新疆昌吉某雞場雞源大腸桿菌耐藥性調(diào)查

摘要：為了解新疆昌吉某雞場雞源大腸桿菌對臨床常用抗菌藥物的耐藥情況。從新疆昌吉濱湖鎮(zhèn)某雞場采集不同品種雞的肛拭子樣并分離大腸桿菌，采用瓊脂稀釋法檢測其對抗菌藥物的耐藥情況。結(jié)果顯示，該雞場烏雞、蘆花雞和公雞三個品種中分離的大腸桿菌均對10種抗生素中的喹諾酮類和氨基糖苷類有極高的耐藥性，最高可達98%。烏雞攜帶的大腸桿菌對氨芐西林耐藥率顯著低于蘆花雞、對阿米卡星耐藥率顯著高于蘆花雞。烏雞攜帶的大腸桿菌對諾氟沙星、恩諾沙星、阿米卡星耐藥率顯著高于公雞，對頭孢噻呋和氨芐西林藥率顯著低于公雞。蘆花雞攜帶的大腸桿菌對諾氟沙星、恩諾沙星耐藥率顯著高于公雞，對頭孢噻呋耐藥率顯著低于公雞?？傮w來說，此雞場大腸桿菌對常用抗生素耐藥情況較為嚴(yán)重，此雞場耐藥率高，耐藥譜廣，須在臨床治療細菌性疾病中避開使用不敏感的抗生素。

關(guān)鍵詞：品種；大腸桿菌；抗生素；耐藥；瓊脂稀釋法

大腸埃希氏菌俗稱大腸桿菌，是埃希氏菌屬的代表菌，是動物腸道中的正常菌群之一，也是環(huán)境中的常在菌。在人和動物出生后的數(shù)小時，大腸桿菌即可經(jīng)口進入消化道后段，大量繁殖而定居，終生伴隨，并經(jīng)糞便不斷散播于周圍環(huán)境[1]。大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的畜禽不同類型疾病的總稱，包括禽類的急性敗血癥、肉芽腫、氣囊炎、肝周炎、心包炎、關(guān)節(jié)炎、卵黃性腹膜炎、輸卵管炎、肺炎等[2]，是養(yǎng)殖業(yè)中最常見的一類細菌性疾病。由于特別是抗菌藥物的濫用，大腸桿菌耐藥譜不斷擴大和耐藥水平不斷提高，給我國畜牧業(yè)的持續(xù)發(fā)展和人類健康帶來嚴(yán)重的危害。我國各地對家畜源性大腸桿菌的耐藥性進行檢測，從陜西、寧夏、新疆等地區(qū)均對大腸桿菌耐藥性進行了報道。根據(jù)報道可知畜禽所攜帶的大腸桿菌具有廣泛的耐藥性，嚴(yán)重影響畜禽行業(yè)的發(fā)展進度。本試驗對從昌吉濱湖鎮(zhèn)某養(yǎng)殖場分離的雞源大腸桿菌進行藥物敏感性試驗，并比較不同品種源大腸桿菌對抗菌藥物的耐藥率，分析臨床用藥對耐藥菌株產(chǎn)生的風(fēng)險，為臨床用藥方案提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 樣品、試驗菌株

2015 年10月在新疆昌吉濱湖鎮(zhèn)某雞場進行樣品采集，分別采集品種烏雞、蘆花雞和公雞的肛拭子樣，依次為41、50和51份。大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌（ATCC25922）購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2 培養(yǎng)基

麥康凱培養(yǎng)基、MH（Mueller-Hinton）培養(yǎng)基和普通肉湯培養(yǎng)基，均購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司。

1.3 試驗藥品

茁-內(nèi)酰胺類：阿莫西林（A，含量86.8%）轅克拉維酸（C，含量100%）、頭孢噻呋（CEF，含量100%）和氨芐西林（AMP，含量86.5%）；喹諾酮類：環(huán)丙沙星（CIP，含量100%）、諾氟沙星（NOF，含量99.6%）和恩諾沙星（ENR，含量100%）；氨基糖苷類：安普霉素（APR，含量55.8%）、阿米卡星（AMK，含量65.5%）和慶大霉素（GEN，含量54.6%）；酰胺醇類：氟苯尼考（FLR，含量99.2%）。上述藥品均為標(biāo)準(zhǔn)品，購自中國獸藥監(jiān)察所。

1.4 大腸桿菌分離鑒定方法

用滅菌肛拭子輕插入雞的肛門內(nèi)，將沾有糞樣的肛拭子放入內(nèi)有1 mL 滅菌營養(yǎng)肉湯的EP 管中，37 益恒溫培養(yǎng)12 h，在麥康凱瓊脂平板上劃線，置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37 益培養(yǎng)18耀24 h后，平板上生長出一致的粉紅色菌落，為大腸桿菌，挑取單菌落，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 試驗方法

采用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會推薦的瓊脂稀釋法對分離的大腸桿菌進行上述抗菌藥物的最小抑菌濃度值測定。以ATCC25922菌株作為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控，如其對被檢抗菌藥物的MICs均在質(zhì)控范圍內(nèi)且有梯度，則試驗測得的MICs結(jié)果有效。

2 結(jié)果與分析

2.1 大腸桿菌的分離結(jié)果

雞場不同品種雞的肛拭子樣共142 份，經(jīng)分離鑒定，共分離得到142株大腸桿菌，分離率為100%。

2.2 不同品種雞源大腸桿菌對抗菌藥物的耐藥結(jié)果及耐藥性比較

烏雞的耐藥情況為：環(huán)丙沙星97.6%（40 株）、諾氟沙星92.7%（38 株）、恩諾沙星82.9%（34 株）、頭孢噻呋65.8%（27 株）、氨芐西林39.0%（16 株）、阿莫西林85.4%（35 株）、安普霉素39.0%（16株）、阿米卡星68.3%（28 株）、慶大霉素97.6%（40 株）和氟苯尼考73.2%（30株）。其中對臨床常用藥物敏感的有頭孢噻呋、安普霉素、氨芐西林和氟苯尼考。

蘆花雞源大腸桿菌對：環(huán)丙沙星98.0%（49 株）、諾氟沙星94.0%（47株）、恩諾沙星94.0%（47株）、頭孢噻呋70.0%（35株）、氨芐西林90.0%（45 株）、阿莫西林96.0%（48 株）安普霉素22.0%（11株）、阿米卡星8.0%（4 株）、慶大霉素98.0%（49 株）和氟苯尼考86.0%（43株）耐藥。該品種的敏感藥物有阿米卡星和安普霉素。公雞的耐藥情況為環(huán)丙沙星90.2%（46 株）、諾氟沙星51.0%（26株）、恩諾沙星45.1%（23 株）、頭孢噻呋86.3%（44 株）、氨芐西林76.5%（49株）、阿莫西林90.2%（46株）、安普霉素35.3%（18株）、阿米卡星2.0%（1 株）、慶大霉素92.2%（47 株）和氟苯尼考86.3%（44株）。本雞場蘆花雞對阿米卡星極為敏感。

不同品種雞大腸桿菌多藥耐藥情況比較，烏雞大腸桿菌多藥耐藥現(xiàn)狀最嚴(yán)重，3耀10 耐均有分布，以8 耐（31.7%）和9 耐（31.7%）為主導(dǎo)，其次為7 耐（12.2）、6 耐（7.3%）10 耐（7.3%）、5 耐（4.9%）、4耐（2.4%）和3 耐（2.4%），0耀3 耐均為0；蛋雞大腸桿菌多藥耐藥情況較為嚴(yán)重，2 耐和9 耐均有分布，以7 耐（31.4%）和8 耐（23.5%）為主導(dǎo)，其次6 耐（13.7 %）、10 耐（9.8%）、5 耐（7.85）、4 耐（7.8%）、3 耐（3.9%）和2耐（2%），0耀1耐均為0。蘆花雞大腸桿菌4耀10耐均有分布，以8 耐（52%）和7 耐（24%）為主，其次為9 耐（10%）、6 耐（6%）、5耐（2%）、4 耐（2%）和10耐（2%），這三個品種大腸桿菌多耐藥情況比較，烏雞大腸桿菌多藥耐藥情況最嚴(yán)重，且分布也較廣泛。

3 不同品種雞源大腸桿菌耐藥譜型

蘆花雞大腸桿菌7 耐的主要耐藥譜A/C/CEF/AMP/CIP/NOF/ENR/GEN（24%，12/50）；8 耐的主要耐藥譜型A/C/CEF/AMP/CIP/NOF/ENR/GEN/FLR（52%，26/50）；烏雞大腸桿菌8 耐A/C/CEF/AMP/CIP/NOF/ENR/GEN/FLR（31.7%，13/41）；9 耐的主要耐藥譜A/C/CEF/AMP/CIP/NOF/ENR/GEN/FLR/APR（5.4 %，5/92）。

蛋雞大腸桿菌7 耐的主要耐藥譜為A/C/AMP/CIP/NOF/ENR/GEN/FLR（31.4%，16/51），8 耐的耐藥譜為A/C/CEF/AMP/CIP/NOF/ENR/GEN/FLR（23.5%，12/51）

4 討論

隨著喹諾酮類、茁-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和酰胺醇類抗生素在獸醫(yī)臨床中廣泛地使用，很容易造成細菌耐藥性。20世紀(jì)50年代-90年代初研究動物大腸桿菌耐藥性變化趨勢時發(fā)現(xiàn)，隨著時間的推移，大腸桿菌耐藥率大幅度上升，耐藥譜迅速增寬。近年來，國內(nèi)也有很多關(guān)于動物源大腸桿菌耐藥性報道。程雷等[3]對分離于江蘇部分雞場的雞致病性大腸桿菌對26 種抗生素的耐藥性檢測，85%耀95%的分離菌株對紅霉素、鏈霉素和青霉素耐藥，100%的分離菌株對氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑青霉素、青霉素、利福平、復(fù)方新諾明、四環(huán)素、萬古霉素耐藥。栗艷[4]對山西省不同地區(qū)5個規(guī)模養(yǎng)雞場的病死雞進行分離鑒定，結(jié)果為雞致病性大腸桿菌感染，分離菌株對阿莫西林、氨芐西林、鏈霉素和諾氟沙星等均有較高程度耐藥性。該結(jié)果與本試驗對阿莫西林、氨芐西林耐藥結(jié)果一致，都有較高的耐藥性。金文杰等[5]對分離保存的216 株禽致病性大腸桿菌進行氨基糖苷類藥物耐藥基因的分子流行病學(xué)檢測，藥敏試驗結(jié)果顯示所有被檢菌株對鏈霉素耐藥率為68.9%，而對阿米卡星的耐藥率為38.9%。與本次試驗結(jié)果不太相同，此次耐藥性結(jié)果為除烏雞對阿米卡星耐藥性較高，其余都對阿米卡星極為敏感。

以上研究結(jié)果表明，中國大部分地區(qū)的雞源大腸桿菌對抗菌藥物耐藥程度都較高，而本實驗雞源大腸桿菌對10種藥物中的環(huán)丙沙星，諾氟沙星、恩諾沙星、氨芐西林、阿莫西林、慶大霉素、恩諾沙星和氟苯尼考的耐藥性較高，對阿米卡星和安普霉素敏感。在以后的預(yù)防及用藥過程中應(yīng)盡量減少這些藥物的使用頻率。

通過此次試驗可以了解到烏雞的耐藥性最高，耐藥譜最廣，蛋雞的耐藥率略低。烏雞和蛋雞的耐藥率差異性最大。應(yīng)注意給藥方案的制定，根據(jù)其品種使用敏感藥物。烏雞和蘆花雞耐藥率較相近，僅有兩種藥的耐藥率差異性顯著，故在給藥時基本可以用同種敏感藥物治療。蘆花雞的生長周期更長，一般在4耀6個月才會出欄。所以投入抗生素的鈅懵|_gt;燴_時間會比別的品種更長一些，故耐藥率同樣會高，耐藥譜比較廣。

5 結(jié)語

綜上所述，今后該雞場治療細菌性疾病時，應(yīng)慎用上述耐藥率高的藥物，防止短期內(nèi)耐藥菌株增多，導(dǎo)致治療失敗。建議使用耐藥率低的藥物為安普霉素和阿米卡星。

參考文獻：

[1] 金升藻， 金巍， 葉微. 大腸桿菌耐藥性研究進展[J]. 上海畜牧獸醫(yī)通訊，2008（6）：17-18.

[2] 王晶任，魚艷榮，張彥明，等.雞源大腸桿菌某些生物學(xué)特性與致病力相關(guān)性研究[J].中國家禽，1999，21（11）：10-12.

[3] 程雷，陳昌海，嚴(yán)建剛.江蘇省部分雞場雞致病性大腸桿菌分離株藥敏試驗[J].中國獸藥雜志，1999（3）：34-36.

[4] 栗艷.雞致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].畜禽業(yè)，2013（10）：12-13.

[5] 金文杰，秦愛建，鄭志明，等.禽致病性大腸桿菌中四種抗氨基糖苷類藥物耐藥基因的分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2007，29（5）：401-404.