基于網(wǎng)絡(luò)藥理學探討加味二至丸“異病同治”絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠的作用機制

摘要：目的運用網(wǎng)絡(luò)藥理學研究方法探究加味二至丸“異病同治”絕經(jīng)綜合征和原發(fā)性失眠的作用機制。方法通過TCMSP（traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform）數(shù)據(jù)庫獲取女貞子、墨旱蓮、淫羊藿的主要化學成分及其靶點，根據(jù)ADME篩選中藥活性組分，通過GeneCards、OMIM、DisGeNET、DrugBank數(shù)據(jù)庫分別獲取絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠主要靶點，采用Cytoscape3.9.0軟件構(gòu)建“加味二至丸-成分-靶點-疾病”網(wǎng)絡(luò)，利用STRING11.5平臺進行蛋白質(zhì)相互作用分析，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)并篩選網(wǎng)絡(luò)中得分較高基因探析。最后采用Metascape平臺進行生物過程及通路分析。結(jié)果加味二至丸調(diào)治絕經(jīng)綜合征和原發(fā)性失眠的核心活性成分為槲皮素、山柰酚、木犀草素、熊果酸等，核心靶點有PTGS2、ESR1、NOS2、 ADRB2、 GABRA1等，加味二至丸調(diào)治絕經(jīng)綜合征和原發(fā)性失眠的生物學通路主要作用于AGE-RAGE信號通路、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力與動脈粥樣硬化、PI3K-Akt信號通路、HIF-1信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、神經(jīng)活性配體受體相互作用等通路。結(jié)論加味二至丸可能通過調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)、炎癥反應(yīng)、雌激素代謝等多種途徑發(fā)揮治療絕經(jīng)綜合征和原發(fā)性失眠的作用。

關(guān)鍵詞：網(wǎng)絡(luò)藥理學；異病同治；加味二至丸；絕經(jīng)綜合征；原發(fā)性失眠；作用機制

中圖分類號：R271.11+6文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2024）03-0052-12

絕經(jīng)期綜合征（menopausal Syndrome，MPS）是指婦女由于卵巢始基卵泡功能逐步耗竭，在絕經(jīng)前或后時，激素水平失穩(wěn)引起的一系列軀體、精神、心理癥狀［1］。我國婦女自然絕經(jīng)平均年齡49.9歲，圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)生率為44.1%［2］，伴隨人口老齡化，60歲以上人口的比例增加，患病率隨之上升［3］。原發(fā)性失眠（Primary Insomnia）是表現(xiàn)為入睡困難、睡眠深度或頻度過短、早醒及睡眠時間不足或質(zhì)量差的一種疾?。?］?；疾÷矢哌_ 23.2%［5］。青年發(fā)病率高于老年［6］，女性發(fā)病率約為男性的1.5倍［7-8］。中醫(yī)理論中“異病同治”即是對于不同的疾病，病機相同者，采用相同的措施進行醫(yī)治［9］。MPS與原發(fā)性失眠比較，有不同的病因，病理機制，及臨床表現(xiàn)，但中醫(yī)病因病機可相同，都可以是“肝腎虧損”、 “陰陽兩虛”或“心腎不交”。滋補腎之陰陽是針對該病機的重要法則。本研究運用網(wǎng)絡(luò)藥理學方法，建立藥物-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)，探究加味二至丸治療更年期綜合征和原發(fā)性失眠“異病同治”的作用機制，以期為臨床研究提供參考依據(jù)。

1資料與方法

1.1加味二至丸活性成分和相關(guān)靶點濾選通過TCMSP檢索女貞子、墨旱蓮、淫羊藿的化學成分，依據(jù)ADME，開啟過濾器設(shè)定類藥性數(shù)值（DL）≥ 0.18、生物利用度（OB）≥20%，以此選擇活性成分。再經(jīng)過TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索活性成分相對應(yīng)的靶點，并根據(jù)已發(fā)表的文獻報道及利用PharmMapper預(yù)測補充活性化合物的靶點。利用 UniProt，將取得靶點轉(zhuǎn)換為對應(yīng)國際標準基因名。

1.2絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠相關(guān)靶點濾選絕經(jīng)綜合癥以“menopausal syndrome”、“climacteric syndrome”、“ perimenopausal syndrome”等為關(guān)鍵詞；原發(fā)性失眠以（primary Insomnia”、“sleep disorder”、“Chronic Insomnia”等為關(guān)鍵詞于GeneCards數(shù)據(jù)庫、OMIM數(shù)據(jù)庫、DisGeNET數(shù)據(jù)庫中采集調(diào)治絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠的潛在靶點，進入DrugBanK數(shù)據(jù)庫尋找調(diào)治絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠的臨床一線西藥作用靶點予以補充。若靶點過多則按照Score從大到小排序，取前1/4目標靶點為研究疾病的潛在靶點。合并4個疾病數(shù)據(jù)庫靶點后，去除重復(fù)值分別得到絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠靶點數(shù)據(jù)集。將兩疾病靶點數(shù)據(jù)集與藥物成分靶點相匹配。

1.3加味二至丸成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建運用將獲得的交集靶點與加味二至丸的活性成分輸入Cytoscape3.9.0構(gòu)建成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)圖，使用Cytoscape3.9.0內(nèi)置的Analyze Network進行拓撲分析，運算度值（Degree）及介數(shù)中心性（Betweenness Centrality），核心靶點及發(fā)揮藥用的主要活性成分用網(wǎng)絡(luò)拓撲學參數(shù)進行推斷。

1.4加味二至丸蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建為明晰加味二至丸藥物相關(guān)靶點與絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠靶點間的相互作用。將藥物-MPS與藥物-Primary Insomnia兩交集分別提交至STRING11.5數(shù)據(jù)庫進行PPI網(wǎng)絡(luò)模型構(gòu)建，設(shè)置生物種類為“Homo sapiens”，設(shè)置最小互相作用閾值為“highest confidence”（gt;0.9），剩余設(shè)定均選為默認，PPI網(wǎng)絡(luò)從頁面上獲得，并使用CytoScape3.9.0 的插件（cytoHubba）遴選出重要基因，采用最大團中心性算法（Maximal Clique Centrality MCC），擇取得分排前10位的節(jié)點并進行可視化分析。

1.5加味二至丸成分-疾病靶點功能與通路的富集分析將加味二至丸調(diào)治絕經(jīng)綜合征和原發(fā)性失眠的靶點分別導(dǎo)入Metascape平臺，設(shè)定Plt;0.01，解析其主要的生物學過程與代謝通路并進行富集分析，保存數(shù)據(jù)結(jié)果并采用線上作圖軟件（www.bioinformatics.com.cn）對數(shù)據(jù)進行可視化。

2結(jié)果

2.1加味二至丸的活性成分與靶點經(jīng)過TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索及ADME濾選，共獲得加味二至丸活性成分36種，其包括女貞子11種、墨旱蓮6種、淫羊藿19種，見表1。于TCMSP數(shù)據(jù)庫中應(yīng)用活性成分檢索對應(yīng)靶蛋白，并通過UniProt數(shù)據(jù)庫搜索對應(yīng)靶蛋白基因名，去重并校對后得到957個作用蛋白靶點及其基因名。女貞子成分對應(yīng)靶點177個、墨旱蓮成分對應(yīng)靶點 146個、淫羊藿成分對應(yīng)靶點205個，合并去除重復(fù)值后共得到靶點228個。

共同靶點72個（圖1（C）），見圖 1。圖中八邊形節(jié)點代表加味二至丸所含中藥，圓形節(jié)點代表藥物活性成分，菱形節(jié)點代表有效成分作用的靶點，三角形節(jié)點代表疾病，其中粉紅色菱形代表絕經(jīng)綜合征與原發(fā)性失眠的公共靶點，灰色菱形代表的絕經(jīng)綜合征獨有靶點，粉紅菱形代表原發(fā)性失眠的獨有靶點。邊代表成分與靶點之間彼此作用的關(guān)系，某一個節(jié)點散發(fā)的邊越多，說明其度值越高，在網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)重要地位。從圖2化合物-靶點-疾病相互作用網(wǎng)絡(luò)圖可以看出，加味二至丸的有效成分大多作用于一個以上靶點，而同一疾病靶點大多也會對應(yīng)多個成分。加味二至丸治療疾病是通過多個潛在成分，成分作用于多個不同靶點產(chǎn)生生物效應(yīng)。根據(jù)度值的大小由高到低進行排序，取度值排名前4名的藥物為主要活性成分，為槲皮素、山奈酚、木犀草素、熊果酸，具體參數(shù)見表2；加味二至丸作用的部分靶點是疾病特有的，NCOA2、AR、SCN5A是加味二至丸治療MPS的度值排名前三的獨有靶點，度值分別為22、18、9；PTGS1、GSK3B、ACHE是加味二至丸治療原發(fā)性失眠度值排名前三的獨有靶點度值分別為20、10、8；PTGS2、ESR1、NOS2 ADRB2 GABRA1則是加味二至丸治療兩種疾病的度值排名前五得共同靶點，也是加味二至丸調(diào)治絕經(jīng)綜合征與原發(fā)性失眠的主要的靶點，具體參數(shù)見表3。

圖2加味二至丸化合物-靶點-疾病作用網(wǎng)絡(luò)2.4加味二至丸成分-疾病靶點PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將加味二至丸治療絕經(jīng)綜合征107個靶點與加味二至丸治療原發(fā)性失眠的104 個靶點分別導(dǎo)入 STRING 11.5平臺，將得到蛋白互作數(shù)據(jù)后重新采用可視化作圖，見圖3。圖中蛋白與蛋白的作用關(guān)系是相互影響的，所以不區(qū)分方向。經(jīng)過相關(guān)度gt;0.9 篩選后得到加味二至丸干預(yù)絕經(jīng)綜合征的節(jié)點數(shù) 為 107 個，邊有 1731 條，平均節(jié)點度值為32.4；加味二至丸干預(yù)原發(fā)性失眠的節(jié)點數(shù)為 104 個，邊有 1224 條，平均節(jié)點度值為 23.5。將 STRING 軟件導(dǎo)出的加味二至丸治療絕經(jīng)綜合癥和原發(fā)性失眠 tsv 格式文件導(dǎo)入 Cytoscape 3.9.0 軟件進行網(wǎng)絡(luò)拓撲參數(shù)分析。MCC 在高級和低級蛋白質(zhì)中都捕獲了更多的必需蛋白質(zhì)［10］，故最大團中心性算法在評估靶點重要性上有較好優(yōu)勢。使用cytoHubba插件，運用MCC評分算法對相互作用關(guān)系進行評析，選取蛋白作用網(wǎng)絡(luò)圖中重要性排前10的基因進行可視化。其中顏色越深表示該節(jié)點地位越重要，連線越多，代表兩個節(jié)點的相關(guān)性越強。篩選得到加味二至丸治療絕經(jīng)綜合征的關(guān)鍵靶基因包括VEGFA、IL6、MMP9、STAT3、CASP3、PTGS2、AKT1、IL1B、CXCL8、CCL2，見圖 3（D）；加味二至丸治療原發(fā)性失眠的靶基因包括IL1B、TNF、VEGFA、IL6、AKT1、PTGS2、IL10、MMP9、CXCL8、CCL2，見圖3（B）；上兩者靶點取交集的得分前8位的靶基因有VEGFA、IL6、MMP9、PTGS2、AKT1、IL1B、CXCL8、CCL2。

3.1加味二至丸組方分析方中女貞子，《神農(nóng)本草經(jīng)》載其“味苦性平，可補中益氣，充實五臟，調(diào)養(yǎng)精神，消除百病”。墨旱蓮，性寒，《本草正義》有言：“補陰且入腎經(jīng)，助毛發(fā)生長，入血分方可涼血止血?！?二至丸中加入淫羊藿便成方加味二至丸，方義一是取獨陽不長，獨陰不生，人之陰陽互根互藏互用，補陽不忘陰，滋陰要溫陽之意；二是《本草綱目》載淫羊藿有“益精氣，堅筋骨，實腰膝，強心力”之功效，可加強原方益腎培元之功。中醫(yī)學認為絕經(jīng)綜合征與原發(fā)性失眠病機皆可為肝腎陰陽虛損，治法宜平補肝腎，滋陰養(yǎng)陽，以女貞子、墨旱蓮、淫羊藿三藥合用，可共生調(diào)和陰陽之效。研究表明，女貞子-墨旱蓮具有抗細胞凋亡、抗氧化應(yīng)激、減低炎癥因子釋放、抗骨質(zhì)疏松、抗老年癡呆、抗衰老、保肝等多種藥理作用［11］。加味二至丸中具有的植物雌激素樣作用，是其抗絕經(jīng)期骨質(zhì)疏松癥、絕經(jīng)期肥胖癥等作用的生物學基礎(chǔ)［12］，且其在調(diào)治MPS及原發(fā)性失眠上的療效不遜色甚至佳于西藥對照，尤其在改善癥狀減少藥物副作用方面表現(xiàn)不凡［13-14］。

3.2加味二至丸成分分析分析得加味二至丸治療絕經(jīng)綜合征與原發(fā)性失眠的活性成分36個，重要成分包括槲皮素（quercetin）、山奈酚（kaempfero）、木犀草素（luteolin）、熊果酸（ursolic acid）等。其中槲皮素、山柰酚、木犀草素為黃酮類化合物，具有抗炎，調(diào)節(jié)免疫、抗氧化應(yīng)激等神經(jīng)、血管保護作用［15-17］。槲皮素作為黃酮類化合物重要的一種，具有降血壓、抗高血脂、抗高血糖、抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護和心臟保護作用等多種特性［18］。研究表明，槲皮素表現(xiàn)出抗炎和免疫增強作用，可能通過阻斷 IL-12 信號傳導(dǎo)和 Th1 分化，減少TNF-α 和一氧化氮的產(chǎn)生，下調(diào)一氧化氮合酶（NOS）的表達，干擾促炎（TNF-α 和 IL-17）和/或抗炎（IL-10）細胞因子達成［19］。有動物實驗表明［20］槲皮素可能通過5-羥色胺能系統(tǒng)的介導(dǎo)增強小鼠睡眠或通過γ-氨基丁酸能（GABAergic）途徑提高小鼠睡眠數(shù)量和質(zhì)量［21］。槲皮素還可增加絕經(jīng)大鼠卵巢中的過氧化氫酶和谷胱甘肽合成酶，防止H2O2-誘導(dǎo)氧化應(yīng)激相關(guān)細胞活力下降和蛋白表達的降低［22］。木犀草素通過紅細胞核因子2-相關(guān)因子途徑發(fā)揮抗氧化和細胞保護特性［23］。木犀草素擁有強大的抗炎活性，這源于其對轉(zhuǎn)錄因子如 STAT3、NF-κB 和 AP-1 的調(diào)節(jié)［24］。山柰酚具備抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護、抗骨質(zhì)疏松、雌激素/抗雌激素、抗焦慮、鎮(zhèn)痛的作用［25］。其抗炎作用主要通過降低細胞因子 IL-6、IL-1β 和 TNF-α 以及抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）的血漿水平實現(xiàn)［26］。有動物實驗表明［27］，山柰酚的雌激素作用可以有效調(diào)節(jié)睡眠［28］。熊果酸具有抗炎、抗氧化、抗癌等多種生物活性［29］。有實驗表明，熊果酸對雌激素相關(guān)的更年期皮膚變化效果良好［30］。熊果酸可激活 GABAA 受體從而延長睡眠時間［31］。

3.3關(guān)鍵靶點分析加味二至丸”異病同治”的關(guān)鍵基因有PTGS2、ESR1、NOS2、 ADRB2、 GABRA1。ESR1基因編碼產(chǎn)物 ER-α 可與雌激素結(jié)合產(chǎn)生刺激促性腺激素分泌、調(diào)節(jié)卵泡生成的生理效用。ESR1 通過負向調(diào)節(jié)NOS2A可影響血管內(nèi)NO等血管舒縮因子的合成與釋放［32-33］。有動物實驗表明，雌激素可改善絕經(jīng)小鼠骨 ER 的表達和密度降低［34-35］。二至丸能顯著上調(diào)ERα和ERβ表達，升高血清E2含量，發(fā)揮雌激素樣作用［36］。環(huán)氧合酶2（COX-2）的表達受雌激素、促炎細胞因子的調(diào)節(jié)［37］可說明ESR1可調(diào)控PTGS2。由上可知，加味二至丸發(fā)揮的雌激素樣作用可能是其防治絕經(jīng)綜合征重要因素之一［38-39］。GABRA1編碼γ-氨基丁酸（GABA）受體，GABA在神經(jīng)細胞中是主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，它作用于GABA-A受體，與保持睡眠-覺醒機制的穩(wěn)態(tài)有關(guān)［40］。 有實驗表明［41］，作用于GABRA1受體的配體可增強小鼠的慢波睡眠和反常睡眠。ADRB2參與的機體免疫、炎癥調(diào)節(jié)［42］。

本研究通過對加味二至丸治療絕經(jīng)綜合征和原發(fā)性失眠PPI網(wǎng)絡(luò)進行最大團中心性（MMC）分析得出了其中排名的前10個共有基因，其中包含IL1B、TNF、VEGFA、IL6、AKT1、PTGS2、IL10、CCL2等炎癥相關(guān)因子。圍絕經(jīng)期會促炎并破壞雌激素調(diào)節(jié)的神經(jīng)系統(tǒng)，雌激素受體-β 已被證明可調(diào)節(jié)稱為炎性體的先天免疫反應(yīng)的關(guān)鍵成分［43］。絕經(jīng)后婦女雌激素缺乏的免疫系統(tǒng)變化表現(xiàn)于促炎血清標志物增加等［44］。破骨細胞活化導(dǎo)致骨重吸收過程中白細胞介素6（IL-6）為關(guān)鍵因素［45］。非快速眼動睡眠可由促炎細胞因子 IL-1、IL-6 與 TNF 增加，由抗炎細胞因子如 IL-4 和 IL-10 減少［46］。實驗表明［47］，TNF可增進動物大腦中5-HT的合成而影響睡眠。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）可增強血管內(nèi)皮通透性，有助于炎癥的發(fā)展和持續(xù)存在［48］。說明加味二至丸具有一定的抗炎作用且可能通過抑制炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)發(fā)揮作用。

3.4通路結(jié)果分析加味二至丸有較多基因靶點富集在AGE-RAGE信號通路、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化、PI3K-Akt信號通路、HIF-1信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、神經(jīng)活性配體受體相互作用等與神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫相關(guān)的信號通路和疾病通路。

AGE-RAGE通路與更年期動脈粥樣硬化有關(guān)，糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）表達水平和循環(huán)可溶性受體（sRAGE）水平與雌二醇相關(guān)［49］。血管炎癥的潛在因素是與性激素-免疫系統(tǒng)相互作用相關(guān)細胞和分子信號通路［50］表示加味二至丸可能以雌激素樣作用通過AGE-RAGE通路影響炎癥因子表達而治療絕經(jīng)綜合征。流體剪切應(yīng)力與動脈粥樣硬化通路可傳導(dǎo)剪切引力啟動信號使內(nèi)皮細胞表現(xiàn)出增殖和促炎基因表達的激活，致使一氧化氮（NO）減少生成，白細胞黏附和滲透性增加，產(chǎn)生絕經(jīng)期動脈病變［51］。HIF-1信號通路參與了絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的病理演變，抑制HIF-1可顯著改善絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥［52］。調(diào)整HIF-1的表達可以改變冠狀動脈疾病的易感性［53］。PI3K/AKT信號通路在調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡、代謝和血管生成等生物學過程中作用重要，是BDNF/TrkB的下游信號通路，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)相關(guān)，其可能通過調(diào)節(jié)BDNF/TrkB從而改善睡眠［54-55］。腫瘤壞死因子 α 可以調(diào)節(jié)睡眠和腦部發(fā)育［56］。白細胞介素1 和 6、腫瘤壞死因子α和β是神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)中的重要樞紐因子，研究表明，白細胞介素1可通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)等發(fā)揮治療絕經(jīng)綜合征［57-58］，過高的TNF-α 、白細胞介素1 和 6可抑制睡眠，誘導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生某些神經(jīng)毒性分子，導(dǎo)致認知功能障礙及記憶力減退［59］。神經(jīng)活性配體－受體相互作用信號通路上富集有GABRA1，其是平衡睡眠機制的重要靶點之一。綜上所述，加味二至丸可能通過調(diào)節(jié)炎癥信號相關(guān)通路、雌激素相關(guān)信號通路、神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫相關(guān)等信號通路呈現(xiàn)相應(yīng)作用。

綜上所述，加味二至丸通過作用于PTGS2、ESR1、NOS2、ADRB2、GABRA1等多個靶點，調(diào)節(jié)AGE-RAGE信號通路、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力與動脈粥樣硬化、PI3K-Akt信號通路、HIF-1信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、神經(jīng)活性配體受體相互作用等通路，從而實現(xiàn)調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫、炎癥反應(yīng)，雌激素代謝等作用網(wǎng)絡(luò)以“異病同治”絕經(jīng)綜合征與原發(fā)性失眠。該研究為深入探討加味二至丸”異病同治”絕經(jīng)綜合征和原發(fā)性失眠的作用機制提供了參考。參考文獻：

［1］李冀，潘明月，李想，等.中醫(yī)藥治療圍絕經(jīng)期綜合征研究進展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2021，23（9）：1-5.

［2］程穎蓮，莫端豪，練堅貞，等.社區(qū)婦女圍絕經(jīng)期綜合征流行病學調(diào)查［J］.中國婦幼保健，2007（15）：2110-2112.

［3］LI R X，MA M，XIAO X R，et al.Perimenopausal syndrome and mood disorders in perimenopause：prevalence，severity，relationships，and risk factors［J］.Medicine（Baltimore），2016，95（32）：e4466.

［4］SHI L，LU Z A，QUE J Y，et al.Prevalence of and Risk Factors Associated With Mental Health Symptoms Among the General Population in China During the Coronavirus Disease 2019 Pandemic［J］.JAMA Netw Open，2020，3（7）：e2014053.

［5］CAO X L，WANG S B，ZHONG B L，et al.The prevalence of insomnia in the general population in China：A meta-analysis［J］.PLoS One，2017，12（2）：e0170772.

［6］SUH S，CHO N，ZHANG J.Sex Differences in Insomnia：from Epidemiology and Etiology to Intervention［J］.Curr Psychiatry Rep，2018，20（9）：69.

［7］ZHOU S J，WANG L L，YANG R，et al.Sleep problems among Chinese adolescents and young adults during the coronavirus-2019 pandemic［J］.Sleep Med，2020，74：39-47.

［8］謝美雪，HSIEH M-H.異病同治及同病異治的理論研究［D］.濟南：山東中醫(yī)藥大學，2014，

［9］CHIN C H，CHEN S H，WU H H，et al.cytoHubba：identifying hub objects and sub-networks from complex interactome［J］.BMC systems biology，2014，8 Suppl 4（Suppl 4）：S11.

［10］黃少杰，陳海霞，牟菲，等.二至丸化學成分及藥理作用研究進展［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2021，36（11）：6617-6619.

［11］毛浩萍，戴永娜，陶蕊，等.經(jīng)典方劑二至丸補肝益腎作用研究［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2021，35（10）：723.

［12］周雨禾，劉婷，馬宏博，等.逍遙二仙湯加減治療圍絕經(jīng)期綜合征情緒障礙的臨床療效［J］.中國實驗方劑學雜志，2021，27（21）：144-149.

［13］曹蔚斌.加味二至丸治療女性圍絕經(jīng)期綜合征54例［J］.浙江中醫(yī)雜志，2018，53（3）：190.

［14］VRACHNIS N，ZYGOURIS D，VRACHNIS D，et al.Effects of Hormone Therapy and Flavonoids Capable on Reversal of Menopausal Immune Senescence［J］.Nutrients，2021，13（7）：2363.

［15］SOMERVILLE V S，BRAAKHUIS A J，HOPKINS W G.Effect of Flavonoids on Upper Respiratory Tract Infections and Immune Function：A Systematic Review and Meta-Analysis［J］.Advances in nutrition（Bethesda，Md），2016，7（3）：488-497.

［16］CALIS Z，MOGULKOC R，BALTACI A K.The Roles of Flavonols/Flavonoids in Neurodegeneration and Neuroinflammation［J］.Mini reviews in medicinal chemistry，2020，20（15）：1475-1488.

［17］HOSSEINI A，RAZAVI B M，BANACH M，et al.Quercetin and metabolic syndrome：A review［J］.Phytotherapy Research，2021，35（10）：5352-5364.

［18］LI Y，YAO J，HAN C，et al.Quercetin，Inflammation and Immunity［J］.Nutrients，2016，8（3）：167.

［19］YE M F，LIU Z，LOU S F，et al.Flos Albiziae aqueous extract and its active constituent quercetin potentiate the hypnotic effect of pentobarbital via the serotonergic system［J］.Biomedical reports，2015，3（6）：835-838.

［20］KIM S，HONG K B，JO K，et al.Quercetin-3-O-glucuronide in the Ethanol Extract of Lotus Leaf（Nelumbo nucifera）Enhances Sleep Quantity and Quality in a Rodent Model via a GABAergic Mechanism［J］.Molecules（Basel，Switzerland），2021，26（10）：3023.

［21］WANG J，QIAN X，GAO Q，et al.Quercetin increases the antioxidant capacity of the ovary in menopausal rats and in ovarian granulosa cell culture in vitro［J］.Journal of ovarian research，2018，11（1）：51.

［22］ASHAARI Z，HADJZADEH M A，HASSANZADEH G，et al.The Flavone Luteolin Improves Central Nervous System Disorders by Different Mechanisms：A Review［J］.Journal of molecular neuroscience：MN，2018，65（4）：491-506.

［23］AZIZ N，KIM M Y，CHO J Y.Anti-inflammatory effects of luteolin：A review of in vitro，in vivo，and in silico studies［J］.Journal of ethnopharmacology，2018，225：342-358.

［24］CALDERN-MONTAO J M，BURGOS-MORóN E，PéREZ-GUERRERO C，et al.A review on the dietary flavonoid kaempferol［J］.Mini reviews in medicinal chemistry，2011，11（4）：298-344.

［25］REN J，LU Y，QIAN Y，et al.Recent progress regarding kaempferol for the treatment of various diseases［J］.Experimental and therapeutic medicine，2019，18（4）：2759-2776.

［26］WATTEL A，KAMEL S，MENTAVERRI R，et al.Potent inhibitory effect of naturally occurring flavonoids quercetin and kaempferol on in vitro osteoclastic bone resorption［J］.Biochemical pharmacology，2003，65（1）：35-42.

［27］LIANG Y，HUANG R，CHEN Y，et al.Study on the Sleep-Improvement Effects of Hemerocallis citrina Baroni in Drosophila melanogaster and Targeted Screening to Identify Its Active Components and Mechanism［J］.Foods（Basel，Switzerland），2021，10（4）：883.

［28］KHWAZA V，OYEDEJI O O，ADERIBIGBE B A.Ursolic Acid-Based Derivatives as Potential Anti-Cancer Agents：An Update［J］.International journal of molecular sciences，2020，21（16）：5920.

［29］CARLETTO B，KOGA A Y，NOVATSKI A，et al.Ursolic acid-loaded lipid-core nanocapsules reduce damage caused by estrogen deficiency in wound healing［J］.Colloids and surfaces B，Biointerfaces，2021（203）：111720.

［30］JEON S J，PARK H J，GAO Q，et al.Ursolic acid enhances pentobarbital-induced sleeping behaviors via GABAergic neurotransmission in mice［J］.European journal of pharmacology，2015（762）：443-448.

［31］TSUTSUMI S，ZHANG X，TAKATA K，et al.Differential regulation of the inducible nitric oxide synthase gene by estrogen receptors 1 and 2［J］.The Journal of endocrinology，2008，199（2）：267-273.

［32］王洪雪，王杰瓊，高杰.中藥治療圍絕經(jīng)期綜合征的機制研究［J］.世界科學技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2020，22（6）：1822-1827.

［33］PINKAS J，GUJSKI M，WIERZBISKA-STPNIAK A，et al.The polymorphism of estrogen receptor α is important for metabolic consequences associated with menopause［J］.Endokrynologia Polska，2016，67（6）：608-614.

［34］QIN X Y，NIU Z C，HAN X L，et al.Anti-perimenopausal osteoporosis effects of Erzhi formula via regulation of bone resorption through osteoclast differentiation：A network pharmacology-integrated experimental study［J］.Journal of ethnopharmacology，2021（270）：113815.

［35］HOU Z P，TANG S Y，JI H R，et al.Edible Bird's Nest Attenuates Menopause-Related Bone Degeneration in Rats via Increaing Bone Estrogen-Receptor Expression［J］.Chinese journal of integrative medicine，2021，27（4）：280-285.

［36］鄭紅霞，趙元，徐穎，等.二至丸對未成熟小鼠雌激素樣作用分析［J］.中國實驗方劑學雜志，2018，24（4）：103-107.

［37］JANA D，SARKAR D K，GANGULY S，et al.Role of Cyclooxygenase 2（COX-2）in Prognosis of Breast Cancer［J］.Indian journal of surgical oncology，2014，5（1）：59-65.

［38］歐陽效強，饒煉，雷敏，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學探討加味二至丸治療動脈粥樣硬化的作用機制［J］.中國實驗方劑學雜志，2020，26（3）：175-182.

［39］FREEDMAN R R.Menopausal hot flashes：mechanisms，endocrinology，treatment［J］.The Journal of steroid biochemistry and molecular biology，2014（142）：115-120.

［40］蔣境興，李寧，趙琳儒，等.中藥防治失眠作用機制研究進展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2022，24（1）：178-181.

［41］ANACLET C，ZHANG M，ZHAO C，et al.Effects of GF-015535-00，a novel α1 GABA A receptor ligand，on the sleep-wake cycle in mice，with reference to zolpidem［J］.Sleep，2012，35（1）：103-111.

［42］WANG Y，JIANG S.The role of ADRB2 gene polymorphisms in malignancies［J］.Molecular biology reports，2021，48（3）：2741-2749.

［43］MCCARTHY M，RAVAL A P.The peri-menopause in a woman's life：a systemic inflammatory phase that enables later neurodegenerative disease［J］.Journal of neuroinflammation，2020，17（1）：317.

［44］GAMEIRO C，ROMAO F.Changes in the immune system during menopause and aging［J］.Frontiers in bioscience（Elite edition），2010，2（4）：1299-1303.

［45］VNNEN H K，HRKNEN P L.Estrogen and bone metabolism［J］.Maturitas，1996，23 Suppl：S65-69.

［46］RICO-ROSILLO M G，VEGA-ROBLEDO G B.［Sleep and immune system］［J］.Revista alergia Mexico （Tecamachalco，Puebla，Mexico：1993），2018，65（2）：160-170.

［47］洪曹棟，尹嘉，張萌，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學探討交泰丸治療失眠的作用機制［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2020，18（10）：1522-1530.

［48］KOCZY-BARON E，KASPERSKA-ZAJC A.［The role of vascular endothelial growth factor in inflammatory processes］［J］.Postepy higieny i medycyny doswiadczalnej（Online），2014（68）：57-65.

［49］PERTYNSKA-MARCZEWSKA M，MERHI Z.Relationship of Advanced Glycation End Products With Cardiovascular Disease in Menopausal Women［J］.Reproductive sciences（Thousand Oaks，Calif），2015，22（7）：774-782.

［50］NASSER S A，AFIFY E A，KOBEISSY F，et al.Inflammatory Basis of Atherosclerosis：Modulation by Sex Hormones［J］.Current pharmaceutical design，2021，27（18）：2099-2111.

［51］張?zhí)K慧，張穎倩，惠輝，等.流體剪切力作用于單核-巨噬細胞對動脈粥樣硬化的影響［J］.臨床心血管病雜志，2022，38（5）：412-417.

［52］ZHONG H，CAO C，YANG J，et al.［Research on Relationship of HIF-1 Signaling Pathway and Postmenstrual Osteoporosis］［J］.Sichuan da xue xue bao Yi xue ban = Journal of Sichuan University Medical science edition，2017，48（6）：862-868.

［53］GUO N，ZHANG N，YAN L，et al.Correlation between genetic polymorphisms within the MAPK1/HIF-1/HO-1 signaling pathway and risk or prognosis of perimenopausal coronary artery disease［J］.Clinical cardiology，2017，40（8）：597-604.

［54］XU F，NA L，LI Y，et al.Roles of the PI3K/AKT/mTOR signalling pathways in neurodegenerative diseases and tumours［J］.Cell amp; bioscience，2020，10（1）：54.

［55］Itoh N，Enomoto A，Nagai T，et al Molecular mechanism linking BDNF/TrkB signaling with the NMDA receptor in memory：the role of Girdin in the CNS.Rev Neurosci，2016，27（5）：481-490.

［56］DYKSTRA-AIELLO C，KOH K M S，NGUYEN J，et al.A wake-like state in vitro induced by transmembrane TNF/soluble TNF receptor reverse signaling［J］.Brain，behavior，and immunity，2021（94）：245-258.

［57］俸玉，姚娜，袁博琳，等.白細胞介素1與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥相關(guān)性研究進展［J］.中國臨床新醫(yī)學，2022，15（1）：90-94.

［58］魏合偉，侯書麗，龔鈺，等.白細胞介素-6在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機制中作用的臨床研究［J］.廣州中醫(yī)藥大學學報，2002（2）：94-95.

［59］李紅，陳瑩，郭麗華，等.圍絕經(jīng)期非器質(zhì)性失眠婦女肝郁證素與白細胞介素1β、腫瘤壞死因子-α的相關(guān)性［J］.中醫(yī)雜志，2016，57（7）：584-587.