北細(xì)辛精油對桔小實蠅殺蟲活性及其機理研究

孫宇婷 李雪 張國華 王藝達(dá) 馬洪雪 金彩玉 杜熙博 張穎慧 張琳

摘要? ［目的］對北細(xì)辛精油對桔小實蠅的熏蒸和觸殺的殺蟲活性進(jìn)行研究，并初步確定北細(xì)辛精油對桔小實蠅的殺蟲機理，旨在尋找天然有效的植物源殺蟲劑。［方法］采用密閉熏蒸法和微量點滴法測定北細(xì)辛精油對桔小實蠅的熏蒸及觸殺活性，采用微板法測定北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)乙酰膽堿酯酶（AchE）和羧酸酯酶（CarE）活力的影響。［結(jié)果］在殺蟲活性試驗中，隨著北細(xì)辛精油濃度的增加，殺蟲效果均逐漸增強，且隨著時間的延長，毒性也均逐漸增強；在熏蒸試驗中，當(dāng)濃度為1? mL/L且處理時間為12? h時，校正死亡率達(dá)到最大為100%；在觸殺試驗中，當(dāng)濃度為156.25? μL/L且處理時間為12 h，校正死亡率達(dá)到最大為100%；對桔小實蠅進(jìn)行熏蒸處理、觸殺處理12? h的LC50分別為0.243 mL/L、30.884 μL/L；用固定濃度為156.25? μL/L的北細(xì)辛精油處理桔小實蠅不同時間后，其體內(nèi)AchE和CarE整體均表現(xiàn)為抑制作用，用不同濃度的北細(xì)辛精油處理桔小實蠅8 h后，蟲體內(nèi)的AchE呈現(xiàn)低濃度誘導(dǎo)高濃度抑制的作用，北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)CarE的抑制作用隨著濃度的增大而不斷增強。［結(jié)論］北細(xì)辛精油對桔小實蠅有較好的觸殺和熏蒸活性，且觸殺活性較強，北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的AchE和CarE均有抑制作用。該研究為天然植物源殺蟲劑的研發(fā)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞? 北細(xì)辛；精油；桔小實蠅；乙酰膽堿酯酶；羧酸酯酶

中圖分類號? S763.41? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼? A? 文章編號? 0517-6611（2024）04-0128-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.04.028

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Study on the Insecticidal Activity and Mechanism of Essential oil of Asarum heterotropoides Against Bactrocera dorsalis

SUN Yu.ting1，2， LI Xue3， ZHANG Guo.hua3 et al

（1.Key Laboratory of Forest Plant Ecology， Ministry of Education/College of Chemistry， Chemical Engineering and Resource Utilization， Northeast Forestry University， Harbin， Heilongjiang 150040; 2. Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Ecological Utilization of Forestry.based Active Substances， Harbin，Heilongjiang 150040 ;3. College of Chemistry， Chemical Engineering and Resource Utilization， Northeast Forestry University， Harbin，Heilongjiang 150040）

Abstract? ［Objective］To study the insecticidal activities of essential oil of Asarum heterotropoides against Bactrocera dorsalis by fumigation and touch.killing， and preliminarily determine the insecticidal mechanism of the essential oil of Asarum heterotropoides against Bactrocera dorsalis， aimed to find natural and effective botanical insecticides. ［Method］The fumigation activity and touch.killing activity of the essential oil against Bactrocera dorsalis were determined by closed fumigation method and micro spot method， the effects of essential oil of Asarum heterotropoides on acetylcholinesterase（AchE） and carboxylesterase（CarE） activities in Bactrocera dorsalis were determined by microplate method. ［Result］In the insecticidal activity experiment， with the increase of the concentration of the essential oil of Asarum heterotropoides， the insecticidal effect was gradually enhanced， and with the extension of time， the toxicity was also gradually enhanced. In the fumigation experiment， when the concentration was 1 mL/L and the treatment time was 12 h， the corrected mortality rate reached the maximum of 100%. In the touch.killing experiment， when the concentration was 156.25 μL/L and the treatment time was 12 h， the corrected mortality rate reached the maximum of 100%. The LC50 of Bactrocera dorsalis treated with fumigation and touch.killing for 12 h were 0.243 mL/L and 30.884 μL/L. After treating Bactrocera dorsalis with a fixed concentration of essential oil （156.25 μL/L） for different time， AchE and CarE in Bactrocera dorsalis were inhibited as a whole. After treating Bactrocera dorsalis with different concentrations of essential oil for 8 h， the AchE in worm showed induction effect at low concentration and inhibition effect at high concentration. The inhibitory effect of essential oil of Asarum heterotropoides on AchE in Bactrocera dorsalis increased with the increase of concentration.［Conclusion］The essential oil of Asarum heterotropoides has good fumigation and touch.killing activities against Bactrocera dorsalis， and has stronger touch.killing activity. The essential oil of Asarum heterotropoides has inhibitory effects on AchE and CarE in Bactrocera dorsalis. This study can provide theoretical basis for the research and development of natural botanical insecticides.

Key words? Asarum heterotropoides;Essential oil;Bactrocera dorsalis;Acetylcholinesterase;Caroxylesterase

基金項目? 東北林業(yè)大學(xué)大學(xué)生省級創(chuàng)新訓(xùn)練計劃項目（202210.225509）；國家林草局野生植物保護(hù)管理項目（2019073060）。

作者簡介? 孫宇婷（1993—），女，黑龍江哈爾濱人，碩士研究生，研究方向：藥用植物資源的開發(fā)與利用。*通信作者，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事藥用植物資源的開發(fā)與利用研究。

收稿日期? 2023-02-17；修回日期? 2023-05-24

桔小實蠅Bactrocera dorsalis（Hendel），又名東方果實蠅，是世界性重要農(nóng)業(yè)入侵性有害生物之一［1］，其特征是寄主范圍較寬、繁殖力強且較難控制［2］。由于桔小實蠅對農(nóng)產(chǎn)品有嚴(yán)重?fù)p害，所以桔小實蠅在許多國家都被列為主要的檢疫性害蟲［3］。桔小實蠅可對多種果樹造成危害，對農(nóng)業(yè)造成嚴(yán)重影響，因此對桔小實蠅的有效防治行動刻不容緩。

目前，對桔小實蠅的防治主要有物理防治和化學(xué)防治［4］。物理防治主要通過黏蟲板來殺滅桔小實蠅［5］，但只能殺死一定區(qū)域內(nèi)的桔小實蠅，當(dāng)害蟲大面積暴發(fā)時，還需結(jié)合化學(xué)防治才能起到較好效果；化學(xué)防治是目前殺滅桔小實蠅的主要手段，但研究表明，隨著殺蟲劑的大量使用，桔小實蠅已對不同的化學(xué)合成類殺蟲劑（如有機磷類、阿維菌素、擬除蟲菊酯類等）產(chǎn)生抗藥性［6］，而且其污染環(huán)境、損害食物品質(zhì)、農(nóng)藥殘留等問題也日益嚴(yán)峻［7-8］，嚴(yán)重影響了水果的品質(zhì)和人類的健康，因此開發(fā)既能快速高效殺滅害蟲又安全無污染的新型農(nóng)藥刻不容緩。植物源殺蟲劑選擇性高、環(huán)保且害蟲不易產(chǎn)生抗藥性［9］。因此，開發(fā)植物源殺蟲劑對害蟲防治具有重要意義。

北細(xì)辛（Asarum heterotropoides var.Mandshuricum）為馬兜鈴科植物，又稱為遼細(xì)辛，主要分布在中國的東北部地區(qū)，包括黑、吉、遼等省區(qū)。目前研究表明遼細(xì)辛精油對桔小實蠅有良好的引誘效果，使楊桃蟲果率顯著降低，防治率高達(dá)90%以上［10］；另有研究表明，遼細(xì)辛精油對淡色庫蚊有毒殺和熏蒸作用［11］；細(xì)辛精油對菜豆象成蟲也有較好的熏蒸和觸殺作用［12］。因此，北細(xì)辛精油在農(nóng)業(yè)害蟲防治方面應(yīng)用前景良好，但目前關(guān)于北細(xì)辛精油對桔小實蠅的殺蟲活性和殺蟲機理鮮見報道，筆者研究了北細(xì)辛精油對桔小實蠅的殺蟲活性及對桔小實蠅體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶和羧酸酯酶的影響，旨在為桔小實蠅的綠色高效防控和新型植物源殺蟲劑的開發(fā)提供新的思路。

1? 材料與方法

1.1? 試驗儀器

恒溫恒濕培養(yǎng)箱、SUS 304中藥粉碎機、全溫振蕩培養(yǎng)箱、Gragon Lab D3024R高速冷凍離心機、Stat Fax-3200酶標(biāo)儀、AchE、CarE、考馬斯亮藍(lán)試劑盒

1.2? 試驗材料

北細(xì)辛購自亳眾堂大藥房，經(jīng)國藥集團(tuán)黑龍江省藥材公司中藥師張軍鑒定為北細(xì)辛（Asarum heterotropoides）。

供試桔小實蠅購自福建農(nóng)林大學(xué)實驗研究所，取蟲蛹在室內(nèi)飼養(yǎng)至成蟲，成蟲羽化后以人工飼料繼代飼養(yǎng)，取羽化后生長健康、形態(tài)大小一致的5～8日齡桔小實蠅成蟲作為供試蟲源。飼養(yǎng)溫度（28±2）℃，相對濕度（70±10）%，光照周期（L∶D=14 h∶10 h）。

1.3? 試驗方法

1.3.1? 北細(xì)辛精油的制備。采用水蒸氣蒸餾法制備北細(xì)辛精油，無水硫酸鈉脫水后備用。

1.3.2? 殺蟲活性。

1.3.2.1? 熏蒸毒力的測定。

采用密閉熏蒸法［13］進(jìn)行熏蒸毒力的測定，用丙酮將精油配成濃度分別為1.25、1.00、0.75、0.50、0.25 mL/L的北細(xì)辛精油溶液，并以純丙酮組作為空白對照組，每個濃度3個重復(fù)，分別取30頭（雌雄各半）桔小實蠅試蟲，將其放于容量為250? mL的廣口瓶中，取等量的精油滴在大小約2 cm×6 cm的濾紙條的一頭，將濾紙條放進(jìn)廣口瓶中，使濾紙條懸掛在廣口瓶中不能接觸瓶身，迅速將瓶口密封，將廣口瓶放入培養(yǎng)箱中，分別放置1、2、4、8、12 h后，檢查并記錄死亡蟲數(shù)，并對不同處理時間進(jìn)行毒力回歸分析。

按公式（1）和（2）計算死亡率和校正死亡率［14］：

死亡率=死亡蟲數(shù)/總蟲數(shù)×100%（1）

校正死亡率=（處理死亡率-對照死亡率）/（1-對照死亡率）×100%（2）

1.3.2.2? 觸殺毒力的測定。

采用微量點滴法［12］進(jìn)行觸殺毒力的測定，用丙酮將精油配成濃度分別為312.50、156.25、78.13、39.06、19.53 μL/L的北細(xì)辛精油溶液，并以純丙酮作為空白對照，每個濃度3個重復(fù)，先用冷凍法麻醉桔小實蠅，用毛筆輕輕翻動桔小實蠅，使其背部朝上，再分別取1 μL的精油溶液滴于桔小實蠅體背，每組20頭（雌雄各半）桔小實蠅試蟲，將處理后的桔小實蠅置于250 mL廣口瓶中，將廣口瓶放入培養(yǎng)箱中，分別放置1、2、4、8、12 h后，檢查并記錄死亡蟲數(shù)，按公式（1）和（2）計算死亡率和校正死亡率，并對不同處理時間進(jìn)行毒力回歸分析。

1.3.3? 北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)2種酶活力的影響。

時間效應(yīng)：因濃度為156.25 μL/L，觸殺12 h內(nèi)，校正死亡率隨著時間的延長不斷增加且最高校正死亡率達(dá)100%，所以選擇156.25 μL/L作為試驗濃度，處理桔小實蠅1、2、4、8、12 h，對照組為丙酮處理的不同時間。

濃度效應(yīng)：因觸殺處理8 h時，不同濃度組間差異顯著且最大濃度校正死亡率達(dá)100%，分別選用312.50、156.25、78.13、39.06、19.53 μL/L的濃度觸殺處理固定時間8 h，對照組為丙酮處理。

1.3.3.1? 乙酰膽堿酯酶（AchE）活力的測定。

樣品處理、AchE酶活力及蛋白質(zhì)含量測定均按照試劑盒說明書進(jìn)行，活性單位為1 mg蛋白1 min催化產(chǎn)生1 nmol 5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）的酶量為1個酶活單位。

按公式（3）計算AchE活力：

AchE活力［nmol/（min·mg）］=（△A÷ε÷d×V反總×106）÷（Cpr×V樣）÷T（3）

式中，△A，412 nm處測定管3 min內(nèi)吸光值變化；ε，TNB摩爾消光系數(shù)，13.6×103 L/（mol·cm）；d，96孔板光徑，0.5 cm；V反總，反應(yīng)體系總體積（L），2×10-4 L；106，1 mol=1×106 μmol；Cpr，蛋白濃度（mg/mL）；V樣，加入上清液體積（mL），0.02 mL；T，反應(yīng)時間（min），3 min。

1.3.3.2? 羧酸酯酶（CarE）活力的測定。

樣品處理、CarE酶活力及蛋白質(zhì)含量測定均按照試劑盒說明書進(jìn)行，活性單位為1 mg組織蛋白在37 ℃反應(yīng)體系中1 min催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。

按公式（4）計算CarE活力：

CarE活力（U/mg）=（△A測定管-△A空白管）×V反總÷（Cpr×V樣）÷T（4）

式中，△A測定管，450 nm處測定管3 min內(nèi)吸光值變化；△A空白管，450 nm處空白管3 min內(nèi)吸光值變化；V反總，反應(yīng)體系總體積（L），2.05×10-4 L；Cpr，蛋白濃度（mg/mL）；V樣，加入上清液體積（mL），0.005 mL；T，反應(yīng)時間（min），3 min。

1.4? 數(shù)據(jù)處理

用SPSS Statistics 22.0軟件進(jìn)行ANOVA方差分析，計算毒力回歸方程、LC50值及95%置信區(qū)間等，組間差異用鄧肯氏新復(fù)極差法（Duncans）檢驗比較。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 北細(xì)辛精油對桔小實蠅的殺蟲活性

2.1.1? 熏蒸毒力。

桔小實蠅在密閉容器中經(jīng)不同濃度的北細(xì)辛精油熏蒸后均有不同程度的死亡，其校正死亡率見表1。從表1可以看出，當(dāng)精油濃度為1.00 mL/L、熏蒸12? h時桔小實蠅的校正死亡率為100%，且當(dāng)濃度為0.75、0.50、0.25 mL/L時，熏蒸12 h的校正死亡率分別為97.78%、84.44%、54.44%，均顯著高于對照組（P＜0.05）。由此可知，北細(xì)辛精油對桔小實蠅有明顯的熏蒸毒力，且具有濃度和時間依賴性，校正死亡率與精油濃度和時間均成正比，除0.25 mL/L處理1 h的校正死亡率外，其他不同濃度北細(xì)辛精油熏蒸處理桔小實蠅蟲的校正死亡率與對照組相比，均具有顯著差異（P＜0.05）。

為了進(jìn)一步說明北細(xì)辛精油對桔小實蠅的熏蒸毒力效果，對熏蒸不同時間北細(xì)辛精油的桔小實蠅校正死亡率結(jié)果進(jìn)行回歸分析，以熏蒸處理測定結(jié)果的校正死亡率為Y，不同濃度為x做毒力回歸方程，并計算LC50，結(jié)果見表2。由表2可知，北細(xì)辛精油熏蒸桔小實蠅1、2、4、8、12 h的LC50分別為1.637、1.434、0.984、0.678、0.243 mL/L，熏蒸2 h的LC50為8 h的2倍多，隨著時間的延長，北細(xì)辛精油對桔小實蠅蟲的LC50不斷降低，說明精油需要一定的時間才能發(fā)揮最好的效果。由此可知，北細(xì)辛精油對桔小實蠅熏蒸毒力回歸方程的相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.90，且皮爾遜擬合優(yōu)度的卡方檢驗P值均大于0.15，說明回歸方程的擬合度和可信度均較高。

2.1.2? 觸殺毒力。

桔小實蠅在密閉容器中經(jīng)不同濃度的北細(xì)辛精油觸殺后均有不同程度的死亡，其校正死亡率見表3。從表3可以看出，當(dāng)精油濃度為156.25 μL/L、觸殺時間12 h時，校正死亡率為100%，當(dāng)濃度為分別78.13、39.06、19.53 μL/L時，觸殺時間12 h的校正死亡率分別為81.82%、61.82%、30.91%，均顯著高于對照組（P＜0.05）。由此可知，北細(xì)辛精油對桔小實蠅有明顯的觸殺毒力，且校正死亡率與精油濃度和時間均成正比，不同濃度北細(xì)辛精油觸殺處理的桔小實蠅蟲的校正死亡率與對照組相比，均具有顯著差異（P＜0.05）。

為了進(jìn)一步說明北細(xì)辛精油對桔小實蠅的觸殺毒力效果，對觸殺處理不同時間北細(xì)辛精油的桔小實蠅校正死亡率進(jìn)行回歸分析，以觸殺處理測定結(jié)果的校正死亡率為Y，不同濃度為x做毒力回歸方程，并計算LC50，結(jié)果見表4，由表4可知，北細(xì)辛精油觸殺處理桔小實蠅1、2、4、8、12 h的LC50分別為173.516、110.871、73.653、53.050、30.884 μL/L，觸殺2 h的LC50為8 h的2倍多，隨著時間的延長，北細(xì)辛精油對桔小實蠅的LC50不斷降低，說明精油作用在蟲體上后，需要被蟲體吸收一定的時間才有效果，由此可知，北細(xì)辛精油對桔小實蠅觸殺毒力回歸方程的相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.90且皮爾遜擬合優(yōu)度的卡方檢驗P值均大于0.15，說明回歸方程的擬合度和可信度均較高。

2.2? 北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)2種酶活力的影響

2.2.1? 時間效應(yīng)。

以156.25 μL/L的北細(xì)辛精油觸殺處理桔小實蠅1、2、4、8、12 h后，測定其體內(nèi)AChE酶活力的大小，結(jié)果見圖1。由圖1可知，同一濃度在2、4、8、12 h時，與對照組相比酶活力差異均顯著（P＜0.05），隨著時間的延長酶活力呈先升高后降低的趨勢，但均顯著低于對照（P＜0.05），說明北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的AchE有明顯的時間效應(yīng)，處理4 h 時，酶活力達(dá)到最高［2.938 nmol/（min·mg）］，但顯著低于對照（P＜0.05），4 h后AchE活力急劇下降，到12 h達(dá)到最低，對照組酶活力［2.633 nmol/（min·mg）］為處理組［1.293 nmol/（min·mg）］的2倍多，極顯著低于對照（P＜0.01）。整體來看，精油刺激后蟲體中AchE活力一直呈現(xiàn)抑制作用。

2.2.2? 濃度效應(yīng)。

北細(xì)辛精油以不同濃度分別為19.53、39.06、78.13、156.25、312.50 μL/L觸殺處理后，測定桔小實蠅體內(nèi)AchE活力，結(jié)果見圖2。由圖2可知，北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的AchE有明顯的濃度效應(yīng)，當(dāng)濃度為19.53和39.06 μL/L 時，AchE活力均極顯著高于對照（P＜0.01），呈現(xiàn)誘導(dǎo)作用，當(dāng)濃度為39.06 μL/L，酶活力達(dá)到最高［5.092 nmol/（min·mg）］，當(dāng)濃度大于39.06 μL/L時，酶活力隨濃度增大逐漸降低，當(dāng)濃度為78.13 μL/L時，與對照組相比無顯著差異（P＞0.05），說明此濃度下北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)AChE活力幾乎沒有影響，當(dāng)濃度升高為312.50 μL/L時，對照組的酶活力為該組的2.82倍，極顯著低于對照（P＜0.01）。整體來看，低濃度的北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的AchE呈現(xiàn)誘導(dǎo)作用，高濃度的北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的AchE呈現(xiàn)抑制作用。

2.2.3? 時間效應(yīng)。

以濃度為156.25 μL/L的北細(xì)辛精油觸殺處理桔小實蠅1、2、4、8、12 h后，測定其體內(nèi)CarE活力，結(jié)果見圖3。由圖3可知，北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的CarE有明顯的時間效應(yīng)，處理組和對照組的酶活力均隨著時間的延長而升高，在8 h后急劇上升，但處理組的酶活力始終低于對照組，在處理1 h時，處理組與對照組無顯著差異（P＞0.05），說明短時間內(nèi)精油對蟲體內(nèi)CarE活力幾乎無影響，在處理2 h 時，處理組酶活力（0.551 U/mg）達(dá)到最低，極顯著低于對照組（P＜0.01），當(dāng)處理時間達(dá)12 h時，處理組酶活力（1.078 U/mg）達(dá)到最高，極顯著低于對照組（1.538 U/mg）（P＜0.01）。整體來看，精油處理對桔小實蠅體內(nèi)CarE呈現(xiàn)抑制作用。

2.2.4? 濃度效應(yīng)。

北細(xì)辛精油以不同濃度分別為19.53、39.06、78.13、156.25、312.5 μL/L 觸殺處理后，桔小實蠅體內(nèi)CarE活力見圖4。由圖4可知，北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的CarE有明顯的濃度效應(yīng)，且隨著濃度的增大，蟲體內(nèi)的酶活力也逐漸降低，當(dāng)濃度為19.53 μL/L時，與對照組比較無顯著差異（P＞0.05），說明該濃度的精油對蟲體內(nèi)CarE活力幾乎無影響，其他濃度均極顯著低于對照（P＜0.01），說明呈現(xiàn)抑制作用，當(dāng)濃度為312.5 μL/L時，酶活力最低，對照組的酶活力為該組的1.87倍，極顯著低于對照（P＜0.01）。整體來看，北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的CarE呈現(xiàn)抑制作用。

3? 結(jié)論與討論

該研究對北細(xì)辛精油對桔小實蠅的殺蟲活性及其機理進(jìn)行了研究。熏蒸及觸殺毒力試驗結(jié)果表明，桔小實蠅的校正死亡率均隨精油濃度增大呈上升趨勢，且隨著時間的延長不斷升高。在熏蒸毒力試驗中，當(dāng)精油濃度為1 mL/L、熏蒸12 h時，桔小實蠅的校正死亡率為100%；在觸殺毒力試驗中，當(dāng)精油濃度為156.25 μL/L、觸殺處理12 h時，桔小實蠅的校正死亡率為100%，說明北細(xì)辛精油有較好的殺蟲活性。研究表明［12］，在遼細(xì)辛精油對菜豆象的殺蟲活性研究中，當(dāng)濃度為70 μL/L時，12 h后熏蒸效果達(dá)100%，滴加劑量1 μL觸殺12 h后效果為100%，殺蟲結(jié)果的差異可能與試蟲種類差異及處理條件等不同有關(guān)，但說明北細(xì)辛精油有良好的殺蟲活性。北細(xì)辛精油熏蒸和觸殺處理桔小實蠅1、2、4、8、12 h后的LC50均隨著時間的延長而降低，說明精油需要一定的時間才能發(fā)揮作用。樊芳芳等［15］研究姜黃精油對二斑葉螨的熏蒸毒性，證明二斑葉螨的死亡率隨著處理時間的延長而增高，LD10、LD20、LD30、LD50均隨處理時間延長而逐漸降低，說明劑量和時間與死亡率均呈正相關(guān)。該試驗結(jié)果與已報道的精油殺蟲研究結(jié)果一致。

精油對昆蟲的殺蟲機制主要通過抑制其體內(nèi)AchE、CarE等酶的活性而使其神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等發(fā)生紊亂從而起到殺蟲作用［16］。其中，AchE是在昆蟲體內(nèi)控制神經(jīng)傳導(dǎo)的重要酶，有機磷類殺蟲藥主要就是抑制AchE來發(fā)揮作用［17］。昆蟲體內(nèi)的CarE是一種解毒酶，它能轉(zhuǎn)化和代謝藥物以降低藥物毒性或利用阻斷作用來保護(hù)其靶標(biāo)位點［18］，當(dāng)CarE遭到抑制時，解毒力量減弱，并可能會使某些外源毒力侵入，進(jìn)而造成桔小實蠅的死亡。該研究結(jié)果表明，北細(xì)辛精油對桔小實蠅體內(nèi)的AchE和CarE都有明顯的抑制作用，且整體具有時間效應(yīng)和濃度效應(yīng)，隨著精油對桔小實蠅作用時間的延長，蟲體內(nèi)AchE活力先小幅度升高后逐漸降低，除1 h外，都顯著低于對照組（P＜0.05），說明作用一段時間后，精油顯著抑制了蟲體內(nèi)的AchE活力，并在8 h后急劇下降，這可能是導(dǎo)致蟲體死亡的主要原因。隨著濃度的增大，精油對桔小實蠅體內(nèi)AchE活力呈低濃度誘導(dǎo)；高濃度抑制的作用。北細(xì)辛精油對蟲體內(nèi)CarE隨著時間的延長酶活性雖逐漸升高但都顯著低于對照（P＜0.05），呈現(xiàn)持續(xù)的抑制作用，且精油對桔小實蠅體內(nèi)的CarE的抑制作用與濃度也成正比。劉麗梅等［19］研究表明不同植物精油對枸杞蚜蟲的AchE和CarE均呈現(xiàn)抑制作用，是導(dǎo)致蟲體死亡的主要靶標(biāo)酶。因此，北細(xì)辛精油對桔小實蠅的殺蟲活性也可能與抑制這2個酶的活力相關(guān)，通過試驗結(jié)果可以判斷北細(xì)辛精油也影響桔小實蠅體內(nèi)AchE和CarE的代謝，這2種酶是北細(xì)辛精油作用于桔小實蠅的重要靶標(biāo)酶，但北細(xì)辛精油中具體哪種成分對桔小實蠅產(chǎn)生毒性作用及其作用機理仍需進(jìn)一步研究。

該試驗對北細(xì)辛精油通過不同的處理方式對桔小實蠅的毒力效果及對其體內(nèi)AchE和CarE的活力的影響進(jìn)行了研究，明確了殺蟲劑的作用方式，初步了解其作用機理，對天然植物源殺蟲劑的研制及其合理使用提供理論依據(jù)并具有一定的實際指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

［1］梁廣勤，梁帆，趙菊鵬，等.中國實蠅檢疫研究概況［J］.環(huán)境昆蟲學(xué)報，2008，30（4）：361-369.

［2］金揚秀，張德滿，謝傳峰，等.桔小實蠅綠色防控技術(shù)研究進(jìn)展［J］.植物檢疫，2022，36（3）：1-6.

［3］CHEN P，YE H.Relationship among five populations of Bactrocera dorsalis based on mitochondrial DNA sequences in western Yunnan，China［J］.Journal of applied entomology，2008，132（7）：530-537.

［4］孟倩倩，章珍，林玉英，等.六甲基磷酰三胺對桔小實蠅的不育效果研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，39（4）：62-64.

［5］楊琴，羅德誠，楊毅娟，等.不同顏色實蠅粘蟲板對桔小實蠅及天敵昆蟲的誘捕效果［J］.應(yīng)用昆蟲學(xué)報，2021，58（5）：1176-1182.

［6］金夢嬌，范銀君，滕子文，等.桔小實蠅的化學(xué)防治措施及抗藥性治理［J］.農(nóng)藥，2021，60（1）：1-5，13.

［7］HSU J C，F(xiàn)ENG H T.Development of resistance to spinosad in oriental fruit fly（Diptera：Tephritidae）in laboratory selection and cross.resistance［J］.Journal of economic entomology，2006，99（3）：931-936.

［8］趙之亭.桔小實蠅對阿維菌素的抗性研究［D］.廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2018.

［9］劉靜怡，袁瑞雪，劉呈瀚，等.植物源殺蟲劑在儲糧害蟲防治上的研究現(xiàn)狀及展望［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2022，38（23）：121-128.

［10］朱玲瓏，羅小鳳，李麗青，等.遼細(xì)辛提取物對桔小實蠅成蟲的引誘作用及田間防治［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報，2020，26（17）：105-108.

［11］王桂清，姬蘭柱，張弘.遼細(xì)辛精油對淡色庫蚊的殺傷作用［J］.中國生物防治，2008，24（2）：112-115.

［12］廖應(yīng)江，戴仁懷，吳麗紅，等.4種植物精油對菜豆象成蟲的熏蒸、觸殺和驅(qū)避作用研究［J］.植物檢疫，2020，34（5）：50-55.

［13］聶霄艷.花椒提取物對玉米象和赤擬谷盜的控制作用研究［D］.重慶：西南大學(xué)，2007.

［14］李玉春，周富婷，肖豐坤，等.六種植物精油對赤擬谷盜的殺蟲活性研究［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，57（14）：49-52.

［15］樊芳芳，程作慧，王旗，等.姜黃精油對二斑葉螨的熏蒸毒力及對解毒酶的影響［J］.中國植保導(dǎo)刊，2022，42（5）：5-9，70.

［16］仲建鋒，魯玉杰，劉鳳杰，等.植物源農(nóng)藥殺蟲機理研究進(jìn)展［J］.糧油食品科技，2007，15（3）：32-34.

［17］徐恩斌，張忠兵，謝渭芬.乙酰膽堿酯酶的研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)（生理、病理科學(xué)與臨床分冊），2003，23（1）：73-75.

［18］王志超，康志嬌，史雪巖，等.有機磷類殺蟲劑代謝機制研究進(jìn)展［J］.農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2015，17（1）：1-14.

［19］劉麗梅，段立清，蘇柳，等.四種植物精油對枸杞蚜蟲的毒力及3種酶活性的影響［J］.中國森林病蟲，2017，36（1）：5-9.