精液標(biāo)本液化后不同時(shí)間檢測(cè)對(duì)精液參數(shù)的影響觀察

【摘要】目的 探討精液標(biāo)本液化后不同時(shí)間檢測(cè)對(duì)精液參數(shù)的影響，為臨床提供參考。方法 選取2021年1月至12月于瓊海市中醫(yī)院行精液檢查的1 000例男性作為研究對(duì)象進(jìn)行回顧性分析，采集所有入組對(duì)象精液標(biāo)本后分別于液化后15、30、60、90 min時(shí)對(duì)精子級(jí)別、精子密度（PMSC）、精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)[鞭打頻率（BCF）、側(cè)擺幅度（ALH）、擺動(dòng)性（WOB）、軌跡速度（VCL）、前向性（STR）、平均移動(dòng)角度（MAD）、直線性（LIN）、直線運(yùn)動(dòng)速度（VSL）及平均路徑速度（VAP）]、精子活力、精子活動(dòng)率、精子濃度及圓細(xì)胞濃度進(jìn)行分析。結(jié)果 15 min時(shí)a、b級(jí)（Grade a、Grade b）精子占比顯著高于30 min，a、b、c級(jí)、a+b級(jí)、a+b+c級(jí)（Grade a、Grade b、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c）精子占比顯著高于60、90 min時(shí)；30 min時(shí)Grade c精子占比顯著高于60 min時(shí)，Grade a、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c精子占比顯著高于90 min時(shí)；60 min時(shí)Grade c精子占比顯著高于90 min時(shí)（Plt;0.05）。各時(shí)間點(diǎn)PMSC、BCF、MAD及LIN比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），15 min時(shí)STR顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)，15 min時(shí)WOB、VCL、VSL及VAP顯著高于90 min，30 min時(shí)ALH、WOB、VCL顯著高于90 min（Plt;0.05）。15 min時(shí)精子活力、精子活動(dòng)率顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)，30 min時(shí)精子活力、精子活動(dòng)率顯著高于60、90 min時(shí)，60 min時(shí)精子活力、精子活動(dòng)率顯著高于90 min時(shí)（Plt;0.05）；各時(shí)間點(diǎn)精子濃度、圓細(xì)胞濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論 精液標(biāo)本液化后應(yīng)于15 min或30 min內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，此時(shí)間段檢測(cè)對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較小，若在精液標(biāo)本液化后60 min后進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果差異較大。

【關(guān)鍵詞】精液標(biāo)本；液化；檢測(cè)時(shí)間；精液參數(shù)

【中圖分類號(hào)】R697 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2096-2665.2023.11.0125.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2023.11.042

精液指雄性動(dòng)物或男性人類在射精時(shí)，從尿道中射排出體外的液體，而精液檢查是計(jì)劃生育研究和不孕癥診治過(guò)程中的一項(xiàng)重要檢查，通過(guò)精液檢查，可以了解男性的生育能力[1-2]。正常情況下，檢查生殖能力的主要檢查指標(biāo)有精子的活動(dòng)率及活動(dòng)力，精子的活動(dòng)率采用百分?jǐn)?shù)表示，而活動(dòng)力則是指尾部有運(yùn)動(dòng)的精子[3]。目前，可通過(guò)對(duì)精液參數(shù)檢測(cè)客觀了解精子的活動(dòng)率、活動(dòng)力及密度等參數(shù)，但由于標(biāo)本完整性、黏稠度及精液是否完全液化等因素導(dǎo)致檢查結(jié)果具有較大的差異性[4]。相關(guān)研究顯示，精液標(biāo)本通常在液化后立即或射精后1 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)[5-6]。目前對(duì)于精液標(biāo)本液化后放置不同時(shí)間對(duì)精液參數(shù)的影響報(bào)道較少。本研究分別在精液留取后不同時(shí)間段對(duì)精液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)分析，比較不同時(shí)間點(diǎn)精液參數(shù)的差異，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2021年1月至12月于瓊海市中醫(yī)院行精液檢查的1 000例男性的臨床資料，年齡20～45歲，平均年齡（31.72±4.86）歲。本研究經(jīng)瓊海市中醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥20歲；②體檢健康者；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①檢查前禁欲gt;7 d；②精液標(biāo)本未在15 min內(nèi)送檢；③患有無(wú)精子癥者。

1.2 檢測(cè)方法 所有入組對(duì)象均按照相關(guān)實(shí)驗(yàn)規(guī)定進(jìn)行檢測(cè)[7]。檢測(cè)前禁欲2～7 d，采用體外射精或手淫法留取精液并置于干燥無(wú)菌的容器中，送檢時(shí)間應(yīng)控制在30 min內(nèi)。將裝有精液的容器置于37 ℃的孵箱，待液化完成后，分別留取液化15、30、60、90 min時(shí)的標(biāo)本。將不同時(shí)段的標(biāo)本充分搖勻后，取5 μL精液于紅寶石精子計(jì)數(shù)板上，然后采用計(jì)算機(jī)輔助的精液分析系統(tǒng)（北京偉力新世紀(jì)科技發(fā)展有限公司，型號(hào)：WLJY-9000）對(duì)精子級(jí)別、精子密度（PMSC）、精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)[鞭打頻率（BCF）、側(cè)擺幅度（ALH）、擺動(dòng)性（WOB）、軌跡速度（VCL）、前向性（STR）、平均移動(dòng)角度（MAD）、直線性（LIN）、直線運(yùn)動(dòng)速度（VSL）及平均路徑速度（VAP）]、精子活力、精子活動(dòng)率、精子濃度、圓細(xì)胞濃度進(jìn)行分析，每次分析取6個(gè)視野，精子總數(shù)gt;200條，獲取結(jié)果后取平均值。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較不同時(shí)間點(diǎn)各級(jí)精子百分率。分級(jí)[8]：a級(jí)（Grade a）指快速向前運(yùn)動(dòng)的精子；b級(jí)（Grade b）指向前運(yùn)動(dòng)，但運(yùn)動(dòng)較慢的精子；c級(jí)（Grade c）指雖然在運(yùn)動(dòng)，但不是朝著前方運(yùn)動(dòng)，而是隨機(jī)向各個(gè)方向運(yùn)動(dòng)的精子；d級(jí)（Grade d）指不運(yùn)動(dòng)的精子。②比較不同時(shí)間點(diǎn)PMSC及精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)。③比較不同時(shí)間點(diǎn)精子活力、精子活動(dòng)率、精子濃度及圓細(xì)胞濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以（x）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)間點(diǎn)各級(jí)精子百分率比較 15 min時(shí)Grade a、Grade b精子占比顯著高于30 min，Grade a、Grade b、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c精子占比顯著高于60、90 min時(shí)；30 min時(shí)Grade c精子占比顯著高于60 min時(shí)，Grade a、Grade c、Grade a+Grade b、Grade a+Grade b+Grade c精子占比顯著高于90 min時(shí)；60 min時(shí)Grade c精子占比顯著高于90 min時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），見(jiàn)表1。

2.2 不同時(shí)間點(diǎn)PMSC及精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)比較 各時(shí)間點(diǎn)PMSC、BCF、MAD及LIN比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），15 min時(shí)STR顯著高于30、60、90 min時(shí)，15 min時(shí)WOB、VCL、VSL及VAP顯著高于90 min，30 min時(shí)ALH、WOB及VCL顯著高于90 min，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），見(jiàn)表2。

2.3 不同時(shí)間點(diǎn)精子活力、精子活動(dòng)率、精子濃度及圓細(xì)胞濃度比較 15 min時(shí)精子活力、精子活動(dòng)率顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)，30 min時(shí)精子活力、精子活動(dòng)率顯著高于60、90 min時(shí)，60 min時(shí)精子活力、精子活動(dòng)率顯著高于90 min時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；各時(shí)間點(diǎn)精子濃度、圓細(xì)胞濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

精液參數(shù)是男性生育能力重要的檢查之一，CASA- CMP系統(tǒng)則是分析精液的活動(dòng)率、活動(dòng)力及活力的一種檢測(cè)方式，其具有較高的準(zhǔn)確性。精液剛排出體外時(shí)呈凝膠狀態(tài)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間會(huì)變成液體狀態(tài)，這一過(guò)程稱為液化。液化時(shí)間就是指新排出的精液由凝膠轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂闪鲃?dòng)狀態(tài)所需的時(shí)間。室溫下，正常精液標(biāo)本在60 min內(nèi)完全液化，如果精液射出30 min后仍不液化，則屬于不正常[9]。精液采集和分析精子樣本的時(shí)間間隔是影響分析結(jié)果的重要因素，也是檢驗(yàn)前質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)，為確保臨床分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)嚴(yán)格控制和規(guī)范精子樣本采集和分析的時(shí)間間隔。另外，由于臨床中精液分析缺乏標(biāo)準(zhǔn)性，因此同一實(shí)驗(yàn)室不同人員和不同實(shí)驗(yàn)室分析結(jié)果出現(xiàn)差異，從而導(dǎo)致精液分析結(jié)果的不準(zhǔn)確性。

精液標(biāo)本隨放置的時(shí)間延長(zhǎng)，精子分級(jí)的百分率均有所下降。本研究顯示，與15 min時(shí)比較，30、60、90 min時(shí)Grade a、Grade b精子百分率顯著下降，而Grade c精子百分率在15 min和30 min時(shí)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在60 min時(shí)下降，且90 min時(shí)下降更為明顯。相關(guān)研究顯示，隨標(biāo)本放置的時(shí)間越長(zhǎng)，Grade a、Grade b精子百分率均顯著下降[10]。本研究與上述研究結(jié)果相符。精子的VCL、VSL及VAP都是以精子頭部為基準(zhǔn)，其作為衡量精子頭部在單位時(shí)間內(nèi)的相對(duì)距離或運(yùn)動(dòng)的參考，反映了精子的運(yùn)動(dòng)能力，即側(cè)擺的幅度和方向，因此可以認(rèn)為，延長(zhǎng)精子在體外停留的時(shí)間，不僅會(huì)降低精子的運(yùn)動(dòng)能力，還會(huì)影響其運(yùn)動(dòng)方式[11]。本研究還對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)PMSC及精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)隨放置時(shí)間的延長(zhǎng)，精子的運(yùn)動(dòng)參數(shù)中STR逐漸降低，精液放置越久BCF有所增加，但不同時(shí)間點(diǎn)PMSC、MAD、LIN、STR、BCF比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，WOB在90 min時(shí)呈上升趨勢(shì)，ALH、VCL、VSL及VAP在90 min時(shí)呈下降趨勢(shì)，且與15 min時(shí)比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？赡苁怯捎诒狙芯坑^察時(shí)間較短，精子PMSC、BCF、MAD及LIN無(wú)明顯改變。

精液標(biāo)本液化后，其放置時(shí)間越長(zhǎng)，精子的活力和精子的活動(dòng)率就會(huì)顯著下降[12]。本研究分別對(duì)液化后的第15、30、60、90 min時(shí)的精子活力、精子活動(dòng)率、精子濃度、圓細(xì)胞濃度進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各時(shí)間點(diǎn)的精子活力和精子活動(dòng)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但各時(shí)間點(diǎn)的精子濃度和圓細(xì)胞濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說(shuō)明時(shí)間越久精子力和精子活動(dòng)率顯著降低。本研究還發(fā)現(xiàn)，精子活動(dòng)力呈無(wú)規(guī)律性下降，主要是由于精液標(biāo)本保存時(shí)間越長(zhǎng)，精液會(huì)出現(xiàn)較高的酸性度，其會(huì)改變精液中絲氨酸蛋白酶的活性，在一定程度上阻礙精子的活動(dòng)力，導(dǎo)致精子活動(dòng)力和活動(dòng)率下降。

綜上所述，精液標(biāo)本液化后應(yīng)于15 min或30 min內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，此時(shí)間段檢測(cè)對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較小，若在精液標(biāo)本液化后60 min后進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果差異較大。

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