人類婆羅雙樹樣基因4作為口腔鱗狀細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)記物的研究

文/焉妍，于建新

口腔鱗狀細(xì)胞癌是口腔頜面外科最常見的惡性腫瘤，大約占整個口腔惡性腫瘤的80%[1]。目前的治療方法，短期效果尚可，但是腫瘤細(xì)胞在緩解一段時(shí)間后仍會復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，患者的5 年生存率較低。一些學(xué)者認(rèn)為，這種不良結(jié)果可能與口腔鱗癌的發(fā)病機(jī)理不清和腫瘤細(xì)胞的特殊性有關(guān)[2]。臨床研究顯示，腫瘤干細(xì)胞是腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素。SALL4 是SALL4 家族中的一員，它可以調(diào)控腫瘤干細(xì)胞，異常表達(dá)可導(dǎo)致肝癌、急性慢性粒細(xì)胞白血病、胃腸道等腫瘤的發(fā)生，突變可導(dǎo)致Duane-Radial 射線綜合征(DRSS)、Hoot-Oruam 綜合征(HOS)等遺傳性疾病[3]。那么SALL4 在口腔鱗癌中的表達(dá)是怎么樣的，能否為口腔鱗癌的臨床治療提供指導(dǎo)，本文進(jìn)行了研究和探討。

1 數(shù)據(jù)和方法

在煙臺山醫(yī)院口腔科隨機(jī)抽取2017 年9 月至2018 年6 月接受治療的52 例口腔鱗癌患者為觀察組，這52 例患者的腫瘤旁組織為對照組，經(jīng)兩名病理科醫(yī)生診斷，在我院道德倫理委員會審核同意的情況下（批準(zhǔn)號：煙山倫準(zhǔn)2017015 號），參與實(shí)驗(yàn)的患者均只進(jìn)行了手術(shù)治療，未進(jìn)行放化療，從癌旁組織到病灶的距離大于5mm，且無腫瘤侵?jǐn)_。其中男性24 例，女性28 例，年齡在52～66 歲之間，平均年齡(59.51±6.41)歲，腫瘤＞5cm 者27 例，腫瘤≤5cm 者25 例，中/高分化者36 例，低分化者16 例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22 例，無轉(zhuǎn)移者30 例；臨床TNM I-II期37 例，III-IV 期15 例。兩組標(biāo)本經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。免疫組織化學(xué)方法檢測SALL4 蛋白的表達(dá)。

免疫組化法操作步驟及判斷標(biāo)準(zhǔn)：常規(guī)切4μm石蠟切片采用Roche 全自動免疫組化染色儀進(jìn)行操作，采用免疫組化EnVision 方法檢測抗體表達(dá)。以清洗液替代1 抗體作陰性對照，以已知的陽性組織作陽性對照。SALL4 蛋白定位于細(xì)胞核，彌漫性或≥70%細(xì)胞核呈黃色或棕褐色判定為陽性表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)處理采用SPSSv.23.0，計(jì)量資料分別用卡方檢定和卡方檢定，用Kaplan-Meier 方法進(jìn)行生存分析，用對數(shù)據(jù)檢驗(yàn)兩組之間的差異。用Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型評價(jià)預(yù)后因素的獨(dú)立性。（P＜0.05）表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SALL4在癌旁組織和口腔鱗癌組織中的表達(dá)

SALL4 在口腔鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為 63.46%，明顯高于對照組的15.38%（P＜0.05）,見表1、圖1。

表1 口腔鱗癌組織及癌旁組織中SALL4 的表達(dá)[n(%)]

圖1 SALL4 在癌旁組織和口腔鱗癌組織中的病理學(xué)表達(dá)

A：SALL4 在口腔鱗癌組織中染色顯示細(xì)胞核陰性表達(dá) En Vision 法 中倍放大；

B：SALL4 在口腔鱗癌旁組織中染色顯示細(xì)胞核陽性表達(dá)En Vision 法 中倍放大。

2.2 SALL4高陽性表達(dá)和口腔鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

SALL4 的表達(dá)水平與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM 分期有關(guān)（P＜0.05） 。SALL4 的表達(dá)水平與年齡、性別、腫瘤大小、組織分化無關(guān) (P＞0.05) 。見表2。

表2 SALL4 高表達(dá)與其病理學(xué)特征的關(guān)系[n(%)]

2.3 SALL4高陽性表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌患者生存時(shí)間的關(guān)系

回訪的52 例患者中，隨訪截止日期2022 年3月，隨訪時(shí)間為4 年，20 例患者因口腔鱗狀細(xì)胞癌復(fù)發(fā)去世（均為Ⅲ、Ⅳ患者），32 例存活，Kaplan-Meier 檢驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組、對照組平均生存期為（26.31±1.37）個月（P＜0.05），SALL4 高表達(dá)的實(shí)驗(yàn)組患者的平均生存期為（26.31±2.48）個月，明顯低于對照組患者的（34.16±1.37）個月（P＜0.05)，表明SALL4 的高表達(dá)對患者的生存時(shí)間有明顯的影響。如圖2。

圖2 SALL4 高陽性表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌患者生存時(shí)間的關(guān)系

2.4 影響口腔鱗癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素分析

淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移、TNM 分期和SALL4 等危險(xiǎn)因素是影響口腔鱗癌患者預(yù)后的因素。見表3。

表3 Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析。

3 討論

據(jù)有關(guān)資料顯示，我國每年約有26 萬例新增口腔鱗癌患者和約12 萬例死亡患者。大多數(shù)患者有長年抽煙或飲酒的習(xí)慣，同時(shí)伴有口腔保健意識差，潰瘍和營養(yǎng)不良等。當(dāng)前精準(zhǔn)的手術(shù)治療、術(shù)后結(jié)合化療仍是口腔鱗癌的治療手段，但由于口腔鱗癌的自身特點(diǎn)使得其治療效果不佳，因此在治療上存在較大的缺陷[4]。目前學(xué)者們對各種惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了研究，口腔鱗狀細(xì)胞癌也在其中，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞在細(xì)胞遷移、侵襲、血管生成、抗凋亡和免疫逃逸等過程中發(fā)揮著重要作用，SALL4 又可以調(diào)控腫瘤干細(xì)胞。加之近些年來，一些腫瘤干細(xì)胞的相關(guān)基因作為腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于臨床治療，就使得SALL4 作為口腔鱗癌標(biāo)記物成為可能。

SALL4 是SALL 家族的成員，其表達(dá)的高峰是在胚胎期，隨后表達(dá)逐漸減弱，成年后該基因在大多數(shù)組織器官中不表達(dá)[5]，SALL4 的研究開始于肺部的惡性腫瘤，研究數(shù)據(jù)顯示SALL4 因其特有的性質(zhì)可以作為一種敏感而有效的腫瘤標(biāo)志物[6]。 Ma 等[7]研究發(fā)現(xiàn)SALL4 在遺傳病DRRS 綜合征中顯著表達(dá)，顯示它是一個含有多個C2H2 鋅指狀結(jié)構(gòu)的原癌基因。Farawela 也提出SALL4 可以作為一種良好的腫瘤標(biāo)志物，它在各種腫瘤中的表達(dá)具有致癌作用[8]。還有研究表明SALL4 是一些途徑(如Wnt 途徑和BMP 途徑)的關(guān)鍵媒介，SALL4 可通過這些途徑調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展[9]。Pan 等人[10]發(fā)現(xiàn)SALL4 可以區(qū)分生殖細(xì)胞腫瘤、轉(zhuǎn)移性癌癥和惡性黑色素瘤，可作為腫瘤診斷的標(biāo)志物。Ommati 等人[11]也通過研究表明SALL4 是一種高度敏感有效的腫瘤標(biāo)記物。Zheng 等人[12]發(fā)現(xiàn)SALL4 可能是肝癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但其與臨床病理特征的關(guān)系不明顯，SALL4 主要作用于細(xì)胞核中的某些基因，從而發(fā)揮作用。上述研究為SALL4 可以作為口腔鱗狀細(xì)胞癌的標(biāo)志物提供了理論基礎(chǔ)。

本研究結(jié)果表明，SALL4 在切取的口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中，陽性表達(dá)率高達(dá)63.46%，明顯高于對照組（P＜0.05）。本研究還分析了SALL4 表達(dá)的臨床病理特征，發(fā)現(xiàn)SALL4 的高表達(dá)水平與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM 分期有關(guān)（P＜0.05）。SALL4 的表達(dá)水平與腫瘤的大小、年齡、性別、組織分化程度等并不相關(guān)（P＜0.05），結(jié)果提示SALL4 可能參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移過程。SALL4 陽性表達(dá)患者的平均生存時(shí)間明顯短于SALL4 陰性表達(dá)患者（P＜0.05），提示SALL4高表達(dá)患者預(yù)后欠佳。

4 結(jié)論

SALL4 在 口腔鱗癌組織中呈明顯高表達(dá)，表明口腔鱗癌組織中可能存在腫瘤干細(xì)胞,SALL4 對腫瘤干細(xì)胞的調(diào)節(jié)與口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，SALL4 有望成為口腔鱗癌的一個靈敏性、特異性良好的標(biāo)志物，用于口腔鱗癌的臨床病理診斷和鑒別診斷。