白蛋白/纖維蛋白原比值、核因子E2相關(guān)因子2、血紅素氧合酶1對(duì)腦缺血再灌注損傷的診斷價(jià)值

鄭娟，孔敏，宋曉宇，田升軍，李燕，于天霞

作者單位：264000 山東省煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

再灌注治療是臨床上針對(duì)急性腦梗死患者的重要治療手段，其可恢復(fù)缺血腦組織血供，提高患者的生存質(zhì)量［1］。但再灌注治療過(guò)程中患者可能會(huì)發(fā)生炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、出血轉(zhuǎn)化、再灌注腦水腫等，從而加重缺血腦組織損傷，進(jìn)而引發(fā)腦缺血再灌注損傷（cerebral ischemia-reperfusion injury，CIRI），增加患者死亡風(fēng)險(xiǎn)［2］。因此，有效預(yù)防CIRI對(duì)改善急性腦梗死患者預(yù)后至關(guān)重要。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，氧化應(yīng)激是CIRI的重要發(fā)生機(jī)制［3］。研究顯示，白蛋白/纖維蛋白原比值（albumin to fibrinogen ratio，AFR）是反映炎癥狀態(tài)及營(yíng)養(yǎng)狀況的新型綜合指標(biāo)，且低水平的AFR可誘發(fā)氧化應(yīng)激，進(jìn)而引發(fā)CIRI［4］。核因子E2相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid-2 related factor 2，Nrf2）是抗氧化防御系統(tǒng)的重要因子，可參與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展過(guò)程，血紅素氧合酶1（heme oxygenase 1，HO-1）具有抗氧化、改善組織微循環(huán)等作用，研究證實(shí)，Nrf2、HO-1可通過(guò)增加細(xì)胞抗氧化能力而促進(jìn)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的恢復(fù)并增強(qiáng)偶聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)CIRI的發(fā)生、發(fā)展［5-6］。本研究旨在分析AFR、Nrf2、HO-1對(duì)CIRI的診斷價(jià)值，以期為臨床防治CIRI提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020年1月—2023年6月煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院收治的CIRI患者105例為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合CIRI的診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；（2）年齡≥18歲；（3）肝、腎功能正常者；（4）對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并惡性腫瘤者；（2）有顱內(nèi)出血或顱腦外傷史者；（3）存在傳染病、自身免疫性疾病或血液系統(tǒng)疾病者；（4）伴有精神疾病者。另選取同期于煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院體檢者105例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡≥18歲；（2）對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：有再灌注治療史者。本研究經(jīng)煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 研究方法

（1）一般資料收集：收集研究對(duì)象一般資料，包括性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)（body mass index，BMI）、基礎(chǔ)疾病（高血壓、冠心病、糖尿?。＃?）AFR檢測(cè)：CIRI患者入院后禁食8 h，于次日清晨采集空腹外周靜脈血5 ml；對(duì)照組于體檢時(shí)采集空腹外周靜脈血5 ml；采用全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑盒檢測(cè)血清白蛋白；采用全自動(dòng)凝血分析儀及其配套試劑盒檢測(cè)血清纖維蛋白原；計(jì)算AFR，AFR=白蛋白/纖維蛋白原。（3）Nrf2、HO-1檢測(cè)：CIRI患者入院后禁食8 h，于次日清晨采集空腹外周靜脈血3 ml；對(duì)照組于體檢時(shí)采集空腹外周靜脈血3 ml；3 500 r/min離心15 min（離心半徑15 cm）后取血清，采用ELISA測(cè)定血清Nrf2、HO-1水平，ELISA試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料均經(jīng)方差齊性及Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布以（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以相對(duì)數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用多因素Logistic回歸分析探討CIRI的影響因素；采用受試者工作特征（receiver operator characteristic，ROC）曲線分析AFR、Nrf2、HO-1及三者聯(lián)合對(duì)CIRI的診斷價(jià)值，曲線下面積（area under curve，AUC）＜0.5表示無(wú)診斷價(jià)值，0.5≤AUC＜0.7表示診斷價(jià)值較低，0.7≤AUC＜0.9表示診斷價(jià)值中等，AUC≥0.9表示診斷價(jià)值較高。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料、AFR、Nrf2、HO-1比較

兩組性別、年齡、BMI及高血壓、冠心病、糖尿病發(fā)生率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；觀察組AFR、Nrf2、HO-1低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料、AFR、Nrf2、HO-1比較Table 1 Comparison of general information，AFR，Nrf2，and HO-1 between the two groups

2.2 CIRI影響因素的多因素Logistic回歸分析

以AFR、Nrf2、HO-1為自變量（均為實(shí)測(cè)值），研究對(duì)象是否為CIRI患者為因變量（賦值：是=1，否=0），進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，AFR、Nrf2、HO-1是CIRI的影響因素（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 CIRI影響因素的多因素Logistic回歸分析Table 2 Multivariate Logistic regression analysis of the influencing factors of CIRI

2.3 AFR、Nrf2、HO-1及三者聯(lián)合對(duì)CIRI的診斷價(jià)值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，AFR、Nrf2、HO-1診斷CIRI的AUC分別為0.854〔95%CI（0.794～0.915）〕、0.815〔95%CI（0.756～0.873）〕、0.831〔95%CI（0.7 7 5 ～0.8 8 8）〕，最佳截?cái)嘀捣謩e為9.7、3.2 μg/L、168.5 nmol/L，靈敏度分別為98.10%、89.50%、85.70%，特異度分別為75.20%、64.80%、71.40%；三者聯(lián)合診斷CIRI的AUC為0.926〔95%CI（0.883～0.968）〕，靈敏度為95.20%，特異度為87.60%，見(jiàn)圖1。

圖1 AFR、Nrf2、HO-1及三者聯(lián)合診斷CIRI的ROC曲線Figure 1 ROC curve of AFR，Nrf2，HO-1 and their combination in diagnosing CIRI

3 討論

神經(jīng)元主要通過(guò)線粒體來(lái)產(chǎn)生三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）以維持其功能及正常耗氧需求［8］。機(jī)體缺氧時(shí)會(huì)發(fā)生線粒體功能障礙，抑制ATP的生成并影響機(jī)體細(xì)胞能量轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，從而促進(jìn)活性氧的生成，進(jìn)而誘發(fā)氧化應(yīng)激［9-10］。而氧化應(yīng)激會(huì)損傷血腦屏障膜蛋白，導(dǎo)致血腦屏障脂質(zhì)過(guò)氧化，使血腦屏障緊密連接中的閉合蛋白的分布不均勻及表達(dá)異常，從而造成血腦屏障損傷，進(jìn)而誘發(fā)CIRI［11］。

AFR是一種新型炎癥標(biāo)志物，其在機(jī)體氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。本研究結(jié)果顯示，觀察組AFR低于對(duì)照組，且多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，AFR是CIRI的影響因素。AFR可反映機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)及炎癥情況［12］。低水平的AFR可提示機(jī)體存在營(yíng)養(yǎng)不良情況，而營(yíng)養(yǎng)不良會(huì)影響免疫功能，增加機(jī)體感染風(fēng)險(xiǎn)，而機(jī)體一旦發(fā)生感染則會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)并導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙，使組織細(xì)胞出現(xiàn)缺氧缺血性壞死、凋亡，在此過(guò)程中，機(jī)體會(huì)釋放活性氧，誘發(fā)氧化應(yīng)激，進(jìn)而引起CIRI［13-15］。此外，炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激還會(huì)引發(fā)血小板異?；罨?，促進(jìn)血栓形成，致使冠狀動(dòng)脈管腔再次阻塞，加重腦組織缺氧缺血程度，這可能會(huì)導(dǎo)致患者再灌注治療時(shí)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、出血轉(zhuǎn)化等，進(jìn)而誘發(fā)CIRI［16］。Nrf2/HO-1信號(hào)通路在調(diào)控CIRI中具有關(guān)鍵作用。FAN等［17］研究指出，Nrf2/HO-1信號(hào)通路可通過(guò)調(diào)節(jié)抗炎因子和抗氧化酶的表達(dá)來(lái)調(diào)控CIRI過(guò)程。其中Nrf2可調(diào)節(jié)抗氧化反應(yīng)元件（antioxidant response element，ARE）/親電子反應(yīng)元件（electrophile response element，EpRE）基因［18］，HO-1可發(fā)揮抑制炎癥反應(yīng)及抗細(xì)胞凋亡、增殖等作用［19］。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2與V-Maf肌肉腱膜纖維肉瘤癌基因同源物蛋白形成異二聚體后可識(shí)別ARE序列，從而促進(jìn)抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄［20］，此時(shí)Nrf2還可調(diào)控HO-1并將HO-1氧化成膽綠素、一氧化碳、游離鐵等物質(zhì)，進(jìn)而發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用［21］。本研究結(jié)果顯示，觀察組Nrf2、HO-1低于對(duì)照組，且多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，Nrf2、HO-1是CIRI的影響因素，與LOU等［22］研究結(jié)果一致。Nrf2、HO-1具有抗氧化能力，低水平的Nrf2、HO-1可抑制神經(jīng)元中抗氧化酶、解毒酶的生成，干擾酶促反應(yīng)過(guò)程，并導(dǎo)致機(jī)體抗氧化劑如超氧化物歧化酶、丙二醛等水平明顯升高，進(jìn)而損傷腦組織，誘發(fā)或加重CIRI［23］。

本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，AFR、Nrf2、HO-1及三者聯(lián)合診斷CIRI的AUC分別為0.854、0.815、0.831、0.926，提示AFR、Nrf2、HO-1均對(duì)CIRI具有中等診斷價(jià)值，而三者聯(lián)合的診斷價(jià)值更高，臨床上可通過(guò)AFR、Nrf2、HO-1來(lái)預(yù)測(cè)CIRI的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，并采取有效措施進(jìn)行干預(yù)，以降低CIRI發(fā)生率。

4 結(jié)論

綜上所述，AFR、Nrf2、HO-1是CIRI的影響因素，且其均對(duì)CIRI具有中等診斷價(jià)值，而三者聯(lián)合的診斷價(jià)值更高。但本研究樣本量較小，且對(duì)照組為體檢健康者，并未納入接受再灌注治療后未發(fā)生CIRI的患者，這可能會(huì)造成研究偏倚，未來(lái)可對(duì)患者進(jìn)一步分級(jí)，以驗(yàn)證AFR、Nrf2、HO-1在CIRI發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。

作者貢獻(xiàn)：鄭娟負(fù)責(zé)文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)、資料整理、論文撰寫、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對(duì)文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理；孔敏、宋曉宇、田升軍進(jìn)行研究的實(shí)施與可行性分析，資料收集；鄭娟、李燕、于天霞負(fù)責(zé)論文修訂、文章質(zhì)量控制及審校。

本文無(wú)利益沖突。