大苞鞘石斛酚類化學(xué)成分研究

李漢芬 ，秦詩慧 ，周澤琴 ，楊 柳，胡江苗 *

1. 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所 植物化學(xué)與西部資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650201

2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京 100049

3. 安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230012

石斛藥用歷史悠久，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有“主傷中，除痹，下氣，補(bǔ)五臟虛勞、羸瘦，強(qiáng)陰。久服，厚腸胃、輕身延年?！钡挠涊d。目前供作藥用的石斛屬植物約有30 種。近幾十年來，中外學(xué)者已經(jīng)對(duì)50 余種石斛屬植物的化學(xué)成分、藥理作用和臨床應(yīng)用進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)石斛具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、治療白內(nèi)障、抗血小板聚集、抗糖尿病等藥理活性，化學(xué)結(jié)構(gòu)類型有倍半萜類、聯(lián)芐類、菲類、芴酮類、黃酮類、苯丙素類、甾體、多糖等，且不同種石斛之間的化學(xué)成分差異較大[1]。

大苞鞘石斛DendrobiumwardianumWarner 為蘭科石斛屬草本植物，俗稱騰沖石斛，在我國(guó)主產(chǎn)于云南省東南部至西部，在國(guó)外的印度、緬甸、不丹等地也有分布[2]。其莖可入藥，有益胃生津滋陰清熱等功效；花色鮮艷，氣味芳香具有較高的觀賞價(jià)值，故有“四大觀賞洋花”之稱[3]。所含化學(xué)成分主要類型涉及倍半萜類、聯(lián)芐類、菲類、芴酮類、黃酮類、苯丙素類、甾體、多糖等[4-5]。迄今為止，對(duì)大苞鞘石斛化學(xué)成分及活性研究并不多見，為進(jìn)一步闡明大苞鞘石斛酚類的化學(xué)成分及藥用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)對(duì)產(chǎn)自云南省龍陵縣的大苞鞘石斛莖95%乙醇提取物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離得到30 個(gè)酚類化合物，分別鑒定為4-羥基-3,3′,5′-三甲氧基聯(lián)芐（aloifol，1）、denbinobine（2）、柚皮素（naringenin，3）、3,3′-二羥基-5,5′-二甲氧基聯(lián)芐（3,3′-dihydroxy-5,5′-dimethoxybibenzyl，4）、3,4′-二羥基-5-甲氧基聯(lián)芐（gigantol，5）、5,7-二羥基色原酮（5,7′-dihydrochromone，6）、dihydrotricin（7）、4,5-二羥基-3,7-二甲氧基-9,10-二氫菲（4,5-dihydroxy-3,7-dimethoxy-9,10-dihydrophenanthrene，8）、1,4,7-三羥基-5-甲氧基芴酮（dendroflorin，9）、二氫松柏醇二氫對(duì)羥基桂皮酸酯（dihydroconiferyl dihydro-p-coumarate，10）、4,4′-二羥基-3,5-二甲氧基聯(lián)芐（4,4′-dihydroxy-3,5-dimethoxybibenzyl，11）、(＋)-丁香脂 [(＋)-episyringaresinol，12]、(＋)-杜仲樹脂酚 [(＋)-hydroxymedioresinol，13]、N-反式桂皮酸酰對(duì)羥基苯乙胺（N-trans-cinnamoyltyramine，14）、丁香酸（syringic acid，15）、二氫松柏醇（dihydroconiferyl alcohol，16）、苜蓿素（tricin，17）、3,5,4′-三羥基-3′-甲氧基聯(lián)芐（3,5,4′-trihydroxy-3′-methoxybibenzyl ， 18 ）、threo-7-O-ethyl-9-O-(4-hydroxyphenyl)propionyl-guaiacylglycerol （ 19 ）、balanophonin（20）、ω-hydroxypropioguaiacone（21）、對(duì)羥基苯甲醛（p-hydroxybenzaldehyde，22）、3-hydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) propan-1-one（23）、(-)-鐵皮石斛素B [(-)-dendrocandin B，24]、(＋)-鐵皮石斛素B [(＋)-dendrocandin B，25]、dendrowillol A（26）、香草醛（vanillin，27）、dihydrop-cinnamic acid（28）、p-hydroxyphenethyltransferulate（29）、對(duì)羥基苯甲酸（p-hydroxy-benzonic acid，30）、對(duì)羥基肉桂酸 [(E)-p-hydroxy-cinnamic acid，31]。首次獲得了鐵皮石斛素B 的單晶并通過X-ray 單晶衍射發(fā)現(xiàn)其為1 對(duì)外消旋體，確定了其絕對(duì)構(gòu)型分別為2S, 3S和2R, 3R，并對(duì)鐵皮石斛素B 進(jìn)行了手性拆分?；衔?0、25 首次從石斛屬植物中分離得到，化合物5、6、14、19、24、26、29、31 均為首次從大苞鞘石斛中分離得到。

1 儀器與材料

Avance III 400 MHz、Avance III 500 MHz 核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker 公司）測(cè)定，TMS 為內(nèi)標(biāo)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)Heidolph 公司）；D8 Quest X射線單晶衍射儀（德國(guó)Bruker 公司）；Autopol VI 旋光儀（德國(guó)魯?shù)婪蚬荆?；Agilent UPLC/Q-Tof 液質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent 公司）；SIL-20A 色譜儀（日本島津公司），半制備手性色譜柱Chiral Pak IC（250 mm×10 mm，5 μm）；薄層色譜硅膠200～300 目柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；凝膠柱色譜 Sephadex LH-20（Pharmacia 公司）；高效液相色譜儀所用試劑均為色譜純，其他為分析純；顯色劑為10%硫酸-乙醇溶液（105 ℃加熱顯色）、碘蒸氣、在紫外燈254 nm 或365 nm 處觀察熒光。

大苞鞘石斛樣品購自云南省保山市龍陵縣，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)吳之坤副教授鑒定為大苞鞘石斛D.wardianumWarner，樣品標(biāo)本（Zsh-7）保存于中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

將50 kg 大苞鞘石斛鮮品切段晾干得到7.5 kg，用95%工業(yè)乙醇回流提取4 次，每次2 h，回收乙醇，得到700 g 浸膏用甲醇溶解過濾，將濾液部分吸附于200 g（200～300 目）硅膠，經(jīng)硅膠柱色譜氯仿-丙酮（15∶1～0∶1）梯度洗脫，TLC 檢測(cè)合并極性相同部分，得到6 個(gè)組分Fr. 1～6。

Fr. 1（15 g）經(jīng)反復(fù)常壓正相柱色譜（200～300目），石油醚-丙酮、氯仿-甲醇等系統(tǒng)洗脫，結(jié)合Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）色譜純化得到化合物1（7 mg）、2（5 mg）。

Fr. 2（20 g）經(jīng)過Sephadex LH-20（氯仿-甲醇，1∶1）分離得到8 個(gè)亞流分Fr. 2-1～2-8。Fr.2-6 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）得到化合物3（1.27 g）及流分Fr. 2-6-2，F(xiàn)r. 2-6-2 通過硅膠制備板，石油醚-醋酸乙酯（1∶1）洗脫得到化合物10（6 mg）、11（3 mg）。Fr. 2-7 經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）分為3 個(gè)流分Fr. 2-7-1～2-7-3，反復(fù)硅膠柱色譜Sephadex LH-20 氯仿-甲醇（1∶1）分離純化得到化合物4（6 mg）、5（12 mg）、6（2 mg）、7（177 mg）、8（12 mg）、9（4 mg）。

Fr. 3（8 g）經(jīng)MCI 柱甲醇-水（60∶40～100∶0）得到3 個(gè)亞流分。Fr. 3-1～3-3。Fr. 3-1 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）得到Fr. 3-1-1、3-1-2，F(xiàn)r. 3-1-1 經(jīng)硅膠柱色譜石油醚-丙酮（2∶1）洗脫得到化合物12（6 mg）Fr. 3-1-2 通過硅膠柱色譜氯仿-甲醇（15∶1～10∶1）洗脫得到化合物13（2 mg）、14（1 mg）。Fr. 3-2 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）分為2 個(gè)組分，再經(jīng)過反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物15（6 mg）、16（5 mg）。

Fr. 4（3 g）經(jīng)MCI 柱，甲醇-水（40∶60～80∶20）洗脫得到3 個(gè)亞流分，F(xiàn)r. 4-1 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇），硅膠柱色譜（氯仿-甲醇）梯度洗脫得到化合物27（3 mg）。

Fr. 5（14 g）經(jīng)MCI 柱，甲醇-水（40∶60～80∶20）洗脫得到5 個(gè)亞流分，F(xiàn)r. 5-1～5-5。Fr. 5-2 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）分段，再反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物18（4 mg）、19（11 mg）、20（8 mg）、21（1 mg）。Fr. 5-3 重結(jié)晶（甲醇）得到化合物17（157 mg）。Fr. 5-4 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）分段，再通過制備硅膠板（石油醚-丙酮4∶1）得到化合物22（1 mg）、23（10 mg）。Fr. 5-5 經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜，再經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇）純化重結(jié)晶得到化合物24 和25 的外消旋體混合物（37 mg）和化合物26（2 mg），隨后，外消旋體經(jīng)手性色譜柱（二氯甲烷-甲醇10∶90，1.5 mL/min）拆分得到化合物24（8.5 mg，tR＝15 min）和25（7.8 mg，tR＝16.4 min）。

Fr. 6（30 g）經(jīng)MCI 柱，甲醇-水（30∶70～80∶20）梯度洗脫，得到3 個(gè)亞流分Fr. 6-1～6-3。Fr. 6-3 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇），再經(jīng)硅膠柱色譜氯仿-甲醇（15∶1～0∶1）梯度洗脫得到化合物28（12 mg）、29（7 mg）、30（3 mg）、31（3 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：棕色膠狀物（氯仿）；ESI-MSm/z: 289[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 6.84 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-6′), 6.70 (1H, dd,J= 8.1, 1.9 Hz, H-5′),6.64 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-2′), 6.34 (2H, d,J= 2.3 Hz,H-2, 6), 6.31 (1H, s, H-4′), 3.85 (3H, s, 3′-OMe), 3.76(6H, s, 3, 5′-OMe), 2.83 (4H, m, H-α, α′)；13C-NMR(125 MHz, CDCl3)δ: 160.8 (s, C-3, 5), 146.4 (s, C-3′),144.3 (s, C-1), 143.9 (s, C-4′), 133.8 (s, C-1′), 121.1 (d,C-6′), 114.3 (d, C-5′), 111.1 (d, C-2′), 106.7 (d, C-2, 6),98.0 (d, C-4), 56.0 (s, 3′-OMe), 55.4 (s, 3, 5-OMe), 38.7(t, C-α′), 37.5 (t, C-α)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]，故鑒定化合物1 為4-羥基-3,3′,5′-三甲氧基聯(lián)芐。

化合物2：棕黑色顆粒（氯仿）；ESI-MSm/z: 285[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 8.12 (1H, d,J= 8.6 Hz, H-10), 8.07 (1H, d,J= 8.6 Hz, H-9), 6.93(1H, d,J= 2.7 Hz, H-6), 6.82 (1H, d,J= 2.7 Hz, H-8),6.15 (1H, s, H-2), 3.96 (3H, s, 3-OMe), 3.93 (3H, s, 7-OMe)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 186.6 (s, C-4),184.5 (s, C-1), 161.3 (s, C-3), 160.9 (s, C-7), 156.4 (s,C-5), 140.0 (s, C-4a), 137.5 (d, C-9), 132.5 (s, C-10a),128.7 (s, C-8a), 122.7 (d, C-10), 117.3 (s, C-4b), 108.8(d, C-6), 107.4 (d, C-2), 101.9 (d, C-8), 57.0 (q, 3-OMe), 55.6 (q, 7-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]，故鑒定化合物2 為denbinobine。

化合物3：無色細(xì)針晶（丙酮）；ESI-MSm/z: 273[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Acetone-d6)δ: 7.37(2H, m, H-2′, 6′), 6.89 (2H, d,J= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.94(2H, d,J= 4.8 Hz, H-6, 8), 5.41 (1H, d,J= 12.9 Hz, H-2), 3.14 (1H, dd,J= 17.1, 12.9 Hz, H-3a), 2.69 (1H, dd,J= 17.1, 3.0 Hz, H-3b)；13C-NMR (125 MHz, Acetoned6)δ: 196.6 (s, C-4 ), 168.6 (s, C-7 ), 165.0 (s, C-5 ),164.2 (s, C-9), 158.5 (s, C-4′), 130.7 (s, C-1′), 128.9 (d,C-2′, 6′), 116.0 (d, C-3′, 5′), 102.6 (s, C-10 ), 96.9 (d,C-6), 96.1 (d, C-8), 79.7 (d, C-2), 43.47 (t, C-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]，故鑒定化合物3 為柚皮素。

化合物4：棕色膠狀物（甲醇）；ESI-MSm/z: 275[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 6.83 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5′), 6.68 (1H, dd,J= 8.0, 2.0 Hz, H-6′),6.62 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 6.32 (1H, brs, H-2), 6.25(2H, d,J= 2.0 Hz, H-4, 6), 3.84 (3H, s, 3′-OMe), 3.75(3H, s, 3-OMe), 2.81 (4H, m, H-α, α′)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 160.9 (s, C-3), 156.6 (s, C-5), 146.3 (s,C-3′), 144.6 (s, C-1), 143.8 (s, C-4′), 133.7 (s, C-1′),121.0 (d, C-6′), 114.2 (d, C-5′), 111.2 (d, C-2′), 108.1(d, C-6), 106.9 (d, C-2), 99.1 (d, C-4), 55.9 (s, 3′-OMe),55.3 (s, 3-OMe), 38.4 (t, C-α), 37.3 (t, C-α′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，故鑒定化合物4 為4′,5-二羥基-3,3′-二甲氧基聯(lián)芐。

化合物5：棕色膠狀物（甲醇）；ESI-MSm/z: 245[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Acetone-d6)δ: 7.04(2H, d,J= 8.4 Hz, 2′, 6′), 6.74 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-3′,5′), 6.31 (1H, brs, H-2), 6.29 (1H, brs, H-6), 6.24 (1H,brs, H-4), 3.70 (3H, s, 5-OMe), 2.76 (4H, m, H-α, α′)；13C-NMR (125 MHz, Acetone-d6)δ: 161.8 (s, C-5),159.2 (s, C-3), 156.3 (s, 4′), 145.1, (s, C-1), 133.4 (s, C-1), 130.0 (d, C-2′, 6′), 115.8 (d, C-3′, 5′), 108.8 (d, C-2), 106.2 (d, C-6), 99.7 (d, C-4), 55.2 (s, 5-OMe), 39.1 (t,C-α), 37.5 (t, C-α′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物5 為3,4′-二羥基-5-甲氧基聯(lián)芐。

化合物6：褐色粉末（甲醇）；ESI-MSm/z: 179[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Acetone-d6)δ: 7.91(1H, d,J= 6.0 Hz, H-2), 6.27 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8),6.17 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 6.08 (1H, d,J= 6.0 Hz,H-3)；13C-NMR (125 MHz, Acetone-d6)δ: 182.0 (s, C-4), 168.0 (s, C-7), 163.1 (s, C-5), 159.4 (d, C-9), 157.0(d, C-2), 111.4 (d, C-3), 105.4 (s, C-10), 100.5 (d, C-6),95.2 (d, C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物6 為5,7-二羥基色原酮。

化合物7：淡黃色羽狀結(jié)晶（丙酮）；ESI-MSm/z:333 [M＋H]+；1H NMR (500 MHz, Acetone-d6)δ: 6.87(2H, s, H-2′, 6′), 5.98 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-8), 5.96 (1H,d,J= 2.2 Hz, H-6), 5.42 (1H, dd,J= 13.1, 3.0 Hz, H-2), 3.86 (6H, s, 3′, 5′-OMe) , 3.23 (1H, dd,J= 17.2,13.1 Hz, H-3a), 2.73 (1H, dd,J= 17.2, 3.0 Hz, H-3b)；13C-NMR (125 MHz, Acetone-d6)δ: 197.3 (s, C-4),167.4 (s, C-7), 165.3 (s, C-5), 164.3 (s, C-9), 148.7 (s,C-3′, 5′), 137.2 (s, C-4′), 130.2 (s, C-1′), 105.3 (d, C-2′,6′), 103.1 (s, C-10), 96.8 (d, C-6), 95.9 (d, C-8), 80.5(d, C-2), 56.7 (q, 3′, 5′-OMe), 43.7 (t, C-3)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，故鑒定化合物 7 為dihydrotricin。

化合物8：棕色針晶（甲醇）；ESI-MSm/z: 273[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 6.80(1H, d,J= 8.1 Hz, H-7), 6.77 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-8),6.46 (1H, d,J= 2.6 Hz, H-1), 6.41 (1H, d,J= 2.6 Hz,H-3), 3.86 (3H, s, 2-OMe), 3.77 (3H, s, 6-OMe), 2.59(4H, m, H-9, 10)；13C NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 161.2 (s, C-2), 155.6 (s, C-4), 148.7 (s, C-5), 143.9(s, C-6), 142.2 (s, C-10a), 133.8 (s, C-8a), 122.2 (d, C-8), 120.1 (s, C-4b), 115.2 (d, C-7), 110.3 (s, C-4a),107.6 (d, C-1), 102.6 (d, C-3), 56.6 (q, 2-OMe), 55.6 (q,6-OMe), 32.4 (t, C-9), 31.4 (t, C-10)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，故鑒定化合物8 為4,5-二羥基-3,7-二甲氧基-9,10-二氫菲。

化合物9：淡黃色粉末（甲醇）；ESI-MSm/z: 259[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 6.80(1H, d,J= 9.0 Hz, H-3), 6.71 (1H, s, H-8), 6.62 (1H, s,H-6), 6.52 (1H, d,J= 9.0 Hz, H-2), 4.01 (3H, s, 5-OMe)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 195.8 (s,C-9), 162.4 (s, C-7), 154.4 (s, C-5), 153.7 (s, C-1),145.1 (s, C-4), 138.2 (s, C-8a), 129.1 (d, C-3), 125.5 (s,C-4a), 122.0 (s, C-4b), 120.2 (d, C-2), 118.3 (s, C-9a),106.3(d, C-6), 106.1 (d, C-8), 57.4 (s, 5-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14]，故鑒定化合物9 為1,4,7-三羥基-5-甲氧基芴酮。

化合物10：無色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:331 [M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:7.02 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.71 (1H, brs, H-2),6.70 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.68 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5), 6.57 (1H, dd,J= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 4.03 (2H,t,J= 6.8 Hz, H-9), 3.82 (3H, s, 3-OMe), 2.80 (2H, t,J= 7.5 Hz, H-7′), 2.55 (4H, m, H-7, 8′), 1.89 ( 2H, m,H-8)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 174.9 (s,C-9′), 156.8 (s, C-4′), 148.8 (s, C-3), 145.6 (s, C-4),134.1 (s, C-1), 132.6 (s, C-1′), 130.2 (d, C-2′, 6′), 121.8(d, C-6) ,116.2 (d, C-3′, 5′), 116.1 (d, C-5), 113.0 (d, C-2), 64.8 (t, C-9), 56.3 (q, 3-OMe), 37.2 (t, C-8′), 32.2 (t,C-7), 31.6 (t, C-8), 31.2 (t, C-7′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物10 為二氫松柏醇二氫對(duì)羥基桂皮酸酯。

化合物11：褐色顆粒（甲醇）；ESI-MSm/z: 275[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 6.95(2H, d,J= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.67 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.37 (2H, s, H-2, 6), 3.77 (6H, s, 3, 5-OMe), 2.77(4H, s, H-α, α′)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ:156.7 (s, C-4′), 149.0 (s, C-3, 5), 134.0 (s, C-1), 130.5(C-1′, 2′, 6′, 4), 115.9 (d, C-3′, 5′), 106.8 (d, C-2, 6),56.6 (s, 3, 5-OMe), 39.5 (t, C-α), 38.5 (s, C-α′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，故鑒定化合物11 為4,4′-二羥基-3,5-二甲氧基聯(lián)芐。

化合物12：無色針晶（甲醇）；ESI-MSm/z: 419[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 6.67(4H, s, H-2′, 6′, 2′′, 6′′), 4.73 (2H, d,J= 4.2 Hz, H-4,8), 4.28 (4H, m, H-2, 6), 3.85 (12H, s, 3, 3′, 5, 5′-OMe),3.15 (2H, m, H-1, 5)；13C-NMR (125 MHz, Methanold4)δ: 149.4 (s, C-3′, 5′, 3′′, 5′′), 136.2 (s, C-4′, 4′′), 133.1(s, C-1′, 1′′), 105.6 (d, C-2′, 6′, 2′′, 6′′), 87.6 (s, C-2, 6),72.7 (t, C-4, 8), 56.8 (q, 3′, 5′, 3′′, 5′′-OMe), 55.5 (d, C-1, 5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]，故鑒定化合物12 為 (＋)-丁香脂。

化合物13：無色針晶（甲醇）；ESI-MSm/z: 387[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 6.96(1H, d,J= 1.9 Hz, H-2), 6.82 (1H, dd,J= 8.2, 1.9 Hz,H-6), 6.77 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-5), 6.66 (2H, s, H-2′,6′), 4.72 (2H, d,J= 4.1 Hz, H-7, 7′), 4.26 (2H, m, H-9,9′), 3.88 (2H, m, H-9, 9′), 3.86 (3H, s, 3-OMe), 3.85(6H, s, 3′, 5′-OMe), 3.16 (2H, m, H-8, 8′)；13C-NMR(125 MHz, Methanol-d4)δ: 149.3 (s, C-3′, 5′), 149.1 (s,C-3), 147.5 (s, C-4), 136.2 (s, C-4′), 133.7 (s, C-1),133.1 (s, C-1′), 120.0 (d, C-6), 116.0 (d, C-5), 110.9 (d,C-2), 104.5 (d, C-2′, 6′), 87.6 (d, C-7), 87.5 (d, C-7′),72.7 (t, C-9), 72.6 (t, C-9′), 56.8 (q, 3′,5′-OMe), 56.4 (q,3-OMe), 55.5 (d, C-8), 55.3 (d, C-8′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[18]，故鑒定化合物13 為 (＋)-杜仲樹脂酚。

化合物14：淡黃色粉末（甲醇）；ESI-MSm/z:269 [M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:7.56 (1H, d,J= 15.8 Hz, H-7′), 7.53 (2H, m, H-2′, 6′ ),7.37 (3H, m, H-3′～5′), 7.06 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2,6), 6.72 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3, 5), 6.58 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8′), 3.48 (2H, t,J= 7.4 Hz, H-8), 2.77 (2H,t,J= 7.4 Hz, H-7)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 168.6 (s, C-9), 157.0 (s, C-4), 141.6 (d, C-7′), 136.3(s, C-1′), 131.2 (s, C-1), 130.8 (d, C-2, 6), 130.7 (d, C-3′, 5′), 129.9 (d, C-4′), 128.8 (d, C-2′, 6′), 121.8 (d, C-8′), 116.2 (d, C-3, 5), 42.5 (t, C-8), 35.7 (t, C-7)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[19]，故鑒定化合物14 為N-反式桂皮酸酰對(duì)羥基苯乙胺。

化合物15：無色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:197 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:7.23 (2H, s, H-2, 6), 3.92 (6H, s, 3, 5-OMe)；13C-NMR(125 MHz, Methanol-d4)δ: 193.1 (s, C-7), 149.7 (s, C-3, 5), 143.4 (s, C-4), 129.3 (s, C-1), 108.4 (d, C-2,6), 56.9 (s, 3, 5-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20]，故鑒定化合物15 為丁香酸。

化合物16：無色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:181 [M-H]-；1H-NMR (400 MHz, Methanol-d4)δ:6.84 (1H, d,J= 7.7 Hz, H-5), 6.70 (1H, d,J=1.9 Hz,H-2), 6.67 (1H, dd,J= 7.7, 1.9 Hz, H-6), 3.86 (3H, s,3-OMe), 3.67 (2H, t,J= 6.3 Hz, H-9), 2.63 (2H, t,J=7.8 Hz, H-7), 1.87 (2H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz,Methanol-d4)δ: 146.3 (s, C-3), 143.6 (s, C-4), 133.6 (s,C-1), 120.8 (d, C-6), 114.2 (d, C-5), 110.9 (d, C-2), 62.5(t, C-9), 55.8 (q, 3-OMe), 34.4 (t, C-7), 31.7 (t, C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[21]，故鑒定化合物16為二氫松柏醇。

化合物17：黃色針晶（甲醇）；ESI-MSm/z: 331[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 7.24(2H, s, H-2′, 6′), 6.65 (1H, s, H-3), 6.48 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-6), 3.95 (6H, s, 3′,5′-OMe)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 183.8(s, C-4), 166.1 (s, C-2), 166.0 (s, C-7), 163.2 (s, C-5),159.4 (s, C-9), 149.6 (s, C-3′, 5′), 140.1 (s, C-4′) ,122.6(s, C-1′), 105.2 (d, C-2′, 6′), 104.5 (s, C-10), 104.5 (d,C-3) 100.1 (d, C-6), 95.1 (d, C-8), 57.0 (q, 3′, 5′-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[22]，故鑒定化合物17為苜蓿素。

化合物18：黃色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:259 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:6.68 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5′), 6.66 (1H, d,J= 2.0 Hz,H-2′), 6.60 (1H, dd,J= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.12 (2H, d,J= 2.2 Hz, H-2, 6), 6.09 (1H, t,J= 2.2 Hz, H-4), 3.78(3H, s, 3′-OMe), 2.74 (4H, m, H-α, α′)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 159.1 (s, C-3, 5), 148.5 (s, C-3′),145.3 (s, C-1, 4′), 134.6 (s, C-1′), 121.6 (s, C-6′),115.8(d, C-5′), 113.1 (d, C-2′), 107.9 (d, C-2, 6), 100.9 (d, C-4), 39.3 (t, C-α), 38.3 (t, C-α′), 56.1 (q, 3′-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[23]，故鑒定化合物18 為3,5,4′-三羥基-3′-甲氧基聯(lián)芐。

化合物19：淡黃色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:389 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:7.01 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.86 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2), 6.76 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5), 6.68 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.65 (1H, dd,J= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 4.14 (1H, d,J= 6.4 Hz, H-7), 3.99 (1H, dd,J= 11.0,3.4 Hz, H-9β), 3.82 (3H, s, 3-OMe), 3.81(1H, m, H-8),3.78 (1H, dd,J= 11.0, 5.9 Hz, H-9α), 3.39 (2H, m, H-10), 2.79 (2H, t,J= 7.5 Hz, H-7′), 2.56 (2H, t,J= 7.5 Hz, H-8′), 1.15 (3H, td,J= 7.0, 1.0 Hz, H-11)；13CNMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 174.6 (s, C-9′), 156.8(s, C-4′), 149.1 (s, C-3), 147.5 (s, C-4), 132.7 (s, C-1′),131.5 (s, C-1), 130.2 (d, C-2′, 6′), 121.4 (d, C-6), 116.2(s, C-3′, 5′), 116.0 (d, C-5), 111.7 (d, C-2), 83.8 (d, C-7), 74.1 (d, C-8), 66.4 (t, C-9), 65.2 (t, C-10), 56.3 (q,3-OMe), 37.0 (t, C-8′), 31.0 (t, C-7′), 15.5 (q, C-11)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[24]，故鑒定化合物19為threo-7-O-ethyl-9-O-(4-hydroxyphenyl) propionylguaiacylglycerol。

化合物20：黃色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:357 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:9.59 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-9′), 7.63 (1H, d,J= 15.7 Hz,H-7′), 7.30 (1H, s, H-6′), 7.24 (1H, d,J= 1.6 Hz, H-2′),6.95 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2), 6.84 (1H, dd,J= 8.2, 2.0 Hz, H-6), 6.79 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-5), 6.70 (1H, dd,J= 15.7, 7.8 Hz, H-8′), 5.62 (1H, d,J= 6.4 Hz, H-7),3.92 (3H, s, 3′-OMe), 3.86 (2H, m, H-9), 3.82 (3H, s, 3-OMe ), 3.57 (1H, q,J= 6.1 Hz, H-8)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 196.0 (d, C-9′), 155.9 (d, C-7′),152.8 (s, C-4′), 133.7 (s, C-5′), 131.1 (s, C-1), 129.4 (s,C-1′), 126.9 (d, C-8′), 119.8 (d, C-6), 119.6 (d, C-6′),116.1 (d, C-5), 114.1 (d, C-2′), 110.4 (d, C-2), 89.9 (d,C-7), 64.4 (t, C-9), 56.6 (q, 3′-OMe), 56.2 (q, 3-OMe),54.5 (d, C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[25]，故鑒定化合物20 為balanophonin。

化合物21：黃色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:197 [M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:7.57 (1H, dd,J= 8.3, 2.1 Hz, H-6), 7.53 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-2), 6.83 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5), 3.94 (2H, t,J=6.2 Hz, H-9), 3.90 (3H, s, 3-OMe), 3.16 (2H, t,J= 6.3 Hz, H-8)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 199.6(s, C-7), 155.2 (s, C-3), 149.5 (s, C-4), 129.7 (s, C-1),125.0 (d, C-6), 116.1 (d, C-5), 111.7 (d, C-2), 59.0 (t,C-9), 56.2 (s, 3-OMe), 41.6 (t, C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[26]，故鑒定化合物21 為ω-hydroxypropioguaiacone。

化合物22：白色粉末（甲醇）；ESI-MSm/z: 123[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 9.75(1H, s, H-7), 7.77 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3, 5), 6.90 (2H,d,J= 8.5 Hz, H-2, 6)；13C-NMR (125 MHz, Methanold4)δ: 193.2 (d, C-7), 165.8 (s, C-1), 133.5 (d, C-3, 5),130.0 (s, C-4), 117.0 (d, C-2, 6)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[27]，故鑒定化合物22 為對(duì)羥基苯甲醛。

化合物23：淡黃色針晶（甲醇）；ESI-MSm/z:331 [M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:7.32 (2H, s, H-2, 6), 3.95 (2H, t,J= 6.2 Hz, H-9), 3.90(6H, s, 3, 5-OMe), 3.18 (2H, t,J= 6.2 Hz, H-8)；13CNMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 199.7 (s, C-7), 149.1(s, C-3, 5), 142.5 (s, C-4), 129.0 (s, C-1), 107.2 (d, C-2,6), 58.9 (t, C-9), 56.8 (q, 3, 5-OMe), 41.6 (t, C-8)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[28]，故鑒定化合物23 為3-hydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) propan-1-one。

化合物24 和25：無色針晶（氯仿）；ESI-MSm/z: 357 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 7.10(2H, d,J= 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (2H, d,J= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 6.67 (2H, s, H-2′′, 6′′), 6.51 (1H, brs, H-2), 5.61(1H, brs, H-6), 4.95 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-7′′), 3.99 (1H,m, H-8′′), 3.91 (6H, s, 3′′, 5′′-OMe), 3.85 (3H, s, 5-OMe), 3.79 (1H, s, 4′-OMe), 3.56 (1H, dd,J= 12.0, 3.0 Hz, H-9′′), 2.82 (4H, m, H-α, α′)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3)δ: 158.0 (s, C-4′), 148.5 (s, C-5), 147.4 (s, C-5′′), 144.2 (s, C-3), 135.4 (s, C-1), 134.6 (s, C-4′′), 133.9(s, C-1′), 131.14 (s, C-4), 129.51 (d, C-6′), 127.48 (s, C-1′′), 113.90 (d, C-3′, 5′), 109.6 (d, C-2), 104.9 (d, C-2′′),104.2 (d, C-6′′), 78.4 (d, C-8′), 61.7 (t, C-9′′), 56.5 (q, 3′,5′′-OMe), 56.2 (q, 5-OMe), 55.4 (q, 4′-OMe), 38.1 (t, Cα), 37.1 (t, C-α′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[29]，故化合物24 和25 的混合物鑒定為鐵皮石斛素B，X-ray單晶衍射（圖1）確定了化合物24 和25 為1 對(duì)外消旋體，-0.67° (c0.17, MeOH)，絕對(duì)構(gòu)型分別為2S,3S和2R, 3R。經(jīng)手性拆分后得到化合物24 和25。

圖1 化合物24 和25 的化學(xué)結(jié)構(gòu)和X 射線單晶衍射圖Fig.1 Chemical structures and X-ray single crystal diffraction patterns of compounds 24 and 25

化合物26：白色粉末（氯仿）；ESI-MSm/z: 483[M＋H]+；1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 7.25 (2H, d,J= 8.3 Hz, H-8, 12), 7.16 (2H, s, H-3′, 5′), 6.98 (2H, d,J= 8.3 Hz, H-9, 11), 6.84 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-5), 6.63(1H, d,J= 1.9 Hz, H-3), 5.50 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-7′),4.35 (1H, m, H-8′), 4.26 (1H, d,J= 12.7 Hz, H-9′a),3.93 (1H, dd,J= 12.7, 3.5 Hz, H-9′b), 3.85 (3H, s, 2-OMe), 3.81 (6H, d,J= 1.0 Hz, 2′, 6′-OMe), 3.67 (3H,s, 11-OMe), 2.96 (4H, m, H-13, 14)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 158.8 (s, C-10), 150.5 (s, C-2), 149.7(s, C-2′, 6′), 145.5 (s, C-6), 138.5 (s, C-1′), 134.7 (s, C-7), 134.6 (s, C-4), 132.9 (s, C-1), 130.2 (d, C-8, 12),128.0 (s, C-4′), 114.6 (d, C-9, 11), 110.4 (d, C-5), 106.4(d, C-3′, 5′), 105.9 (d, C-3), 80.1 (d, C-8′), 61.7 (t, C-9′), 56.7 (q, 2′, 6′-OMe), 56.2 (q, 2-OMe), 55.4 (q, 10-OMe), 38.5 (t, C-13), 37.6 (t, C-14)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[30]，故鑒定化合物26 為dendrowillol A。

化合物27：淡黃色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:151 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:9.76 (1H, s, H-7), 7.45 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-2), 7.43(1H, dd,J= 7.9, 1.9 Hz, H-6), 6.95 (1H, d,J= 7.9 Hz,H-5), 3.93 (3H, s, 7-OMe)；13C-NMR (125 MHz,Methanol-d4)δ: 193.0 (d, C-7), 154.9 (s, C-4), 149.8 (s,C-3), 130.8 (s, C-1), 128.1 (s, C-6), 111.4 (d, C-2, 5),56.5 (q, 7-OMe)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[31]，故鑒定化合物27 為香草醛。

化合物28：黃色油狀物（甲醇）；ESI-MSm/z:179 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ:7.01 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2, 6), 6.69 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3, 5), 3.64 (3H, s, 4-OMe), 2.82 (2H, t,J= 7.6 Hz, H-7), 2.57 (2H, t,J= 7.6 Hz, H-8)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 175.3 (s, C-9), 156.8 (s, C-4),132.7 (s, C-1), 130.2 (d, C-2, 6), 116.2 (d, C-3, 5), 51.8(q, 4-OMe), 37.0 (t, C-8), 31.1 (t, C-7)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[32]，故鑒定化合物28 為dihydro-pcinnamic acid。

化合物29：白色粉末（甲醇）；ESI-MSm/z: 313[M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 7.43(1H, d,J= 15.6 Hz, H-7), 7.11 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2), 7.05 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 7.02 (1H, dd,J=8.4, 2.0 Hz, H-6), 6.79 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-5), 6.71(2H, d,J= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.40 (1H, d,J= 15.6 Hz,H-8), 3.87 (3H, s, 3-OMe), 3.46 (2H, t,J= 7.4 Hz, H-1′′), 2.75 (2H, t,J= 7.4 Hz, H-2′′)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 169.2 (s, C-9), 156.9 (s, C-4′),149.8 (s, C-4), 149.3 (s, C-3), 142.0 (d, C-7), 131.3 (s,C-1′), 130.7 (d, C-2′), 128.2 (s, C-1), 123.2 (d, C-6),118.7 (d, C-8), 116.4 (d, C-5), 116.2 (d, C-3′), 111.5 (d,C-2), 56.3 (q, 3-OMe), 42.5 (t, C-1′′), 35.7 (t, C-2′′)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[33]，故鑒定化合物29為p-hydroxyphenethyltrans-ferulate。

化合物30：無色針晶（甲醇）；ESI-MSm/z: 137[M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 7.85(2H, d,J= 8.7 Hz, H-2, 6), 6.80 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ: 170.1 (s,COOH), 163.3 (s, C-4), 133.0 (d, C-2, 6), 122.6 (s, C-1), 116.0 (d, C-3, 5)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[34]，故鑒定化合物30 為對(duì)羥基苯甲酸。

化合物31：無色針晶（甲醇）；ESI-MSm/z: 163[M-H]-；1H-NMR (500 MHz, Methanol-d4)δ: 7.59(1H, d,J= 16.0 Hz, H-8), 7.44 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-2,6), 6.81 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-3, 5), 6.27 (1H, d,J=12.6 Hz, H-7)；13C-NMR (125 MHz, Methanol-d4)δ:146.6 (s, C-1), 131.2 (d, C-2, 6), 116.9 (d, C-3, 5), 161.1(s, C-4), 127.5 (d, C-7), 115.9 (d, C-8), 171.4 (s, C-9)。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[35]，故鑒定化合物31為反式對(duì)羥基肉桂酸。

4 討論

本研究從大苞鞘石斛莖95%乙醇提取物中分離鑒定了31 個(gè)酚類化合物，化合物5、6、14、19、24、26、29、31 首次從大苞鞘石斛中分離得到，類型涉及聯(lián)芐、菲、黃酮、苯丙素、芴酮類等，均為藥用石斛的特征性成分。石斛屬植物是聯(lián)芐類化合物的重要來源，相關(guān)研究表明石斛聯(lián)芐類化合物具有抗衰老的活性并且是通過活性氧（reactive oxygen species，ROS）介導(dǎo)的含錳離子的超氧化物歧化酶/去乙酰化酶3（Mn-SOD/SIRT3）途徑實(shí)現(xiàn)的[36]，Charoenrungruang 等[37]研究發(fā)現(xiàn)石斛聯(lián)芐類化合物具有通過線粒體依賴性途徑誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡的能力。石斛屬植物中的菲類化學(xué)成分具有顯著的抗炎和抗腫瘤活性，在白血病、乳腺癌、肺癌等疾病的治療方面有著較好的應(yīng)用潛力[5,38]。邵尉[39]研究發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛花、葉、莖中均富含黃酮類成分且有較好的抗氧化活性。由此說明大苞鞘石斛也有一定的藥用研究?jī)r(jià)值。本研究結(jié)果進(jìn)一步闡明了大苞鞘石斛的化學(xué)成分，為其藥用價(jià)值的研究提供了基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突