中晚期非小細(xì)胞肺癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群特點(diǎn)分析

李雅楠 張志 張玉娜 白明明 鄭凡 邢江濤 黃懷鵬 吳克峰

在全球范圍內(nèi),肺癌的發(fā)病率僅次于乳腺癌,據(jù)統(tǒng)計,2020年約有180萬人死于肺癌,位居癌癥相關(guān)死亡的首位[1]。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)約占肺癌的85%[2],其最常見的組織類型為腺癌和鱗癌,分別占50%和40%[3]。研究表明,晚期NSCLC患者外周血中存在循環(huán)腫瘤細(xì)胞[4]。免疫監(jiān)視功能下降有助于循環(huán)腫瘤細(xì)胞逃避免疫細(xì)胞的殺傷作用,并在靶器官中形成轉(zhuǎn)移性病變[5]。本研究觀察NSCLC患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的分布特點(diǎn),報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2022年1月至2023年4月就診于石家莊平安醫(yī)院腫瘤學(xué)部,符合入組標(biāo)準(zhǔn)的肺癌患者,收集治療前1 d患者的外周靜脈血及臨床病例資料。本研究經(jīng)石家莊平安醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)(批件號:202112)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)無惡性腫瘤病史;(2)1個月內(nèi)新發(fā)肺占位患者;(3)符合中華醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)分會肺癌臨床診療指南(2021版)肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];(4)未接受肺癌相關(guān)手術(shù)、化療、放療、免疫治療、靶向治療、類固醇激素治療;(5)經(jīng)支氣管鏡咬檢或經(jīng)皮穿刺肺組織活檢,病理證實(shí)為肺部原發(fā)腫瘤,且組織病理類型為鱗癌或腺癌;(6)無急性及嚴(yán)重播散性感染性疾病;(7)無自身免疫性疾病;(8)排除合并其他部位原發(fā)腫瘤者。

1.3 主要儀器與試劑 CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP-Cy5.5/CD4-PC7/CD19-APC/ CD8-APC-Cy7熒光單克隆抗體試劑盒購自天津曠博公司,溶血素購自美國Becton Dickinson公司。流式細(xì)胞儀為美國Becton Dickinson公司FACS Canto Ⅱ流式細(xì)胞儀,每樣本管獲取10萬個活細(xì)胞,流式分析軟件為BD Diva 8.0.2。血液分析儀為日本Sysmex公司XS-1000i全自動五分類血液分析儀。

1.4 標(biāo)本收集及實(shí)驗(yàn)方法 真空采血管采集患者外周靜脈血2 mL。按照CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP-Cy5.5 /CD4-PC7/CD19-APC/CD8-APC-Cy7熒光單克隆抗體試劑盒說明書進(jìn)行樣本處理,然后上機(jī)檢測。首先,建立CD45/SSC散點(diǎn)圖,去除碎片,設(shè)置不規(guī)則門圈出CD45高表達(dá)、SCC低表達(dá)的淋巴細(xì)胞。選擇顯示淋巴細(xì)胞門細(xì)胞,分別設(shè)置CD3/SSC散點(diǎn)圖、CD3/CD4散點(diǎn)圖、CD3/CD8散點(diǎn)圖、CD3/CD16+56散點(diǎn)圖和CD3/CD19散點(diǎn)圖。在CD3/SSC散點(diǎn)圖中,設(shè)置方形門將表達(dá)該抗原的陽性細(xì)胞群圈出,即總T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比。在CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD16+56和CD3/CD19散點(diǎn)圖中,設(shè)置四象限門,將表達(dá)相應(yīng)抗原的陽性細(xì)胞圈出,即CD4+T、CD8+T、NK、B細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比。各淋巴亞群絕對值(個/μL)=各淋巴細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比×血常規(guī)淋巴細(xì)胞絕對值。見圖1。

圖1 外周血淋巴細(xì)胞亞群流式檢測

2 結(jié)果

2.1 一般資料 本研究共納入93例新發(fā)肺癌病例,其中男74例,女19例;年齡41～87歲,平均年齡(67.02±8.99)歲。經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí),42例(45.16%)為鱗癌,51例(54.84%)為腺癌。見表1。

表1 93例新發(fā)肺癌病例的臨床特征

2.2 肺癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群特征

2.2.1 58.06%的病例外周血淋巴細(xì)胞比例低于正常值下限,其中腺癌病例中,淋巴細(xì)胞比例低于正常值下限者占52.94%,鱗癌病例中,淋巴細(xì)胞比例低于正常值下限者占64.29%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.30);35.48%的病例淋巴細(xì)胞絕對值低于正常值下限,其中腺癌病例中,淋巴細(xì)胞絕對值低于正常值下限者占33.33%,鱗癌病例中,淋巴細(xì)胞絕對值低于正常者占38.10%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.67)。見表2。

2.2.2 流式分析顯示,與健康人群數(shù)據(jù)相比,總T細(xì)胞比例高于正常值上限者占7.53%,低于正常值下限者占7.53%。細(xì)胞毒T細(xì)胞比例高于正常值上限者占7.53%,低于正常值下限者占7.53%。輔助T細(xì)胞比例高于正常值上限者占21.51%,低于正常值下限者占9.68%?？侭細(xì)胞比例高于正常值上限者占7.53%,低于正常值下限者占16.13%。NK細(xì)胞比例高于正常值上限者占3.23%,低于正常值下限者占4.30%。腺癌和鱗癌在以上指標(biāo)的分布上差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.2.3 總T細(xì)胞絕對值低于正常值下限者占60.22%,細(xì)胞毒T細(xì)胞絕對值低于正常值下限者占64.52%,輔助T細(xì)胞絕對值低于正常值下限者占58.06%,總B細(xì)胞絕對值低于正常值下限者占44.09%。腺癌和鱗癌在以上指標(biāo)的分布上差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。NK細(xì)胞絕對值低于正常值下限者占32.26%,其中21.57%的腺癌病例NK細(xì)胞絕對值低于正常值下限者,45.24%的鱗癌病例NK細(xì)胞絕對值低于正常值下限者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.02)。見表2。

2.3 不同病理類型患者外周血淋巴細(xì)胞亞群具體數(shù)值的分布情況:腺癌患者的總T細(xì)胞比例顯著低于鱗癌患者的總T細(xì)胞比例(P=0.047),腺癌患者的NK細(xì)胞比例顯著高于鱗癌患者的NK細(xì)胞比例(P=0.0025),腺癌患者的NK細(xì)胞絕對值顯著高于鱗癌患者的NK細(xì)胞絕對值(P=0.02),其他淋巴細(xì)胞亞群檢測指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見圖2。

3 討論

免疫狀態(tài)與宿主腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。健康人群的外周血可以檢測到多種免疫細(xì)胞,包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞,它們在免疫監(jiān)視、免疫抑制和殺傷效應(yīng)等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[5]。研究發(fā)現(xiàn),循環(huán)腫瘤細(xì)胞在進(jìn)入外周循環(huán)后可抱團(tuán)形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞簇[7]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞簇的形成能提高其侵襲轉(zhuǎn)移能力,程序性死亡受體配體1(programmed cell death ligand 1, PD-L1)在肺癌細(xì)胞的表達(dá)能夠使其逃離免疫細(xì)胞的殺傷作用,從而產(chǎn)生免疫耐受[8]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞與NSCLC患者外周血免疫監(jiān)視功能下降有關(guān)。免疫監(jiān)視功能降低有助于其逃避免疫細(xì)胞的殺傷作用,并在靶器官中形成轉(zhuǎn)移性病變[5]。因此,機(jī)體免疫細(xì)胞亞群在數(shù)量或比例上的變化至關(guān)重要。

本研究結(jié)果顯示,大部分中晚期NSCLC患者在就診初期外周血淋巴細(xì)胞亞群比例正常(總T細(xì)胞84.95%、總B細(xì)胞76.34%、NK細(xì)胞92.47%),但由于淋巴細(xì)胞占白細(xì)胞的比例降低和絕對值減少,因此總T細(xì)胞絕對值、總B細(xì)胞絕對值和NK細(xì)胞絕對值相應(yīng)降低。這提示中晚期NSCLC患者外周血免疫功能低下,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

T細(xì)胞是具有高度異質(zhì)性的細(xì)胞群體,其中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞占比最大。本研究發(fā)現(xiàn),在就診初期,中晚期肺癌患者外周血已存在CD4+T和CD8+T細(xì)胞比例失衡。研究報道,腫瘤間質(zhì)中CD4+/CD8+T細(xì)胞的浸潤與NSCLC患者的預(yù)后及生存率密切相關(guān)[9]。NSCLC腫瘤部位CD4+T細(xì)胞數(shù)量較鄰近正常肺組織的CD4+T細(xì)胞數(shù)量顯著增多,以CD4+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Tregs)細(xì)胞為主。CD8+T細(xì)胞是抑制肺癌生長的關(guān)鍵細(xì)胞,其生物學(xué)效應(yīng)被CD4+Foxp3+Tregs細(xì)胞抑制[10]。可見,CD4+/CD8+比例失衡可能破壞免疫系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸或免疫耐受。

NK細(xì)胞稱為自然殺傷細(xì)胞,起源于共同淋巴祖細(xì)胞,與T、B細(xì)胞不同,它們無需抗原預(yù)先致敏,可以直接殺傷某些腫瘤細(xì)胞,也可以通過ADCC效應(yīng)定向殺傷IgG抗體特異性結(jié)合的腫瘤細(xì)胞,是執(zhí)行機(jī)體免疫監(jiān)視作用的重要效應(yīng)細(xì)胞[11]。NK細(xì)胞還可以通過與其他免疫細(xì)胞相互作用來調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),例如將凋亡靶細(xì)胞的抗原交叉提呈給特定的樹突細(xì)胞,以及通過產(chǎn)生γ-干擾素來啟動CD4+T細(xì)胞[12]。本研究表明,腺癌患者的NK細(xì)胞比例和絕對值均顯著高于鱗癌患者水平。流行病學(xué)顯示,石家莊市肺腺癌和肺鱗癌的5年生存率分別為40.06%和24.51%[13]。提示高NK細(xì)胞狀態(tài)可能是腺癌患者的保護(hù)因素。文獻(xiàn)報道,循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性患者外周血NK細(xì)胞比例顯著低于循環(huán)腫瘤細(xì)胞陰性患者相應(yīng)水平[5]。免疫紊亂導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散到循環(huán)中,逃避免疫細(xì)胞的殺傷,并遷移到靶器官后形成轉(zhuǎn)移灶,最終導(dǎo)致疾病進(jìn)展和生存率低下。

綜上所述,中晚期NSCLC患者就診初期外周血T、B、NK細(xì)胞比例多正常,但各亞群細(xì)胞絕對值減低,CD4+/CD8+比例失衡,腺癌患者NK細(xì)胞水平顯著高于鱗癌患者NK細(xì)胞水平。由于肺癌患者早期臨床癥狀不明顯,大部分患者出現(xiàn)臨床癥狀時已處于晚期。