用于SARS-CoV-2疫苗免疫后血漿篩選的不同ELISA試劑盒適用性評(píng)估

周志軍，王倩，彭焱，岳勝蘭，熊偉，紀(jì)德銘，馮璐，李娟，李策生，胡勇，李陶敬

1.國(guó)藥集團(tuán)武漢血液制品有限公司，湖北 武漢 430207；2.中國(guó)生物技術(shù)股份有限公司，北京 100020；3.成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司，四川 成都 610041

COVID-19 是一種由SARS-CoV-2 感染引起的急性傳染性疾?。?］。當(dāng)前國(guó)內(nèi)多款SARS-CoV-2 疫苗已上市，其安全性和有效性已獲得大量數(shù)據(jù)支撐［2-4］。截至2022 年4 月25 日，31 個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）和新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)累計(jì)報(bào)告接種SARS-CoV-2 疫苗33 3401.8 萬(wàn)劑次，使采用SARS-CoV-2 疫苗免疫后健康人血漿大規(guī)模制備COVID-19 人免疫球蛋白成為可能。目前市場(chǎng)上提供的多為用SARS-CoV-2 中和抗體相關(guān)受體結(jié)合位點(diǎn)（receptor binding domain，RBD）作為抗原檢測(cè)血漿中SARS-CoV-2 IgG 抗體的定性試劑盒［5］。國(guó)藥集團(tuán)武漢血液制品有限公司（現(xiàn)更名為國(guó)藥集團(tuán)武漢生物制藥有限公司）是最早進(jìn)行COVID-19康復(fù)期血漿療法實(shí)踐和COVID-19人免疫球蛋白制備的單位。COVID-19 疫情早期我們比較了5 家在售試劑盒，選定1 家試劑盒，用自制的內(nèi)控參考品，建立了SARS-CoV-2 IgG 抗體定量檢測(cè)的間接ELISA方法［6］。隨著SARS-CoV-2疫苗的加強(qiáng)免疫，血漿中SARS-CoV-2 抗體效價(jià)逐步提高，因此對(duì)于SARS-CoV-2 IgG 高效價(jià)血漿，需增加稀釋倍數(shù)才能使結(jié)果在線性范圍內(nèi)。另外，隨著體外診斷技術(shù)的發(fā)展，市場(chǎng)上出現(xiàn)了一批替代細(xì)胞水平中和試驗(yàn)的試劑盒［7-12］，為更精細(xì)研究血漿篩選方法，本研究收集了國(guó)內(nèi)上市的2 個(gè)RBD 作為抗原的間接ELISA 法檢測(cè)試劑盒和2 個(gè)原理相同（模擬中和過(guò)程）但操作步驟不同的研發(fā)中的國(guó)產(chǎn)中和抗體檢測(cè)試劑盒，對(duì)現(xiàn)有收漿方案進(jìn)行比較，從收漿合格率和操作便利性兩方面對(duì)試劑盒的適用性進(jìn)行評(píng)估［13］。

1 材料與方法

1.1 血漿及標(biāo)準(zhǔn)品 SARS-CoV-2疫苗免疫后血漿均由國(guó)藥集團(tuán)武漢血液制品有限公司轄屬漿站提供，經(jīng)過(guò)標(biāo)定的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)品B2由該公司自制［13］。

1.2 主要試劑及儀器 新型冠狀病毒（2019-nCoV）IgG 抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）體外診斷試劑（僅供研究及臨床試驗(yàn)用，批號(hào)：NCOG20210201B、NCOG20210702B，cutoff = 0.19）由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司（廠家A）提供；新型冠狀病毒（2019-nCoV）IgG 抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）（僅供研究及臨床試驗(yàn)用，批號(hào)：20200601、20210602，cutoff =0.105）、新型冠狀病毒（2019-nCoV）中和抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）（批號(hào)：20210802）由北京華大吉比愛(ài)生物技術(shù)有限公司（廠家B）提供；新冠病毒中和抗體定量檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：ES20210901）由上海捷諾生物科技有限公司（廠家C）提供；酶標(biāo)儀（型號(hào)：SpectroMAX plus384）由美國(guó)MD公司提供。

1.3 假病毒中和試驗(yàn) 該方法由中國(guó)食品藥品檢定研究院建立，本實(shí)驗(yàn)引進(jìn)并行方法驗(yàn)證后，用于血漿樣品檢測(cè)［13-14］。

1.4 供篩選單份血漿樣品的準(zhǔn)備 SARS-CoV-2 IgG抗體檢測(cè)按照廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用樣品稀釋液對(duì)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)品B2［13］在酶標(biāo)板孔外進(jìn)行1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640稀釋，孔外稀釋為樣品在加樣前稀釋后取100 μL 直接加入包被板孔中，而試劑盒要求樣品按照10倍（10 μL 樣品+100 μL 樣品稀釋液）稀釋上樣，因此樣品稀釋倍數(shù)≥cutoff 的最高孔外稀釋倍數(shù)／起始稀釋倍數(shù)。該試劑盒顯示B2 的稀釋倍數(shù)為32，線性范圍為1 ~ 32。單份血漿樣品首先在孔外進(jìn)行40 倍稀釋，取100 μL 直接上樣，計(jì)算其稀釋倍數(shù)（范圍覆蓋4~128）；稀釋倍數(shù)>64 樣品重新在孔外稀釋800 倍，取100 μL 直接上樣，計(jì)算其稀釋倍數(shù)（范圍覆蓋80~2 560）。廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒按照該稀釋方式檢測(cè)免疫后血漿，進(jìn)行稀釋倍數(shù)分檔。按照稀釋倍數(shù)分檔制備混合血漿（簡(jiǎn)稱混漿），編號(hào)分別為Pp16、32、64、128、200，用于后續(xù)試劑盒與中和試驗(yàn)的相關(guān)性評(píng)估。同時(shí)選取稀釋倍數(shù)> 16（檔位代號(hào)WT >16）的單份血漿留樣共2 857 份，其中稀釋倍數(shù)16 ~ 32（檔位代號(hào)WT16 ~32）936 份，稀釋倍數(shù)32 ~ 64（檔位代號(hào)WT32 ~ 64）1 081 份，稀釋倍數(shù)>64（檔位代號(hào)WT>64）840 份，用于適用性評(píng)估。

1.5 不同試劑盒檢測(cè) 將上述制備的不同檔位混漿及B2 按照不同廠家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果與假病毒中和試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，計(jì)算絕對(duì)系數(shù)，確定是否可用于免疫后血漿的篩選。

1.6 不同試劑盒篩選單份血漿及制備不同檔位混漿

1.6.1 廠家C 中和抗體定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)WT >16 的血漿 具體操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以試劑盒附帶的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照不同效價(jià)分檔制備混漿。共進(jìn)行2 輪血漿篩選和混漿制備，第1輪覆蓋WT>16的血漿所有范圍，樣品稀釋5倍后上樣；第2輪根據(jù)第1輪結(jié)果縮小范圍至WT16~64，此為與廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒產(chǎn)生主要差異的稀釋倍數(shù)范圍，樣品原倍上樣。第1輪混漿編號(hào)為JN<50、50~100、100~250、250~500、500~1 000、1 000~2 000、>2 000；第2 輪混漿編號(hào)為JNY<50，50~100，100~250，>250。

1.6.2 廠家B 中和抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)WT16 ~ 64的血漿 具體操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以試劑盒附帶的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照不同效價(jià)分檔制備混漿?；鞚{編號(hào)為GN<50、50~100、100~200、200~400、400~1 000、>1 000。

1.6.3 廠家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)WT>16 的血漿 具體操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以B2為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用樣品稀釋液對(duì)B2 在酶標(biāo)板孔外進(jìn)行1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640稀釋，孔外稀釋為樣品在加樣前稀釋后取100 μL 直接加至包被板孔中，而試劑盒要求樣品按照10倍（10 μL 樣品+100 μL 樣品稀釋液）稀釋上樣，因此樣品稀釋倍數(shù)≥ccutoff 的最高孔外稀釋倍數(shù)／起始稀釋倍數(shù)。該試劑盒顯示B2 稀釋倍數(shù)為8，按照不同稀釋倍數(shù)分檔制備混漿?；鞚{編號(hào)為GB<4、4~8、>8。

1.7 不同廠家分檔混漿的假病毒中和抗體檢測(cè)及收漿合格率計(jì)算 將3 種試劑盒篩選后制備的混漿進(jìn)行假病毒中和試驗(yàn)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定收漿標(biāo)準(zhǔn)，再根據(jù)收漿標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)的試劑盒效價(jià)檔位計(jì)算收漿合格率；3種試劑盒檢測(cè)結(jié)果不一致樣品再次混合后進(jìn)行中和試驗(yàn)，對(duì)收漿合格率排序重新確認(rèn)。

1.8 不同廠家按照收漿標(biāo)準(zhǔn)的操作便利性評(píng)估 按照收漿標(biāo)準(zhǔn)判斷單份血漿的稀釋倍數(shù)，綜合考慮操作步驟及時(shí)間，給出便利性排序。

1.9 數(shù)據(jù)采集及分析 采用Softmax 5.2軟件計(jì)算血漿樣品效價(jià)，EXCELL 軟件采集數(shù)據(jù)，GraphPad Prism 9.0軟件分析相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 不同廠家試劑盒與假病毒中和試驗(yàn)的相關(guān)性4 種試劑盒檢測(cè)結(jié)果與假病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果均具有相關(guān)性（P<0.05），均能用于免疫后血漿篩選，相關(guān)性強(qiáng)度排序?yàn)椋簭S家B 中和抗體檢測(cè)試劑盒> 廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒>廠家B ELISA-IgG抗體檢測(cè)試劑盒> 廠家C 中和抗體定量檢測(cè)試劑盒。見(jiàn)表1和表2。

表1 B2及分檔混漿不同試劑盒及假病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Results of different kits and pseudovirus neutralization tests for detection of B2 and graded pooled plasma

表2 4種試劑盒檢測(cè)結(jié)果與假病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析Tab.2 Correlation analysis between detection results of four kits and pseudovirus neutralization test results

2.2 WT > 16 血漿廠家C 中和抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果 如以假病毒中和效價(jià)50 U／mL 為收漿標(biāo)準(zhǔn)，第1 輪混漿JN ≥100 滿足要求，即按照J(rèn)N100 為標(biāo)準(zhǔn)篩選血漿能保證混漿的假病毒中和抗體水平>50 U／mL。則在826份WT>32的血漿中，廠家C 的收漿合格率為92.5%［1 -（56 + 6）／826］，略低于廠家A 的ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒的收漿合格率（100%，此輪選取的樣品均為廠家A 的合格血漿樣品），主要差異在WT32~64 的血漿中（41／380），而在WT>64的血漿中差異不大，因此第2輪樣品調(diào)整為WT16 ~ 64，以進(jìn)行進(jìn)一步分析。見(jiàn)表3。第2 輪混漿如以JN100 為收漿標(biāo)準(zhǔn)，則在536 份WT16~64的血漿中，廠家C 的收漿合格率為42.5%［（102 +125）／536］，低于廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒的收漿合格率（50.2%，269／536）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，廠家C和A在WT16~32的血漿中檢測(cè)結(jié)果一致率為70%［1 -（45 + 35）／267］，在WT32 ~ 64 的血漿中一致率為54.6%［（57 + 90）／269］，表明該中和抗體試劑盒與現(xiàn)用ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒在抗體譜上存在較大差異。見(jiàn)表4。

表3 廠家C中和抗體定量檢測(cè)試劑盒第1輪血漿篩選結(jié)果（份）Tab.3 Results of the 1st round of plasma screening by neutralizing antibody kit of manufacture C（copies）

表4 廠家C中和抗體定量檢測(cè)試劑盒第2輪血漿篩選結(jié)果（份）Tab.4 Results of the 2nd round of plasma screening by neutralizing antibody kit of manufacture C（copies）

2.3 WT16~64血漿廠家B中和抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果 如以假病毒中和抗體50 U／mL 為收漿標(biāo)準(zhǔn)，混漿GN ≥50 滿足要求，即按照GN50 為標(biāo)準(zhǔn)篩選血漿能保證混漿的假病中和抗體水平>50 U／mL。則在387 份WT16~64 的血漿中，廠家B 中和抗體檢測(cè)試劑盒收漿合格率為66.4%（1 - 130／387），高于廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒的收漿合格率（42.1%，163／387）。同時(shí)廠家B中和抗體檢測(cè)試劑盒與廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒在WT16 ~32 的血漿中檢測(cè)結(jié)果一致率為58.0%（130／224），在WT32~64 的血漿中一致率為100%，表明該中和抗體檢測(cè)試劑盒能提高現(xiàn)用廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒在WT16 ~ 32 的血漿的收漿合格率。見(jiàn)表5。

表5 廠家B中和抗體檢測(cè)試劑盒血漿篩選結(jié)果（份）Tab.5 Results of plasma screening by neutralizing antibody kit of manufacture B（copies）

2.4 WT16 ~ 64 血漿廠家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果 B2 在廠家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)稀釋倍數(shù)為8，假病毒中和抗體效價(jià)為43.5 U／mL。若以B2作為收漿標(biāo)準(zhǔn)，即以GB8為標(biāo)準(zhǔn)，廠家B 的ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒在WT16 ~32的血漿中收漿合格率為70.8%（315／445），在WT32~64的血漿中收漿合格率為82.9%（223／269），在WT >64 的血漿中收漿合格率為94.4%（372／394），在共1 108份WT>16的血漿中收漿合格率為82.1%（910／1108），高于廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒的收漿合格率［59.8%（1-445／1 108）］。廠家B 與A ELISA-IgG抗體檢測(cè)試劑盒在WT16~32的血漿中檢測(cè)結(jié)果一致率為29.2%（1 - 315／445），在WT32 ~64的血漿中一致率為82.9%（223／269），在WT>64的血漿中一致率為94.4%（372／394）。見(jiàn)表6。將廠家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒篩選合格（GB>8），其他3 種試劑盒篩選不合格的血漿（JNY < 50、WT32 ~ 64 共50 份；JNY < 50、WT16 ~ 32 共74 份；GN < 50、WT16 ~ 32 共82 份）重新混漿進(jìn)行中和抗體檢測(cè)，中和抗體效價(jià)分別為79、58、61 U／mL，均>50 U／mL，表明廠家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒能減少現(xiàn)用廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒及廠家B 和C 中和抗體檢測(cè)試劑盒在WT16 ~ 64 的漏檢率。收漿合格率排序?yàn)椋簭S家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒> 廠家B 中和抗體檢測(cè)試劑盒> 廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒> 廠家C 中和抗體檢測(cè)試劑盒。

表6 廠家B ELISA-IgG抗體檢測(cè)試劑盒血漿篩選結(jié)果（份）Tab.6 Results of plasma screening by ELISA-IgG kit of manufacture B（copies）

2.5 4種試劑盒的操作便利性比較 從操作原理、反應(yīng)時(shí)間、操作方法及線性范圍對(duì)比，見(jiàn)表7，操作便利性排序?yàn)椋簭S家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒>廠家B 中和抗體檢測(cè)試劑盒> 廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒>廠家C中和抗體檢測(cè)試劑盒。

表7 4種試劑盒比較Tab.7 Comparison of four detection kits

綜上，4種試劑盒優(yōu)選順序?yàn)椋簭S家B ELISA-IgG抗體檢測(cè)試劑盒>廠家B 中和抗體檢測(cè)試劑盒>廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒> 廠家C 中和抗體檢測(cè)試劑盒。

3 討論

目前SARS-CoV-2 中和抗體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)為中和試驗(yàn)，一般采用細(xì)胞病變抑制法［14-15］，中國(guó)食品藥品檢定研究院采用假病毒法中和試驗(yàn)［16-18］，中國(guó)科學(xué)院武漢病毒所采用傳統(tǒng)的蝕斑法中和試驗(yàn)，本研究以假病毒中和試驗(yàn)結(jié)果作為篩選混漿是否合格的最終判斷標(biāo)準(zhǔn)。

SARS-CoV-2的S蛋白由S1和S2兩個(gè)亞基組成，S1 亞基包含RBD，其與存在于上皮細(xì)胞表面的細(xì)胞表面受體血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（angiotensin converting enzyme 2，ACE2）結(jié)合［19-21］，而中和抗體是活細(xì)胞被病毒感染后在血液中產(chǎn)生的能阻斷SARS-CoV-2 細(xì)胞浸潤(rùn)和病毒復(fù)制的結(jié)合抗體亞群，通過(guò)與病毒RBD競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合細(xì)胞表面的ACE2 來(lái)阻斷病毒對(duì)細(xì)胞的侵入［22］。目前我們收集到3家體外中和抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒，其中廠家A 中和抗體檢測(cè)試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)法，在酶標(biāo)板上包被的為S 蛋白基因重組抗原，可捕獲樣本中的SARS-CoV-2 中和抗體，形成抗原抗體復(fù)合物，再加入HRP 標(biāo)記的S-RBD 抗體與中和抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被抗原，未完全模擬抗體中和的全過(guò)程，有3步孵育，時(shí)長(zhǎng)2 h，但其線性范圍窄（0~0.5 U／mL），WT > 16 的樣品需孔外20 倍稀釋才能在線性范圍內(nèi)，因此不適用于大規(guī)模篩選高效價(jià)血漿，未在本研究中采用。本研究采用了2 家完全模擬抗體中和的全過(guò)程的中和抗體檢測(cè)試劑盒，抗體效價(jià)與A450呈負(fù)相關(guān)。如廠家B 采用的競(jìng)爭(zhēng)法，廠家C 采用的競(jìng)爭(zhēng)阻斷法［23-24］，包被酶標(biāo)板的均為ACE2，酶標(biāo)記抗體為HRP 酶標(biāo)記的RBD，但兩個(gè)廠家在樣品中和程序上有所不同，其中廠家C 中和抗體檢測(cè)試劑盒與FDA 批準(zhǔn)的金斯瑞中和抗體檢測(cè)試劑盒相似并進(jìn)一步改良，雖然按照其標(biāo)準(zhǔn)制備的混漿在Pp16~64 與假病毒中和抗體效價(jià)有一定相關(guān)性，但整個(gè)操作過(guò)程繁瑣，且同一樣品不同稀釋度檢測(cè)結(jié)果差異較大，收漿合格率低于廠家A ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒，因此非最佳選擇。廠家B 中和抗體檢測(cè)試劑盒線性范圍寬（16~1 600 IU／mL），在Pp16~200與假病毒中和抗體效價(jià)有最高的相關(guān)性，目前在WT16~128的樣品無(wú)需稀釋上樣即可檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)時(shí)間短，收漿合格率也較高，但非SARS-CoV-2 的特異性免疫球蛋白產(chǎn)品和人免疫球蛋白使用該試劑盒檢測(cè)時(shí)，SARS-CoV-2抗體效價(jià)為30~50 IU／mL，因此需進(jìn)一步用未接種疫苗的健康人群血清（無(wú)SARSCoV-2 感染史）或SARS-CoV-2 疫情暴發(fā)前血漿樣本作為陰性樣本進(jìn)行檢測(cè)，以確認(rèn)其特異性。

雖然廠家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒不如其他試劑盒線性范圍寬（稀釋倍數(shù)1~8，共4 個(gè)2 倍稀釋度），但在內(nèi)控參考品和收漿標(biāo)準(zhǔn)已確定情況下，僅需3 個(gè)檔位線性范圍即可滿足篩漿要求。且本研究結(jié)果顯示，該試劑盒還能提高WT16 ~ 32 的收漿合格率，可能由于其包被抗原采用的為純化的病毒裂解物，主要成分為RBD蛋白，其覆蓋的抗體譜比重組RBD-IgG 更廣。另外，廠家B ELISA-IgG 抗體檢測(cè)試劑盒操作最簡(jiǎn)便，步驟少，因此可將該試劑盒作為優(yōu)選試劑盒，后期我們對(duì)該試劑盒進(jìn)行了全區(qū)段血漿篩選，制備混漿，與假病毒中和抗體效價(jià)進(jìn)行相關(guān)性分析，最終確認(rèn)其優(yōu)勢(shì)［25］。

本研究通過(guò)試劑盒的適用性評(píng)估建立了SARSCoV-2 抗體混漿血清盤和篩選高效價(jià)抗體所需試劑盒的評(píng)估系統(tǒng)，即用普通靜注人免疫球蛋白和特異性人免疫球蛋白作為陰性對(duì)照評(píng)估其特異性；用不同檔位混漿樣品盤（具有不同廠家中和抗體和IgG特異性抗體結(jié)果及SARS-CoV-2 假病毒中和試驗(yàn)結(jié)果）作為陽(yáng)性對(duì)照評(píng)估其線性；計(jì)算不同備選試劑盒對(duì)現(xiàn)有試劑盒不同稀釋度檔位單份血漿檢測(cè)的結(jié)果符合率，確定結(jié)果存在差異的檔位區(qū)間；制備各種檔位的混漿，滅活后用假病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)中和抗體效價(jià)，根據(jù)混漿中和效價(jià)檢測(cè)結(jié)果確定起始收漿檔位，并計(jì)算收漿合格率，確定合格率是否提高；最后比較線性范圍及樣品稀釋度，反應(yīng)時(shí)間和步驟，確定操作便理性。通過(guò)本研究可在眾多備選試劑盒中篩選出性價(jià)比滿足要求的試劑盒，也可為同類問(wèn)題提供參考。