臭氧微納米氣泡處理對黃豆芽“綠化”的影響及機制

高紅豆，史君彥，劉海濤，左進華，袁樹枝，岳曉珍，王 清,

（1.北京市農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與食品營養(yǎng)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部蔬菜產(chǎn)后處理重點實驗室，果蔬農(nóng)產(chǎn)品保鮮與加工北京市重點實驗室，北京 100097；2.北京方圓平安生物科技股份有限公司，北京 100097）

黃豆中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，例如：蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物以及一些礦物質(zhì)等營養(yǎng)元素。在發(fā)芽過程中，會增加一些維生素類物質(zhì)的產(chǎn)生，并且蛋白質(zhì)的利用率大大提高，此外，一些棉籽糖、鼠李糖等不利于人體吸收利用的物質(zhì)也得到分解，以上變化對人體是極有利的，避免了吃黃豆后人體產(chǎn)生脹氣現(xiàn)象[1]。但黃豆芽在售賣過程中無法保持持續(xù)避光，極易發(fā)生光合作用出現(xiàn)“綠化”現(xiàn)象，會影響消費者的購買欲，對黃豆芽產(chǎn)業(yè)發(fā)展有不利影響。其中光照是導(dǎo)致黃豆芽“綠化”最直接的因素，故抑制“綠化”是提高黃豆芽商品價值的重要條件。Ozone MNBs 是近年來一項新興的保鮮技術(shù)，已有研究發(fā)現(xiàn)，臭氧具有抑制植物光合作用發(fā)生的功能，而將Ozone MNBs技術(shù)應(yīng)用在抑制黃豆芽“綠化”上的報道較少。

微納米氣泡由微米和納米氣泡組成，直徑小于50 μm，具有較強的溶水能力，并且在水中具有穩(wěn)定性[2]。臭氧是一種強氧化劑，具有殺菌作用，目前已廣泛應(yīng)用在果蔬采后保鮮方面[3-4]。但是臭氧在水中具有不穩(wěn)定、易分解的特性[5]，通過與微納米氣泡結(jié)合可增加臭氧在水中的溶解量和保持其濃度恒定的作用[6-7]，很好地解決了臭氧在水中不穩(wěn)定易分解的弊端。研究發(fā)現(xiàn)Ozone MNBs 在果蔬保鮮方面有一定的應(yīng)用，王雪青等[8]采用4 mg/L Ozone MNBs 處理菠菜，發(fā)現(xiàn)處理組能夠提高菠菜的抗氧化能力，減緩菠菜營養(yǎng)物質(zhì)損耗，提高了菠菜的耐貯性。運用1.8 mg/L Ozone MNBs 處理番茄苗，顯示兩種空氣傳播病原菌分生孢子受到明顯的抑制，說明Ozone MNBs在番茄空氣傳播病害防治中的應(yīng)用是可行的[7]。對板栗進行多種水洗處理時，與自來水沖洗相比，Ozone MNBs 處理顯著降低了采后板栗的腐爛率和相關(guān)微生物群落（好氧細(xì)菌、霉菌/絲狀真菌和酵母）生長，提高了板栗的貯藏品質(zhì)[9]。然而，Ozone MNBs 處理對芽菜類的研究尚少。

本實驗以黃豆芽為材料，在20 ℃下，用LED 白光照射，探究4 mg/L Ozone MNBs 處理對黃豆芽葉綠素降解酶，葉綠素合成前體物，葉綠素含量，ADP、ATP 和輔酶Ⅱ含量等指標(biāo)的影響，以期為延長黃豆芽貨架期提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黃豆芽 購買于北京市超市發(fā)連鎖有限公司，挑選當(dāng)日新鮮折損率較小的袋裝黃豆芽，20 min 內(nèi)運回實驗室，進行實驗；丙酮、無水乙醇、石油醚、甲醇、二胺四乙酸（EDTA）、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；酚酞指示劑、NaOH、KCl、NaCl 西隴科學(xué)股份有限公司；HCL、Triton X-100、Tris 北京化學(xué)試劑有限公司；葉綠素a 美國Sigma 公司；Tricine 翌圣生物科技（上海）股份有限公司；噻唑藍(lán)溴化四唑（MTT）、葡萄糖-6-磷酸、吩嗪乙硫酸鹽（PES）、4-香豆酸 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；ATP、ADP 上海源葉生物科技有限公司；5-氨基乙酰丙酸、膽色素原、尿卟啉原III、1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶試劑盒 上海酶聯(lián)生物科技有限公司；以上試劑均為分析純。

3S-T 臭氧發(fā)生器、3S-J5000 臭氧檢測儀 北京同林科技有限公司；MF-5000 微納米氣泡發(fā)生裝置上海行恒科技有限公司；UV-1800 紫外分光光度計 日本島津公司；IKA M20 研磨機 德國艾卡儀器設(shè)備有限公司；D-37520 離心機 北京誠茂興業(yè)科技發(fā)展有限公司；XMTD-6000 型數(shù)顯恒溫水浴鍋余姚金電儀表有限公司；Varioskan LUX 多功能酶標(biāo)儀 賽默飛世爾科技（中國）有限公司；KQ-50TDB超聲波清洗機 昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 Ozone MNBs 處理 本實驗以黃豆芽為材料，以0.5～5 mg/L 濃度的Ozone MNBs 對其進行預(yù)實驗篩選適宜濃度，多次重復(fù)實驗證明4 mg/L 處理對抑制黃豆芽“綠化”效果最佳。隨后在臭氧檢測儀監(jiān)測下將臭氧濃度調(diào)至4 mg/L，隨后接入微納米氣泡發(fā)生器，用產(chǎn)生的4 mg/L 濃度的Ozone MNBs 處理黃豆芽，對照組用蒸餾水代替Ozone MNBs。將12 kg黃豆芽用Ozone MNBs 處理5 min 后取出，吸水紙吸干表面多余水分，裝入厚度為0.03 mm 的自封袋，置于溫度20 ℃，濕度95%，穩(wěn)定LED 白光照射條件下模擬貨架期銷售環(huán)境，并于0、12、24、36、48 h 取樣測定相應(yīng)指標(biāo)。剩余樣品液氮冷凍，置于-80 ℃冰箱，后續(xù)指標(biāo)測定時研磨成粉。

1.2.2 失重率和可滴定酸（TA）含量的測定 失重率和TA 遵循Martínez-Romero 等[10]的方法。TA 含量利用酸堿電位滴定法測定，酚酞作為指示劑，樣品：蒸餾水按照1:10 比例均漿，過濾，取濾液。用0.1 mol/L NaOH 滴定樣品濾液至溶液變紅為止，結(jié)果以%表示。

式中，W1為0 h 樣品重量；W2為取樣點樣品重量。

1.2.3 ADP、ATP、Urogen Ⅲ、ALA、膽色素原（PBG）和1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶（RuBisCO）含量

根據(jù)酶聯(lián)免疫試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）方法進行實驗測定。

1.2.4 NADP（H）含量測定 NADP（H）含量測定根據(jù)陳夢茵等[11]和Zhang 等[12]的實驗方法進行測定。1 g 樣品加入5 mL 0.1 mol/L HCl 用于NADP 測定，1 g 樣品加入5 mL 0.1 mol/L NaOH 用于NADPH測定。混和液沸水浴5 min，冰浴冷卻，4 ℃，10000×g 離心10 min。上層清液分別用0.1 mol/L NaOH 或HCl 中和至pH 為7，隨后進行離心，離心條件同上。最終上層清液即為提取液。

50 μL上層清液加入60 μL 1 mol/L Tricine-NaOH 緩沖液，60 μL 40 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA），60 μL 4.2 mmol/L MTT，60 μL 16.6 mmol/L 吩嗪乙硫酸鹽（PES），60 μL 25 mmol/L 葡萄糖-6-磷酸和450 μL 0.1 mol/L NaCl 溶液中，37 ℃水浴5 min。隨后加入50 μL 200 U/mL 的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PDH）溶液，37 ℃下孵育40 min。最后加入600 μL 6 mol/L NaCl 溶液終止反應(yīng)。將所獲得的反應(yīng)混合物4 ℃，10000×g 離心10 min，用4 mL 95%乙醇溶解的沉淀，570 nm 下測定吸光值。結(jié)果以nmol/mL為單位表示（全程弱光操作）。

1.2.5 葉綠素a、葉綠素b 和葉綠素含量測定 根據(jù)Shi 等[13]的方法來測定黃豆芽葉綠素a，葉綠素b 和葉綠素含量。稱取1 g 組織樣品加入10 mL 丙酮-乙醇（2:1）溶液中，搖勻。4 ℃條件下12000×g離心10 min 取上層清液，然后用紫外分光光度計測定上層清液在645 nm 和663 nm 下的吸光值，葉綠素a 和葉綠素b 的質(zhì)量濃度：

式中，ρ為由公式計算得葉綠素的質(zhì)量濃度，mg/L；V 為樣品提取液總體積，mL；m 為樣品質(zhì)量，kg。

1.2.6 葉綠素降解酶活性測定

1.2.6.1 底物的制備 以下前處理均采用Shi 等[13]的方法制備。純?nèi)~綠素 a（Chla）試劑 10 mg，根據(jù)所需的濃度用丙酮溶液配制。葉綠酸a（Chlin a）的制備：40 mL 石油醚加入到6 mL 200 μg/mL 葉綠素a丙酮溶液中，將被分離出來的醚相用蒸餾水（20 mL）沖洗三次，最后加入1.33 mL 300 mg/mL KOH 甲醇溶液制備成Chlin a。分離出Chlin a 的沉淀并溶解在蒸餾水中。脫鎂葉綠素 a（Phy a）制備：葉綠素丙酮溶液中加入一滴0.1 mol/L 的HCl，2 min 后加入一滴0.1 mol/L NaOH 中和。Phy a 濃度的確定通過測定消光系數(shù)為156000 mol/L/cm 的波長為409 nm處吸光值計算。

1.2.6.2 丙酮粉的制備 3 g 樣品在22.5 mL 冷丙酮（-20 ℃）溶解，-20 ℃靜置15 min，然后于4 ℃，12000×g 下離心5 min，取沉淀再加22.5 mL 冷丙酮，重復(fù)2～3 次至沉淀中綠色褪去，沉淀即為丙酮粉。

1.2.6.3 粗酶液提取 Chlase 提?。?.2 g 丙酮粉與3 mL 50 mmol/L PBS（pH7.0）緩沖液混合，其中緩沖液包括50 mmol/L KCl 和0.24% Triton X-100，放入30 ℃恒溫條件，攪拌30 min，然后12000×g 離心5 min，取上層清液。MD 提?。?.1 g 丙酮粉與1 mL 50 mmol/L PBS（pH7.0）緩沖液混合，緩沖液配制與葉綠素酶提取過程中所用相同，混合液放入0 ℃下攪拌1 h，隨后在4 ℃，12000×g 離心20 min，取上層清液。Chl-POX 提?。?.15 g 丙酮粉與10 mL 10 mmol/L PBS（pH7.0）緩沖液混合，0 ℃下攪拌1 h。4 ℃，10000×g 離心20 min，取上層清液。PPH 提取：0.15 g 丙酮粉與1.5 mL 50 mmol/L pH8.0 Tris-HCl 緩沖液混合，0 ℃下攪拌1 h，4 ℃，15000×g 離心15 min，取上層清液。

1.2.6.4 Chlase 活性的測定 Chlase 活性的測定采用Han 等[14]的方法。反應(yīng)液由0.5 mL pH7.5 100 mmol/L PBS（含0.24% Triton X-100），0.5 mL 酶液以及0.2 mL 200 μg/mL Chla 丙酮溶液組成。反應(yīng)液25 ℃水浴40 min，隨后加入4 mL 冷丙酮終止反應(yīng)，再加4 mL正己烷，充分混合，4 ℃，12000×g 離心5 min。測定下層相667 nm 處的吸光值，單位為nmol/（g·h）。

1.2.6.5 Chl-POX 活性測定 Chl-POX 活性測定運用Asumi 等[15]的方法，反應(yīng)液：0.5 mL 酶液，0.2 mL Chla 丙酮溶液（80 μg/mL），0.1 mL H2O2（0.3%），0.1 mL Triton X-100（1%），0.1 mL 4-香豆酸（5 mmol/L）、1.5 mL pH5.5 PBS 緩沖液（0.1 mol/L）。反應(yīng)液25 ℃保溫10 min 后測定668 nm 處吸光值，單位為nmol/（g·min）。

1.2.6.6 MD 活性測定 MD 活性測定運用Suzuki等[16]的方法，反應(yīng)液包含：0.2 mL 酶液，0.75 mL Tris-HCl 緩沖液（50 mmol/L pH8.0）和0.3 mL Chlin a。反應(yīng)液37 ℃保溫10 min 后測定686 nm 處吸光值，單位為OD/（g·min）。

1.2.6.7 PPH 活性測定 PPH 活性測定運用Aiamlaor 等[17]的方法，反應(yīng)液由0.35 mL 酶液，75 μL Triton X-100（2.0%），0.1 mL Phy a，0.7 mL Tris-HCl緩沖液（50 mmol/L pH8.0）構(gòu)成。反應(yīng)液25 ℃保溫90 min 后加入4 mL 冷丙酮終止，再加入4 mL 正己烷，充分混合，4 ℃，12000×g 離心5 min。測定丙酮層在667 nm 處的吸光值，單位為nmol/（kg·min）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用WPS 2022 軟件進行數(shù)據(jù)處理，利用SPSS 22.0 軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（P＜0.05）。運用Origin 2022 軟件制圖，不同字母表示顯著性差異（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 Ozone MNBs 處理對黃豆芽外觀品質(zhì)的影響

外觀品質(zhì)是反映果蔬品質(zhì)變化最直觀的指標(biāo)。由圖1 可以看出在LED 白光照射24 h 后對照和Ozone MNBs 處理組黃豆芽均出現(xiàn)“綠化”現(xiàn)象，其中對照組“綠化”程度較Ozone MNBs 處理組更明顯。這是因為臭氧本身具有抑制光合作用的能力，同時微納米氣泡可進入果蔬內(nèi)部的縫隙，從而加強了臭氧抑制光合作用發(fā)生的效果[18-19]。說明Ozone MNBs 處理可有效維持黃豆芽的外觀品質(zhì)，減弱“綠化”發(fā)生。

圖1 Ozone MNBs 處理對黃豆芽外觀品質(zhì)的影響Fig.1 Effect of Ozone MNB treatment on exterior quality of soybean sprout

2.2 Ozone MNBs 處理對黃豆芽失重率和TA 的影響

失重是所有果蔬貯藏過程中不可避免的一個基礎(chǔ)變化，對果蔬品質(zhì)影響較大。有研究表明，臭氧能夠有效地抑制植物進行光合作用，但持續(xù)的臭氧處理會促進植物衰老，造成不可逆損傷[20]。因此利用Ozone MNBs 技術(shù)進行短時處理可能會降低臭氧對黃豆芽的損傷。圖2A 顯示，整個LED 白光照射貯藏過程中，Ozone MNBs 處理組和對照組失重率均呈一直增長趨勢。Ozone MNBs 處理后，失重率明顯較對照組大。可能是因為黃豆芽含水量高，并且細(xì)胞膜較薄，受到Ozone MNBs 刺激后破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，加速了水分損失[21]。另外，圖2B 顯示TA 含量變化在Ozone MNBs 處理組和對照組中均較為穩(wěn)定，除12 和48 h 外，整個過程中兩組差異不顯著（P＞0.05），說明Ozone MNBs 對TA 含量的影響相對較小。

圖2 Ozone MNBs 處理對黃豆芽失重率（A）和TA（B）含量的影響Fig.2 Effect of Ozone MNB treatment on weight loss rate (A)and TA (B) content of soybean sprout

2.3 Ozone MNBs 處理對黃豆芽ADP、ATP、NADP+和NADPH 含量的影響

黃豆芽“綠化”主要是發(fā)生了光合作用，此過程較為復(fù)雜，涉及光吸收、電子傳遞、光合磷酸化、碳同化等重要反應(yīng)步驟。此過程伴隨著能量變化，葉綠體類囊體膜催化ADP 與Pi 結(jié)合形成ATP。在形成ATP 的同時，還釋放了氧并形成還原型輔酶Ⅱ（NADPH）[22]。若光合作用增強時，會促進能量的產(chǎn)生。如圖3A 顯示，整個LED 白光照射貯藏過程中，Ozone MNBs 處理組和對照組ADP 含量均呈先升后降趨勢，36 h 時Ozone MNBs 處理組和對照組均達到峰值分別為711.167 nmol/L 和710.733 nmol/L，對照組含量整體高于Ozone MNBs 處理組，12 h 和48 h 差異顯著（P＜0.05）。圖3B 的ATP 含量變化均呈先增長然后緩慢下降的趨勢，并且對照組含量高于Ozone MNBs 處理組。由圖3C 可知，NADP+含量整體呈一直增長趨勢，12～48 h 對照組和Ozone MNBs 處理組差異顯著（P＜0.05），48 h 時兩組達到最大值，分別為14.23 nmol/mL 和8.84 nmol/mL。圖3D顯示，NADPH 含量整體呈先升后降趨勢，整個貯藏期間對照組含量高于Ozone MNBs 處理組，且12～48 h 對照組含量明顯更高（P＜0.05）。ADP、ATP、NADP+、NADPH 在Ozone MNBs 組較對照組含量低，說明Ozone MNBs 降低了光合磷酸化過程，從而降低光合作用的發(fā)生，有效延緩了黃豆芽的“綠化”。

圖3 Ozone MNBs 處理對黃豆芽ADP（A）、ATP（B）、NADP+（C）和NADPH（D）含量的影響Fig.3 Effect of Ozone MNB treatment on ADP (A),ATP (B),NADP+ (C) and NADPH (D) content of soybean sprout

2.4 Ozone MNBs 處理對黃豆芽Urogen Ⅲ、ALA和PBG 含量的影響

Urogen Ⅲ、ALA 和PBG 作為葉綠素合成前體物，能夠?qū)θ~綠素合成過程具有較好的調(diào)控作用[23-24]，這些前體物質(zhì)含量降低可能會降低葉綠素的合成速率。當(dāng)黃豆芽葉綠素含量降低時，“綠化”現(xiàn)象會減弱。圖4A 顯示，整個LED 白光照射貯藏過程中，Ozone MNBs 處理組Urogen Ⅲ含量呈下降趨勢，對照組則為先升后降。對照組含量始終高于Ozone MNBs 處理組，在12 h 時Ozone MNBs 處理組和對照組之間差異顯著（P＜0.05），此時兩組含量分別為20.175 ng/mL和28.252 ng/mL。圖4B 的ALA 含量變化均呈先增長后下降的趨勢，對照組在36 h 達到峰值為46.323 ng/mL，而Ozone MNBs 處理組在12 h 已達到最大值為42.207 ng/mL。此過程中對照組含量高于Ozone MNBs 處理組，尤其在24 h 以后效果明顯。由圖4C 可知，PBG 含量呈一個較為穩(wěn)定的趨勢，除24 h Ozone MNBs 處理組大于對照組外，其余貯藏時間對照組均大于Ozone MNBs 處理組。Urogen Ⅲ和ALA 含量變化說明Ozone MNBs 會降低葉綠素合成前體物質(zhì)，可能對黃豆芽“綠化”具有抑制效果。

圖4 Ozone MNBs 處理對黃豆芽Urogen Ⅲ（A）、ALA（B）和PBG（C）含量的影響Fig.4 Effect of Ozone MNB treatment on Urogen Ⅲ (A),ALA(B) and PBG (C) content of soybean sprout

2.5 Ozone MNBs 處理對黃豆芽葉綠素a、葉綠素b和葉綠素含量的影響

葉綠素是反映植物顏色變化的關(guān)鍵因素，其作為光系統(tǒng)的重要組成部分，具有捕獲和轉(zhuǎn)換光能的基本功能[23]。葉綠素合成過程首先由谷氨酸合成葉綠素a，隨后葉綠素a 和葉綠素b 的相互轉(zhuǎn)換，最后葉綠素a 降解[25]。因此，葉綠素a 和葉綠素b 含量變化是光合作用是否發(fā)生的重要指標(biāo)。圖5A 顯示，LED白光照射貯藏過程中，葉綠素a 含量均呈一直增長趨勢，除36 h 外，對照組含量明顯高于Ozone MNBs處理組（P＜0.05），48 h 時Ozone MNBs 處理組和對照組達到最大值分別為58.460 mg/kg 和77.598 mg/kg。圖5B 的葉綠素b 含量變化趨勢同葉綠素a 變化趨勢相似，對照組含量一直明顯高于Ozone MNBs 處理組（P＜0.05），在48 h 達到最大值分別為18.739 mg/kg和15.597 mg/kg。由圖5C 可知，葉綠素含量變化趨勢同葉綠素a、b 含量變化趨勢相似，除36 h Ozone MNBs 處理組與對照組含量相似外，其余貯藏時間內(nèi)對照組均顯著大于Ozone MNBs 處理組（P＜0.05）。以上葉綠素a、葉綠素b 和總?cè)~綠素含量的變化說明Ozone MNBs 處理降低了葉綠素合成，同時也回應(yīng)了光合作用減弱，黃豆芽“綠化”的延緩。

圖5 Ozone MNBs 處理對黃豆芽葉綠素a（A）、葉綠素b（B）和葉綠素（C）含量的影響Fig.5 Effect of Ozone MNB treatment on chlorophyl a (A),chlorophyl b (B) and chlorophyl (C) content of soybean sprout

2.6 Ozone MNBs 處理對黃豆芽RuBisCO 活性的影響

RuBisCO 酶是光合作用反應(yīng)中重要的羧化酶，光呼吸中不可缺少的加氧酶，在光合作用過程中，RuBisCO 最大羧化速率決定了光合作用的能力，臭氧可通過抑制蛋白合成、加速蛋白分解來降低RuBisCO 的活性[26]。由圖6 可知，LED 白光照射過程中，RuBisCO 活性均呈先升后降趨勢，對照組和Ozone MNBs 處理組活性分別在24 h 和36 h 達到峰值，分別為15.641 U/L 和14.507 U/L，然而整個過程Ozone MNBs 處理組和對照組兩組差異不顯著，這說明Ozone MNBs 對RuBisCO 活性影響相對較小。

圖6 Ozone MNBs 處理對黃豆芽RuBisCO 活性的影響Fig.6 Effect of Ozone MNB treatment on RuBisCO activity of soybean sprout

2.7 Ozone MNBs 處理對黃豆芽Chl-POX、PPH、MD和Chlase 活性的影響

產(chǎn)生黃豆芽“綠化”現(xiàn)象除了與光合作用有關(guān)外，也可能是葉綠素降解相關(guān)酶的影響。Chlase 是葉綠素分解代謝途徑中的第一酶，催化Chl a 生成脫鎂葉綠素a；Chl-POX 可以在體外降解Chl a，生成中間產(chǎn)物OHChl a，然后MD 會進一步催化葉綠素降解，通過去除脫植基葉綠素a 的Mg2+產(chǎn)生脫鎂葉綠素a，PPH 則會促進生成脫鎂葉綠素a/b[13]。這些催化的產(chǎn)物會加速葉綠素降解，降低果蔬綠色色素產(chǎn)生。圖7A 顯示，Chlase 活性呈一直下降趨勢，整個過程中，對照組活性低于Ozone MNBs 處理組，且12～36 h 對照組活性顯著低于Ozone MNBs 處理組（P＜0.05）。圖7B 表明，整個LED 白光照射貯藏過程中，Ozone MNBs 處理組的Chl-POX 活性呈先升后降趨勢，在36 h 時達到最大值83.016 nmol/（g·min），但是對照組Chl-POX 活性變化不明顯，其中12、24 和36 h 兩組差異顯著（P＜0.05），Ozone MNBs 處理組明顯高于對照組。圖7C 顯示，MD 活性整體呈先升后降趨勢，12 h 時活性最大，分別為0.890 OD/（g·min）和1.496 OD/（g·min），另外，Ozone MNBs 處理組活性也是高于對照組，其中12～36 h 對照組和Ozone MNBs 處理組差異顯著（P＜0.05）。由圖7D 知，除24 h 外，Ozone MNBs 處理組達到944.116 nmol/（kg·min），其余時間點PPH 活性整體呈下降趨勢，并且Ozone MNBs 處理組活性高于對照組。結(jié)果說明Ozone MNBs 提高了葉綠素的一系列降解酶活性，使得葉綠素合成受到抑制，可能是臭氧本身具有抑制光合作用的能力，微納米氣泡可促進其進入果蔬內(nèi)部，從而抑制了光合作用的發(fā)生[18-19]，降低了黃豆芽“綠化”的發(fā)生。

圖7 Ozone MNBs 處理對黃豆芽Chlase（A）、Chl-POX（B）、MD（C）和PPH（D）活性的影響Fig.7 Effect of Ozone MNB treatment on Chlase (A),Chl-POX (B),MD (C) and PPH (D) activities of soybean sprout

3 結(jié)論

本文以黃豆芽為原料，探究了Ozone MNBs 技術(shù)對黃豆芽生理品質(zhì)和葉綠素合成和分解的調(diào)控作用。研究結(jié)果表明，LED 白光照射下，Ozone MNBs處理的黃豆芽光合作用受到顯著抑制，“綠化”程度明顯降低。處理組黃豆芽失水較對照組嚴(yán)重，但在貨架期內(nèi)整體失重率變化較小。同時Ozone MNBs 處理還降低了黃豆芽ALA、Urogen Ⅲ、葉綠素、葉綠素a、葉綠素b、ADP、ATP、NADP+和NADPH 含量，誘導(dǎo)提升了Chl-POX、PPH、MD 和Chlase 酶活性。據(jù)此認(rèn)為，Ozone MNBs 技術(shù)可降低黃豆芽“綠化”現(xiàn)象，與降低黃豆芽光合作用相關(guān)酶活性和物質(zhì)積累、提升葉綠素降解酶活性有關(guān)。以上發(fā)現(xiàn)對其應(yīng)用在調(diào)節(jié)綠葉植物生長具有重要意義。