不同比例雌雄激素誘導(dǎo)大鼠前列腺炎癥、纖維化的研究

王曉東 張雪圓 田野△ 王元林 江克華 李凱 王振 李濤

(1.貴州省人民醫(yī)院泌尿外科,貴州 貴陽(yáng) 550002;2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科,貴州 貴陽(yáng) 550004)

下尿路癥狀(lower urinary tract symptoms,LUTS)是老年男性常見(jiàn)病、多發(fā)病,表現(xiàn)為排尿躊躇、尿流變細(xì)、夜尿增多、尿頻、尿急及尿不盡感[1],是多種致病因素共同作用結(jié)果,除動(dòng)力性、機(jī)械性梗阻外,還可能與前列腺其他病變相關(guān),如炎癥、纖維化等。前列腺是性激素依賴(lài)器官,N.Enatsu等人[2]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)口服度他雄胺組以及去勢(shì)組大鼠相比對(duì)照組大鼠前列腺纖維化程度明顯更嚴(yán)重。而F.Cantiello等人[3]也認(rèn)為前列腺纖維化使得前列腺部尿道彈性變差,增加了膀胱出口的阻力。前列腺纖維化程度及膠原含量與LUTS癥狀程度呈正比關(guān)系[4]。本研究通過(guò)不同比例濃度雌雄激素作用于SD大鼠,觀察其前列腺組織炎癥、纖維化程度的表現(xiàn)差異。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 主要設(shè)備石蠟脫水機(jī)(武漢俊杰電子有限公司);石蠟包埋機(jī)(武漢俊杰電子有限公司);病理切片機(jī)(上海徠卡儀器有限公司);組織攤片機(jī)(科迪儀器設(shè)備有限公司);烤箱(天津萊玻瑞儀器設(shè)備有限公司)光學(xué)顯微鏡(Nikon,日本);全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(Molecular Devices美國(guó))。

1.1.2 主要試劑雌二醇E2(APEXBIO,美國(guó));雙氫睪酮 DHT(APEXBIO,美國(guó));無(wú)水乙醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);二甲苯(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);HE染液(武漢賽維爾生物科技有限公司);E2定量試劑盒(酶免);DHT定量試劑盒(酶免);Masson染色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司):中性樹(shù)膠(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法(1)4月齡大鼠根據(jù)不同比例濃度雌雄激素隨機(jī)分為未去勢(shì)對(duì)照組;未去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介(玉米油)組;去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介(玉米油)組;去勢(shì)后(手術(shù)切除雙側(cè)睪丸)不同比例濃度雌雄激素處理組:去勢(shì)+0.15 mg/kg DHT 組;去勢(shì)+0.15 mg/kg DHT+0.005 mg/kg E2組;去勢(shì)+0.15 mg/kg DHT+0.015 mg/kg E2組;去勢(shì)+0.15 mg/kg DHT+0.05 mg/kg E2組;去勢(shì)+0.15 mg/kg DHT+0.15 mg/kg E2組;去勢(shì)+0.15 mg/kg DHT+0.5 mg/kg E2組;去勢(shì)+0.05 mg/kg E2組;去勢(shì)+0.05 mg/kg E2 +0.005 mg/kg DHT組;去勢(shì)+0.05 mg/kg E2 +0.015 mg/kg DHT組;去勢(shì)+0.05 mg/kg E2 +0.05 mg/kg DHT組;去勢(shì)+0.05 mg/kg E2 +0.15 mg/kg DHT組;去勢(shì)+0.05 mg/kg E2+0.5 mg/kg DHT組,共十五組。DHT及 E2使用玉米油溶解配制成為不同濃度,根據(jù)大鼠不同分組采用每日皮下注射連續(xù)1個(gè)月,手術(shù)獲取大鼠前列腺標(biāo)本。(2)通過(guò)HE染色、Masson染色顯微鏡下進(jìn)行前列腺組織病理炎癥分級(jí)(參考國(guó)際前列腺炎組織學(xué)診斷與分度標(biāo)準(zhǔn))及纖維化程度的觀察。

2 結(jié) 果

2.1 不同比例雌雄激素對(duì)去勢(shì)大鼠前列腺組織學(xué)炎癥的影響通過(guò)HE染色探究雌雄激素對(duì)去勢(shì)大鼠前列腺炎癥浸潤(rùn)的影響,結(jié)果顯示未去勢(shì)對(duì)照組和未去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介組前列腺組織結(jié)構(gòu)完整、腺腔和間質(zhì)無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),無(wú)充血和水腫;與未去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介相比,去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介組前列腺腺腔和間質(zhì)有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(P<0.001);與去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介組相比,去勢(shì)大鼠添加0.15 mg/kg DHT組前列腺腺腔和間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少(P<0.001);與0.15 mg/kg DHT組相比,同時(shí)添加雌激素E2組(0.15 mg/kg DHT+0.005 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.015 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.05 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.15 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.5 mg/kg E2)前列腺腺腔和間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)一步增多;與去勢(shì)大鼠添加0.05 mg/kg E2相比,同時(shí)添加DHT組(0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.05 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.15 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.5 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT)前列腺腺腔和間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少。見(jiàn)表1,圖1。

圖1 HE染色檢測(cè)各組大鼠前列腺組織炎癥浸潤(rùn)

表1 各組大鼠前列腺組織學(xué)炎癥分級(jí)

2.2 不同比例雌雄激素對(duì)去勢(shì)大鼠前列腺纖維化的影響通過(guò)Masson染色探究雌雄激素對(duì)去勢(shì)大鼠前列腺纖維化的影響,結(jié)果顯示未去勢(shì)對(duì)照組和未去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介組前列腺組織無(wú)明顯纖維化;與未去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介相比,去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介組前列腺膠原纖維化程度高(P<0.001);與去勢(shì)對(duì)照+溶藥媒介組相比,去勢(shì)大鼠添加0.15 mg/kg DHT組前列腺膠原纖維化含量下降3.08倍(P<0.001);與0.15 mg/kg DHT組相比,進(jìn)一步添加雌激素E2組(0.15 mg/kg DHT+0.005 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.015 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.05 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.15 mg/kg E2、0.15 mg/kg DHT+0.5 mg/kg E2)前列腺膠原纖維化程度增加;與去勢(shì)大鼠添加0.05 mg/kg E2相比,進(jìn)一步添加DHT組(0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.05 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.15 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.5 mg/kg DHT、0.05 mg/kg E2+0.015 mg/kg DHT)前列腺膠原纖維化減少。見(jiàn)圖2,表2。

圖2 Masson染色檢測(cè)各組大鼠前列腺組織纖維化

表2 各組大鼠前列腺組織膠原含量半定量結(jié)果

3 討 論

大量證據(jù)表明前列腺纖維化與前列腺炎癥反應(yīng)二者關(guān)系密切[5],而前列腺纖維化是老年男性患者下尿路癥狀的重要病因[6]。雄激素是促進(jìn)前列腺正常生長(zhǎng)以及病理性增生[7]。而雌激素是促進(jìn)組織對(duì)DHT的吸收轉(zhuǎn)化及雄激素與雄激素受體的結(jié)合[8-9]。前列腺細(xì)胞能分泌多種炎癥因子,同時(shí)也是炎性因子作用的主要靶點(diǎn)[10-11]。在去勢(shì)大鼠體內(nèi)添加外源性的雌雄激素模擬人體內(nèi)雌雄激素的失衡,通過(guò)HE染色,發(fā)現(xiàn)去勢(shì)大鼠添加0.15 mg/kg DHT抑制了前列腺腺腔和間質(zhì)中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),而在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步添加E2誘導(dǎo)前列腺炎的發(fā)生。相反地,在去勢(shì)大鼠添加0.05 mg/kg E2的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步添加DHT抑制了前列腺炎的進(jìn)展。此結(jié)果與研究一致[12-14],即在正?；蚋哂谡Ｋ降腄HT具有抑制前列腺炎癥的作用。

前列腺組織的炎癥發(fā)展到一定程度后前列腺細(xì)胞、炎癥細(xì)胞以及促炎因子之間相互促進(jìn),炎癥反應(yīng)循環(huán)放大,誘發(fā)前列腺細(xì)胞合成及分泌功能紊亂,導(dǎo)致前列腺細(xì)胞外成分重構(gòu)及纖維化的發(fā)生,成纖維細(xì)胞和成肌纖維細(xì)胞聚集并活化、膠原沉積、細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)以及組織的彈性減弱為特征[6,15]。雌激素對(duì)纖維化形成和發(fā)展起到促進(jìn)作用[16]。在接受內(nèi)分泌治療的前列腺癌標(biāo)本中可發(fā)現(xiàn)在非腫瘤區(qū)域的前列腺發(fā)生了纖維化[17]。通過(guò)添加不同比例的DHT和E2,Masson染色結(jié)果表明,與假手術(shù)組相比,去勢(shì)大鼠組的前列腺膠原含量更高,而添加0.15 mg/kg DHT后,前列腺膠原含量明顯下降。

中青年血漿雌/雄激素濃度為1∶150,老年人為1∶120～1∶80,老年人前列腺內(nèi)雌/雄激素濃度高達(dá)1∶8。男性隨著年齡增長(zhǎng),雌雄激素比例失調(diào),從而誘導(dǎo)前列腺炎癥,進(jìn)而導(dǎo)致纖維化。本研究雖以大鼠為研究對(duì)象,探討不同比例濃度雌雄激素作用下去勢(shì)大鼠前列腺炎癥、纖維化程度,其結(jié)果對(duì)于臨床前列腺炎、前列腺纖維化的治療提供了思路,能否通過(guò)改變老年男性雌雄激素比例,以改變、延緩前列腺炎癥、纖維化病程,進(jìn)而緩解LUTS癥狀,尚需進(jìn)一步研究。

利益沖突說(shuō)明/Conflict of Intetests

所有作者聲明不存在利益沖突。

倫理批準(zhǔn)及知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究通過(guò)貴州省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)(科學(xué)倫理委員會(huì))批準(zhǔn)。