火鍋底料中喹諾酮類化合物的測定

康宗華　江露

摘 要：目的：建立火鍋底料中喹諾酮類化合物的測定方法。方法：樣品經(jīng)0.1 mol·L-1 EDTA-Mcllvaine溶液提取，5%甲醇水溶液凈化后上液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。采用SHIMADZU C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，3 ?m）進(jìn)行分離，流動相為0.1%甲酸-乙腈，梯度洗脫。采用電噴霧離子源，正離子掃描。結(jié)果：該方法線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)≥0.99；樣品在1.0～20.0 μg·kg-1的添加水平下加標(biāo)回收率為65.20%～110.20%。結(jié)論：該方法適用于火鍋底料中喹諾酮類化合物的測定，簡單快速，靈敏度高，重復(fù)性好。

關(guān)鍵詞：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；火鍋底料；喹諾酮

Determination of Quinolones in Hot Pot Base

KANG Zonghua1，2， JIANG Lu1

（1.Hunan Kouweiwang Group Co.， Ltd.， Yiyang 413000， China;

2.Hunan Tuopu Inspection Institute， Yiyang 413000， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of quinolones in hot pot base. Method： Hot pot base sample were extracted by 0.1 mol·L-1 EDTA-Mcllvaine solution， purified by 5% methanol aqueous solution， and analyzed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Separation was performed using a column SHIMADZU C18 column （2.1 mm×100 mm， 3 ?m） with 0.1% formic acid-acetonitrile as a mobile phase and gradient elution. The ion source is an electrospray ion source， and the scanning method is positive ion scanning. Result： The method has a good linear relationship， and the correlation coefficient is greater than or equal to 0.99. The recoveries of spiked samples at spiked levels of 1.0～20.0 μg·kg-1 ranged from 65.20% to 110.20%. Conclusion： This method is suitable for the determination of quinolones in hotpot seasonings， which is simple， rapid， sensitive and reproducible.

Keywords： liquid chromatography-tandem mass spectrometry; hot pot base; quinolones

近年來，多地質(zhì)監(jiān)局在一些商販所用的火鍋底料中檢出了喹諾酮類化合物[1]。由于喹諾酮類化合物對革蘭氏陰性菌具有殺菌作用，被廣泛用作人畜通用的抗生素藥物，可用于治療革蘭氏陰性菌感染的大部分疾病。但根據(jù)相關(guān)規(guī)定，洛美沙星等4種獸藥在食品動物中已經(jīng)被禁止使用[2]。喹諾酮類化合物會對胃腸道、中樞神經(jīng)產(chǎn)生不良作用。例如，氧氟沙星是一種喹諾酮類化合物，長期食用氧氟沙星殘留量超標(biāo)的動物性食品可能會引發(fā)胃腸道不良反應(yīng)，包括刺激性損傷和一些不適癥狀（如頭痛、睡眠不良）等，嚴(yán)重者還可能引起肝損害[3]。目前，喹諾酮類化合物的檢測方法主要有液相色譜[4]、液質(zhì)聯(lián)用[1，5]等，但這些檢測方法參數(shù)不確定，重復(fù)性不佳。因此，本研究旨在采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，為喹諾酮類化合物的高效檢測提供方法依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

火鍋底料，從超市購買；甲醇，優(yōu)級純，默克；乙腈，優(yōu)級純，匯虹；甲酸、氨水，分析純，匯虹；磷酸氫二鈉、鹽酸、乙酸銨，分析純，國藥集團(tuán)；NaOH、EDTA-2Na，分析純，科密歐。除有特殊說明，本文所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水均為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

AB3500液質(zhì)聯(lián)用儀，Sciex TRIPLE QUAD TM3 500；Ax224ZH電子天平，奧豪斯；SHZMADZU C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，3 μm）。

1.3 試劑與標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

0.1 mol·L-1 EDTA Mcllvaine緩沖溶液（以下簡稱緩沖溶液）：稱取60.5 g EDTA-2Na至1 625 mL Mcllvaine緩沖溶液中，超聲溶解。25%氨水甲醇溶液：量取25 mL氨水于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線。

標(biāo)準(zhǔn)儲備液（有效期6個月）：稱取各標(biāo)準(zhǔn)品約10 mg（精確到0.001 g）于10 mL容量瓶中，加入0.2 mL甲酸，超聲溶解，乙腈定容，得到濃度為1.0 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，避光保存（＜18 ℃）。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（有效期3個月）：量取一定量各標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇稀釋，使環(huán)丙沙星、沙拉沙星濃度為0.015 mg·mL-1，其他化合物濃度為0.010 mg·mL-1。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：量取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇精確稀釋至刻度線，得到環(huán)丙沙星、沙拉沙星濃度為1.5 μg·mL-1，其他化合物濃度為1.0 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，避光保存（＜4 ℃），現(xiàn)用現(xiàn)配。

內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液（有效期6個月）：稱取氘代同位素標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，加入0.2 mL甲酸，超聲溶解，用乙腈定容至10 mL，得到濃度為1.0 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，避光保存（＜18 ℃）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 樣品處理

火鍋底料樣品制備：稱取待檢樣品約500 g，用絞肉機(jī)充分絞碎均勻，裝入干凈容器中，密封，做好相關(guān)信息標(biāo)記，4 ℃冷藏存放。

1.4.2 樣品制備

樣品制備參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)方法[6]。

（1）提取。稱取5.0 g均勻樣品（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0.1 mL，加入20 mL 0.1 mol·L-1 EDTA-Mcllvaine緩沖溶液，渦旋混勻1 min，超聲提取15 min，8 000 r·min-1離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)肊DTA-Mcllvaine緩沖溶液重復(fù)提取兩次，每次10 mL，合并上清液至同一容量瓶中，用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液定容至刻度，混勻。用濾紙過濾（必要時10 000 r·min-1離心5 min后過濾），續(xù)濾液待凈化。

（2）凈化。精密吸取上述待凈化液25.0 mL，以1 mL·min-1的流速全部通過固相小柱，用3 mL 5%甲醇水溶液淋洗，抽干，依次以6 mL甲醇、3 mL氨水甲醇洗脫，合并甲醇及氨水甲醇洗脫液，45 ℃氮吹至近干，準(zhǔn)確加入2.0 mL流動相初始比例復(fù)溶液溶解殘?jiān)?，過0.22 ?m濾膜，濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：稱取5 g空白試樣（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，除不加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液外，其余操作同1.4.2中樣品處理，得到空白基質(zhì)，共制備6份。

分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0 mL、0.010 mL、0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL及混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0.025 mL于試管中，氮吹至近干，加入1.0 mL空白基質(zhì)復(fù)溶，過0.22 μm濾膜，得到濃度分別為0 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用以上機(jī)。用內(nèi)標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.4 測試條件

色譜柱：SHIMADZU C18柱（2.1 mm×100 mm，3 ?m）；流動相：A-0.1%的甲酸水溶液，B-乙腈；經(jīng)過前期多次預(yù)實(shí)驗(yàn)，最終優(yōu)化得到梯度洗脫程序見表1；流速：300 μL·min-1；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；采用正離子掃描；進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測；電噴霧電壓：-4 500 V；噴霧氣（GS1）壓力：30 psi；氣簾氣壓力：10 psi；輔助加熱氣（GS2）：28 psi；離子源溫度：350℃；碰撞氣：8 psi。

1.4.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)

（1）加標(biāo)回收試驗(yàn)。制備高、中、低3個加標(biāo)水平的火鍋底料樣品，按照樣品前處理方法提取、凈化后，按1.4.4條件測定加標(biāo)回收率。

（2）精密度試驗(yàn)。進(jìn)行兩次平行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算測定結(jié)果的絕對差值。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性相關(guān)性和方法檢出限

分別稱取樣品8份，按照1.4處理。由表2可知，11種喹諾酮類化合物在0～200 ng·mL-1線性關(guān)系良好。檢出限為1 ?g·kg-1，定量限為3 ?g·kg-1。

2.2 回收率和重復(fù)性

由表3可知，樣品在1.0～20.0 μg·kg-1添加水平下的加標(biāo)回收率為65.20%～110.20%。

2.3 樣品檢測

對從超市購買的火鍋底料進(jìn)行喹諾酮類化合物含量測定，結(jié)果顯示未檢出。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定火鍋底料中喹諾酮類化合物的方法，應(yīng)用此方法對實(shí)際樣品中喹諾酮類化合物進(jìn)行測定，結(jié)果為未檢出。該方法簡單快速，靈敏度高，重復(fù)性好，可推廣應(yīng)用于更多食品中喹諾酮類化合物的檢測，如麻辣燙、豆制品等。

參考文獻(xiàn)

[1]趙飛，高廣慧，賈宏新，等.超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法測定麻辣燙中喹諾酮類藥物殘留[J].分析測試學(xué)報(bào)，2017，36（6）：768-772.

[2]佚名.市場監(jiān)管總局關(guān)于發(fā)布《水產(chǎn)品及水中丁香酚類化合物的測定》等2項(xiàng)食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法的公告（2019年第15號）[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2019，31（3）：204.

[3]史艷艷，高琳，李俊，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測飼料中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2019，10（11）：3367-3375.

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