動(dòng)物源食品中氯丙嗪檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

◎ 金 偉，李惠穎，張 寧

（青島市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 青島 266073）

氯丙嗪屬于吩噻嗪類(lèi)鎮(zhèn)靜劑，其具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)吐和麻醉等作用[1-2]，常用于人類(lèi)精神疾病的治療，可以控制精神病人的狂躁癥狀，降低或減輕患者的妄想，使精神病人的思維活動(dòng)趨于正常，但氯丙嗪具有嗜睡、體位性低血壓等副作用，長(zhǎng)期大量服用還會(huì)引起運(yùn)動(dòng)障礙、流涎等錐體外系反應(yīng)[1]。在畜禽養(yǎng)殖中使用氯丙嗪可以治療畜禽外傷、燒傷、中暑和食道梗塞等癥狀，但有些不法商販常常濫用氯丙嗪，導(dǎo)致畜禽體內(nèi)有氯丙嗪殘留[3]?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）明確指出，氯丙嗪可以在畜禽養(yǎng)殖中作治療用，但動(dòng)物源食品中不得檢出。近年來(lái)，我國(guó)氯丙嗪殘留檢出率較高，劉坤等[4]對(duì)2020—2021 年國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布的我國(guó)畜肉產(chǎn)品主要藥物風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行了調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)在406 批次不合格豬肉及副產(chǎn)品樣品中有15 批次樣品不合格項(xiàng)目為氯丙嗪。山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局2022—2023 年發(fā)布的食品不合格情況通告中，多批次豬肉及副產(chǎn)品檢出氯丙嗪殘留。這些不合格食品被人們長(zhǎng)期食用后會(huì)在體內(nèi)積蓄氯丙嗪，增加肝臟負(fù)擔(dān)，并可能會(huì)對(duì)血細(xì)胞產(chǎn)生不良影響，嚴(yán)重危害身體健康[5]。因此，構(gòu)建一種高靈敏度且快速的氯丙嗪檢測(cè)方法對(duì)食品安全監(jiān)管具有重要意義。本文對(duì)動(dòng)物源食品中氯丙嗪的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了詳細(xì)的綜述，以期對(duì)氯丙嗪檢測(cè)方法的建立與優(yōu)化提供參考。

1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法是基于抗體與抗原特異性結(jié)合免疫學(xué)原理而建立的一種分析方法，該方法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，但是該方法重復(fù)性差不能準(zhǔn)確定量，需要其他方法進(jìn)行確證。目前建立的動(dòng)物源食品中氯丙嗪檢測(cè)的酶聯(lián)免疫法有很多，劉建靜[6]通過(guò)傅克?；ê团嫉郊姿岱▋煞N方式制備了兩種氯丙嗪半抗原，建立了氯丙嗪間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法，該方法中氯丙嗪與其他5 種吩噻嗪類(lèi)藥物的交叉反應(yīng)率在23.87%～42.79%，檢測(cè)限為4.5 ng·mL-1，線性范圍為0.99 ～1 905 ng·mL-1，牛奶樣品中氯丙嗪的回收率在65.0%～114.6%。袁利鵬等[7]以氯丙嗪為原料首先合成N-甲基氯丙嗪再與丙烯酸叔丁酯反應(yīng)得到氯丙嗪半抗原，建立了氯丙嗪檢測(cè)的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法，該方法的檢測(cè)限為0.05 ng·g-1，檢測(cè)范圍為0.09 ～3.45 ng·g-1，對(duì)氯丙嗪的 平均回收率為88.49% ～94.36%，變異系數(shù)為5.20%～7.67%，該方法對(duì)5 種氯丙嗪結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的交叉反應(yīng)率為2.1%～29.0%。孫文佳等[8]將化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法相結(jié)合構(gòu)建了化學(xué)發(fā)光酶免疫法以檢測(cè)氯丙嗪，該方法既具備酶聯(lián)免疫法的特異性，又具備化學(xué)發(fā)光法的高靈敏度，其檢出限為0.02 μg·L-1，線性范圍為0.02 ～24.78 μg·L-1，在添加濃度為2 μg·kg-1、10 μg·kg-1、30 μg·kg-1時(shí)，方法回收率為84.0%～105.6%。

2 氣相色譜法及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜法是一種以氣體作為流動(dòng)相（氮?dú)狻⒑夂蜌鍤獾龋?，固體或液體作為固定相的分離技術(shù)，該方法通過(guò)將樣品氣化使得樣品隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱與固定相相互作用實(shí)現(xiàn)化合物分離，具有分析速度快、選擇性高等優(yōu)點(diǎn)，但氣相色譜法不適用于氣化困難和熱不穩(wěn)定性的樣品。目前，氣相色譜方法檢測(cè)氯丙嗪的研究基質(zhì)大部分為血液、血清和尿液等[9-15]，鮮有利用氣相色譜法檢測(cè)動(dòng)物源食品中的氯丙嗪。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是一種氣相色譜和質(zhì)譜相結(jié)合的一種技術(shù)，具有氣相色譜的高分離度和質(zhì)譜的高靈敏度?，F(xiàn)有部分研究采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)動(dòng)物源食品中的氯丙嗪進(jìn)行分離分析。路平等[16]建立了豬肝中氯丙嗪檢測(cè)的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS），該方法以乙酸乙酯為提取試劑，正己烷和C18固相萃取小柱凈化，方法檢出限為1 μg·kg-1，回收率為68.00%～92.10%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD） 為5.92% ～9.35%。 單美娜等[17]同樣用乙酸乙酯提取，采用正己烷和陽(yáng)離子固相萃取柱凈化，建立了GC-MS 法測(cè)定豬肉中的氯丙嗪，該方法檢出限為2.0 μg·kg-1，回收率為87.1%～97.3%。ZHANG 等[18]建立了同時(shí)測(cè)定豬肉中氯丙嗪和地西泮的GC-MS 法，該方法氯丙嗪的檢出限為2.0 μg·kg-1，回收率＞66.5%，RSD ＜9.5%。周穎等[19]采用乙腈提取，QuEChERS 法凈化，建立了16 種鎮(zhèn)靜劑的GC-MS/MS 檢測(cè)方法，該方法氯丙嗪的檢出限為0.01 μg·kg-1，豬肉和牛肉中定量限為0.10 μg·kg-1，羊肉中定量限為0.20 μg·kg-1，回收率為74.23%～104.91%，批內(nèi)RSD 為3.19%～8.21%，批間RSD 為8.62%～12.54%。

3 液相色譜法

液相色譜法是一種以液體作為流動(dòng)相，固體或液體作為固定相的分離技術(shù)，該方法通過(guò)待分析組分與固定相和流動(dòng)相間相互作用實(shí)現(xiàn)化合物分離，其適用范圍廣，不受分析對(duì)象的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，可以對(duì)約80%化合物進(jìn)行分析，由于其高選擇性和高適用性，液相色譜被廣泛應(yīng)用于食品、藥品和環(huán)境等領(lǐng)域。目前，檢測(cè)動(dòng)物源食品中氯丙嗪的液相色譜法已有很多，現(xiàn)有研究主要是以C18柱進(jìn)行分離，利用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)大多在240～257 nm[20-22]。在前處理方面，液相色譜法中氯丙嗪的檢測(cè)一般是有機(jī)試劑提取，經(jīng)濃縮或凈化后過(guò)膜上機(jī)，現(xiàn)有研究中提取試劑主要有乙腈、酸化乙腈和氨水乙腈等[21-23]。劉淳[22]以乙腈為提取試劑，超聲輔助提取，以乙腈-乙酸銨水溶液為流動(dòng)相建立了豬肉中氯丙嗪檢測(cè)的液相色譜法，該方法氯丙嗪的檢出限為7.5 μg·kg-1，回收率在87.7%～101.0%。李堃等[24]建立了檢測(cè)豬肉中氯丙嗪的高效液相色譜法，樣品經(jīng)乙腈-水提取，以20 mmol·L-1乙酸銨-甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行分析，該方法中，氯丙嗪的回收率在95.4%～103.0%。華永有等[20]以氫氧化鈉甲醇溶液為提取試劑，采用0.1%磷酸-甲醇為流動(dòng)相，利用高效液相色譜測(cè)定畜禽肉中的氯丙嗪，該方法在0.2 ～10.0 μg·mL-1具有良好的線性關(guān)系，氯丙嗪的檢出限為4 μg·kg-1，回收率為81.7%～94.1%。

上述液相色譜法均為單農(nóng)藥殘留檢測(cè)，而現(xiàn)有研究中包括氯丙嗪在內(nèi)的多農(nóng)藥殘留液相色譜檢測(cè)方法也有很多。李品艾等[25]建立了液相色譜法同時(shí)測(cè)定豬肝中氯丙嗪和5 種磺胺類(lèi)藥物的檢測(cè)方法，該方法用乙腈提取樣品，采用堿性氧化鋁柱進(jìn)行凈化，以50%甲醇乙腈溶液和0.1%乙酸水為流動(dòng)相進(jìn)行檢測(cè)，氯丙嗪的檢出限為20 μg·kg-1，定量限為50 μg·kg-1，平均回收率為76.4%。魏晉梅等[21]建立了同時(shí)測(cè)定羊肉中包括氯丙嗪在內(nèi)的11 種鎮(zhèn)靜劑的液相色譜方法，比較了乙腈、甲醇、乙酸乙酯、0.1%氨水-乙腈和甲醇-乙酸乙酯（V/V，1 ∶1）這5 種提取試劑，發(fā)現(xiàn)甲醇、乙酸乙酯和甲醇-乙酸乙酯作為提取液時(shí)易出現(xiàn)樣液渾濁、黏稠和析出絮狀物的現(xiàn)象，用乙腈提取則會(huì)避免這種情況，而相比于純乙腈，以1%氨水-乙腈溶液作為提取劑時(shí)，氯丙嗪等具有特殊結(jié)構(gòu)的藥物回收率更高，該方法在0.02 ～200.00 μg·mL-1具有良好的線性關(guān)系，氯丙嗪的回收率為70.7%～83.8%。

4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是將液相色譜和質(zhì)譜通過(guò)適當(dāng)接口相結(jié)合的一種分析技術(shù)，兼具液相色譜的高分離性和質(zhì)譜的高靈敏度，有分析范圍廣、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，目前已被廣泛應(yīng)用于食品領(lǐng)域，特別是農(nóng)藥殘留和獸藥殘留檢測(cè)。李景娜[26]用1%氨水乙酸乙酯提取樣品、正己烷凈化，建立了動(dòng)物源食品中氯丙嗪的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，LC-MS/MS），該 檢 測(cè) 方 法 的 檢 出 限 為0.5 μg·kg-1，定 量 限 為1.5 μg·kg-1，回收率范圍在72.2%～101.0%，RSD 小于10%。周青等[27]建立了豬肝中氯丙嗪檢測(cè)的LC-MS/MS方法，該研究分別以甲醇、乙腈、乙酸乙酯和50%乙腈水提取豬肝中的氯丙嗪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以甲醇和乙酸乙酯為提取試劑時(shí)更易提取出蛋白質(zhì)和脂肪等干擾物，以50%乙腈水為提取試劑時(shí)提取液易渾濁，而乙腈作為提取試劑時(shí)由于其具有蛋白沉淀作用，提取液中干擾物少，提取效果最好，該方法采用QuEChERS 凈化法凈化，在0.5 ～100.0 ng·mL-1濃度水平下呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回收率可超過(guò)80%，氯丙嗪的檢出限為0.5 μg·kg-1，定量限為1.0 μg·kg-1，RSD 為0.8%～1.9%。RODZIEWICZ 等[28]建立了動(dòng)物腎臟和尿液中氯丙嗪檢測(cè)的LC-MS/MS 方法，該方法以乙腈為提取試劑，回收率在84 ～102%。

近年來(lái)，多殘留檢測(cè)發(fā)展迅速，現(xiàn)有很多研究建立了包括氯丙嗪在內(nèi)的多殘留液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法。王可等[29]以乙腈為提取試劑，選擇N-丙基乙二胺和無(wú)水MgSO4作為吸附劑對(duì)樣品進(jìn)行凈化，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液定量，利用LC-MS/MS 建立了禽蛋中的異丙嗪和氯丙嗪的檢測(cè)方法。張燕等[30]建立了同時(shí)測(cè)定畜禽肉和牛奶中氯丙嗪和地塞米松的LC-MS/MS 法，該方法以乙腈為提取劑，采用C18作為固相分散劑進(jìn)行凈化，氯丙嗪的檢出限為0.1 μg·kg-1，定量限為0.3 μg·kg-1，回 收 率 在70.1% ～119.4%，RSD 為1.6% ～9.4%。華萌萌等[31]以90%乙腈水（含0.1 mol·L-1鹽酸）作為提取試劑，混合型陽(yáng)離子固相萃取柱（PCX）凈化，利用LC/MS-MS 對(duì)雞肉中包括氯丙嗪在內(nèi)的8 種鎮(zhèn)靜劑類(lèi)藥物進(jìn)行檢測(cè)，該方法氯丙嗪的檢出限為0.5 μg·kg-1，定量限為1.0 μg·kg-1，平均回收率為85.3%～95.5%，RSD 為0.81%～5.00%。馮靜等[32]建立了牛肉中16 種鎮(zhèn)靜劑類(lèi)藥物的LC-MS/MS 法，該方法先對(duì)樣品進(jìn)行堿水解，再經(jīng)鹽酸溶液提取，強(qiáng)陽(yáng)離子固相萃取柱（MCX）凈化，采用基質(zhì)工作曲線定量補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)，該方法氯丙嗪的檢出限為0.03 μg·kg-1，加標(biāo)回收率為89.7%～114.0%。胡海山等[33]建立了動(dòng)物源食品中5 種鎮(zhèn)靜劑的LC-MS/MS檢測(cè)方法，該研究以乙腈為提取劑，采用HLB 凈化后上機(jī)，該方法氯丙嗪的檢出限為0.11 μg·kg-1，加標(biāo)回收率為94.5%～96.8%，RSD 為4.01%～4.58%。王旭峰等[34]建立了檢測(cè)水產(chǎn)品中10 種鎮(zhèn)靜劑及其代謝物的LC/MS-MS 方法，該方法以1%氨水-乙酸乙酯提取，一步通過(guò)式小柱KNORTH m-PFC SPE 凈化，氯丙嗪的檢出限為0.1 μg·kg-1，定量限為0.3 μg·kg-1，加標(biāo)回收率為82.6%～117.0%，RSD 為1.5%～9.3%。楊洪生等[35]采用一步通過(guò)式小柱PRIME HLB 進(jìn)行凈化，利用同位素稀釋和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線兩種方式抑制基質(zhì)效應(yīng)的干擾，建立了檢測(cè)水產(chǎn)品中13 種鎮(zhèn)靜劑的LC/MS-MS 方法，該方法中氯丙嗪的加標(biāo)回收率為84.6%～114.7%。

綜上所述，在提取試劑方面，現(xiàn)有研究中液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法所采用大多是有機(jī)試劑，如乙腈和乙酸乙酯等[26-27,29-30,33,36-37]。在凈化方面，現(xiàn)有研究采用的凈化方式主要有陽(yáng)離子固相萃取柱（MCX 和PCX 等）、親水親脂平衡型固相萃取柱（HLB 等）、QuEChERS 和一步通過(guò)式固相萃取柱（PRIME HLB和KNORTH m-PFC SPE）等方式[30-34,37-39]。相較于液相色譜法，LC-MS/MS 法能達(dá)到更高的靈敏度，但是法儀器價(jià)格昂貴，成本高。

5 結(jié)語(yǔ)

氯丙嗪作為一種鎮(zhèn)靜劑類(lèi)藥物可用于人類(lèi)精神疾病的治療，也可在畜禽養(yǎng)殖中作治療用，但是常有不法商家濫用氯丙嗪，導(dǎo)致其在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生累積進(jìn)而影響人們的身體健康。因此，構(gòu)建一種高效的檢測(cè)方法以加強(qiáng)食品中氯丙嗪的監(jiān)管十分重要。本文對(duì)動(dòng)物源食品中氯丙嗪的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行綜述，分別從酶聯(lián)免疫法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等方面進(jìn)行綜述，可以看出目前氯丙嗪的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展很快，且不斷向前處理簡(jiǎn)單、靈敏度高和多殘留同時(shí)檢測(cè)的方向發(fā)展。未來(lái)高效、高靈敏度和高通量將會(huì)是動(dòng)物源食品檢測(cè)的發(fā)展方向。