富硒猴頭菇中硒含量分布和賦存形態(tài)研究

徐聰 周高新 王勇 馬俊 楊柱 劉丙蕊

摘要 研究了富硒猴頭菇中硒的含量分布和賦存形態(tài)，結(jié)果表明，猴頭菇中總硒含量為205.98 μg/g，其中有機(jī)硒含量占總硒的91.39%，而有機(jī)硒中最主要的賦存形態(tài)為蛋白硒，含量占有機(jī)硒的66.18%，其次是多糖硒和其他有機(jī)硒，占比分別為18.90%和14.30%，另有少量的核酸硒。

關(guān)鍵詞 猴頭菇；硒；含量分布；賦存形態(tài)

中圖分類號 TS218? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2024）06-0182-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.06.040

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Study on Content Distribution and Combined Forms of Selenium in Selenium-enriched Heircium erinaceus

XU Cong，ZHOU Gao-xin，WANG Yong et al

（Ankang Institute of Agricultural Sciences，Ankang，Shaanxi 725021）

Abstract The content distribution and combined forms of selenium in selenium-enriched Hericium erinaceus were studied.The results showed that the content of total selenium in Hericium erinaceus was 205.98 μg/g，in which the content of organic selenium accounted for 91.39% of the total selenium.The main form of organic selenium was protein selenium，which accounted for organic selenium 66.18%; followed by polysaccharide selenium and other organic selenium，which accounted for organic selenium 18.90% and 14.30% respectively，and there was also a small amount of nucleic acid selenium.

Key words Heircium erinaceus;Selenium;Content distribution;Combined form

硒是人體中重要的微量元素之一［1］，硒能有效提高人體免疫能力［2-3］，預(yù)防癌癥和腫瘤等疾病［4］。我國缺硒或低硒地區(qū)高達(dá)72%，因此科學(xué)補(bǔ)硒已成為近年來功能性食品研究熱點。隨著研究深入，人們已經(jīng)認(rèn)識到富硒產(chǎn)品不能僅僅追求硒的含量，還需要著重研究硒的形態(tài)，因為不同形態(tài)的硒有著不同的化學(xué)功能和生物活性［5］。其中無機(jī)硒毒害性大，且吸收利用率低，但植物通過吸收、利用、轉(zhuǎn)化土壤中的硒變成有機(jī)硒進(jìn)入食物鏈，成為人類和動物攝入硒的重要來源，因此研究植物對硒的生物富集特點具有重要意義。

猴頭菇自古就是藥食兩用寶庫中的珍品，其性平、味甘、利五臟、助消化、滋補(bǔ)功效［6］，特別是對胃潰瘍、十二指腸潰瘍和神經(jīng)衰弱等患者有很好的保健效果［7-8］。李好［9］研究表明富硒猴頭菇的抑菌效果和對腸道菌的調(diào)節(jié)作用明顯優(yōu)于普通猴頭菇。許偉等［10-12］研究表明猴頭菇硒多糖在抗氧化、增強(qiáng)正常小鼠免疫功能、腫瘤抑制作用方面效果都優(yōu)于猴頭菇多糖。筆者著重研究有機(jī)硒在猴頭菇中的賦存形態(tài)和分布規(guī)律，這對開發(fā)新型補(bǔ)硒資源和尋找具有更強(qiáng)生物活性的功能因子具有重要意義，也為合理開發(fā)利用富硒猴頭菇、完善富硒猴頭菇標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試材。猴頭菇樣品由安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院食用菌研究所提供。

1.1.2 儀器。

全能型微波化學(xué)工作平臺（TOPEX+，上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司）；智能控溫電加熱器（G-400，上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司）；原子熒光光度計（AFS-8220，北京吉天儀器公司）；硒編碼特種空心陰極燈；超聲波清洗器（KH5200DE，昆山禾創(chuàng)超聲儀器公司）；優(yōu)普純水機(jī)（UPH-Ⅱ-20T）。

1.1.3 試劑。硒標(biāo)準(zhǔn)溶液［GBW（E）080215］，100 μg/mL，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；硝酸，優(yōu)級純，成都科龍化工試劑廠；鹽酸，優(yōu)級純，洛陽昊華化學(xué)試劑有限公司；30%過氧化氫，分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；三氯乙酸，分析純，上海山浦化工有限公司；試驗用水為優(yōu)普純水機(jī)制備的超純水；器皿使用前用10% HNO3浸泡24 h，超純水沖洗備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品預(yù)處理。烘箱75 ℃烘干至恒重，再粉碎、過篩后貯存在干燥器中備用。

1.2.2 總硒含量的測定。硒含量測定采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］。

1.2.3 無機(jī)硒含量的測定。稱取1.0 g左右菇粉放入50 mL離心管，加入20 mL超純水搖勻，測pH約為6.5。70 ℃水浴振蕩0.5 h后，50 ℃超聲提取20 min，冷卻離心取上清；殘渣再提取一次后合并上清液，用甲苯萃取2次，水相濃縮［15］。再采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.4 有機(jī)硒含量。采用差減法，總硒含量減去無機(jī)硒含量得有機(jī)硒含量。

1.2.5 硒蛋白的提取和測定。稱取2.0 g左右菇粉放入100 mL 離心管，加入40 mL的0.07 mol/L NaOH溶液，提取溫度70 ℃，第1次提取4 h離心收集上清，第2次沉渣加入0.07 mol/L NaOH溶液20 mL，70 ℃下再次提取2 h后取上清，第3次重復(fù)第2次步驟。合并上清液，6 mol/L 鹽酸調(diào)pH至4.0～4.5，出現(xiàn)沉淀，4 ℃下靜置過夜，離心收集沉淀［16］。采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.6 多糖硒的提取和測定。稱取3.0 g左右菇粉放入100 mL 離心管，加入50 mL純化水，搖勻后用緩沖液調(diào)pH為4.0，加入木瓜蛋白酶、果膠酶、纖維素酶各0.03 g，搖勻50 ℃水浴加熱酶解90 min，80 ℃水浴滅酶10 min。超聲波破碎20 min 后離心取上清液，沉淀20 mL水再次清洗、離心，合并上清液約80 mL。TCA法［17］除去蛋白質(zhì)后，加入4倍體積的乙醇，4 ℃下靜置過夜，得多糖沉淀，用85%乙醇洗滌2次后，超純水溶解定容至50 mL［18-19］。采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.7 核酸硒的提取和測定。采用濃鹽法［20］提取后，采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法［13-14］測定其中硒含量。

1.2.8 其他有機(jī)硒含量。采用差減法，有機(jī)硒含量減去蛋白硒、多糖硒、核酸硒的硒含量所得。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

硒標(biāo)準(zhǔn)使用液配制成濃度為1.0、3.0、5.0、10.0、20.0、30.0 μg/L的梯度標(biāo)液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 儀器工作條件

1.4.1 TOPEX+微波化學(xué)工作平臺設(shè)置。根據(jù)屹堯微波消解儀說明書設(shè)置TOPEX+消解菇粉的工作條件，具體見表1。

1.4.2 AFS-8220原子熒光光度計工作設(shè)置。負(fù)高壓270 V；總電流80 mA；輔陰極電流40 mA；載氣流量300 mL/min，屏蔽氣流量800 mL/min；原子化器高度8 mm；測定方式為校準(zhǔn)曲線；讀數(shù)方式為Peak Area；測量方式為Std.Curve；讀數(shù)時間10 s，延遲時間1 s，重復(fù)次數(shù)2次；載流為10% HCl，還原劑為2% KBH4～0.5% KOH；進(jìn)樣方式為手動進(jìn)樣［21］。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及檢出限 在“1.4.2”中設(shè)置的工作條件下用“1.3”配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液依次測量，以相對熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)、硒標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過儀器工作站得到硒標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為y=147.23x+37.78（R2=0.999 8），表明硒在1～30 μg/L與原子熒光強(qiáng)度線性關(guān)系良好。根據(jù)限量檢測要求，用3б法得出方法檢出限為0.009 mg/kg，滿足檢測要求。

2.2 加標(biāo)回收試驗

樣品采用標(biāo)準(zhǔn)加入法驗證硒含量測定方法的準(zhǔn)確度和精密度，在已知總硒含量本底值為6.256 μg/L的菇粉中分別加入高、中、低3種濃度的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，靜置過夜后按微波消解-氫化物原子熒光光譜法進(jìn)行處理，獲得回收率和精密度試驗結(jié)果，結(jié)果見表2。從表2可以看出，平均回收率為86.53%～108.28%，加標(biāo)后相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）<5%，符合試驗要求。

2.3 重復(fù)性試驗

為了驗證該試驗方法的可靠性，稱取7份猴頭菇粉采用微波消解-氫化物原子熒光光譜法測定總硒含量，得到總硒平均含量為205.98 μg/g，RSD為2.60%，RSD小于5.00%，符合試驗要求。

2.4 精密性試驗

為了驗證測量方法的可靠性，對3份猴頭菇粉總硒含量分別測量了5次，計算RSD，結(jié)果見表3。從表3可以看出，RSD均小于5%，符合試驗要求。

2.5 富硒猴頭菇中硒的形態(tài)及分布比例 根據(jù)“1.2”的試驗方法依次得到了菇粉總硒和各類有機(jī)硒的含量，具體結(jié)果見表4。從表4可以看出，猴頭菇中大部分硒為有機(jī)硒，占總量的91.39%。其中蛋白硒是有機(jī)硒中硒的主要賦存形態(tài)，占有機(jī)硒含量的66.18%，其次是多糖硒，占18.90%，核酸硒占0.62%，其他有機(jī)硒占14.30%。

3 結(jié)論

猴頭菇中大部分硒為有機(jī)硒，占總硒的91.39%，說明猴頭菇是一種較好的富集硒的生物載體，多能為人體安全吸收、利用。其中，蛋白硒是富硒猴頭菇中硒的主要賦存形態(tài)，約總硒量的60.48%，占有機(jī)硒含量的66.18%。3種有機(jī)態(tài)硒含量從高到低依次為蛋白硒、多糖硒、核酸硒，這與蛋白質(zhì)、多糖、核酸3類物質(zhì)在猴頭菇中含量分布一致。研究猴頭菇中硒的賦存形態(tài)，為拓展其在食療保健領(lǐng)域中的應(yīng)用提供了試驗依據(jù)，開發(fā)綠色補(bǔ)硒產(chǎn)品，有利于提高其利用價值。

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