變波長高效液相色譜法測定糕點中的食品添加劑

李俊運　李麗

摘 要：本研究旨在建立一種變波長高效液相色譜法同時測定糕點中5種食品添加劑的快速檢測方法。最終確定分離條件為博納艾杰爾Venusil XBP Perservatives色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為甲醇和20 mmol·L-1磷酸二氫銨（pH值調(diào)至5.5）進行梯度洗脫，DAD紫外檢測器（190～400 nm）進行變波長監(jiān)測，外標法進行定量分析。結(jié)果表明，5種食品添加劑的回收率為95.44%～96.96%，精密度為0.10%～0.20%。

關(guān)鍵詞：食品添加劑；糕點；變波長；高效液相色譜法

Determination of Food Additives in Pastry by Variable Wavelength High Performance Liquid Chromatography

LI Junyun1，2， LI Li1*

（1.College of Bioengineering， Sichuan University of Science & Engineering， Yibin 644005， China; 2.Yibin Food and Drug Inspection and Testing Center， Yibin 644600， China）

Abstract： This study aims to establish a rapid detection method for five food additives in pastries using variable wavelength high-performance liquid chromatography. The final separation condition was determined to be the Bonna-Agelas Venusil XBP Preservatives column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， The mobile phase consists of methanol and 20 mmol·L-1 ammonium dihydrogen phosphate （pH value adjusted to 5.5） for gradient elution. The DAD ultraviolet detector （190～400 nm） is used for wavelength monitoring， and the external standard method is used for quantitative analysis. The result showed that recovery rate range of five food additives is 95.44%～96.96%， the precision range is 0.10%～0.20%.

Keywords： food additives; pastries; variable wavelength; high-performance liquid chromatography

糕點是日常生活中常見的食品，深受各個年齡段消費者的喜愛，其質(zhì)量和安全都至關(guān)重要。為了延長糕點的保質(zhì)期，提升糕點的口感，糕點在生產(chǎn)加工過程中一般會加入不同種類的防腐劑和甜味劑[1]?！妒称钒踩珖覙藴?食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）對不同種類的食品添加劑以及其所對應的限量值進行了嚴格的規(guī)定[2]。但是一些不法商家為了獲得利益，會在糕點生產(chǎn)加工過程中非法添加或者過量添加食品添加劑，對人體的健康造成潛在的威脅。因此，市場監(jiān)督管理部門需要進一步加強對食品添加劑的監(jiān)管。

目前，只能按照相應的國家標準對食品中的單一添加劑進行前處理和樣品分析，耗時較長、流程較為煩瑣、消耗耗材較多[3-4]，因此建立同時檢測多種食品添加劑的方法非常有必要。本文建立了一種能夠同時檢測食品中多種防腐劑以及多種甜味劑混合使用的簡便方法，在降低檢驗檢測成本的同時，還能提升市場監(jiān)督管理部門在食品安全監(jiān)管工作中的效率以及準確性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品：周邊超市采購（主要是購買預包裝的糕點）和日常檢驗檢測樣品（包括各種省級和市縣級的監(jiān)督抽檢任務和委托檢驗任務），實驗樣本均為不重樣糕點。

試劑：甲醇（色譜純，山東禹王和天下新材料有限公司）；亞鐵氰化鉀（分析純，西隴科學股份有限公司）；乙酸鋅（分析純，成都市科隆化學品有限公司）；磷酸二氫銨（分析純，成都市科隆化學品有限公司）；氨水（分析純，成都市科隆化學品有限公司）；氫氧化鈉（分析純，成都市科隆化學品有限公司）；磷酸（分析純，成都市科隆化學品有限公司）。

標準品：苯甲酸、山梨酸、糖精鈉（3種標準品均購買于中國計量科學研究院，濃度均為1 000 μg·mL-1，5 mL）；脫氫乙酸（純度99.9%，100 mg，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）；安賽蜜（濃度為1 000 μg·mL-1，5 mL，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）。

1.2 儀器與設備

Agilent 1260高效液相色譜儀（配備紫外檢測器），美國安捷倫；XW-80A渦旋混合儀，上海青浦滬西儀器廠；超級純水機，南京易普易達科技發(fā)展有限公司；TG-16高速離心機，四川蜀科儀器有限公司；超聲波清洗機，鼎泰生化科技設備制造有限公司；電子天平，上海舜宇恒平科學儀器有限公司；0.22 μm水系濾膜，天津市津騰實驗設備有限公司；pH計，上海儀電科學儀器股份有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 溶液配制

①氫氧化鈉溶液（20 g·L-1）。稱取20 g固體氫氧化鈉于1 L容量瓶中，用900 mL超純水超聲溶解后，最終用超純水定容至刻度，搖勻即得。②亞鐵氰化鉀溶液（92 g·L-1）。稱取106 g固體亞鐵氰化鉀于

1 L容量瓶中，先加入800 mL超純水超聲溶解，最終用超純水定容至刻度，搖勻即得。③乙酸鋅溶液（183 g·L-1）。稱取220 g乙酸鋅于1 L容量瓶中，先加入一定量超純水溶解，再加入冰醋酸30 mL，最終用超純水定容至刻度，搖勻即得。④20 mmol·L-1磷酸二氫銨溶液（pH值調(diào)至5.5）。稱取2.3 g磷酸二氫銨于1 L容量瓶中，用990 mL水溶解，用氨水調(diào)節(jié)溶液pH值到5.5后，最后用超純水定容至刻度，搖勻并過0.22 μm水系濾膜即得。

稱取脫氫乙酸標準品10.01 mg于10 mL棕色容量瓶中，用1 mL上述配制的氫氧化鈉溶液（20 g·L-1）溶解脫氫乙酸標準品，再用水定容至刻度，混勻，配成濃度為1 000 μg·mL-1的脫氫乙酸標準儲備液。準確吸取其他4種標準品原液1 mL和脫氫乙酸標準儲備液1 mL于同一10 mL容量瓶中，超純水定容至刻度，混勻，得到濃度為100 μg·mL-1的5種食品添加劑混合標準儲備液。再用水進行逐級稀釋，分別得到濃度為5 μg·mL-1、10 μg·mL-1、20 μg·mL-1、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1的5種食品添加劑混合標準工作曲線。

1.3.2 試樣前處理

稱取2 g粉碎混勻后的糕點試樣（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加入20 mL超純水進行提取，于渦旋混合儀上渦旋10 min后，在50 ℃下進行超聲處理20 min。再準確加入3 mL乙酸鋅溶液和3 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，在6 000 r·min-1下進行10 min離心，將上清液轉(zhuǎn)移至錐形瓶中[5]。剩余殘渣再次使用前處理方式提取所需組分，將兩次的提取液合并至同一支50 mL比色管，超純水定容至刻度并搖勻。再取搖勻后試樣過0.22 μm水系濾膜進入高效液相色譜儀待測。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：博納艾杰爾Venusil XBP Perservatives色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：A為甲醇、B為20 mmol·L-1磷酸二氫銨溶液（pH=5.5）；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測器：DAD紫外檢測器。波長變化檢測見表1，梯度洗脫程序見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線繪制

按照1.3.3的色譜條件，以多種食品添加劑混合標準工作溶液的濃度作為橫坐標，以每種添加劑對應的峰面積作為縱坐標，繪制標準曲線，每種食品添加劑對應的回歸方程以及相關(guān)系數(shù)見表3。5種食品添加劑出峰順序見圖1。

2.2 檢出限

將5種添加劑的混合標準溶液加入空白基質(zhì)的樣品中，在相同的實驗條件下進行6次重復的測定，再按照3倍信噪比得到每種添加劑對應的檢出限，結(jié)果見表4。

2.3 添加回收率以及精密度

按照國家標準，糕點樣品中不可能同時含有本次研究的5種添加劑，因此采取加標回收率的方式進行回收率和精密度的確定和驗證[6]。向空白糕點樣品中添加5種添加劑標準溶液，按前處理的方式同試樣一起處理，重復測定6次，得到表5的回收率和精密度結(jié)果，5種食品添加劑的回收率為95.44%～96.96%，精密度為0.10%～0.20%。

2.4 試樣分析

采用本方法對市面上流通的10份糕點進行5種添加劑的含量檢測，其中有1份糕點樣品中檢出山梨酸含量為0.125 g·kg-1，其余添加劑均未檢出，且檢出有山梨酸的糕點樣品對應的含量均處于《國家食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》規(guī)定的要求范圍內(nèi)，消費者可以放心食用。

3 結(jié)論

采用變波長高效液相色譜法進行梯度洗脫的方式對糕點中多種食品添加劑進行同時監(jiān)測，前處理過程操作簡單，回收率為95.44%～96.96%，精密度為0.10%～0.20%，可見本方法適用于糕點食品添加劑日常的檢驗檢測和分析。

參考文獻

[1]孫裴鍵.食品添加劑對食品安全的影響分析[J].現(xiàn)代食品，2023，29（20）：157-159.

[2]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品添加劑使用標準：GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[3]王珍妮，宋月，趙敘，等.超高效液相色譜法檢測酸菜中山梨酸和苯甲酸[J/OL].微量元素與健康研究，1-2

[2023-11-13].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/52.1081.R.20231103.1616.008.html.

[4]王然然，王楠楠，苗育可，等.高效液相色譜法同時測定食品中8種食品添加劑[J].現(xiàn)代食品，2021，27（5）：

148-150.

[5]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定：GB 5009.28—2016[S].北京：中國標準出版社，2016.

[6]劉星，楊黎，馮婷，等.高效液相色譜法檢測4種食品中11種食品添加劑[J].食品安全質(zhì)量檢測學報，2021，12（10）：4188-4194.

作者簡介：李俊運（1995—），男，四川內(nèi)江人，碩士在讀，助理工程師。研究方向：食品藥品檢驗檢測。

通信作者：李麗（1982—），女，遼寧朝陽人，博士，副教授。研究方向：乳制品及食品生物化學。E-mail： kokonice@139.com。