BCR-ABL 融合基因檢測(cè)在慢性粒細(xì)胞白血病診斷中的價(jià)值

郭 竑，林 江，馬吉春，劉嫣方，聞向梅，錢(qián) 軍

（江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，江蘇 鎮(zhèn)江 212000）

血液腫瘤已成為高度危及人類生命的疾病，如急/慢性淋巴細(xì)胞白血病、急/慢性髓系白血病等。其中，血液系統(tǒng)骨髓增殖性腫瘤（MPN）在血液系統(tǒng)疾病中占據(jù)較高發(fā)病比例，MPN 為造血干細(xì)胞克隆增生性疾病，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)，粒紅巨三系呈現(xiàn)不同程度的增生，分為慢性粒細(xì)胞白血病、慢性中性粒細(xì)胞白血病、真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性骨髓纖維化、原發(fā)性血小板增多癥、慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病、肥大細(xì)胞增生癥和無(wú)法分類的MPN[1]，而臨床上以慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）、真性紅細(xì)胞增多癥（PV）和原發(fā)性血小板增多癥（ET）居多，本研究針對(duì)這三種類型的MPN 進(jìn)行研究。其中，CML為起源于多能干細(xì)胞的惡性克隆增殖性疾病[2]。通過(guò)對(duì)BCR-ABL融合基因進(jìn)行定量檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)CML 各個(gè)病程（慢性期、加速期與急變期）的監(jiān)測(cè)，使BCR-ABL融合基因成為一個(gè)有價(jià)值的指標(biāo)，為進(jìn)一步臨床用藥提供指導(dǎo)依據(jù)[3]。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2016 年1 月至2022 年6 月期間，江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院的96 例MPN 患者標(biāo)本。其中，包含59 例CML患者（初發(fā)30例，加速期和急變期11例，緩解18例），37 例非CML 骨髓增殖性腫瘤患者（PV16 例和ET21 例），所有患者均已確診。本研究經(jīng)江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患者一般資料見(jiàn)表1。

表1 CML（除緩解患者）與非CML 患者性別及年齡參數(shù)

1.2 方法

1.2.1BCR-ABL定量檢測(cè)

進(jìn)行BCR-ABL融合基因定量檢測(cè)，留取骨髓或者外周血（5 mL），應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 方法，試劑為上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司提供，儀器名稱和型號(hào)為ABI 7500。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和圖形分析采用Graphpad Prism 7.00 和SPSS 24.0。組間分類變量的差異采用Fisher's 確切檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)；組間連續(xù)變量的差異則采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)。以P＜0.05（雙側(cè)分布）為差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CML 初發(fā)患者與非CML 的MPN 患者對(duì)比

在CML 初發(fā)患者中，BCR-ABL融合基因水平均值為167.93%，結(jié)果均為陽(yáng)性；而非CML 的MPN 患者其BCR-ABL融合基因均為陰性。

2.2 比較CML 患者各個(gè)病程中BCR-ABL 融合基因的水平

30 例初發(fā)CML 患者，與11 例加速期和急變期的患者的標(biāo)本進(jìn)行BCR-ABL融合基因水平及臨床參數(shù)的比較（見(jiàn)表2），結(jié)果顯示在白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量和血小板計(jì)數(shù)中，CML 初發(fā)患者與加速期和急變期的患者間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值分別為0.046、0.039 和0.001（見(jiàn)圖1、圖2 和圖3），而B(niǎo)CR-ABL融合基因水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明當(dāng)病程發(fā)生進(jìn)展，處于加速期與急變期時(shí)，患者BCR-ABL融合基因水平增高，但與未治療的初發(fā)患者水平無(wú)明顯差異。

圖1 CML 初發(fā)患者和加速期與急變期患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)

圖2 CML 初發(fā)患者和加速期與急變期患者的血紅蛋白含量

圖3 CML 初發(fā)患者和加速期與急變期患者的血小板計(jì)數(shù)

表2 CML 初發(fā)患者與加速期和急變期患者BCR-ABL 融合基因水平及臨床參數(shù)

2.3 CML 初發(fā)與緩解后患者BCR-ABL 融合基因水平的變化

分別檢測(cè)18 組CML 初發(fā)與緩解后患者的BCR-ABL融合基因水平（見(jiàn)表3），結(jié)果表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0001），證實(shí)BCR-ABL融合基因水平對(duì)于疾病的診斷及監(jiān)測(cè)是一個(gè)較好指標(biāo)，見(jiàn)圖4。

圖4 CML 患者中初發(fā)患者及緩解后患者的BCR-ABL 融合基因相對(duì)含量

表3 18 組CML 初發(fā)與緩解后患者的BCR-ABL 融合基因相對(duì)含量水平

3 討論

MPN 在臨床上常見(jiàn)類型為CML、PV 及ET，PV 和ET 治療的主要目的是預(yù)防血栓出血并發(fā)癥。對(duì)其早期診斷，可將疾病控制在低風(fēng)險(xiǎn)層，有效阻止疾病進(jìn)程。Tefferi A 等人證實(shí)在PV 和ET 患者的血栓形成風(fēng)險(xiǎn)分層中，骨髓雖有不同程度增生，但均不出現(xiàn)BCR-ABL融合基因改變[4]。Lu T 等人證實(shí)酪氨酸激酶由BCR-ABL融合蛋白激活，是CML 驅(qū)動(dòng)因子，其陽(yáng)性見(jiàn)于大多數(shù)CML患者中[5]。因此本研究通過(guò)對(duì)BCR-ABL融合基因的檢測(cè)，證實(shí)了該基因在PV及ET增生性疾病中其水平均為陰性，提高了MPN 診斷率。

CML 常伴有染色體t（9；22）易位[6]。在起病初期，部分Ph 染色體發(fā)生隱匿性易位，約5%的Ph 染色體出現(xiàn)陰性狀態(tài)[7]，而B(niǎo)CR-ABL融合基因檢測(cè)靈敏度高于染色體，因此其在CML 的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。這種異常信號(hào)的激活，導(dǎo)致細(xì)胞不受控制增殖，如果未實(shí)施有效干預(yù)，病程將從慢性期向加速期與急變期發(fā)展[8]。

本研究結(jié)果表明，在CML 患者中，隨著病程發(fā)展，經(jīng)治療緩解后，BCR-ABL融合基因水平明顯下調(diào)，而病程處于加速期與急變期時(shí)，其水平又明顯增高，與未治療的初發(fā)患者水平相當(dāng)。Zhang XS 等人也得出同樣的結(jié)論[9]。診斷明確后及時(shí)進(jìn)行靶向藥物治療，使用酪氨酸激酶抑制劑（TKI）治療CML，是現(xiàn)代靶向治療的規(guī)范用藥。重要的是，通過(guò)對(duì)BCR-ABL融合基因水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)，來(lái)評(píng)估治療有效性和量化，是目前監(jiān)測(cè)CML 的主要決定因素[10]。部分患者經(jīng)靶向藥物治療后BCR-ABL融合基因水平明顯下調(diào)，經(jīng)TKI 治療，CML 的患者進(jìn)展到加速期或急變期的百分比從每年20%以上降至1%至1.5%[11]，國(guó)際血液骨髓移植研究中心同樣建議使用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)定期監(jiān)測(cè)BCR-ABL融合基因水平，對(duì)CML 病程監(jiān)測(cè)及用藥是一個(gè)較好的診療指標(biāo)[12]。

BCR-ABL融合基因可以對(duì)MPN 類型做鑒別診斷，并對(duì)CML 病程進(jìn)行監(jiān)測(cè)，是一個(gè)有價(jià)值的指標(biāo)，可為進(jìn)一步臨床用藥提供指導(dǎo)依據(jù)。