基于多孔金@鉑納米酶的比色型生物傳感器用于檢測(cè)牛乳中鼠傷寒沙門(mén)氏菌研究

苑懿，黃羽文，邢巾，張宇

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 150030）

0 引 言

鼠傷寒沙門(mén)氏菌是一種常見(jiàn)的食源性致病菌，常以肉制品、蛋制品、水產(chǎn)品及乳制品等食品為傳播媒介，進(jìn)入人體消化道釋放致病因子[1-3]，引起腹痛、腹瀉、胃腸炎和發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重可導(dǎo)致死亡[4]。在2016年全國(guó)共報(bào)告的食源性疾病中，有23.9%的暴發(fā)事件是由沙門(mén)氏菌感染引起，它是造成食源性疾病的第二大致病菌[5]，可出現(xiàn)在乳制品加工、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、銷(xiāo)售等各個(gè)環(huán)節(jié)[6]。我國(guó)原料奶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)遠(yuǎn)低于乳業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家[7]，因此，發(fā)展鼠傷寒沙門(mén)氏菌快速檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)其早期篩查具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

目前針對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌檢測(cè)方法中，培養(yǎng)計(jì)數(shù)法是金標(biāo)準(zhǔn)方法，靈敏度高，但耗時(shí)長(zhǎng)[8]；ELISA 是很多細(xì)菌的推薦檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)速度較快，但靈敏度偏低[9-10]；PCR 也是推薦標(biāo)準(zhǔn)方法，靈敏度較高，檢測(cè)速度也較快，但依賴(lài)于熱循環(huán)器，不適合進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)[11-12]。以上檢測(cè)方法均無(wú)法實(shí)現(xiàn)快速、現(xiàn)場(chǎng)、高靈敏的微生物檢測(cè)，無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)際檢測(cè)要求。因此亟需開(kāi)展快速靈敏、低成本和操作簡(jiǎn)便的比色型生物傳感器用于鼠傷寒沙門(mén)氏菌的篩查。常用的比色策略是基于天然酶的催化作用[13]，但生物酶易失活、不易儲(chǔ)存、分離難、提取成本高，難以大規(guī)模應(yīng)用[14-15]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)成本低、穩(wěn)定性高的貴金屬納米酶具有類(lèi)過(guò)氧化物酶的催化活性，包括Au、Ru、Pd、Pt 和Os[16-18]。金納米粒子（Gold nanoparticles，AuNPs）制備簡(jiǎn)單，生物相容性高[19]，向其中引入其它金屬來(lái)構(gòu)建多金屬納米結(jié)構(gòu)和核殼結(jié)構(gòu)[20]，產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，有助于提高酶活性[21-22]。LIU A[23]等構(gòu)建了Ag@Au 核/殼的三角形納米片作為葡萄糖比色檢測(cè)的納米探針，引入金殼不僅提高了銀納米片的穩(wěn)定性，還賦予材料葡萄糖氧化酶（GOD）和辣根過(guò)氧化物酶（HRP）類(lèi)雙重酶催化活性。免疫磁分離技術(shù)是一種在外加磁場(chǎng)作用下將目標(biāo)細(xì)菌從樣本溶液中分離、富集的方法，通過(guò)具有鐵磁性的納米粒子的表面修飾目標(biāo)細(xì)菌抗體的特異性識(shí)別來(lái)實(shí)現(xiàn)[24-26]。

本研究建立了一種基于多孔Au@PtNCs 的比色型生物傳感器。將Anti-S. typhimurium-mAb 與Au@Pt－NCs 靜電吸附偶聯(lián)形成Au@PtNCs@mAb，用羧基化磁珠（MNPs-COOH）與Anti-S. typhimurium-pAb 進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)形成MNPs@pAb。兩者與鼠傷寒沙門(mén)氏菌溶液充分混合反應(yīng)形成MNPs@pAb-S. typhimurium-Au@PtNCs@mAb 免疫磁細(xì)菌復(fù)合物，磁分離及富集。由于A(yíng)u@PtNCs 優(yōu)良的類(lèi)過(guò)氧化物酶催化特性，加入H2O2-TMB 進(jìn)行催化反應(yīng)，溶液顏色由無(wú)色逐漸變?yōu)樗{(lán)色，最后使用酶標(biāo)儀測(cè)定652 nm 處的吸光度，從而測(cè)定計(jì)算目標(biāo)細(xì)菌濃度來(lái)實(shí)現(xiàn)可視化快速檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

以鼠傷寒沙門(mén)氏菌（ATCC 14028）為研究模型，蠟樣芽孢桿菌（CICC 10041）、單核細(xì)胞增生李斯特菌（ATCC 13932）和大腸桿菌O157∶H7（ATCC 43888）作為非靶向目標(biāo)細(xì)菌。

Anti-S. typhimurium-mAb（1 g/L），Meridian 公司；Anti-S. typhimurium-pAb（2.8 g/L），F(xiàn)itzgerald 公司；三水合氯金酸（Ⅲ）、氯鉑酸、檸檬酸三鈉、抗壞血酸、PVP（10 ku）、脫脂乳和牛血清白蛋白,Sigma Aldrich 公司；PBS 及PB 緩沖液、H2O2-TMB，索萊寶公司；BHI 培養(yǎng)基和LB 培養(yǎng)基，北京奧寶生物技術(shù)公司；MNPs-COOH（直徑180 nm），上海So-Fe 生物醫(yī)藥公司；EDC，D&B 生物；NHSS，Yanye 生物技術(shù)公司；其他試劑均為市售分析純級(jí)，北京國(guó)藥集團(tuán)。

1.2 儀器與設(shè)備

Millipore 超純水系統(tǒng)，Millipore 公司；超聲波清洗儀，昆山超聲波儀器有限公司；全波段酶標(biāo)儀Infinite M200，北京賽百奧科技有限公司；96 孔透明酶標(biāo)板，康寧公司；高速冷凍離心機(jī)，湖南湘儀有限公司；混勻儀和振蕩器，Scientific Industries 公司；恒溫培養(yǎng)箱，Benchmark 公司；JEOL JEM-1200EX 透射電子顯微鏡，JEOL 公司。

1.3 方法

1.3.1 多孔Au@PtNCs 制備

首先采用檸檬酸三鈉還原法合成13 nm AuNPs[27]，并進(jìn)行了一些修改。多孔Au@PtNCs 的形成是以AuNPs 為核進(jìn)行層層生長(zhǎng)。具體合成方案如下：取31 μL AuNPs（10 mmol/L）加入969 μL 去離子水中，然后加入20 μL PVP（質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%）在室溫下均勻混合5 min。然后加入60 μL 氯鉑酸（100 mmol/L）和40 μL 100 g/L抗壞血酸并加熱至70 °C，反應(yīng)15 min，溶液顏色由紅變黑，表明成功合成Au@PtNCs。將其冷卻至室溫，4 ℃下離心（5 500 r/min，10 min）處理2 次去除上清，沉淀用1.0 mL 的去離子水復(fù)溶，并于4 °C 儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 免疫Au@PtNCs 探針制備

免疫Au@PtNCs 探針制備具體步驟如下：取500 μL合成的1.3.1 溶液，4 °C 下離心（5 500 r/min，10 min），使用PBS（0.01 mol/L，pH 7.4）清洗1 次，去除多余的PVP，使用500 μL PBS（0.01 mol/L，pH 7.4）復(fù)溶，并加入25 μg Anti-S. typhimurium-mAb，室溫下靜電吸附3.5 h，反應(yīng)結(jié)束加入50 μL BSA 溶液（10%），封閉多余位點(diǎn)，封閉時(shí)間為1.5 h，封閉結(jié)束之后，4 °C 下離心（5 500 r/min，10 min），使用PBS（0.01 mol/L，pH 7.4）清洗1 次，去除多余未修飾的抗體，沉淀使用500 μL的專(zhuān)用復(fù)溶液復(fù)溶，并置于4 °C 保存。

專(zhuān)用復(fù)溶液：10% 的蔗糖溶液+1% 的脫脂乳+1%的PVP，配置時(shí)可用30% 的蔗糖溶液+3% 的脫脂乳+3% 的PVP 等體積混合，溶劑為PB（0.01 mol/L，pH 8.0）。

1.3.3 免疫M(jìn)NPs 的制備

取1 mg 的直徑為180 nm MNPs-COOH，用PB（0.01 mol/L，pH 6.0）清洗2 次，磁富集去除上清液，用1 mL PB（0.01 mol/L，pH 6.0）復(fù)溶；再加入EDC、NHSS，控制二者最終濃度為0.1 g/L，于室溫下反應(yīng)30 min 以達(dá)到活化羧基，反應(yīng)結(jié)束磁吸用PB（0.01 mol/L，pH 6.0）清洗去除多余的EDC、NHSS；將富集物于1 mL PB（0.01 mol/L，pH 8.0）復(fù)溶，加入200 μg Anti-S.typhimurium-pAb 置于室溫下反應(yīng)3 h 偶聯(lián)抗體，反應(yīng)結(jié)束加入100 μL 脫脂乳，封閉2 h，封閉結(jié)束磁富集清洗，于4 °C 下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4 免疫探針合成條件優(yōu)化

1.3.4.1 標(biāo)記pH

將20 μL Au@PtNCs 與20 μg Anti-S. typhimurium-mAb 使用HCl（1 mol/L）和NaOH（1 mol/L）分別調(diào)節(jié)pH 至5、6、7、8、9 的條件下進(jìn)行偶聯(lián)，反應(yīng)結(jié)束之后，4 ℃下離心（5 500 r/min，10 min）去除上清，最后將探針與1 mL 復(fù)溶液復(fù)溶，于4 ℃保存?zhèn)溆谩Ｈ≈苽涞拿庖咛结槻煌悸?lián)pH 條件20 μL Au@PtNC@mAb與20 μL MNPs@pAb 和1 mL 濃度為1.1×103CFU/mL的鼠傷寒沙門(mén)氏菌于室溫下反應(yīng)1 h，磁回收洗滌3次后，加入200 μL H2O2-TMB，在37 ℃中孵育10 min后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm。

1.3.4.2 抗體偶聯(lián)時(shí)間

將20 μL Au@PtNCs 與20 μg Anti-S. typhimurium-mAb 在最佳pH 條件下進(jìn)行不同的偶聯(lián)時(shí)間，反應(yīng)結(jié)束之后，4 ℃下離心（5 500 r/min，10 min）去除上清，最后將探針與1 mL 復(fù)溶液復(fù)溶，于4 ℃保存?zhèn)溆?。在不同偶?lián)時(shí)間條件下，取制備的免疫探針20 μL Au@PtNC@mAb 與20 μL MNPs@pAb 和1 mL 濃度為1.1× 103CFU/mL 的鼠傷寒沙門(mén)氏菌于室溫下反應(yīng)1 h，磁回收洗滌3 次后，加入200 μL H2O2-TMB，在37 ℃中孵育10 min 后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm。

1.3.4.3 抗體飽和標(biāo)記量

基于1.3.4.2 中所優(yōu)化的檢測(cè)條件，將20 μL Au@PtNCs 與10、15、20、25、30 μg Anti-S. typhimuriummAb 進(jìn)行偶聯(lián)，反應(yīng)結(jié)束之后，4 ℃下離心（5 500 r/min，10 min）去除上清，最后將探針復(fù)溶于1 mL 復(fù)溶液，于4 ℃保存?zhèn)溆?。取制備的免疫探針，即在不同抗體標(biāo)記量下的20 μL Au@PtNC@mAb 與20 μL MNPs @pAb和1 mL 濃度為1.1× 103CFU/mL 的鼠傷寒沙門(mén)氏菌于室溫下反應(yīng)1 h，磁回收洗滌3 次后，加入200 μL H2O2-TMB，在37 ℃中孵育10 min 后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm。

1.3.4.4 Au@PtNCs 探針用量

基于1.3.4.3 中所優(yōu)化的檢測(cè)條件，將不同用量的免疫探針5、10、20、30、40 μL Au@PtNCs@mAb，與20 μg MNPs@pAb 和1 mL 濃度為1.1× 103CFU/mL 的鼠傷寒沙門(mén)氏菌于室溫下反應(yīng)1 h，磁回收洗滌3 次后，加入200 μL H2O2-TMB，在37 ℃中孵育10 min 后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm。

1.3.4.5 免疫學(xué)反應(yīng)時(shí)間

基于1.3.4.4 中的所優(yōu)化的檢測(cè)條件，取30 μL Au@PtNCs@mAb 與20 μg MNPs@pAb 和1 mL 濃度為1.1×103CFU/mL 的鼠傷寒沙門(mén)氏菌在室溫下反應(yīng)，將反應(yīng)時(shí)間分別設(shè)定為10、20、30、40、50、60 min，磁回收洗滌3 次后，加入200 μL H2O2-TMB，在37 ℃中孵育10 min 后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm。

1.3.5 比色傳感器性能檢測(cè)

1.3.5.1 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的構(gòu)建

在1.3.4 中優(yōu)化的檢測(cè)條件下，分別加入0 以及97～ 9.7×106CFU/mL 不同濃度的鼠傷寒沙門(mén)氏菌，設(shè)定7 個(gè)濃度梯度，并根據(jù)1.3.4 中的方法以及優(yōu)化條件，加入一定量的Au@PtNCs 探針和免疫M(jìn)NPs，在室溫下內(nèi)反應(yīng)50 min 后，磁回收洗滌3 次，隨后加入200 μL H2O2-TMB，用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm（每個(gè)濃度重復(fù)3 次），記錄相應(yīng)的平均OD 值。

1.3.5.2 特異性實(shí)驗(yàn)

通過(guò)檢測(cè)其它3 株常見(jiàn)的食源性致病菌來(lái)評(píng)價(jià)該比色傳感器的特異性。對(duì)靶菌（鼠傷寒沙門(mén)氏菌）、非靶菌（大腸桿菌O157：H7、單核細(xì)胞增生李斯特菌和蠟樣芽孢桿菌）以及它們的混合物，根據(jù)1.3.4 中的方法以及優(yōu)化的條件，加入一定量的免疫Au@PtNCs和免疫M(jìn)NPs，在室溫下反應(yīng)一定時(shí)間后，磁回收洗滌3 次，隨后加入200 μL H2O2-TMB 并置于37 ℃中孵育10 min，用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm（每個(gè)濃度重復(fù)3次），記錄相應(yīng)的平均OD 值。

1.3.5.3 實(shí)際樣品檢測(cè)

為確定該比色型生物傳感器在真實(shí)樣品檢測(cè)中的實(shí)用性及可行性，進(jìn)行實(shí)際樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。按照國(guó)標(biāo)方法處理牛乳樣本，取上清液與不同濃度的鼠傷寒沙門(mén)氏菌混合，采用批內(nèi)和批間2 種方法。批內(nèi)實(shí)驗(yàn)測(cè)定連續(xù)1 d，同一天重復(fù)3 次，批間實(shí)驗(yàn)測(cè)定連續(xù)3 d，每天1 次，每個(gè)濃度均3 次重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 多孔Au@PtNCs 制備與表征

首先利用檸檬酸三鈉還原法合成13 nm AuNPs，呈淡紅色，用紫外—可見(jiàn)吸收光譜表征其光學(xué)性能，如圖1（a）所示，AuNPs 在520 nm 附近出現(xiàn)了很強(qiáng)的光吸收峰，同時(shí)通過(guò)TEM 對(duì)其形貌進(jìn)行微觀(guān)表征，如圖1（b）所示，結(jié)果表明材料制備成功，具有良好的單分散性。基于此，以13 nm AuNPs 為核進(jìn)行生長(zhǎng)，Pt形成多孔Au@ PtNCs，如圖1（a）所示，Au@PtNCs 溶液變?yōu)樽厣?，通過(guò)紫外—可見(jiàn)吸收光譜進(jìn)行分析，波長(zhǎng)在520 nm 處AuNPs 的吸收峰消失，這是由于Pt 殼沉積在A(yíng)u@PtNCs 表面上引起的阻尼效應(yīng)屏蔽了AuNPs 較強(qiáng)的表面等離子體共振，這與先前的研究一致[28]，表明Au@PtNCs 已形成核殼結(jié)構(gòu)。隨后進(jìn)一步通過(guò)TEM 對(duì)其進(jìn)行微觀(guān)表征，如圖1（c）所示，結(jié)果表明合成了粒徑均一且分布在100 nm 的Au@PtNCs。綜上，本研究成功合成出了粒徑均一、分散性較好的Au@PtNCs。

圖1 Au@PtNCs 表征

2.2 免疫Au@PtNCs 探針制備及優(yōu)化

抗體標(biāo)記pH、抗體偶聯(lián)時(shí)間、抗體飽和標(biāo)記量、Au@PtNCs 探針用量和免疫反應(yīng)時(shí)間對(duì)檢測(cè)條件的優(yōu)化息息相關(guān)。因此，本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)抗體標(biāo)記pH、抗體偶聯(lián)時(shí)間、抗體飽和標(biāo)記量、Au@PtNCs 探針用量及免疫反應(yīng)時(shí)間5 個(gè)條件進(jìn)行優(yōu)化，使用酶標(biāo)儀測(cè)定OD652nm。pH 會(huì)改變蛋白質(zhì)構(gòu)象影響抗體結(jié)合位點(diǎn)活性，從而使得探針結(jié)合效率發(fā)生變化。首先用NaOH（0.01 mol/L）對(duì)溶液的pH 進(jìn)行調(diào)控，結(jié)果如圖2（a）所示，當(dāng)pH 從5.0 增加到6.0 時(shí)，吸光度從0.74 增加至1.12；隨著pH 增加至9.0 時(shí)，吸光度降至0.70，在pH 為6.0 的條件下吸光值最大，這表明較高pH 不利于免疫反應(yīng)進(jìn)行，會(huì)導(dǎo)致比色信號(hào)減弱?？贵w偶聯(lián)時(shí)間也會(huì)影響探針結(jié)合效率，如圖2（b）所示，在最佳標(biāo)記pH 下，隨著抗體偶聯(lián)時(shí)間的增加，吸光度逐漸增大，偶聯(lián)時(shí)間3.5 h 吸光度達(dá)到最大水平為1.19，之后趨于平緩，3.5 h 為最佳抗體偶聯(lián)時(shí)間。在上述最優(yōu)的條件下對(duì)抗體飽和標(biāo)記量進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明抗體使用量從10 μg 到25 μg，OD652nm從0.80 迅速變?yōu)?.55，隨著抗體使用量繼續(xù)加大，吸光度上升趨勢(shì)趨于平緩，由此可確定最佳抗體飽和標(biāo)記量為25 μg，如圖2（c）；在最佳抗體飽和標(biāo)記量（25 μg）的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)免疫探針用量?jī)?yōu)化，結(jié)果如圖2（d）所示，當(dāng)探針用量從5 μL 增加至30 μL，吸光度從0.42 迅速增加至1.49，之后信號(hào)略有下降，可能是由于空間位阻造成的，由此可確定最佳探針用量為30 μL。在確定了最佳標(biāo)記pH 為6、抗體標(biāo)記量25 μg 以及免疫探針用量30 μL 的條件下，進(jìn)一步優(yōu)化免疫反應(yīng)時(shí)間。如圖2（e）所示，當(dāng)免疫反應(yīng)時(shí)間由0 min 增加到50 min 時(shí)，隨著免疫反應(yīng)時(shí)間的增加其吸光值由0.60 增至1.58，至50 min 以后不再呈明顯上升趨勢(shì)，由此可確定最佳免疫反應(yīng)時(shí)間為50 min。

圖2 檢測(cè)條件的優(yōu)化

2.3 比色傳感器對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的響應(yīng)性能分析

2.3.1 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的構(gòu)建

在確認(rèn)2.2 中優(yōu)化的檢測(cè)條件下，設(shè)置了一組具有濃度梯度的鼠傷寒沙門(mén)氏菌菌液（97～9.7×106CFU/mL）驗(yàn)證該比色傳感器的檢測(cè)性能。如圖3 所示，以鼠傷寒沙門(mén)氏菌的濃度為橫坐標(biāo)，以O(shè)D652nm為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，OD652nm與目標(biāo)細(xì)菌濃度在97～9.7×105呈現(xiàn)良好線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性方程為：y=0.274In(x)-0.8757(R2=0.987)，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算獲得該生物傳感器的最低檢測(cè)靈敏度為81 CFU/mL。此外，還使用TEM 表征形成的免疫復(fù)合物圖像，表明已經(jīng)形成了雙抗夾心復(fù)合物。

圖3 以牛乳樣本繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及免疫復(fù)合物TEM 圖像

2.3.2 特異性評(píng)價(jià)

特異性的識(shí)別對(duì)于評(píng)估分析實(shí)際樣品至關(guān)重要。用該比色型傳感器檢測(cè)鼠傷寒沙門(mén)氏菌（1.1×103CFU/mL）與其它3 株常見(jiàn)的致病菌：大腸桿菌O157：H7、蠟樣芽孢桿菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌（5×106CFU/mL），驗(yàn)證本方法對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的檢測(cè)特異性。如圖4 所示，非靶菌的吸光值明顯低于0.30。此外，含所有細(xì)菌的混合物的吸光度與目標(biāo)細(xì)菌的水平相似，吸光度均達(dá)到1.90 以上。這些結(jié)果表明，該生物傳感器檢測(cè)鼠傷寒沙門(mén)氏菌具有良好的特異性，這歸因于合成的成本低、穩(wěn)定性高的Au@PtNCs 探針具有優(yōu)異的過(guò)氧化物酶模擬催化活性。同時(shí)，結(jié)合磁分離技術(shù)對(duì)目標(biāo)細(xì)菌鼠傷寒沙門(mén)氏菌進(jìn)行分離富集，實(shí)現(xiàn)了對(duì)比色型生物傳感器信號(hào)的放大。

圖4 基于A(yíng)u@PtNCs 的比色型生物傳感器特異性評(píng)價(jià)

2.3.3 實(shí)際樣本檢測(cè)性能評(píng)價(jià)

為確定該比色型生物傳感器在真實(shí)樣品檢測(cè)中的實(shí)用性及可行性，進(jìn)行牛乳樣本的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。如表1 所示，根據(jù)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各加標(biāo)樣品批內(nèi)平均回收率為96.75%～101.75%，CV 為1.10%～5.13%，批間平均回收率為97.25%～101.35%，CV為3.01%～5.00%，以上結(jié)果說(shuō)明該生物傳感器對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的檢測(cè)具有實(shí)用性及可行性。

表1 牛乳樣本中鼠傷寒沙門(mén)氏菌的檢測(cè)分析

3 結(jié) 論

成功建立了一種基于多孔Au@PtNCs 的比色型生物傳感器檢測(cè)牛乳中鼠傷寒沙門(mén)氏菌ATCC 14028 的方法。最低檢測(cè)限為81 CFU/mL，線(xiàn)性范圍為97～9.7×105CFU/mL。對(duì)常見(jiàn)的3 株食源性致病菌進(jìn)行檢測(cè)，均沒(méi)有出現(xiàn)交叉反應(yīng)，表明該生物傳感器具有較好的特異性和選擇性。此外，在實(shí)際牛乳樣本加標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，其加標(biāo)回收率為96.75%～101.75%，CV 為1.10%～5.13%。由此方法可實(shí)現(xiàn)對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌簡(jiǎn)單、快速、靈敏的檢測(cè)，且可用于其他的生物分子或化學(xué)目標(biāo)領(lǐng)域。