都勻毛尖茶多糖對四氧嘧啶模型小鼠降血糖作用的研究

李攀攀，白錦龍，艾于杰

（1.貴州貴天下進(jìn)出口實業(yè)有限責(zé)任公司，貴州 黔南布依族苗族自治州 558000；2.貴州大學(xué) 茶學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

隨著老齡化、城市化不斷深入，中國已成為糖尿病患病率增長最快的國家之一，糖尿病發(fā)病率逐年上漲[1]。經(jīng)過中藥學(xué)的不斷發(fā)展，從常見食物及中藥中所提煉出的活性組分在臨床上的使用，可促進(jìn)糖尿病小鼠的胰島素分泌，提高血糖的攝入，具有一定的降血糖功效[2]。天然茶多糖（tea polysaccharide）是一種在茶葉中非常重要的、具有天然活性的綴合物大分子，由糖類、核酸、蛋白質(zhì)及無機(jī)元素等構(gòu)成，約占茶葉干物質(zhì)的20%左右[3，4]。研究表明，多種茶樹中所含的茶多糖，具有抗氧化作用，增強(qiáng)免疫功能，降低血糖等作用，具有多種生理功能[5-10]。隨著對茶多糖的進(jìn)一步的研究，它被證明是一種具有良好的降糖性的物質(zhì)，可以有效地提高人體內(nèi)的代謝酶的活力，提高人體內(nèi)的胰島素的分泌以及肝糖原的含量；具有促進(jìn)糖代謝，降低血糖的功能[11-13]。本試驗以都勻毛尖茶多糖為原料，基于四氧嘧啶模型誘導(dǎo)小鼠設(shè)計降血糖對比實驗，為都勻毛尖茶多糖功能性食品的開發(fā)和應(yīng)用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

葡萄糖，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；四氧嘧啶（Alloxan，ALX），美國Sigma公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。雄性昆明小鼠，清潔級，購于重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司，合格生產(chǎn)許可證號：SCXK-(軍)2012-0011。

1.2 實驗儀器

AUY-220型電子分析天平，日本京都島津制作所；D-971型磁力攪拌器，鞏義市英峪予華儀器廠；GZX-9246MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海博迅實業(yè)有限公司；XMTD-204型恒溫水浴鍋，常州諾海電子有限公司；MIX-30S迷你混合器，杭州米歐儀器有限公司；RE52-AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器，ACCU-Chek Advantage血糖儀（德國羅氏診斷有限公司）。

1.3 茶多糖提取

取都勻毛尖粉末樣品100g，用1:20（W/V）的蒸餾水以1:5（W/V）的比率在55℃的水浴中進(jìn)行磁性攪拌2.5小時，將浸出物過濾，4000r/min離心15min，取上清液，加入3倍容積95%酒精進(jìn)行沉淀并離心，收集沉淀物并冷凍干燥，得到粗茶多糖（TPS）。

1.4 實驗方法

1.4.1 糖尿病小鼠建模。取120只健康雄性昆明小鼠（體重20±2g），適應(yīng)飼養(yǎng)7天后，24小時內(nèi)禁食不禁水。隨機(jī)選擇10只作為對照組，通過腹腔內(nèi)注入相同數(shù)量的生理鹽水，剩余小鼠靜脈內(nèi)注入200mg/kg.bw的四氧嘧啶（四氧嘧啶配為2%的生理鹽水溶液，在冰浴下進(jìn)行制備）。72小時后剪尾尖取血，血糖儀上測量其空腹血糖（測量之前，禁食不禁水），以空腹血糖值>11.1mmol/L的小鼠作為糖尿病模型進(jìn)行降糖試驗。

1.4.2 降血糖實驗。以20只正常小鼠作為正常對照（NCG)，取糖尿病模型鼠隨機(jī)分成四組，即糖尿病模型組（MCG）、茶多糖低（T-L）、中（T-M）、高（T-H）劑量組。對照組與模型組每日一次性i.g.等量生理鹽水，T-L、T-M、T-H劑量組每天分別一次性i.g.100、300和600mg/kg?bw劑量的茶多糖溶液，在持續(xù)進(jìn)行14天的灌胃過程中，每組給予基本飼料和自由飲用水，并在給藥第7天和給藥第14天后測定小鼠的空腹血糖值。

1.4.3 糖耐量實驗。在對每組小鼠進(jìn)行空腹葡萄糖檢測后，對其連續(xù)灌胃15天。實驗開始之前4小時禁食，并對在給葡萄糖之前的血糖值進(jìn)行測量。15min之后，各組通過灌胃給予葡萄糖2.0g/（kg? bw），于30min、120min時測定血糖值，并計算出血糖曲線下面積。

1.4.4 小鼠生化指標(biāo)實驗。取40只糖尿病模型小鼠，按照禁食4h后的血糖水平，隨機(jī)分成4組。即模型組、T-L、T-M、T-H劑量組，糖尿病模型組每天一次性i.g.等量生理鹽水，T-L、T-M、T-H組每天分別一次性i.g.100、300和600mg/kg?bw劑量的茶多糖溶液。連續(xù)灌胃3周，灌胃體積為10mL/kg；末次給藥4h后，小鼠禁食不禁水，腹主動脈取血并取其肝臟和胰腺，測定小鼠肝糖原、丙二醛（MDA）、血清胰島素、超氧化物歧化酶（SOD）含量。

1.5 統(tǒng)計方法

采用WPS Office Excel、SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析處理，各項指標(biāo)數(shù)據(jù)用 ±s表示，不同組間差異采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，采用Duncan檢驗法組間兩兩比較。

2 結(jié)果分析

2.1 都勻毛尖茶多糖對小鼠空腹血糖的影響

在模型建立后，以及給予藥物0，7，14天后，對小鼠的空腹葡萄糖值進(jìn)行測量，如表1所示。與健康對照比較，四氧嘧啶可使小鼠的葡萄糖水平顯著提高，而各組之間沒有顯著差異，說明模型建立成功。給藥之后，各TPS組均能降低糖尿病模型小鼠血糖。給藥7d后，與模型對照組相比，T-M組達(dá)顯著水平，T-H組差異達(dá)極顯著水平。給藥14d后，各TPS組小鼠血糖值均明顯降低，與模型對照組相比，T-L組差異顯著，T-M、T-H組差異極顯著。表明三種濃度的毛尖茶多糖的降糖效果均存在一定的量效關(guān)系。

表1 都勻毛尖茶多糖對小鼠空腹血糖的影響

2.2 都勻毛尖茶多糖對小鼠糖耐量的影響

都勻毛尖茶多糖對四氧嘧啶所致的糖尿病模型的糖耐量測定的結(jié)果如表2所示。研究發(fā)現(xiàn)，正常對照小鼠經(jīng)口服葡萄糖接收糖負(fù)載后，其血糖值在30min達(dá)到最高，之后逐步開始下降，120min時下降至正常。結(jié)果表明，在30min時小鼠的葡萄糖濃度達(dá)峰值，之后繼續(xù)升高，表現(xiàn)出糖耐量降低的特征。TPS各劑量組在30min時的葡萄糖濃度達(dá)到峰值，之后逐步下降，至120min時的葡萄糖濃度恢復(fù)正常。相比于模型對照組，T-L劑量組差異顯著，而T-M、T-H組差異極顯著。與模式對照比較，各劑量組的血糖曲線下面積均有所下降，T-M、T-H組之間的差別達(dá)到了極顯著水平，結(jié)果表明，茶多糖能夠有效地提高小鼠的糖耐量，并且呈現(xiàn)出了一定的量效關(guān)系。

表2 都勻毛尖茶多糖對小鼠空腹血糖糖耐量的影響

2.3 都勻毛尖茶多糖對小鼠生化指標(biāo)的影響

都勻毛尖茶多糖對四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠生化指標(biāo)的影響實驗結(jié)果見表3。實驗結(jié)果顯示，連續(xù)灌胃三周后，T-M、T-H組的小鼠體內(nèi)的胰島素和肝臟的糖原均高于正常組，且血清中的 MDA比正常組含量低，差異顯著。各TPS組的 SOD活力均升高，與模型對照相比，T-M、T-H組有顯著性差異。說明都勻毛尖茶多糖可以影響糖尿病小鼠的糖代謝，并具有一定降血糖能力。

表3 都勻毛尖茶多糖對小鼠生化指標(biāo)的影響

3 討論

目前，糖尿病已是全球范圍內(nèi)位居第三的嚴(yán)重威脅人們健康的疾病。近些年來，隨著人們生活習(xí)慣與飲食結(jié)構(gòu)的不斷改變，糖尿病發(fā)病率日益提高，且呈現(xiàn)年輕化趨勢。當(dāng)前，西藥用于糖尿病病人，不僅會損害病人的肝功能，還會增加病人的胰島素敏感性，對病情的控制不易達(dá)到理想水平?；谥兴幍闹T多優(yōu)點，中藥復(fù)方對上述問題的解決具有重要意義。已知，茶多糖有降血糖等作用，可用作一種自然的輔助藥劑用于長期的糖尿病患者，能顯著提高肝內(nèi)酶的活力；促進(jìn)肝臟中的葡萄糖迅速降解，提高胰島素的含量等多個方面降低血糖值。

以上結(jié)果表明，都勻毛尖茶多糖具有明顯的降糖效果，能夠顯著地降低四氧嘧啶小鼠的高血糖水平，提高機(jī)體的糖耐量，促進(jìn)肝臟的胰島素分泌及肝臟中糖原含量，從而提高機(jī)體的糖代謝水平，達(dá)到降血糖的目的。同時可以降低模型小鼠血清中MDA含量，且能顯著提高機(jī)體內(nèi) SOD活性，能明顯改善高血糖小鼠的脂質(zhì)過氧化程度，對高血糖小鼠模型有顯著的保護(hù)作用。結(jié)論：都勻毛尖茶多糖對四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠有明顯的降糖作用，對糖尿病小鼠的糖代謝有明顯的促進(jìn)作用，能明顯改善高血糖小鼠的脂質(zhì)過氧化程度，起到一定的降血糖作用。