煎煮法果汁得率高，但果汁顏色深，焦糖味重，因此果汁提取工藝選擇浸提法。

2.4.2 拐棗粉碎粒度考察。

將干燥后的拐棗粉碎，分別過8、10、14、18目標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)，得到≤8目的顆粒、>8～10目的顆粒、>10～14目的顆粒、>14～18目的顆粒、>18目的顆粒。取不粉碎的拐棗500 g，加入3倍量水，浸泡18 h。5種不同粒徑的拐棗顆粒各500 g，加入2倍量水浸泡18 h，比較糖度、果汁得率、不溶性固形物含量（高速離心后，倒出上清液，測定不溶性固形物含量，以此反映果汁澄清度）、二氫楊梅素含量及口感。結(jié)果如表4所示。

從表4可以看出，不粉碎的拐棗，口感差，果汁得率低；其余粒徑拐棗壓榨的果汁糖度及得率差別不大。不溶性固形物含量隨著拐棗粒度的減小呈緩慢增加趨勢。二氫楊梅素含量以>10～18目含量最高，≤8目、>18目的分別為0.001 6%、0.003 5%。根據(jù)這些指標(biāo)確定拐棗的粉碎粒度為過8目篩。

2.4.3 浸提時間考察。

取拐棗粉3份，加入2倍量水，分別浸泡12、16、18 h，壓榨果汁，測定果汁糖度和果汁得率，結(jié)果如表5所示。從表5可以看出，果汁糖度差別不大，果汁得率以18 h最高，以此確定浸提時間為18 h。

2.4.4 加水量考察。

取拐棗粉3份，分別加入1.3、1.5、2.0、2.5 倍量水，浸提18 h，壓榨果汁，測定果汁糖度和果汁得率，結(jié)果如表6所示。從表6可以看出，加水量越多，果汁得率越高，但所得果汁糖度越低，若要得到相同的糖度，需加熱濃縮，耗能較高，操作不便，且加熱后果汁有焦糖味。結(jié)合微生物檢測結(jié)果，糖度大于30%的拐棗汁具有抑菌性，易于保存，以此確定加水量為1.3～1.5倍。

2.4.5 拐棗果汁澄清工藝研究。

壓榨后的果汁為棕紅色黏稠液體，靜置后有沉淀物。采用高速離心（轉(zhuǎn)速8 000 r/min）可得到澄清溶液，但該方法工業(yè)生產(chǎn)中不易實現(xiàn)。直接過濾（1 000目），果汁混濁，靜置后仍有沉淀析出。果汁加熱煮沸后，不溶物沉淀速度加快，靜置過夜后基本沉淀完全，上部液體澄清。以此確定果汁澄清工藝為：壓榨后的果汁加熱煮沸，密閉沉降12 h，取上清液。

3 結(jié)論

拐棗鮮果澀味重，難以保存，有季節(jié)性限制，壓榨果汁得率低。該研究采用經(jīng)霜后的拐棗進行果汁壓榨，工藝簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)，避免了果汁脫澀的工藝流程，解決了鮮果壓榨季節(jié)性限制的問題。壓榨的果汁保留了拐棗特有的口感，未添加任何輔料，可直接飲用或根據(jù)個人口味加水稀釋后飲用，也可作為其他復(fù)合果汁或食品的原料，為拐棗系列產(chǎn)品的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

建立的二氫楊梅素含量測定方法準(zhǔn)確度、精密度高，專屬性好，可作為拐棗籽或拐棗其他產(chǎn)品含量測定的依據(jù)，但拐棗汁中二氫楊梅素含量較低，不建議納入果汁質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

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