化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的臨床對(duì)比研究

謝金花

【摘要】 目的 比較化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇2021年1月—2021年12月廣昌縣中醫(yī)院收治的100例疑似乙肝病毒感染患者進(jìn)行研究，在確認(rèn)所有患者病例資料完整后抽取其空腹血，分別采用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法對(duì)患者乙肝五項(xiàng)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比2類檢測(cè)方法對(duì)乙肝五項(xiàng)陽(yáng)性檢測(cè)率的差異，以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）對(duì)乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比化學(xué)發(fā)光法及酶聯(lián)免疫法檢測(cè)HBV的診斷效能。結(jié)果 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙肝e抗體（hepatitis B eantibody，HBeAb）的陽(yáng)性檢出率高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05）；2類方法在乙肝表面抗體（hepatitis b surface antibody，HBsAb）、乙肝e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙肝核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）及總陽(yáng)性檢出率方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)HBV陽(yáng)性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準(zhǔn)確率為91.00%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為92.42%、陰性預(yù)測(cè)值為88.24%，與PCR檢驗(yàn)的Kappa值為0.801；化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)HBV陽(yáng)性的靈敏度為96.92%、特異度為88.57%、準(zhǔn)確率為94.00%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為94.03%、陰性預(yù)測(cè)值為93.94%，與PCR檢驗(yàn)的Kappa值為0.866；化學(xué)發(fā)光法具有更優(yōu)的診斷效能。結(jié)論 相較于酶聯(lián)免疫法，化學(xué)發(fā)光法在對(duì)乙肝病毒五項(xiàng)血清檢測(cè)中表現(xiàn)出更高的診斷價(jià)值，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫法；乙肝病毒；乙肝五項(xiàng)

文章編號(hào)：1672-1721（2024）10-0105-03? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ?中國(guó)圖書分類號(hào)：R446.6

乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV）持續(xù)感染引起的一種嚴(yán)重疾病，參與著肝硬化、肝纖維化、肝細(xì)胞衰竭及肝癌等多種肝臟疾病機(jī)制，在發(fā)展中國(guó)家人群中較為常見(jiàn)，是全世界十大死亡原因之一。HBV主要傳播途徑為血液、體液及性傳播，也被列為性傳播疾病[1]。大多數(shù)情況下，HBV病毒潛伏期無(wú)癥狀，通常在體檢中發(fā)現(xiàn)。當(dāng)前臨床主要可通過(guò)乙肝五項(xiàng)對(duì)患者HBV感染情況進(jìn)行分析，而乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)方法主要包括化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法。酶聯(lián)免疫法是一種更廣泛使用的臨床檢測(cè)方法，主要醫(yī)療設(shè)備具備試驗(yàn)條件，價(jià)格便宜，適用于公共測(cè)試，但在定量分析中有一些弊端，特別是當(dāng)血清樣品濃度太高時(shí)，假陰性因素影響疾病的診斷[2]。化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法是一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)，可以高精度地進(jìn)行定量分析[3]。本研究比較化學(xué)發(fā)光和酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)檢測(cè)乙型肝炎感染血清的差異，為臨床檢驗(yàn)提供參考，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 基礎(chǔ)資料

選取2021年1月—2021年12月廣昌縣中醫(yī)院收治治療的100例疑似乙肝病毒感染患者，男性患者52例，女性患者48例，年齡18～60歲，平均年齡（39±21）歲；所有患者均有完整病例資料，在治療期間抽取空腹靜脈血進(jìn)行乙肝五項(xiàng)檢查。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）有HBV感染者接觸史，且伴有肝痛、乏力等肝病癥狀；（2）年齡18～60歲；（3）患者對(duì)于研究相關(guān)信息已掌握，并且愿意配合相關(guān)研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近期已使用相應(yīng)的抗病毒治療藥物；（2）免疫經(jīng)患者；（3）全身或局部急慢性感染患者；（4）既往乙肝或其他類型病毒感染史；（5）血液系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

血樣采集。所有患者均在空腹?fàn)顟B(tài)下接受靜脈血采集，抽取靜脈血樣本時(shí)需保證在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，抽血器械需要在消毒后使用。抽取血液樣本后置于離心機(jī)，以3 000 r/min速度離心10 min后，采用移液器取上層血清檢測(cè)。若當(dāng)時(shí)條件不允許或需要長(zhǎng)時(shí)間保存血樣本時(shí)，必須將血樣放于低溫狀態(tài)下進(jìn)行保存，低溫可低至-80 ℃。檢測(cè)-80 ℃冰箱中的血樣本時(shí)，應(yīng)將樣本在室溫中復(fù)溫、復(fù)融、充分混合，切勿將樣本反復(fù)凍融。將收集到的15 mL血分為3份，2份分別采用化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)乙肝五項(xiàng)進(jìn)行檢測(cè)，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）等指標(biāo)[4]；1份采用PCR對(duì)HBV進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)，根據(jù)配套試劑盒操作即可。

化學(xué)發(fā)光法。主要通過(guò)邁瑞CL-2000i儀器檢測(cè)進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)，依次對(duì)各項(xiàng)目試劑盒及校準(zhǔn)品的二維碼執(zhí)行儀器校準(zhǔn)測(cè)試得到系統(tǒng)校準(zhǔn)曲線，試劑和校準(zhǔn)品在37 ℃條件下孵育30 min，試劑加入儀器試劑盤中，校準(zhǔn)品按儀器校準(zhǔn)操作執(zhí)行，校準(zhǔn)通過(guò)之后再執(zhí)行質(zhì)控品經(jīng)行質(zhì)控檢測(cè)，質(zhì)控在可控范圍之內(nèi)方可檢測(cè)待測(cè)樣品，待測(cè)品按序號(hào)依次放入樣本架進(jìn)入軌道即可。

酶聯(lián)免疫吸附法。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書分別采用雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、中和競(jìng)爭(zhēng)法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法進(jìn)行檢驗(yàn)，將室溫放置后的實(shí)際分入空白對(duì)照孔、陰陽(yáng)性對(duì)照孔，并使得標(biāo)準(zhǔn)液和特異酶加入，除空白對(duì)照孔外其他加入待測(cè)樣品，充分混勻后蓋上專用膜，37 ℃孵育30 min后洗滌拍干，加入顯色劑并通過(guò)覆膜避光反應(yīng)15～30 min后加入終止液進(jìn)行終止反應(yīng)，并于酶標(biāo)儀對(duì)分光度值進(jìn)行讀取。

實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。主要通過(guò)熒光定量測(cè)定儀進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)，根據(jù)配套試劑盒操作即可。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)2類方法的陽(yáng)性檢測(cè)?；瘜W(xué)發(fā)光法，HBsAg檢測(cè)值大于0.08 U/mL，HBsAb檢測(cè)值大于10 U/mL，HBeAg相對(duì)光強(qiáng)度/臨界相對(duì)光強(qiáng)度水平不小于1，HBeAb和HBcAb的相對(duì)光強(qiáng)度/臨界相對(duì)光強(qiáng)度水平不大于1均可判定為陽(yáng)性。酶聯(lián)免疫吸附法，HBeAb、HBcAb相對(duì)CUTOFF相對(duì)光強(qiáng)度水平不高于0.8，HBsAg、HBsAb、HBeAg不低于0.8，則可以判定為陽(yáng)性。根據(jù)判定結(jié)果，比較對(duì)HBV血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率，從陽(yáng)性結(jié)果準(zhǔn)確率分析2類方法檢測(cè)效果的差異性。

以PCR檢測(cè)作為金標(biāo)準(zhǔn)，采用Kappa檢驗(yàn)分別對(duì)化學(xué)發(fā)光法及酶聯(lián)免疫法檢測(cè)HBV陽(yáng)性水平的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確率進(jìn)行比較。將2類檢測(cè)方法與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性Kappa值進(jìn)行對(duì)比，PCR檢測(cè)HBV定量測(cè)量值＞1.0×102拷貝/mL即可將患者判定為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)；一致性分析采取Kappa檢驗(yàn)，Kappa值＜0.4為一致性較差，0.4～0.75為一致性一般，＞0.75為一致性較好；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2類方法乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果比較

化學(xué)發(fā)光法HBsAg、HBeAb陽(yáng)性檢出率比酶聯(lián)免疫法更高（P＜0.05）；2類方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及總陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2 2類方法檢驗(yàn)HBV陽(yáng)性的一致性分析

100例研究對(duì)象經(jīng)PCR檢驗(yàn)顯示，HBV陽(yáng)性為65例。酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)HBV陽(yáng)性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準(zhǔn)確率為91.00%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為92.42%、陰性預(yù)測(cè)值為88.24%，與PCR檢驗(yàn)的Kappa值為0.801?；瘜W(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)HBV陽(yáng)性的靈敏度為96.92%、特異度為88.57%、準(zhǔn)確率為94.00%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為94.03%、陰性預(yù)測(cè)值為93.94%，與PCR檢驗(yàn)的Kappa值為0.866?；瘜W(xué)發(fā)光法具有更優(yōu)的診斷效能，見(jiàn)表2、表3。

3 討論

乙肝發(fā)生率非常高，嚴(yán)重阻礙了人們的生活和健康[5]。乙肝傳染方式主要是血液感染、性傳染、母嬰感染等。對(duì)肝炎患者進(jìn)行治療和診斷時(shí)，科學(xué)且有效的診斷和評(píng)價(jià)很重要。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)發(fā)展，乙肝五項(xiàng)及HBV-DNA檢驗(yàn)技術(shù)的提高，使得該病發(fā)生及動(dòng)態(tài)定量分析的準(zhǔn)確性大大提高。目前乙肝臨床檢測(cè)方法主要有乙肝單一五項(xiàng)檢查、與HBV前s抗原組合的乙肝五項(xiàng)檢查、與HBV-DNA檢測(cè)組合的乙肝五項(xiàng)檢查等，較大程度降低了乙肝臨床檢測(cè)失誤率，對(duì)于更早發(fā)現(xiàn)疾病或幫助醫(yī)師制定臨床治療方案具有一定價(jià)值[6]。

本研究結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光法HBsAg、HbeAb陽(yáng)性檢出率高于酶聯(lián)免疫法（P＜0.05），2類方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及總陽(yáng)性檢出率上比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示化學(xué)發(fā)光法在可通過(guò)HBsAg、HBeAb陽(yáng)性異常檢出來(lái)提高對(duì)患者乙肝檢測(cè)的準(zhǔn)確性?；瘜W(xué)發(fā)光法是根據(jù)被測(cè)物質(zhì)與相應(yīng)的檢測(cè)試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)光強(qiáng)度來(lái)判斷被測(cè)物質(zhì)的濃度。因?yàn)闄z測(cè)發(fā)光強(qiáng)度與被測(cè)物質(zhì)存在線性定量關(guān)系，所以化學(xué)發(fā)光法靈敏度很高[7]。相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)靈敏度高，對(duì)于被測(cè)標(biāo)志物的檢測(cè)準(zhǔn)確率高、誤診率低。隨著化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)在乙型肝炎五項(xiàng)標(biāo)志物檢測(cè)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。HBsAg主要屬于HBV的外殼蛋白成分，其水平可在HBV感染后1～2周出現(xiàn)異常，并因病情進(jìn)展而持續(xù)變化；HBeAb主要受到HBsAg刺激而產(chǎn)生抗體，對(duì)于HBV復(fù)制過(guò)程的反映也有一定效果。化學(xué)發(fā)光法更靈敏的檢測(cè)使得該類方法對(duì)HBV陽(yáng)性檢出更具價(jià)值[8]。

本次研究顯示，酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)HBV陽(yáng)性的靈敏度為93.85%、特異度為85.71%、準(zhǔn)確率為91.00%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為92.42%、陰性預(yù)測(cè)值為88.24%，與PCR檢驗(yàn)的Kappa值為0.801；化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)HBV陽(yáng)性的靈敏度為96.92%、特異度為88.57%、準(zhǔn)確率為94.00%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為94.03%、陰性預(yù)測(cè)值為93.94%，與PCR檢驗(yàn)的Kappa值為0.866；化學(xué)發(fā)光法具有更優(yōu)的診斷效能。酶聯(lián)免疫吸附法根據(jù)抗原與抗體的特異性結(jié)合現(xiàn)象，可以利用酶與基質(zhì)之間的催化作用和對(duì)待測(cè)物的定量測(cè)定，同時(shí)測(cè)定抗原和抗體，在臨床應(yīng)用廣泛，但該方法對(duì)抗原抗體結(jié)合位點(diǎn)較為看重，否則難以發(fā)生反應(yīng)。該方法適用于不適合標(biāo)記的抗體，可以保持初級(jí)抗體的最強(qiáng)免疫，缺點(diǎn)是容易發(fā)生交叉反應(yīng)。試驗(yàn)物質(zhì)的濃度越高，酶標(biāo)抗原或抗體越少，用儀器測(cè)定的吸光度值越低[9]?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析主要由抗原抗體檢測(cè)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)構(gòu)成，免疫反應(yīng)特異性強(qiáng)，化學(xué)發(fā)光靈敏度高，通過(guò)與發(fā)光試劑標(biāo)記的抗原和抗體組合的免疫反應(yīng)產(chǎn)生免疫現(xiàn)象，加入化學(xué)基質(zhì)，在聚乙烯醇的催化反應(yīng)下發(fā)生電子轉(zhuǎn)移，氧化成刺激的中間體，用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)一定程度的光信號(hào)強(qiáng)度，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)被測(cè)對(duì)象定性定量的檢測(cè)。

化學(xué)發(fā)光法主要包括化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)、化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)、電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)3類，各類方法標(biāo)志物有所不同?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)反應(yīng)機(jī)理為氧化還原反應(yīng)，不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生明顯損害?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)結(jié)合的底物與前者有所區(qū)別，在與結(jié)合抗原抗體分離后可發(fā)生能量躍遷，從而發(fā)生相應(yīng)強(qiáng)度的光，從而進(jìn)行定量。電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)兼具前兩者的高特異性和點(diǎn)化學(xué)發(fā)光高敏感性。其中，電化學(xué)發(fā)光試劑主要用于抗體和抗原的標(biāo)記，磁珠作為將檢測(cè)對(duì)象及其相應(yīng)的抗體固定在磁微球上的固體載體。免疫結(jié)合后，抗體免疫組合物在磁珠上生成，磁場(chǎng)施加到反應(yīng)介質(zhì)的外側(cè)，復(fù)合體被磁性機(jī)架吸附凝聚，通過(guò)洗滌去除彈跳物質(zhì)，測(cè)量磁珠結(jié)合物的發(fā)光強(qiáng)度，從而準(zhǔn)確測(cè)量未知濃度的抗原[10]。

綜上所述，相較于酶聯(lián)免疫法，化學(xué)發(fā)光法在對(duì)乙肝病毒五項(xiàng)血清檢測(cè)中表現(xiàn)出更高的診斷價(jià)值，值得推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 沈國(guó)強(qiáng)，王曉明，唐森龍.兩種不同方法檢測(cè)乙肝病毒感染的臨床效果比較[J].現(xiàn)代診斷與治療，2015，26（20）：4709-4710.

[2] 萬(wàn)獎(jiǎng).探討不同免疫檢驗(yàn)方法檢測(cè)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的效果差異性[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2020，18（3）：47-48.

[3] 高永慶.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物的比較[J].臨床軍醫(yī)雜志，2019，2（47）：215-216.

[4] 高建軍，周利平，朱凌云.全自動(dòng)酶免儀與免疫發(fā)光儀檢測(cè)乙肝兩對(duì)半定量的臨床研究[J].世界新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，102（18）：235-236.

[5] 劉聰，付幫雷.比較兩種不同免疫方法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志物的臨床效果[J].智慧健康，2019，5（20）：5-6.

[6] 李付奎，齊志剛，曾華巧，等.酶聯(lián)免疫吸附與磁微粒化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝病毒的對(duì)比研究[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2020，9（1）：41-42.

[7] 冉景銳.乙肝五項(xiàng)指標(biāo)定量與定性檢測(cè)結(jié)果的差異和臨床意義[J].臨床檢驗(yàn)雜志（電子版），2018，7（1）：78-79.

[8] 馬晶晶，孟雨.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA與化學(xué)發(fā)光磁微粒法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)的關(guān)系[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2021，25（7）：970-972.

[9] 畢玉超，王吉，任瑩，等.核酸檢測(cè)法與酶聯(lián)免疫吸附法在乙型肝炎病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2019，17（5）：146-147.

[10] 何成山，馬晨蕓，陸志成.化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)HBcAb陽(yáng)性、HBsAg陰性血清中隱匿性乙型肝炎病毒感染的分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2019，26（1）：130-133.

（編輯：張興亞）