大苞藤黃葉化學(xué)成分研究

梅 貴，陸正陽(yáng)，谷英姿，石 可，熊 慧，陳 玉，楊光忠,

1. 中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430074

2. 中南民族大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430074

3. 國(guó)家中醫(yī)藥管理局民族藥學(xué)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430074

大苞藤黃GarciniabracteataC. Y. Wu ex Y. H.Li，又稱為花皮樹(shù)、萬(wàn)年果（云南麻栗坡），為藤黃科（Guttiferae）藤黃屬GarciniaL.植物，主要分布于中國(guó)云南南部至廣西南部，生于海拔400～1 300 m 的石灰山雜林中。藤黃屬植物用于治療多種疾病，如炎癥、氧化應(yīng)激、微生物感染和癌癥。大苞藤黃果實(shí)可食用且具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，富含維生素、蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分[1-2]。近年來(lái)，通過(guò)對(duì)其莖皮[3]、葉[3-7]、枝干[2,8-11]及果實(shí)[11-12]的植物化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)該植物含有多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物（polycyclic polyprenylated acylphloroglucinols，PPAPs）、二苯甲酮衍生物、酮、黃酮、三萜、甾體、聯(lián)苯等多種結(jié)構(gòu)類型的化學(xué)成分，其中酮和PPAPs 是其特征及活性成分。課題組前期從大苞藤黃果實(shí)中分離出一系列結(jié)構(gòu)新穎的PPAPs和酮類化合物，并展現(xiàn)出抗腫瘤、抗炎和降血糖等多種生物活性[13-16]。為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)藥用植物的可持續(xù)利用和發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，本研究對(duì)大苞藤黃葉的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，采用正、反相硅膠柱色譜及半制備高效液相色譜等多種分離技術(shù)進(jìn)行分離純化，并通過(guò)波譜學(xué)數(shù)據(jù)和量子化學(xué)的計(jì)算鑒定化合物結(jié)構(gòu)。從大苞藤黃葉醋酸乙酯提取物中分離得到了12 個(gè)化合物（圖1），分別鑒定為1,3,5-三羥基-5,6,7,8- 四氫酮（ 1,3,5-trihydroxy-5,6,7,8-tetrahydroxanthone，1）、1,3-二羥基-5-羰基-5,6,7,8-四氫酮（1,3-dihydroxy-5-oxo-5,6,7,8-tetrahydroxanthone，2）、1,3,5,6-四羥基-8-異戊烯基縮酚酸環(huán)醚（1,3,5,6-tetrahydroxy-8-prenyl-depsidone，3）、松脂醇（pinoresinol，4）、對(duì)羥基苯丙烯酸[3-(4-hydroxyphenyl) acrylic acid，5]、3-甲氧基-4,4',5-三醇聯(lián)苯（[1,1'-biphenyl]-3-methoxy-4,4',5-triol，6）、(2S)-2,9-巨豆二羥基-6-烯-1-酮 [(2S)-2,9-dihydroxymegastigm-6-en-1-one，7]、(2R)-2,9-巨豆二羥基-6-烯-1-酮 [(2R)-2,9-dihydroxy-megastigm-6-en-1-one，8]、(5Z)-9-羥基-1,5-巨豆二烯-2-酮 [(5Z)-9-hydroxy-1,5-megastigmadien-2-one，9]、2-氧代-α-紫羅蘭醇（2-oxo-α-ionol，10）、黑麥草內(nèi)酯（loliolide，11）、gardeterpenone A（12）?；衔?、2 為新的酮類化合物，化合物3 為新的縮酚酸類化合物，命名為為大苞藤黃甲素、大苞藤黃乙素和大苞藤黃丙素（garbractinones A～C）；化合物7～10 為降倍半萜類化合物，化合物11～12 為單萜類化合物，均是首次從大苞藤黃葉中分離得到。CCK-8 實(shí)驗(yàn)表明，所有化合物（50 μmol/L）對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549 細(xì)胞沒(méi)有表現(xiàn)明顯的抗增殖活性，其抑制率小于50%。

圖1 化合物1～12 的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1—12

1 儀器與材料

AM-500/600 型核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker公司）；Ultimate 3000 半制備型高效液相色譜儀（美國(guó)戴安公司，VWD，DAD 檢測(cè)器）；半制備型色譜柱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm）；AX224ZH/E 型電子天平（奧豪斯儀器常州有限公司）；柱色譜硅膠（200～300、300～400 目，青島海洋化工廠）；石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、乙醇、甲醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）；甲醇（色譜級(jí)，Sigma 公司）；乙腈（色譜級(jí)，中國(guó)昌泰興業(yè)有限公司）；ZF1-II 紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）；UH5300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日立高新技術(shù)公司）；Autopo1IV-T 全自動(dòng)數(shù)字旋光儀（美國(guó)魯?shù)婪蚬荆籆hirascan Plus 圓二色譜儀（美國(guó)應(yīng)用光物理公司）；Q Exactive 高分辨質(zhì)譜儀（賽默飛世爾科技有限公司）。高糖培養(yǎng)基（DMEM，美國(guó)Gibco 公司）；0.25%胰酶-EDTA 消化液（美國(guó)Gibco 公司）；磷酸鹽緩沖液（PBS，美國(guó)Gibco 公司）；胎牛血清（FBS，杭州四季青生物科技有限公司）；青-鏈霉素混合液（雙抗，美國(guó)Gibco 公司）；二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO，北京索萊寶科技有限公司）；SP-MAX3500FL 多功能酶標(biāo)儀（上海閃譜生物科技有限公司）；紫杉醇（貨號(hào)B21695，上海源葉生物科技有限公司）；冬凌草甲素（自制，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%）。

大苞藤黃葉于2021 年9 月采集于云南省文山州西疇縣，由中南民族大學(xué)藥學(xué)院劉新橋教授鑒定為藤黃科藤黃屬植物大苞藤黃G.bracteataC. Y. Wu ex Y. H. Li 的葉，植物標(biāo)本（20210901）保存于中南民族大學(xué)藥學(xué)院藥用植物標(biāo)本室。

2 方法

2.1 提取與分離

取干燥的大苞藤黃葉20.0 kg，粉碎成粗粉，將粗粉置于95%乙醇中浸泡，室溫提取3 次，每次24 h。將浸提液進(jìn)行減壓抽濾，合并濾液濃縮干燥，得到乙醇浸膏2.29 kg。將上述浸膏用10%甲醇-水溶解，再依次用石油醚、醋酸乙酯萃取3 次，濃縮、干燥后得到醋酸乙酯提取物0.43 kg。取醋酸乙酯粗提物0.3 kg，用硅膠（200～300 目）柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-醋酸乙酯（10∶1、8∶2、7∶3、6∶4、1∶1、3∶7、0∶1）為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并所得的組分，最后得到13 個(gè)組分（A～M）。將H 組分（14.27 g）用反相硅膠柱色譜進(jìn)行分離，用30%、50%、60%、70%、80%、100%水-甲醇依次洗脫后，TLC 檢測(cè)合并所得的組分，最后得到10個(gè)組分（H.01～H.10）。再將其中的H.02 和H.03 組分合并過(guò)正相硅膠柱，以石油醚-醋酸乙酯（10∶1、6∶1、8∶2、7∶3、6∶4、1∶1、0∶1）為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，得到19 個(gè)組分（H0203-01～H0203-19）。將組分H0203-10 通過(guò)高效液相色譜（DAD 檢測(cè)器，乙腈-水24∶76）分離純化，得到化合物7（1.23 mg，tR＝17.1 min）、8（1.12 mg，tR＝17.8 min）、5（68.36 mg，tR＝13.5 min）、11（9.15 mg，tR＝26.4 min）和6（4.83 mg，tR＝28.6 min）。將組分H0203-13 通過(guò)高效液相色譜（乙腈-水27∶73）分離純化，得到化合物3（10.18 mg，tR＝96.1 min）和4（10.37 mg，tR＝29.3 min）。將組分H0203-14 通過(guò)高效液相色譜（乙腈-水25∶75）分離純化，得到化合物1（18.9 mg，tR＝22.9 min）。將組分H0203-12 通過(guò)高效液相色譜（乙腈-水22∶78）分離純化，得到化合物10（1.4 mg，tR＝50.1 min）和9（4.18 mg，tR＝27.5 min）。將組分H0203-7 通過(guò)高效液相色譜（乙腈-水27∶73）分離純化，得到化合物2（11.9 mg，41.2min）和12（4.2 mg，tR＝14.0 min）。

2.2 抗增殖活性測(cè)試

采用CCK-8 法測(cè)定化合物體外抑制A549 細(xì)胞增殖活性[17]。以化合物1～12 為實(shí)驗(yàn)組，紫杉醇和冬凌草甲素為陽(yáng)性對(duì)照組，同時(shí)設(shè)對(duì)照組（等體積的不含細(xì)胞空白培養(yǎng)基）和空白組（等體積的含10%CCK-8 培養(yǎng)基）。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549 細(xì)胞，以5×103個(gè)/孔密度接種于96 孔板培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁后給藥，每孔加入濃度為50 μmol/L 的受試化合物（1～12）100 μL 于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h，然后，吸棄各培養(yǎng)孔上清液，向每孔加入100 μL含10% CCK-8 工作液的培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2中繼續(xù)培養(yǎng)1 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在450 nm處的吸光度（A）值。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3 次，各組分別設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。根據(jù)測(cè)得的A值計(jì)算抑制率。

抑制率＝(A對(duì)照-A實(shí)驗(yàn))/(A對(duì)照-A空白)

3 結(jié)果與分析

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

表1 化合物1 和2 的1H-NMR 和13C-NMR 數(shù)據(jù)Table 1 1 H-NMR and 13C-NMR data of compounds 1—2

圖4 化合物1 的實(shí)驗(yàn)ECD 和計(jì)算ECD 圖譜Fig.4 Experimental and calculated ECD spectra of compound 1

化合物2：黃色粉末，由HR-ESI-MSm/z:247.060 12 [M＋H]+（C13H11O5+，計(jì)算值247.061 01），結(jié)合13C-NMR 及DEPT 135 數(shù)據(jù)確定該化合物的分子式為C13H10O5，不飽和度為9。同化合物1 相比，多1 個(gè)飽和度，比較2 個(gè)化合物的NMR 數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)化合物2 比化合物1 多1 個(gè)共軛羰基的信號(hào)δC192.4 (s)，而少1 個(gè)連氧次甲基的信號(hào)，說(shuō)明化合物2 為化合物1 的5-OH 氧化成羰基，HMBC 圖譜中H-6 (δH3.12) 與δC150.5 (C-5a), 192.4 (C-5) 相關(guān)，H-8 (δH2.96) 與δC128.5 (C-8a), 182.1 (C-9),δC150.5(C-5a) 相關(guān)證實(shí)了上述推斷，因而，化合物2 的結(jié)構(gòu)鑒定為1,3-二羥基-5-羰基-5,6,7,8-四氫酮。

化合物3：橙黃色無(wú)定型粉末，由HR-ESI-MSm/z: 345.096 86 [M＋H]+（C18H17O7+，計(jì)算值345.096 88），結(jié)合13C-NMR 及DEPT 數(shù)據(jù)確定該化合物的分子式為C18H16O7，不飽和度為11。1HNMR 圖譜（表2）顯示有1 對(duì)苯環(huán)間位偶合的芳香質(zhì)子信號(hào) [δH6.18 (1H ,d,J= 3.0 Hz ), 6.40 ( 1H , d,J= 3.0 Hz )]，1 個(gè)孤立的芳香質(zhì)子信號(hào)δH6.57 (1H,s)，2 個(gè)單峰甲基信號(hào) [δH1.70 (3H, s)；1.66 (3H, s)]，1 個(gè)亞甲基信號(hào) [δH3.40 (2H, d,J= 7.0 Hz)]，1 個(gè)雙鍵質(zhì)子信號(hào) [δH5.19 (1H, t,J= 7.5 Hz)]。由13C-NMR和DEPT-135 圖譜可知存在1 個(gè)共軛酯羰基 [δC166.5 (s)]，1 個(gè)異戊烯基 [δC32.7 (t), 124.5 (d), 134.0(s), 18.1 (q), 26.1 (q)]，3 個(gè)sp2雜化的次甲基 [δC102.0 (d), 100.5 (d), 115.2 (d)]，9 個(gè)非質(zhì)子化的碳[150.2 (s), 156.5 (s), 154.6 (s), 151.4 (s), 135.4 (s),151.7 (s), 138.2 (s), 113.5 (s), 127.8 (s)]，綜合以上數(shù)據(jù)，推測(cè)該化合物結(jié)構(gòu)類型為縮酚酸環(huán)醚，帶有4個(gè)羥基和1 個(gè)異戊烯基[19]。A 環(huán)的羥基取代的模式同化合物1 一致，HMBC 證實(shí)了上述推斷。HMBC圖譜中H-7 (δH6.57) 與δC151.7 (C-6), 135.4 (C-5),113.5 (C-8a) 相關(guān)，H2-11 (δH3.40) 與δC113.5 (C-8a), 115.2 (C-7), 138.2 (C-8) 相關(guān)，說(shuō)明剩余的2 個(gè)羥基分別連在C-5 和C-6 位，異戊烯基連在C-8。綜上所述，鑒定化合物3 的結(jié)構(gòu)為1,3,5,6-四羥基-8-異戊烯基縮酚酸環(huán)醚。

表2 化合物3 的1H-NMR 和13C-NMR 數(shù)據(jù) (500/125 MHz, CD3OD)Table 2 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 3(500/125 MHz, CD3OD)

化合物4：白色粉末，分子式為C20H22O6。1HNMR (500 MHz, CD3OD)δ: 6.94 (2H, d,J= 2.0 Hz,H-2, 2'), 6.76 (2H, d,J= 8.0 Hz, H-5, 5'), 6.80 (2H, dd,J= 8.5, 2.0 Hz, H-6, 6'), 4.69 (2H, d,J= 4.5 Hz, H-7,7'), 3.13 (2H, m, H-8, 8'), 4.22 (2H, dd,J= 9.0, 7.0 Hz,H-9a, 9'a), 3.82 (2H, m, H-9b, 9'b), 3.84 (6H, s, 3, 3'-OMe)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 134.0 (C-1,1'), 111.1 (C-2, 2'), 149.3 (C-3, 3'), 147.5 (C-4, 4'),116.3 (C-5, 5'), 120.3 (C-6, 6'), 87.2 (C-7, 7'), 55.6 (C-8, 8'), 72.8 (C-9, 9'), 56.6 (3', 3-OMe)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，故鑒定化合物4 為松脂醇。

化合物5：白色粉末，分子式為C9H8O3。1HNMR (500 MHz, CD3OD)δ: 6.28 (1H, d,J= 16.0 Hz,H-2), 7.60 (1H, d,J= 16.0 Hz, H-3), 7.45 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2', 6'), 6.81 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-3', 5')；13CNMR (125 MHz, CD3OD)δ: 171.3 (C-1), 115.7 (C-2),146.8 (C-3), 127.3 (C-1'), 131.2 (C-2'), 116.9 (C-3'),161.2 (C-4'), 116.9 (C-5'), 131.2 (C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[21]，故鑒定化合物5 為對(duì)羥基苯丙烯酸。

化合物6：黃色粉末，分子式為C13H12O4。1HNMR (500 MHz, CD3OD)δ: 6.63 (1H, s, H-2, 6), 7.34(1H, d,J= 8.5 Hz, H-2', 6'), 6.79 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-3', 5')；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 134.0 (C-1),103.3 (C-2), 150.1 (C-3), 134.5 (C-4), 147.0 (C-5),108.4 (C-6), 134.5 (C-1'), 128.8 (C-2'), 116.6 (C-3'),157.7 (C-4'), 116.6 (C-5'), 128.8 (C-6'), 56.9 (3-OMe),以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[22]，故鑒定化合物6為3-甲氧基-4,4',5-三羥基聯(lián)苯。

化合物7：白色固體，分子式C13H22O3。-36(c0.05, MeOH)，ECD (2.02×10-3M, MeOH)λ(θ)210 (＋4.76), 250 (-9.72), 311 (＋1.06) nm；1H-NMR(500 MHz, CD3OD)δ: 4.28 (1H, dd,J= 14.0, 5.5 Hz,H-2), 2.03 (1H, dd,J= 12.5, 5.5 Hz, H-3a), 1.74 (1H,t,J= 13.5 Hz, H-3b), 2.30 (1H, m, H-7a), 2.40 (1H, m,H-7b), 1.56 (2H, m, H-8), 3.79 (1H, m, H-9 ), 1.21 (3H,d,J= 6.0 Hz, CH3-10), 1.28 (3H, s, CH3-11), 1.22 (3H,s, CH3-12), 1.80 (3H, s, CH3-13)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD)δ: 201.6 (C-1), 70.6 (C-2), 47.2 (C-3), 39.0 (C-4), 167.1(C-5), 129.9 (C-6), 28.2 (C-7), 39.1 (C-8), 69.1(C-9), 23.4 (C-10), 25.9 (C-11), 30.2 (C-12), 12.1 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[23]，結(jié)合CD 圖譜，鑒定化合物7 為 (2S)-2,9-巨豆二羥基-6-烯-1-酮。

化合物8：白色固體，分子式C13H22O3。＋28° (c0.05，MeOH)。ECD (2.02×10-3M, MeOH)λ(θ) 210 (-4.85), 250 (＋9.00), 320 (-9.22) nm；1HNMR (500 MHz, CD3OD)δ: 4.28 (1H, dd,J= 14.0, 5.5 Hz, H-2), 2.20 (1H, dd,J= 12.5, 5.5 Hz, H-3a), 1.75(1H, t,J= 13.0 Hz, H-3b), 2.51 (1H, m, H-7a), 2.19(1H, m, H-7b), 1.56 (2H, m, H-8), 3.79 (1H, m, H-9),1.20 (3H, d,J= 6.5 Hz, CH3-10), 1.28 (3H, s, CH3-11),1.21 (3H, s, CH3-12), 1.80 (3H, s, CH3-13)；13C-NMR(125 MHz, CD3OD)δ: 201.6 (C-1), 70.6 (C-2), 47.2 (C-3), 39.0 (C-4), 167.1 (C-5), 129.9 (C-6), 28.2 (C-7),39.1 (C-8), 69.0 (C-9), 23.5 (C-10), 26.0 (C-11), 30.1 (C-12), 12.1 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[23]，結(jié)合CD 圖譜，故鑒定化合物8 為 (2R)-2,9-巨豆二羥基-6-烯-1-酮。

化合物 9：黃色無(wú)定型粉末，分子式為C13H20O2。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 5.89 (1H,s, H-1), 2.35 (2H, s, H-3), 6.23 (1H, t,J= 7.0 Hz, H-7),2.61 (2H, t,J= 6.5 Hz, H-8), 3.89 (1H, m, H-9), 1.23(3H, d,J= 6.0 Hz, CH3-10), 1.31 (3H, s, CH3-11), 1.30(3H, s, CH3-12), 2.12 (3H, d,J= 1.0 Hz, CH3-13)；13CNMR (125 MHz, CD3OD)δ: 134.8 (C-1), 202.3 (C-2),54.8 (C-3), 39.5 (C-4), 158.9 (C-5), 143.9 (C-6), 125.9(C-7), 40.6 (C-8), 68.8 (C-9), 23.6 (C-10), 29.5 (C-11),29.5 (C-12), 22.8 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[24]，故鑒定化合物9 為 (5Z)-9-羥基-1,5-巨豆二烯-2-酮。

化合物10：黃色固體，分子式為C13H20O2。1HNMR (600 MHz, CD3OD)δ: 5.88 (1H, brs, H-1), 2.42(1H, d,J= 16.8 Hz, H-3a), 2.05 (2H, d,J= 16.8 Hz, H-3b), 2.66 (1H, d,J= 9.6 Hz, H-5), 5.58 (1H, ddd,J=15.6, 9.0, 1.2 Hz, H-7), 5.68 (1H, dd,J= 15.0, 6.0 Hz,H-8), 4.28 (1H, m, H-9), 1.24 (3H, d,J= 6.6 Hz, CH3-10), 0.98 (3H, s, CH3-11), 1.03 (3H, s, CH3-12), 1.96(3H, d,J= 1.8 Hz, CH3-13)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 126.3 (C-1), 202.3 (C-2), 48.5 (C-3), 37.3(C-4), 56.9 (C-5), 166.3 (C-6), 127.6 (C-7), 140.4 (C-8), 69.0 (C-9), 24.0 (C-10), 28.2 (C-11), 27.6 (C-12),24.0 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[25]，故鑒定化合物10 為2-氧代-α-紫羅蘭醇。

化合物11：淡黃色粉末，分子式為C11H16O3。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 2.41 (1H, td,J= 2.5,13.5 Hz, H-1a), 1.72 (1H, dd,J= 4.0, 13.5 Hz, H-1b),4.21 (1H, m, H-2), 1.98 (1H, td,J= 2.5, 14.5 Hz, H-3a), 1.52 (1H, dd,J= 4.0, 14.5 Hz, H-3b), 5.74 (1H, s,H-7), 1.46 (3H, s, CH3-9), 1.27 (3H, s, CH3-10), 1.75(3H, s, CH3-11)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 46.6(C-1), 67.4 (C-2), 48.2 (C-3), 37.4 (C-4), 185.9 (C-5),89.2 (C-6), 113.5 (C-7), 174.6 (C-8), 27.1 (C-9), 31.2 (C-10), 27.6 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[26]，故鑒定化合物11 為黑麥草內(nèi)酯。

化合物 12：黃色無(wú)定型粉末，分子式為C10H14O2。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 2.39 (2H,s, H-5), 6.21 (1H, s, H-6), 4.44 (2H, d,J= 1.2 Hz, H-7), 5.43 (1H, d ,J= 1.2 Hz, H-8a), 5.46 (1H, s, H-8b),1.21 (6H, s, CH3-9, 10)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 202.1 (C-1), 159.0 (C-2), 150.4 (C-3), 40.1 (C-4),53.2 (C-5), 124.0 (C-6), 62.1 (C-7), 114.1 (C-8), 28.7(C-9, 10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[27]，故鑒定化合物12 為gardeterpenone A。

3.2 抗增殖活性測(cè)試結(jié)果

采用CCK-8 方法，以冬凌草甲素和紫杉醇為陽(yáng)性藥，測(cè)試所有分離的化合物對(duì)A549 細(xì)胞體外抗增殖的活性，結(jié)果表明，在50 μmol/L 下，所有化合物對(duì)A549 細(xì)胞沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的抗增殖活性，其抑制率小于50%，而陽(yáng)性藥冬凌草甲素（50 μmol/L）和紫杉醇（10 μmol/L）的抑制率分別為97.83%和74.77%。

4 討論

本研究從大苞藤黃葉醋酸乙酯提取物中分離得到了12 個(gè)化合物，其結(jié)構(gòu)類型涉及到酚類（1～6）和萜類化合物（7～12）。酚類化合物包括2 個(gè)新的四氫酮和1 個(gè)縮酚酸環(huán)醚類化合物，為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)的新結(jié)構(gòu)類型，萜類化合物包括降倍半萜類和單萜，均是首次從該植物中分離得到，這些發(fā)現(xiàn)豐富了大苞藤黃化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類型。盡管本研究在進(jìn)行抗增殖活性的篩選中，并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)所分離的化合物具有明顯的抗增殖活性，結(jié)合前期文獻(xiàn)報(bào)道[5]，大苞藤黃葉發(fā)揮抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)可能是酮（包括異戊烯基和籠狀酮），但這些化合物在抗炎和降血糖方面的生物活性值得進(jìn)一步挖掘。研究成果為深入研究大苞藤黃葉的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)奠定了基礎(chǔ)，也為這一藥用植物資源的合理開(kāi)發(fā)及可持續(xù)利用提供了科學(xué)依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突