肝細(xì)胞癌過(guò)繼細(xì)胞療法研究進(jìn)展

赫麗杰　李婷婷　張宇　李景圓　榮耀星　王大慶

【摘要】 肝細(xì)胞癌是嚴(yán)重威脅人類(lèi)生存的一類(lèi)疾病，中國(guó)肝細(xì)胞癌死亡率居世界第三。由于肝細(xì)胞癌發(fā)病早期無(wú)特異性癥狀，晚期的治療方案又存在復(fù)發(fā)率高等的種種弊端，因此尋找行之有效的治療新方法迫在眉睫。過(guò)繼細(xì)胞療法是一種細(xì)胞免疫療法，在肝臟多樣化和復(fù)雜的免疫微環(huán)境中，通過(guò)結(jié)合腫瘤特異性抗原或是非特異性的調(diào)節(jié)免疫平衡，過(guò)繼細(xì)胞療法在肝細(xì)胞癌的治療中逐漸發(fā)揮出優(yōu)勢(shì)。在這篇綜述中我們闡述了肝細(xì)胞癌靶向治療常用生物標(biāo)志物的形態(tài)結(jié)構(gòu)及信號(hào)通路，探討總結(jié)了近年來(lái)過(guò)繼細(xì)胞療法治療肝細(xì)胞癌的研究手段及取得的臨床效果，并對(duì)接下來(lái)的研究方向進(jìn)行了展望。

【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞癌 生物標(biāo)志物 自然殺傷細(xì)胞 T細(xì)胞受體 嵌合抗原受體T細(xì)胞

肝細(xì)胞癌（HCC）是世界范圍內(nèi)第二常見(jiàn)的致死性腫瘤疾病，在全球范圍內(nèi)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。在我國(guó)，HCC發(fā)病例數(shù)和死亡例數(shù)均占全世界總數(shù)的50%以上，死亡率居世界第三位。經(jīng)研究調(diào)查，HCC患者5年生存率為18%，發(fā)病率占所有肝臟腫瘤疾病中的90%[1]。然而，HCC的早期檢測(cè)仍然很困難，因?yàn)榛疾〕跗诨颊邲](méi)有特異性的癥狀[2]。肝硬化或代謝性疾病，丙型肝炎病毒（HCV）、乙型肝炎病毒（HBV）等是HCC發(fā)病的主要原因[3]，然而，目前為止對(duì)以上原因引起的HCC都沒(méi)有研究出行之有效的特異性藥物療法[4]，常見(jiàn)的HCC治療方案有根治性治療方案，例如切除、移植、消融和聯(lián)合治療；姑息性治療方案，例如經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)（TACE）、全身療法和支持療法[5]，然而根治性治療方案存在復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高的弊端，因此，目前HCC的研究重點(diǎn)是開(kāi)發(fā)創(chuàng)新策略和抗腫瘤藥物[6]。免疫療法自提出以來(lái)逐漸成了癌癥治療的研究重心，但是，免疫療法并不是對(duì)所有癌癥都普遍有效[7]。由于肝臟具有多樣化和復(fù)雜的免疫微環(huán)境，HCC被認(rèn)為是一種免疫原性腫瘤[8]，晚期HCC常伴有免疫衰竭，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞和衰竭的T細(xì)胞數(shù)量增加[9]，因此，機(jī)體本身無(wú)法有效的控制疾病的發(fā)展，隨著免疫療法的研究，過(guò)繼細(xì)胞療法作為HCC的一種新型治療方案而受到關(guān)注。常見(jiàn)的過(guò)繼細(xì)胞療法手段包括嵌合抗原受體T（CAR-T）細(xì)胞、自然殺傷（NK）細(xì)胞、T細(xì)胞受體（TCR）及細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）、樹(shù)突狀細(xì)胞-細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（DC-CIK）。

截至目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種在HCC早期檢測(cè)或治療中發(fā)揮作用的生物標(biāo)志物，本文簡(jiǎn)單介紹了常用生物標(biāo)志物的結(jié)構(gòu)及HCC相關(guān)的信號(hào)通路，并討論現(xiàn)今HCC過(guò)繼細(xì)胞療法的研究現(xiàn)狀及治療效果，并對(duì)今后過(guò)繼細(xì)胞療法的研究方向進(jìn)行了總結(jié)和展望。

1 常用生物標(biāo)志物

GPC3基因位于X染色體，是由580個(gè)氨基酸構(gòu)成的核心蛋白[10]。人類(lèi)GPC3核心結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)和果蠅直向同源Dally樣蛋白（Dlp）相似，呈現(xiàn)出一個(gè)α螺旋結(jié)構(gòu)，但是相較于DLP具有更彎曲的形狀[11]。GPC3在HCC、生殖細(xì)胞腫瘤、黑色素瘤中過(guò)表達(dá)，但在膽管細(xì)胞癌、膽囊癌或良性肝組織中不表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生和預(yù)后密切相關(guān)[12]。此外，GPC3在肝癌發(fā)生的早期階段表達(dá)，有可能使HCC的早期檢測(cè)成為可能[13]。甲胎蛋白（AFP）是分子量為69～70 kDa的一種糖蛋白，由590個(gè)氨基酸組成[14]，是HCC最廣泛使用的生物標(biāo)志物之一，然而也有報(bào)道指出HCC患者中約20%的病例檢測(cè)不到AFP的分泌[15]。

2 HCC相關(guān)的信號(hào)通路

研究證明，HCC進(jìn)程中存在c-Myc的過(guò)表達(dá)，而c-Myc是典型的Wnt信號(hào)傳導(dǎo)的目標(biāo)，而典型Wnt/β-catenin介導(dǎo)的信號(hào)通路，可以刺激HCC生長(zhǎng)[16]。在HCC患者的疾病進(jìn)程中，大約95%的患者表現(xiàn)出Wnt/β-catenin失調(diào)[17]。β-catenin與淋巴增強(qiáng)因子/T細(xì)胞因子（LEF/TCF）轉(zhuǎn)錄因子家族的成員相關(guān)，能夠誘導(dǎo)刺激細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞存活的基因表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖[18]。Hh信號(hào)調(diào)節(jié)障礙也會(huì)促進(jìn)HCC病程的發(fā)展[19]。Hh信號(hào)通路依賴(lài)于其與細(xì)胞表面的Patched蛋白的結(jié)合，使Patched蛋白對(duì)Smo的抑制能力受到影響，HCC表面抗原與Hedgehog的相互作用有高親和力，能夠與Patched競(jìng)爭(zhēng)Hedgehog的結(jié)合，對(duì)于Hedgehog信號(hào)存在負(fù)反饋[20]。除了Wnt和Hedgehog信號(hào)通路外，還可以通過(guò)與細(xì)胞外基質(zhì)中的多種相互作用影響細(xì)胞增殖，包括Hippo、HGF、IGF和FGF信號(hào)通路[21]。

3 過(guò)繼細(xì)胞療法治療HCC

3.1 CAR-T細(xì)胞

CAR-T細(xì)胞療法是將T淋巴細(xì)胞修飾后，使其具有識(shí)別特定抗原的能力并用于腫瘤治療的靶向免疫治療方法[22]。Li等[23]構(gòu)建了基于hYP7的CAR-T細(xì)胞，在異種移植或原位HCC小鼠中，CAR-hYP7-T細(xì)胞能夠消除GPC3陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞，其機(jī)制有可能是降低腫瘤細(xì)胞中的Wnt信號(hào)傳導(dǎo)，或是通過(guò)誘導(dǎo)穿孔素和顆粒酶介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。CAR-T細(xì)胞療法在臨床上的研究應(yīng)用較廣泛，Shi等[24]構(gòu)建了二代CAR-GPC3 T細(xì)胞（4-1BB）治療復(fù)發(fā)型難治型HCC小患者，招募的13例患者中1年總存活率為42%，其中1例的存活時(shí)間達(dá)到44.2個(gè)月。Sun等[25]報(bào)道了1例在肝腫瘤切除后出現(xiàn)了復(fù)發(fā)和肺轉(zhuǎn)移的HCC患者接受CAR-GPC3 T細(xì)胞治療的臨床研究，在淋巴細(xì)胞清除后進(jìn)行CAR-GPC3 T細(xì)胞與索拉非尼聯(lián)合治療，結(jié)果顯示腫瘤在36個(gè)月內(nèi)沒(méi)有擴(kuò)大，治療12個(gè)月之后達(dá)到完全緩解狀態(tài)，并維持完全緩解狀態(tài)超過(guò)24個(gè)月。為了彌補(bǔ)單一抗原的弊端，Cao等[26]還開(kāi)發(fā)出一種新型雙特異性T細(xì)胞接合器CAR-T（CAR-T-BiTE），使其在表達(dá)GPC3特異性的同時(shí)還分泌針對(duì)B7-H3的BiTE，在體外實(shí)驗(yàn)中顯示GPC3-BiTE CAR-T細(xì)胞對(duì)于表達(dá)GPC3/B7H3的細(xì)胞系的細(xì)胞毒性大于GPC3 CAR-T細(xì)胞，并且對(duì)于GPC3陰性細(xì)胞系也表現(xiàn)出抑制作用。

然而，由于活化的CAR-T細(xì)胞上會(huì)表達(dá)程序性死亡受體1（PD-1），而腫瘤細(xì)胞及其微環(huán)境能夠表達(dá)程序性死亡受體配體1（PD-L1）和PD-L2。PD-1與配體的結(jié)合會(huì)抑制T細(xì)胞活化，造成免疫逃逸[27]。為了尋找應(yīng)對(duì)的解決辦法，Li等[28]建立了一種雙靶點(diǎn)CAR，其具有抗PD-1單鏈片段可變scFv和抗GPC3 scFv的細(xì)胞外抗原識(shí)別域，以幫助CAR-T細(xì)胞識(shí)別GPC3并且抵抗PD-1抑制信號(hào)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示雙靶點(diǎn)CAR-T細(xì)胞對(duì)GPC3高表達(dá)的HuH-7細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的消除作用，并且對(duì)高表達(dá)PD-L1的HuH7細(xì)胞毒性增強(qiáng)。能夠使成瘤的NOD/SCID小鼠腫瘤生長(zhǎng)速度降低，存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)。

為了應(yīng)對(duì)PD-1及其配體結(jié)合抑制CAR-T功能的問(wèn)題，Li等[29]也構(gòu)建了一個(gè)半合成的鯊魚(yú)VNAR噬菌體文庫(kù)并分離出抗PD-L1單域抗體（B2），在此基礎(chǔ)上通過(guò)與GPC3和B2慢病毒共轉(zhuǎn)導(dǎo)生產(chǎn)雙特異性CAR-T細(xì)胞，Hep3B細(xì)胞毒性試驗(yàn)中顯示，雙特異性CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞毒性顯著高于任何一種單特異性CAR-T細(xì)胞，但是在Hep3B異種移植小鼠模型中，出乎意料的是雙特異性CAR-T細(xì)胞未能減輕腫瘤負(fù)荷，且效果比單特異性CAR-T細(xì)胞差。由此看來(lái)對(duì)于解除PD-1抑制作用的研究還需要繼續(xù)深入的探索。

由于CAR-T細(xì)胞療法在以往的研究中取得了較為樂(lè)觀(guān)的進(jìn)展，因此，針對(duì)CAR-T靶向治療，科學(xué)界進(jìn)行了大量的研究。僅以最常見(jiàn)靶位點(diǎn)GPC3為例，截至目前（2023年5月17日）在美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院的臨床試驗(yàn)注冊(cè)中心登記的CAR-T細(xì)胞療法臨床試驗(yàn)總結(jié)見(jiàn)表1。

3.2 NK細(xì)胞

NK細(xì)胞是先天性淋巴樣細(xì)胞（ILC）的一員，ILC是前線(xiàn)免疫效應(yīng)細(xì)胞，對(duì)于宿主防御的早期階段和組織穩(wěn)態(tài)的維持有至關(guān)重要的作用[30]。ILC可以在沒(méi)有抗原特異性受體的情況下發(fā)揮與CD4+輔助細(xì)胞（Th）和CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞相似并互補(bǔ)的生物學(xué)功能[31]。

NK細(xì)胞可以通過(guò)血流在機(jī)體內(nèi)循環(huán)，具有強(qiáng)大的細(xì)胞溶解功能，細(xì)胞表面存在著多種天然細(xì)胞毒性受體如NKP46、KG2D、CD16和KIRs，可為宿主防御微生物感染和腫瘤[32]。研究人員探索了將NK細(xì)胞聯(lián)合細(xì)胞因子共同作用的課題，Arulanandam等[33]利用生產(chǎn)四價(jià)多功能抗體細(xì)胞接合器的FLEX-NKTM平臺(tái)，構(gòu)建了一個(gè)同時(shí)含有不誘導(dǎo)NKp46內(nèi)化的新型人源化NKp46結(jié)合劑和人源化GPC3結(jié)合劑的雙特異性多功能抗體CYT-303，以介導(dǎo)NK細(xì)胞對(duì)HCC的定向殺傷。該研究結(jié)果顯示與單特異性GPC3或NKp46mAb相比，CYT-303的活性更高，這也印證了NKp46和GPC3的協(xié)同作用能夠產(chǎn)生免疫突觸，促進(jìn)了NK細(xì)胞針對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)揮功能。

白介素-12（IL-12）是一類(lèi)強(qiáng)效的促炎細(xì)胞因子，在免疫細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的反應(yīng)中能夠起到促進(jìn)抗腫瘤反應(yīng)并調(diào)節(jié)腫瘤環(huán)境的作用[34]，然而，全身應(yīng)用IL-12會(huì)引起嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，為了解決這一問(wèn)題，Luo等[35]利用synNotch合成受體構(gòu)建了能夠定位GPC3的改造的NK92細(xì)胞，改造后的GPC3-Syn-IL-12-NK92能夠在腫瘤部位選擇性分泌IL-12，NK92細(xì)胞相比于T淋巴細(xì)胞壽命較短，因此安全性更高。在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)將GPC3-Syn-IL-12-NK92細(xì)胞配合CAR-T細(xì)胞與GPC3陽(yáng)性細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生更多的γ干擾素（IFN-γ）和、腫瘤壞死因子-α（TNF-α），異種移植瘤NSG小鼠治療后45 d可以觀(guān)察到小鼠腫瘤體積明顯減小。

為了抵抗PD-1及其配體結(jié)合的抑制作用，Chen等[36]將PD-L1變體（L3C7c-Fc）與GPC3-CAR-NK細(xì)胞相結(jié)合，構(gòu)建了靶向GPC3的GPC3-CAR-NK細(xì)胞，結(jié)果顯示L3C7c-GPC3-CAR-NK不受PD-L1抑制作用影響，增強(qiáng)了CAR-NK細(xì)胞的治療效果。

Zhao等[37]通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建了三個(gè)具有不同鉸鏈和跨膜區(qū)域的GPC3-CAR-NK細(xì)胞，結(jié)果顯示具有CD8α鉸鏈區(qū)和4-1BB跨膜結(jié)構(gòu)域的GPC3-04-CAR-NK殺瘤效率最高，與HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)也觀(guān)察到培養(yǎng)液上清中的IFN-γ表達(dá)量升高，也驗(yàn)證了GPC3-04-CAR-NK的殺傷作用。

近年來(lái)對(duì)于NK細(xì)胞的研究表現(xiàn)為能夠在輔助其他治療手段的情況下有效的減緩腫瘤的發(fā)展，然而應(yīng)用上還存在許多的弊端，首先是壽命較短的特性，這一特性能防止NK細(xì)胞在循環(huán)中存在的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，提高了安全性，但是也冒著抗腫瘤活性作用時(shí)間短的風(fēng)險(xiǎn)，需要找到一個(gè)適宜的用藥時(shí)間。其次NK細(xì)胞發(fā)揮作用是以非特異性的形式，這使得NK細(xì)胞不能精準(zhǔn)的僅作用于腫瘤組織。因此，在臨床研究中常將NK細(xì)胞和其他治療手段聯(lián)用達(dá)到增強(qiáng)臨床療效的目的，目前的相關(guān)研究絕大部分也都報(bào)道了可喜的成果，有望使更多的HCC患者從中受益。

3.3 TCR-T細(xì)胞

近年來(lái)，科學(xué)家圍繞過(guò)繼細(xì)胞療法開(kāi)發(fā)出不同的治療手段，其中TCR改造的T細(xì)胞在腫瘤治療領(lǐng)域受到了廣泛的關(guān)注。TCR包含四個(gè)作用于連接啟動(dòng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的CD3多肽鏈，TCR的功能單元是由六種蛋白組成的八聚體復(fù)合物[38]，能夠通過(guò)腫瘤特異性抗原和腫瘤相關(guān)抗原及主要組織相容性復(fù)合體限制肽識(shí)別靶向腫瘤細(xì)胞[39]。

通過(guò)搜索美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院的臨床試驗(yàn)注冊(cè)中心網(wǎng)站發(fā)現(xiàn)，目前采用TCR改造的T細(xì)胞手段治療HCC的臨床研究主要圍繞著針對(duì)HBV相關(guān)HCC患者的HBV-TCR重定向T細(xì)胞治療及AFP特異性T細(xì)胞受體轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞，截至目前相關(guān)研究約14項(xiàng)，主要在中國(guó)、美國(guó)、新加坡開(kāi)展，絕大部分研究仍處于第一階段，主要驗(yàn)證TCR改造T細(xì)胞的安全性和耐受性，見(jiàn)表2。

在我國(guó)，HBV相關(guān)HCC占HCC病例的75%～80%，因此，目前使用HBV特異性TCR-T細(xì)胞治療HCC的研究較為熱門(mén)[40]。Meng等[41]構(gòu)建了表達(dá)HBV的特異性TCR T細(xì)胞，靜脈回輸治療8例HBV相關(guān)HCC患者。結(jié)果顯示輸注后有1例患者短暫的出現(xiàn)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及膽紅素升高，這些現(xiàn)象在第二次TCR-T輸注后約80 d恢復(fù)正常。經(jīng)過(guò)治療后7例患者循環(huán)乙型肝炎表面抗原和HBV DNA水平出現(xiàn)降低或穩(wěn)定，1例患者肝臟腫瘤持續(xù)27.7個(gè)月顯著縮小，3例患者顯示出更長(zhǎng)的疾病進(jìn)展時(shí)間和生存期。研究結(jié)果證實(shí)了HBV特異性TCR-T細(xì)胞療法是一種技術(shù)上可行且安全的治療方法，并且在晚期HBV相關(guān)HCC患者中具有潛在的治療價(jià)值。此外，Morteza等[42]還驗(yàn)證了HBV特異性TCR-T細(xì)胞治療肝移植后HCC復(fù)發(fā)的潛力，為使其不受免疫抑制藥物的影響，他們通過(guò)電穿孔特定mRNA突變CnB和IMPDH來(lái)保持HBV特異性TCR-T細(xì)胞的多功能性，同時(shí)減少排斥的風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)果顯示治療后肝移植后HCC復(fù)發(fā)患者出現(xiàn)血清AFP水平波動(dòng)并出現(xiàn)腫瘤消退的臨床體征。體外共培養(yǎng)結(jié)果顯示CnB和IMPDH的突變體的瞬時(shí)過(guò)表達(dá)能夠有效地抵消免疫抑制藥物的作用，但是由于mRNA電穿孔過(guò)表達(dá)細(xì)胞的突變并不能持續(xù)突變，因此對(duì)抑制作用的抵抗只能維持3～5 d。Yang等[43]也通過(guò)mRNA電穿孔獲得HBV特異性瞬時(shí)功能性T細(xì)胞，在肝移植后的HCC復(fù)發(fā)患者臨床應(yīng)用中已經(jīng)驗(yàn)證了其具有良好的耐受性。

除此之外，AFP也是TCR-T細(xì)胞研究的熱門(mén)靶點(diǎn)之一，Liu等[44]構(gòu)建了靶向AFP13的HLA-A*02呈遞肽的TCRm，對(duì)6例確診為晚期HCC的患者進(jìn)行細(xì)胞輸注治療，沒(méi)有觀(guān)察到明顯的不良事件或細(xì)胞因子釋放綜合征，其中1例患者的原發(fā)性腫瘤和肺部轉(zhuǎn)移瘤消退。

3.4 腫瘤殺傷免疫細(xì)胞

CIK是體外擴(kuò)增的異質(zhì)性混合淋巴細(xì)胞群，能夠表達(dá)CD3+、CD56+和NK細(xì)胞受體等[45]。通過(guò)細(xì)胞因子混合物刺激單核細(xì)胞并培養(yǎng)2～4周后，這些細(xì)胞能夠擴(kuò)增高達(dá)1 000倍，從而輕松地獲得大量的細(xì)胞用于后續(xù)的治療。Yang等[46]將人類(lèi)CIK對(duì)J7細(xì)胞腫瘤模型小鼠進(jìn)行尾靜脈注射，結(jié)果顯著抑制了腫瘤的生長(zhǎng)。Wu等[47]將癌癥相關(guān)抗原粘蛋白1（MUC1）和GPC-3的抗體與識(shí)別T細(xì)胞的CD3抗體化學(xué)偶聯(lián)，形成偶聯(lián)CIK的雙特異性抗體，將其作用于2例HCC患者的臨床治療中，結(jié)果顯示治療后能夠維持一段時(shí)間的病情穩(wěn)定，此后通過(guò)抗PD-1抗體治療獲得完全緩解。這也再次印證了通過(guò)阻斷PD-1/PD-L1通路從而阻斷免疫抑制通路，可以提高CIK的抗腫瘤活性[48]。

Haber等[49]對(duì)經(jīng)皮乙醇注射、射頻消融或手術(shù)切除后的230例HCC患者使用CIK進(jìn)行免疫治療，患者無(wú)復(fù)發(fā)生存期延長(zhǎng)至14個(gè)月，總生存期延長(zhǎng)，無(wú)額外的嚴(yán)重不良事件?？偨Y(jié)治療效果發(fā)現(xiàn)CIK治療對(duì)于較小的腫瘤有更加突出的療效。Ji等[50]也將116例原發(fā)性HCC患者分為兩組，58例患者進(jìn)行射頻消融術(shù)（RF）和TACE治療，58例患者在RFA和TACE治療的基礎(chǔ)上還進(jìn)行CIK治療，治療后RFA-TACE-CIK組患者體內(nèi)的CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平顯著升高，平均總生存期和5年生存期明顯長(zhǎng)于RFA-TACE組患者。由于大多數(shù)癌癥患者體內(nèi)T細(xì)胞亞群功能失衡，而CIK治療能夠逆轉(zhuǎn)患者的這種免疫抑制狀態(tài)，聯(lián)合常規(guī)治療手段進(jìn)行CIK治療可增強(qiáng)患者的免疫功能，對(duì)HCC療效顯著。

樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）可以攝取、加工和呈遞腫瘤抗原，抑制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸[51]，具有激活初始T細(xì)胞的能力，能起到特異性的抗腫瘤免疫作用[52]。大量研究證實(shí)，DC能夠增強(qiáng)CIK的活性及增殖能力，誘導(dǎo)其分泌更高濃度的細(xì)胞因子如IL-2、IFN-γ等[53]。隨著DC-CIK免疫療法機(jī)制研究的逐步開(kāi)展，在癌癥過(guò)繼細(xì)胞療法中DC-CIK療法也占據(jù)了一席之地，Xu等[54]對(duì)36例接受根治性切除術(shù)后的原發(fā)性HCC患者進(jìn)行了DC/CIK-CD24免疫治療，接受4次治療的患者相比于接受2次治療的患者，4年生存率上升至52.6%，復(fù)發(fā)時(shí)間得到延緩，與基線(xiàn)相比，患者血清中CD3+、CD4+、CD56+T細(xì)胞有所增加，該結(jié)果驗(yàn)證了DC-CIK療法調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡的能力，聯(lián)合手術(shù)治療對(duì)患者的生存率能夠產(chǎn)生顯著的提升。Zhou等[55]將71例晚期HCC患者分為兩組，其中35例患者僅口服索拉非尼治療，36例患者口服索拉非尼的同時(shí)進(jìn)行DC-CIK治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DC-CIK聯(lián)合索拉非尼的患者相比于僅口服索拉非尼的患者肝功能得到有效改善，中位生存時(shí)間由13.8個(gè)月上升至18.6個(gè)月，治療6個(gè)月的有效率由16.7%上升為51.4%，臨床獲益率由41.9%上升至88.6%。

由于手術(shù)切除等常規(guī)手段存在復(fù)發(fā)等弊端，也為了恢復(fù)腫瘤患者體內(nèi)免疫功能，CIK及DC-CIK療法應(yīng)運(yùn)而生，最近的研究表明，在常規(guī)治療手段的基礎(chǔ)上聯(lián)合使用CIK或DC-CIK治療可以增加T細(xì)胞和NK細(xì)胞的數(shù)量，恢復(fù)機(jī)體的免疫平衡，產(chǎn)生大量具有抗腫瘤活性的細(xì)胞來(lái)發(fā)揮抗腫瘤作用，從而延長(zhǎng)患者的總生存期，在腫瘤細(xì)胞治療中發(fā)揮了協(xié)助的優(yōu)勢(shì)。

4 結(jié)論與展望

由于常規(guī)治療手段效果不甚滿(mǎn)意，免疫療法勢(shì)必成為HCC治療的研究重點(diǎn)之一。過(guò)繼細(xì)胞療法作為一種新興的治療手段，逐漸成為臨床研究的熱點(diǎn)，然而作為一種發(fā)展中的治療手段，過(guò)繼細(xì)胞療法治療HCC的臨床研究絕大部分還處于第一階段，少數(shù)處于第二階段。關(guān)注的主要結(jié)果指標(biāo)聚焦于不良事件和安全性。過(guò)繼細(xì)胞療法存在的弊端是，其對(duì)不表達(dá)特異性靶點(diǎn)的一部分腫瘤細(xì)胞作用不大，同時(shí)還存在腫瘤細(xì)胞通過(guò)不表達(dá)特異性靶點(diǎn)來(lái)逃避藥物作用的情況，這就造成了治療的不徹底并留下了隱患。為了彌補(bǔ)這一弊端，接下來(lái)的研究應(yīng)該發(fā)展多抗原靶點(diǎn)免疫療法，以及免疫療法配合常規(guī)療法，以針對(duì)腫瘤組織中不表達(dá)特異性靶點(diǎn)的那一部分腫瘤細(xì)胞或抗原逃逸現(xiàn)象。同時(shí)，復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境及器官移植患者免疫抑制藥物的使用都會(huì)影響過(guò)繼細(xì)胞療法的療效，針對(duì)這些問(wèn)題，還需要進(jìn)一步的研究。例如PD-1與配體的結(jié)合會(huì)抑制免疫細(xì)胞的活化，為防止這一現(xiàn)象，大量阻斷PD-1及其配體通路的研究正在開(kāi)展，值得加以注意。

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