嬰幼兒配方乳粉中維生素檢測關(guān)鍵點的探究

劉寧　侯廣月　周莉莉　杜營　孔寒　張笑珊

關(guān)鍵詞：嬰幼兒配方乳粉，維生素，檢測

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2024.01.037

0 引言

母乳是嬰兒最理想的食物，母乳中脂肪酸、乳糖、水、氨基酸的配比更適合嬰兒的消化，還能將母體的抗體傳遞給嬰兒，提高嬰兒的免疫力。從各方面看母乳優(yōu)于配方奶粉，但母乳喂養(yǎng)會因為各種原因停止或中斷。嬰幼兒配方乳粉便是人類“模擬母乳”的偉大發(fā)明。但由于一些無良商家造假謀利、產(chǎn)品保存環(huán)境不當(dāng)、運輸過程不當(dāng)?shù)仍?，會使乳粉產(chǎn)生如營養(yǎng)成分含量不達(dá)標(biāo)、微生物指標(biāo)不合格、生物毒素超標(biāo)等問題。不合格的嬰幼兒配方乳粉會產(chǎn)生極壞的影響。2008年“三鹿奶粉事件”因含有化工原料三聚氰胺，導(dǎo)致食用奶粉的嬰兒患上腎結(jié)石，此事件使中國國民長期不敢食用國產(chǎn)奶粉；2020年“郴州奶粉事件”以固體飲料代替配方奶粉，導(dǎo)致嬰兒嚴(yán)重營養(yǎng)不良。這些事件警示我們，嬰幼兒配方乳粉的營養(yǎng)成分和有害物質(zhì)檢測的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。本文對嬰幼兒配方乳粉中維生素的檢測標(biāo)準(zhǔn)、種類、功能作用進(jìn)行論述。結(jié)合日常的檢測經(jīng)驗，概括了維生素檢測難點，提出解決方法并根據(jù)參考文獻(xiàn)，延伸出維生素的優(yōu)化檢測方法。以期為進(jìn)一步研究嬰幼兒配方乳粉中的維生素提供思路。

1 我國嬰幼兒配方乳粉的標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀

1.1 嬰幼兒配方乳粉的國家標(biāo)準(zhǔn)

我國于1983年發(fā)布首個嬰幼兒配方乳粉的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，與國外的相關(guān)研究相比起步較晚，直到1997年發(fā)布《嬰幼兒配方粉及嬰幼兒補充谷粉通用技術(shù)條件》，我國有關(guān)嬰幼兒配方乳粉的標(biāo)準(zhǔn)才達(dá)到國際水平。目前，使用2021年最新發(fā)布的GB 10765-2021、GB 10766-2021、GB 10767-2021分別對0～6、6～12、12～36月齡嬰幼兒食用配方食品的原料、感官、營養(yǎng)成分、污染物限量、真菌毒素限量、微生物限量進(jìn)行了要求，其中營養(yǎng)成分包括必需和可選擇成分兩大類。必需成分有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素、礦物質(zhì)；可選擇成分有?；撬帷⑷~黃素等，生產(chǎn)企業(yè)在符合國家相關(guān)規(guī)定下可自行決定是否添加。

必需成分對嬰兒的生長發(fā)育至關(guān)重要。蛋白質(zhì)、脂肪與碳水化合物為生命體提供了80%以上的能量，是生命體的主要供能物質(zhì)。維生素和礦物質(zhì)雖然不提供能量，但在維持細(xì)胞的生長和正常代謝、生理功能上具有重要作用[1]。不同維生素在人體中發(fā)揮不同的作用，缺乏時會出現(xiàn)不同的癥狀，詳見表1。

1.2 嬰幼兒配方乳粉的檢測標(biāo)準(zhǔn)

維生素可分為脂溶性維生素和水溶性維生素兩大類。脂溶性維生素包括維生素A、D、E、K，攝入過多，會引起積累中毒；水溶性維生素包括維生素C和B族維生素，會隨尿液排出，過量攝入對生物體不會產(chǎn)生危害。2023年國家食品安全監(jiān)督抽檢實施細(xì)則對13種維生素項目的相關(guān)檢測方法做出規(guī)定，詳見表1。

2 嬰幼兒配方乳粉中維生素的檢測難點與分析

嬰幼兒配方乳粉生產(chǎn)工藝主要分為干法、濕法和干濕法復(fù)合三種工藝。與干法工藝相比較，濕法工藝生產(chǎn)的奶粉源頭可控、營養(yǎng)均衡，因此市場上的產(chǎn)品大多采用濕法工藝。李琳瑤等[5]通過實驗對嬰幼兒配方乳粉中維生素的衰減進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)光照、溫度、pH等條件對維生素的穩(wěn)定性影響較大。因此實驗過程需要控制好這些環(huán)境因素。從表1中可以看出目前國家監(jiān)管中檢測維生素A、D、E、K1、B1、B2、B6和煙酸采用高效液相色譜技術(shù)進(jìn)行。綜合日常檢測過程，本文重點對上述8種維生素的檢測關(guān)鍵點進(jìn)行研究。

2.1 脂溶性維生素的檢測難點與分析

脂溶性維生素實驗過程萃取復(fù)雜，條件要求嚴(yán)格，主要問題是回收率差、檢測結(jié)果低；在檢測時，注意以下問題：（1）檢測維生素A、D、E時，針對回收率低、檢測結(jié)果低的問題。采取實驗前做好標(biāo)液標(biāo)定、皂化后加標(biāo)提高回收率、適當(dāng)調(diào)整皂化液使用量和皂化時間來解決問題[6-7]。本文在實驗過程中發(fā)現(xiàn)VA標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性較差。VD與VE的標(biāo)液相對穩(wěn)定。乳粉中不含淀粉不需酶解直接皂化，乳粉中VA的添加形式大多數(shù)是是醋酸視黃脂，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品是視黃醇時，質(zhì)量控制可以選擇在皂化后添加，可以有效將VA的回收率從65%提高到80%，VD、VE也可使用此方法提高回收率；筆者選擇15 mL氫氧化鉀來進(jìn)行皂化。相應(yīng)的，在洗滌步驟需要清洗4次，才能至中性，這有效保護了色譜柱，延長色譜柱的使用壽命。

（2）針對維生素K1回收率的問題，筆者根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)資料[8]，檢測過程中使用脂肪酶0.6 g、酶解時間2 h，1.0 g K2CO3進(jìn)行皂化反應(yīng)并使用飽和氯化鈉溶液水洗一次，此前處理能達(dá)到回收率80%～90%；流動相不再使用對人體有害的四氫呋喃，使用含有0.03%冰醋酸、1.5 g/L氯化鋅、0.5 g/L無水醋酸鈉的100 %甲醇，峰型理想，分離度較好。

2.2 水溶性維生素的檢測難點與分析

水溶性維生素檢測過程中，在調(diào)節(jié)pH時容易出現(xiàn)基質(zhì)中含有的營養(yǎng)素與目標(biāo)物發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致實驗中目標(biāo)物含量偏低；標(biāo)準(zhǔn)方法簡單，而樣品基質(zhì)復(fù)雜，容易存在雜質(zhì)干擾。在檢測時，要注意以下問題：

（1）實驗過程中，與標(biāo)準(zhǔn)相比，本文結(jié)合文獻(xiàn)資料[9]在檢測維生素B1的過程中使用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為5～6，使用1.0 g/L的堿性鐵氰化鉀衍生液來進(jìn)行衍生。此步驟可將樣品回收率提高到85%；維生素B2的檢測按照標(biāo)準(zhǔn)方法，當(dāng)檢測羊奶粉時需添加酸性磷酸酶，此步驟能提高維生素提取率。

（2）煙酸在反向色譜柱中保留時間靠前，雜質(zhì)干擾目標(biāo)峰，標(biāo)準(zhǔn)中通過調(diào)節(jié)pH來沉淀蛋白質(zhì)。結(jié)合文獻(xiàn)資料[10]，本文采用標(biāo)準(zhǔn)的前處理方法，使用分離度更高的Atlantis T3（5μm 4.6×250 mm）色譜柱，使用甲醇和20 mmol/L乙酸銨為流動相，梯度洗脫。結(jié)果表明煙酸的峰型好，且能避開前3分鐘的雜質(zhì)峰，分離度較好。

（3）國標(biāo)方法中維生素B6實驗過程較簡單，目標(biāo)峰附近干擾較多。參考標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)資料[11]，本文使用標(biāo)準(zhǔn)方法對樣品進(jìn)行前處理，優(yōu)化色譜條件選用Atlantis T3（5μm 4.6×250 mm）色譜柱，流動相使用甲醇和20 mmol/L乙酸銨梯度比例，最終目標(biāo)物峰型好、分離度較好且能避開前3分鐘的雜質(zhì)峰，可滿足對嬰幼兒配方乳粉中維生素B6的定性定量分析。

3 維生素新檢測方法的探討

在檢測維生素A、D、E時，國家標(biāo)準(zhǔn)方法操作步驟復(fù)雜，實驗結(jié)果不夠理想，檢測行業(yè)一直在尋找更方便、高效的檢測方法。目前主要有二維液相色譜法[12]和在線固相萃取-二維液相色譜法[13]這兩種。二維液相色譜法與標(biāo)準(zhǔn)方法相比簡化了VD的正向半制備過程并能同時檢測維生素A、E，方法簡便、靈敏性高、準(zhǔn)確度高。在線固相萃取-二維液相色譜法在二維液相色譜法的基礎(chǔ)上，簡化了國標(biāo)中的提取、洗滌和濃縮步驟，樣品皂化后即可上機檢測，此法大大減少了實驗過程中的損失，提高了樣品回收率。

4 總結(jié)

本文對嬰幼兒配方乳粉中常見的維生素的種類、功能、缺乏危害及檢測關(guān)鍵點進(jìn)行了研究。現(xiàn)階段，嬰幼兒配方乳粉中維生素的測定還存在許多難題。相信隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和研究人員的不斷努力，終能攻克難關(guān)，實現(xiàn)嬰幼兒配方乳粉中維生素準(zhǔn)確、快速測定，為嬰幼兒健康成長保駕護航。

作者簡介

劉寧，本科，工程師，研究方向為食品檢驗檢測。

侯廣月，通信作者，理學(xué)博士，高級工程師，主要從事產(chǎn)品質(zhì)量檢驗與科研工作。

（責(zé)任編輯：袁文靜）