連翹苷調(diào)節(jié)NLRP3炎性通路對急性胸膜炎大鼠肺損傷的影響

郝建玲 信婧婧 王靖 田紅 蘇海濤

摘要：目的 探討連翹苷通過調(diào)節(jié)NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NLRP3）炎性通路對急性胸膜炎大鼠滲出液和肺損傷的影響。方法 將90只大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法均分為對照組、模型組、連翹苷低劑量（PH-L，5 mg/kg）組、連翹苷中劑量（PH-M，10 mg/kg）組、連翹苷高劑量（PH- H，20 mg/kg）組及NLRP3通路抑制劑（PJ34，10 mg/kg）組。肺功能分析儀檢測大鼠用力肺活量（FVC）、第0.1秒用力呼氣量（FEV 0.1）、第0.3秒用力呼氣量（FEV 0.3）；電子天平稱量胸腔滲出物質(zhì)量；瑞氏染色檢測滲出物白細(xì)胞數(shù)；酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測滲出液中前列腺素E2（PGE2）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、白細(xì)胞介素（IL）-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量；全自動血氣分析儀檢測大鼠動脈CO2分壓［p（CO2）］、動脈氧分壓［p（O2）］；HE染色觀察肺組織病理學(xué)變化；免疫組織化學(xué)染色檢測NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶1（Caspase-1）蛋白表達(dá)；Western blot檢測NLRP3通路蛋白表達(dá)。結(jié)果 與對照組比較，模型組大鼠胸腔滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞數(shù)、滲出液PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α含量、p（CO2）、NLRP3通路蛋白表達(dá)增加，F(xiàn)VC、FEV 0.1、FEV 0.3、p（O2）降低，肺組織出現(xiàn)明顯的病理損傷（P＜0.05）；與模型組比較，PH各組和PJ34組大鼠胸腔滲出物質(zhì)量、白細(xì)胞數(shù)、滲出液PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α含量、p（CO2）、NLRP3通路蛋白表達(dá)降低，F(xiàn)VC、FEV 0.1、FEV 0.3、p（O2）增加，肺組織病理損傷好轉(zhuǎn)（P＜0.05）；與PH-H組比較，PJ34組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 PH可通過抑制NLRP3通路激活，抑制炎癥反應(yīng)，改善急性胸膜炎引起的肺損傷。

關(guān)鍵詞：胸膜炎；急性??；連翹苷；肺損傷；NLR家族，熱蛋白結(jié)構(gòu)域包含蛋白3

中圖分類號：R285.5，R561.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.11958/20230399

Effect of phillyrin regulating NLRP3 inflammatory pathway on exudates and lung injury in rats with acute pleurisy

Abstract： Objective To investigate the impacts of phillyrin on exudates and lung injury in rats with acute pleurisy by regulating the NLRP3 inflammatory pathway. Methods Ninety rats were randomly divided into the control group， the model group， the low-dose phillyrin （PH-L， 5 mg/kg） group， the medium-dose phillyrin （PH-M， 10 mg/kg） group， the high-dose phillyrin （PH-H， 20 mg/kg） group and the NLRP3 pathway inhibitor （PJ34， 10 mg/kg） group. FVC， FEV 0.1 and FEV 0.3 were detected by lung function analyzer. Electronic balance was used to weigh the mass of chest exudate. The number of white blood cells in exudate was detected by Wright staining. Contents of prostaglandin E2 （PGE2）， monocyte chemoattractant protein-1 （MCP-1）， interleukin （IL） -6 and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in exudate were detected by ELISA. Automatic blood gas analyzer was used to detect p （CO2） and p （O2） of rats. HE staining was used to observe pathological changes of lung tissue. The expression levels of NLRP3 and Caspase-1 protein were detected by immunohistochemistry. Western blot assay was used to detect the expression of NLRP3 pathway protein. Results Compared with the control group， the quality of pleural exudate and the number of white blood cells， the contents of PGE2， MCP-1， IL-6， TNF-α， the expression of p （CO2） and NLRP3 pathway proteins in exudate of the model group increased obviously， FVC， FEV 0.1， FEV 0.3 and p （O2） decreased obviously， and the lung tissue showed obvious pathological damage （P＜0.05）. Compared with the model group， the quality of pleural exudate and the number of white blood cells， the contents of PGE2， MCP-1， IL-6， TNF-α， the expression of p （CO2）， NLRP3 pathway proteins in the exudate of rats decreased obviously in the PH group and the PJ34 group， FVC， FEV 0.1， FEV 0.3 and p （O2） increased obviously， the pathological injury of lung tissue was obviously improved （P＜0.05）. Compared with the PH-H group， there were no significant differences in the above indexes in the PJ34 group （P＞0.05）. Conclusion PH can improve lung injury induced by acute pleurisy in rats by inhibiting the activation of NLRP3 pathway and inhibiting inflammatory reaction.

Key words： pleurisy; acute disease; phillyrin; lung injury; NLR family， pyrin domain-containing 3 protein

急性胸膜炎是病毒、細(xì)菌感染后侵犯胸膜引起的滲出性炎癥［1］。該病臨床表現(xiàn)為胸悶、呼吸急促、肺音高、呼吸困難，胸腔積液過多等［2］。炎癥在胸膜炎發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用，細(xì)胞因子是炎癥反應(yīng)過程中的介質(zhì)，其中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）和白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-1β等炎性因子可以激活白細(xì)胞和其他細(xì)胞類型，放大炎癥反應(yīng)［3］。NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）通路激活是炎癥細(xì)胞因子形成的關(guān)鍵，NLRP3炎癥小體是多種蛋白質(zhì)的復(fù)合物，其以胱天蛋白酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase 1，Caspase-1）依賴性方式激活來促進(jìn)炎細(xì)胞因子IL-1β的分泌，參與炎癥調(diào)節(jié)［4］。連翹苷（phillyrin，PH）是中藥連翹的重要活性成分，具有抗病毒、抗炎、抗氧化等活性［5］。研究發(fā)現(xiàn)，PH可通過抑制蛋白激酶B（AKT）/核因子-κB（nuclear factor κB，NF-κB）途徑來減輕去甲腎上腺素誘導(dǎo)的心臟肥大和炎癥反應(yīng)［6］。NF-κB在受損組織中被激活后，可激活其下游NLRP3炎癥小體，加劇組織炎癥反應(yīng)［7］。PH作為舒風(fēng)節(jié)度膠囊中的重要組分，可治療上呼吸道感染所致肺損傷［8］。本研究以胸膜炎大鼠為研究對象，探討PH對急性胸膜炎的抗炎機(jī)制，為臨床治療胸膜炎相關(guān)肺損傷疾病提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料 SPF級雄性SD大鼠90只，6～7周齡，體質(zhì)量（220±20）g，購自導(dǎo)科醫(yī)藥技術(shù)（廣東）有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2022-0060。所有大鼠飼養(yǎng)于本院實驗動物中心，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由飲食水。連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品、L型角叉菜膠、HE染色試劑盒均購自索萊寶生物科技有限公司；前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1，MCP-1）、IL-6、TNF-α酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、NF-kB p65、凋亡斑點樣蛋白（apoptotic spot-like protein，ASC）、NLRP3、剪切的Caspase-1（Cleaved-Caspase-1，C-Caspase-1）、Caspase-1、GAPDH抗體和辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗購自Abcam公司。全自動生化分析儀、多功能酶標(biāo)儀均購自賽默飛世爾科技中國有限公司；光學(xué)顯微鏡購自日本奧

林巴斯公司。

1.2 研究方法

1.2.1 造模及分組 大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、模型組，連翹苷低（PH-L，5 mg/kg）、中（PH-M，10 mg/kg）、高（PH-H，20 mg/kg）劑量組［9］以及NLRP3通路抑制劑組（PJ34組，10 mg/kg）［10］，每組15只。PH各組鼻腔給予對應(yīng)劑量藥物，PJ34組腹腔注射對應(yīng)劑量藥物，對照組、模型組均在相同部位給予等量生理鹽水，連續(xù)給藥7 d，1次/d。參照文獻(xiàn)［11］，對照組注射等體積生理鹽水，其余組給藥結(jié)束后2 h建立急性胸膜炎大鼠模型，麻醉大鼠，在大鼠右側(cè)第7肋間注射2%角叉菜膠致炎。造模大鼠胸腔滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞升高，表現(xiàn)出典型的急性炎癥，表明急性胸膜炎造模成功。

1.2.2 大鼠肺通氣功能檢測和樣本采集 造模成功6 h后，麻醉大鼠，手術(shù)切開氣管，將大鼠置于體描箱中，連接動物肺功能分析儀，測定用力肺活量（FVC）、第0.1秒用力呼氣量（FEV 0.1）、第0.3秒用力呼氣量（FEV 0.3）。肺通氣功能檢測完畢后，腹主動脈取血3 mL備用。采血完畢后，手術(shù)打開胸腔，無菌操作吸出滲出液，加入磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌胸腔，將滲出液和洗滌液合并，收集至離心管中，3 000 r/min離心10 min，收集上清液和沉淀物質(zhì)（滲出物）備用；完成上述操作后，剝離肺組織備用。

1.2.3 胸腔滲出液中滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞數(shù) 取1.2.2分離的胸腔滲出液的沉淀物，分析天平精密稱量沉淀物質(zhì)量；稱定后用PBS稀釋、混勻，吸取50 μL細(xì)胞懸液于載玻片中，干燥后，進(jìn)行瑞氏染色，光學(xué)顯微鏡觀察并拍照，對白細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。

1.2.4 胸腔滲出液炎性因子含量測定和大鼠血氣值分析 取1.2.2采集的滲出液上清，根據(jù)ELISA試劑盒檢測滲出液上清中PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α含量，具體操作嚴(yán)格根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。取1.2.2采集的動脈血，使用全自動血氣分析儀檢測大鼠動脈CO2分壓［p（CO2）］、動脈氧分壓［p（O2）］。

1.2.5 肺組織病理學(xué)變化觀察 從各組中隨機(jī)抽取5只大鼠麻醉處死后取右肺中葉，加入4%多聚甲醛固定，梯度乙醇脫水、浸蠟、包埋、連續(xù)4 μm切片，根據(jù)HE染色試劑盒說明書進(jìn)行染色，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡觀察并拍照。

1.2.6 免疫組織化學(xué)法檢測肺組織NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá) 另從各組中隨機(jī)取5只大鼠，麻醉處死后取右肺中葉，加入10%多聚甲醛固定，梯度乙醇脫水、O.C.T膠包埋，連續(xù)10 μm切片，烤片后，加入3%過氧化氫孵育，10 min后PBS沖洗，加入山羊血清室溫封閉，滴加一抗NLRP3（1∶200）、Caspase-1（1∶200），4 ℃過夜，再加入二抗（1∶200），PBS沖洗后，加入DAB顯色，蘇木素復(fù)染。光學(xué)顯微鏡下拍照，肺組織中NLRP3、Caspase-1免疫組化陽性表達(dá)成棕黃色。分析NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)量。

1.2.7 Western blot檢測肺組織NLRP3通路蛋白表達(dá) 將剩余5只大鼠麻醉處死后取右肺中葉，液氮研磨后，加入蛋白裂解液提取蛋白，二辛可寧酸（dicinchonic acid，BCA）法測定蛋白濃度，取適量蛋白上樣，電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，加入p-NF-κB p65、NF-kB p65、ASC、NLRP3、C-Caspase-1、Caspase-1及內(nèi)參GAPDH（稀釋比均為1∶1 000），4 ℃過夜，再加入二抗（1∶2 000），PBS沖洗后，加入ECL顯影，根據(jù)條帶灰度值計算蛋白相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 26.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料用[[x] ±s

]表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肺通氣功能比較 與對照組比較，模型組大鼠FVC、FEV 0.1、FEV 0.3降低（P＜0.05）；與模型組比較，PH各組和PJ34組大鼠FVC、FEV 0.1、FEV 0.3增加（P＜0.05），且PH-L組、PH-M組、PH-H組上述指標(biāo)依次增加（P＜0.05）；與PH-H組比較，PJ34組FVC、FEV 0.1、FEV 0.3差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

2.2 各組大鼠胸腔滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞數(shù)比較 與對照組比較，模型組大鼠胸腔滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞數(shù)增加（P＜0.05）；與模型組比較，PH各組和PJ34組大鼠胸腔滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞數(shù)降低（P＜0.05）；與PH-L組比較，PH-H組胸腔滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞數(shù)均降低，PH-M組胸腔滲出物質(zhì)量降低（P＜0.05）；與PH-M組比較，PH-H組白細(xì)胞數(shù)降低（P＜0.05）；與PH-H組比較，PJ34組胸腔滲出物質(zhì)量和白細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.3 各組大鼠胸腔滲出液炎性因子水平比較 與對照組比較，模型組大鼠胸腔滲出液中PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α含量增加（P＜0.05）；與模型組比較，PH各組和PJ34組大鼠胸腔滲出液中PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α含量降低（P＜0.05）；與PH-L組比較，PH-H組上述指標(biāo)的含量均降低（P＜0.05），PH-M組PGE2、MCP-1、TNF-α含量降低（P＜0.05）；與PH-M組比較，PH-H組IL-6、TNF-α含量降低（P＜0.05）；與PH-H組比較，PJ34組胸腔滲出液中PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

2.4 各組大鼠p（CO2）、p（O2）值比較 與對照組比較，模型組大鼠p（CO2）增加，p（O2）降低（P＜0.05）；與模型組比較，PH各組和PJ34組大鼠p（CO2）降低，p（O2）增加（P＜0.05）；與PH-L組比較，PH-H組p（CO2）降低，p（O2）增加，PH-M組p（CO2）降低（P＜0.05）；與PH-M組比較，PH-H組p（CO2）降低，p（O2）增加（P＜0.05）；與PH-H組比較，PJ34組p（CO2）、p（O2）差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

2.5 各組大鼠肺組織病理變化 對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰完整，未見炎性細(xì)胞浸潤；與對照組比較，模型組大鼠肺組織有紅細(xì)胞滲出，細(xì)胞核變形，炎性細(xì)胞浸潤到支氣管，肺泡壁也明顯增厚；與模型組比較，PH各組隨著藥物濃度增大，炎性細(xì)胞浸潤逐漸減輕，PJ34組炎性細(xì)胞浸潤減少，肺泡壁增厚現(xiàn)象減輕，見圖1。

2.6 各組大鼠肺組織NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)比較 與對照組比較，模型組大鼠肺組織NLRP3、Caspase-1陽性表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）；與模型組比較，PH各組和PJ34組大鼠肺組織NLRP3、Caspase-1陽性表達(dá)降低（P＜0.05），且PH-L組、PH-M組、PH-H組上述指標(biāo)依次降低（P＜0.05）；與PH-H組比較，PJ34組NLRP3、Caspase-1陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表5、圖2。

2.7 各組大鼠肺組織中NLRP3炎性小體通路相關(guān)蛋白表達(dá)比較 與對照組比較，模型組大鼠肺組織p-NF-κB p65、ASC、NLRP3和C-Caspase-1表達(dá)增加（P＜0.05）；與模型組比較，PH各組和PJ34組大鼠肺組織p-NF-κB p65、ASC、NLRP3和C-Caspase-1表達(dá)降低（P＜0.05），且PH-L組、PH-M組、PH-H組上述指標(biāo)依次降低（P＜0.05）；與PH-H組比較，PJ34組p-NF-κB p65、ASC、NLRP3和C-Caspase-1表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見圖3、表6。

3 討論

胸膜是覆蓋在肺組織表面和胸壁內(nèi)側(cè)壁上的一層膜狀軟組織，可調(diào)節(jié)胸膜腔穩(wěn)態(tài)。胸膜炎屬于慢性炎癥疾病，而角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠胸膜炎是一種以炎癥為特征的模型，是研究胸腔積液的有效模型，會導(dǎo)致胸腔積液外滲和細(xì)胞積聚到胸膜腔，引起肺部嚴(yán)重并發(fā)癥［12］。在本研究中，角叉菜膠誘導(dǎo)后模型大鼠胸腔滲出物質(zhì)量增加，白細(xì)胞數(shù)目增多，說明造模成功。胸腔積液外滲和白細(xì)胞遷移會導(dǎo)致肺組織病變，引起肺泡壁增厚和炎性細(xì)胞浸潤等病理損傷［11］。本研究對模型大鼠的肺功能和血氣以及病理變化等進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn)，模型大鼠出現(xiàn)明顯的肺損傷，主要表現(xiàn)為肺功能降低，肺組織炎性細(xì)胞浸潤增加，肺泡壁增厚，這與既往研究［11］結(jié)果一致，提示急性胸膜炎可導(dǎo)致肺損傷。

PGE2是炎癥反應(yīng)的主要介質(zhì)，可以促進(jìn)白細(xì)胞向炎癥區(qū)域聚集，引發(fā)組織水腫、充血等病變［13］。MCP-1、TNF-α、IL-6在急性肺損傷患者體內(nèi)高表達(dá)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞等白細(xì)胞聚集并釋放更多炎癥介質(zhì)，加重肺組織炎癥［14］。研究顯示，在急性胸膜炎大鼠血清和胸腔滲出液中PGE2、TNF-α、IL-6水平均增加［11，15］。此外，MCP-1是胸膜滲出液形成的關(guān)鍵驅(qū)動因素，在角叉菜膠誘導(dǎo)的胸膜炎小鼠模型血清和胸腔積液中MCP-1水平增加，使用MCP-1拮抗劑阻斷MCP-1活性可減少胸膜炎小鼠炎性胸腔積液的形成［16］。本研究在模型大鼠胸腔滲出液中檢測到較高的炎性細(xì)胞因子PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α水平，并且白細(xì)胞數(shù)增多，肺組織發(fā)生明顯的病理學(xué)變化，說明胸腔積液的滲漏引起了肺部嚴(yán)重的并發(fā)癥。經(jīng)過PH預(yù)處理后，模型大鼠胸腔滲出液炎性介質(zhì)PGE2、MCP-1、IL-6、TNF-α釋放減少，白細(xì)胞數(shù)減少，肺部病理學(xué)改變明顯好轉(zhuǎn)，肺功能明顯好轉(zhuǎn)，且PH-H組優(yōu)于PH-L組和PH-M組，表明PH可抑制炎癥反應(yīng)，減輕急性胸膜炎大鼠肺損傷，提示PH具有治療胸膜炎導(dǎo)致的肺損傷的潛力。

NLRP3是一種胞質(zhì)多蛋白復(fù)合物，由先天免疫受體蛋白NLRP3、適配器蛋白ASC和炎癥蛋白pro-Caspase-1組成，其過度激活會促進(jìn)各種炎癥性疾病的發(fā)展［17］。有研究發(fā)現(xiàn)NLRP3炎癥小體活化后，pro-Caspase-1會裂解為具有活性的Cleaved Caspase-1，進(jìn)而將pro-IL-1β裂解為成熟的IL-1β，促進(jìn)炎性細(xì)胞募集，參與肺部疾病的發(fā)生、發(fā)展［18-19］。PH改善肺損傷的機(jī)制可能與抑制NLRP3炎性通路激活有關(guān)。在炎癥疾病中，NLRP3受NF-κB調(diào)節(jié)而激活［20］，抑制NLRP3炎性通路的激活可以減輕組織損傷［21］。在本研究中，模型大鼠肺組織中p-NF-κB p65、ASC、NLRP3和C-Caspase-1表達(dá)明顯增加，表明NLRP3炎性通路被激活；經(jīng)過PH預(yù)處理后，p-NF-κB p65、ASC、NLRP3和C-Caspase-1蛋白表達(dá)明顯降低，表明NLRP3炎性通路被抑制，推測PH對肺損傷的改善作用可能是通過抑制NLRP3炎性通路實現(xiàn)。為了驗證PH的抗炎作用是否與抑制NLRP3炎性通路有關(guān)，筆者設(shè)置了通路抑制劑組，發(fā)現(xiàn)通路抑制劑組與PH-H組呈現(xiàn)相似的治療效果，再次證實了PH可能通過抑制NLRP3炎性通路激活，從而減輕胸膜炎大鼠的肺損傷。

綜上所述，PH可以抑制NLRP3炎性通路激活，減少胸膜炎大鼠炎性介質(zhì)釋放和白細(xì)胞聚集，改善肺損傷。然而，炎癥反應(yīng)涉及多種通路協(xié)同作用，PH對胸膜炎大鼠肺損傷的治療作用是否同時涉及其他通路作用，還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

［1］ ALIKHANI A，ABBASPOUR KASGARI H，MAJIDI H，et al. Brucella pleurisy：an extremely rare complication of brucellosis［J］. Clin Case Rep，2022，10（9）：e6366-e6370. doi：10.1002/ccr3.6366.

［2］ BROWN S E，BYCROFT K A，ADAM K，et al. Acute fibrinous pleuropneumonia and septicaemia caused by Bibersteinia trehalosi in neonatal calves in New Zealand［J］. N Z Vet J，2021，69（1）：51-57. doi：10.1080/00480169.2020.1792372.

［3］ HOU T，YANG M，YAN K，et al. Amentoflavone ameliorates carrageenan-induced pleurisy and lung injury by inhibiting the NF-κB/STAT3 pathways via Nrf2 activation［J］. Front Pharmacol，2022，13：763608. doi：10.3389/fphar.2022.763608.

［4］ XU J，N??EZ G. The NLRP3 inflammasome： activation and regulation［J］. Trends Biochem Sci，2023，48（4）：331-344. doi：10.1016/j.tibs.2022.10.002.

［5］ CHEN S，ZHANG S，WU H，et al. Protective effect of phillyrin against cerebral ischemia/reperfusion injury in rats and oxidative stress-induced cell apoptosis and autophagy in neurons［J］. Bioengineered，2022，13（3）：7940-7950. doi：10.1080/21655979.2022.2042142.

［6］ TANG K，ZHONG B，LUO Q，et al. Phillyrin attenuates norepinephrine-induced cardiac hypertrophy and inflammatory response by suppressing p38/ERK1/2 MAPK and AKT/NF-kappaB pathways［J］. Eur J Pharmacol，2022，927：175022. doi：10.1016/j.ejphar.2022.175022.

［7］ MESSAOUD-NACER Y，CULERIER E，ROSE S，et al. STING agonist diABZI induces PANoptosis and DNA mediated acute respiratory distress syndrome （ARDS）［J］. Cell Death Dis，2022，13（3）：269. doi：10.1038/s41419-022-04664-5.

［8］ LI Y，CHANG N，HAN Y，et al. Anti-inflammatory effects of Shufengjiedu capsule for upper respiratory infection via the ERK pathway［J］. Biomed Pharmacother，2017，94（1）：758-766. doi：10.1016/j.biopha.2017.07.118.

［9］ ZHONG W T，WU Y C，XIE X X，et al. Phillyrin attenuates LPS-induced pulmonary inflammation via suppression of MAPK and NF-κB activation in acute lung injury mice［J］. Fitoterapia，2013，90（1）：132-139. doi：10.1016/j.fitote.2013.06.003.

［10］ 曹樂，唐雅雯，馮平，等. 辛伐他汀對蛛網(wǎng)膜下腔出血早期腦損傷大鼠NLRP3炎性小體的表達(dá)及NF-κB信號通路的影響［J］. 腦與神經(jīng)疾病雜志，2023，31（1）：23-28. CAO L，TANG Y W，F(xiàn)ENG P，et al. Effect of Simvastatin on the expression of NLRP3 inflammasome and NF-κB signaling pathway in rats with early subarachnoid hemorrhage［J］. Journal of Brain and Neurological Diseases，2023，31（1）：23-28.

［11］ 趙博，楊馨怡，屈新亮，等. 黃芩莖葉抑制TRPV1通路改善大鼠急性胸膜炎的研究［J］. 中藥藥理與臨床，2022，38（4）：112-116. ZHAO B，YANG X Y，QU X L，et al. Effect of stem and leaf of Scutellaria baicalensis on acute pleurisy in rats by inhibiting TRPV1 pathway［J］. Pharmacology and Clinic of Chinese Traditional Medicine，2022，38（4）：112-116. doi：10.13412/j.cnki.zyyl.20220418.002.

［12］ CAIAZZO E，MORELLO S，CARNUCCIO R，et al. The Ecto-5'-nucleotidase/CD73 inhibitor，α，β-methylene adenosine 5'-diphosphate，exacerbates carrageenan-induced pleurisy in rat［J］. Front Pharmacol，2019，10（1）：775-784. doi：10.3389/fphar.2019.

00775.

［13］ WANG G，ZHANG Y，HU N，et al. Mesenchymal stem cells attenuate acute lung injury in mice partly by suppressing alveolar macrophage activation in a PGE2-dependent manner［J］. Inflammation，2022，45（5）：2000-2015. doi：10.1007/s10753-022-01670-9.

［14］ ZHAO H，CHEN H，XIAOYIN M，et al. Autophagy activation improves lung injury and inflammation in sepsis［J］. Inflammation，2019，42（2）：426-439. doi：10.1007/s10753-018-00952-5.

［15］ 黃媛恒，陳健，黃仁彬，等. 玉郎傘提取物對模型大鼠胸膜炎TNF-α、PGE2、NO的影響［J］. 中國藥房，2010，21（3）：200-202. HUANG Y H，CHEN J，HUANG R B，et al. Effect of Yulang Parasol extract on TNF-α，PGE2 and NO in pleurisy of model rats［J］. Chinese Pharmacy，2010，21（3）：200-202.

［16］ LANSLEY S M，CHEAH H M，LEE Y C. Role of MCP-1 in pleural effusion development in a carrageenan-induced murine model of pleurisy［J］. Respirology，2017，22（4）：758-763. doi：10.1111/resp.12951.

［17］ HUANG Y，XU W，ZHOU R. NLRP3 inflammasome activation and cell death［J］. Cell Mol Immunol，2021，18（9）：2114-2127. doi：10.1038/s41423-021-00740-6.

［18］ HSU C G，CH?VEZ C L，ZHANG C，et al. The lipid peroxidation product 4-hydroxynonenal inhibits NLRP3 inflammasome activation and macrophage pyroptosis［J］. Cell Death Differ，2022，29（9）：1790-1803. doi：10.1038/s41418-022-00966-5.

［19］ 卓玉珍，楊磊，鹿燕敏，等. 涼血活血方通過抑制NLRP3炎性小體活化保護(hù)膿毒癥急性肺損傷小鼠的實驗研究［J］. 中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2022，28（2）：173-178. ZHUO Y Z，YANG L，LU Y M，et al. Experimental study of Liangxue Huoxue Decoction ameliorates sepsis-induced ali in mice by inhibiting NLRP3 inflammasome［J］. Chinese Journal of Surgery of Integrated Traditional and Western Medicine，2022，28（2）：173-178. doi：10.3969/j.issn.1007-6948.2022.02.005.

［20］ CAI B，ZHAO J，ZHANG Y，et al. USP5 attenuates NLRP3 inflammasome activation by promoting autophagic degradation of NLRP3［J］. Autophagy，2022，18（5）：990-1004. doi：10.1080/15548627.2021.1965426.

［21］ ZHANG C，WANG X，WANG C，et al. Qingwenzhike prescription alleviates acute lung injury induced by LPS via inhibiting TLR4/NF-kB pathway and NLRP3 inflammasome activation［J］. Front Pharmacol，2021，12：790072. doi：10.3389/fphar.2021.790072.