禽偏肺病毒滅活疫苗攻毒保護(hù)效力評(píng)估實(shí)驗(yàn)

摘要：為評(píng)估不同偏肺病毒疫苗和不同免疫程序?qū)η萜尾《镜谋Ｗo(hù)效力。本實(shí)驗(yàn)采用SPF雞作為實(shí)驗(yàn)雞群，將40只1日齡SPF雞平均分為4組，將2種自制的偏肺病毒滅活疫苗作為實(shí)驗(yàn)樣本。21日齡進(jìn)行滅活疫苗免疫，免疫21d后以4× 105.5 TCID50APV野毒進(jìn)行攻毒。攻毒后觀察14 d，記錄觀察和監(jiān)測(cè)臨床癥狀、采食和飲水情況、抗體水平。攻毒保護(hù)結(jié)果顯示：兩組禽偏肺病毒滅活疫苗攻毒保護(hù)效果均可達(dá)80%。

關(guān)鍵詞：禽偏肺病毒；滅活疫苗；攻毒保護(hù)

禽偏肺病毒（avian metapneumovrus，aMPV）屬于副黏病毒科肺病毒屬，感染火雞引起鼻氣管炎（turkey rhinotrachetitis，TRT）。該病主要感染雞和火雞，對(duì)雞的感染常因多種細(xì)菌和病原的混合感染，引起腫頭綜合癥（swollen head syndrome，SHS），上世紀(jì)70 年代南非首次報(bào)道了禽偏肺病毒引發(fā)的家禽發(fā)病。此后，歐洲也報(bào)道了本病，英國和法國相繼也分離到病原。1997 年，美國首次報(bào)道火雞感染偏肺病毒發(fā)病，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。

aMPV屬副黏病毒科肺病毒亞科。根據(jù)編碼禽肺病毒G蛋白的基因不同將歐洲病毒株分為兩個(gè)亞型，即aMPV/A（英國）和aMPV/B（歐洲大陸）。1997年美國分離到aMPV/C亞型，aMPV/C 亞型喻aMPV/A 和aMPV/B 有明顯區(qū)別，而與人偏肺病毒的基因組相似。2000 年，法國首先分離到aMPV/D亞型[1]。

大多數(shù)火雞飼養(yǎng)的國家都有本病存在和流行，僅限于血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。目前aMPV報(bào)道有檢測(cè)到的國家有南非、歐洲大陸、美國、法國、巴西、中國、韓國、日本、以色列、約旦以及尼日利亞等國家。國內(nèi)有研究人員也有對(duì)aMPV 種雞感染血清學(xué)的報(bào)道，發(fā)現(xiàn)種雞群中普遍存在aMPV 感染，多個(gè)雞群血清陽性率達(dá)到100%，而且開產(chǎn)前后或30 周齡左右易感染，抗體水平明顯升高[2]。一些雞場(chǎng)aMPV感染呈一過性，不便確診，但有些雞場(chǎng)呈典型的腫頭綜合癥狀，如雞場(chǎng)零星發(fā)病，雞臉、眼瞼和頭部腫脹，精神沉郁，整個(gè)頭部面部嚴(yán)重腫脹，下頜和頸上水腫，進(jìn)而繼發(fā)感染，對(duì)生產(chǎn)成績和產(chǎn)蛋率造成比較大的影響。

由于aMPV對(duì)禽類危害較大，尤其是對(duì)家禽的上呼吸道健康造成比較大的威脅，容易繼發(fā)感染IBV、H9、支原體、大腸桿菌等呼吸道病原，導(dǎo)致雞群嚴(yán)重發(fā)病影響產(chǎn)蛋和體重增長，造成較大經(jīng)濟(jì)損失。所以人們對(duì)該病毒的防控工作歷來都比較重視和關(guān)注。傳統(tǒng)活疫苗的安全性限制了其在田間的推廣和應(yīng)用，針對(duì)aMPV的滅活疫苗是一個(gè)值得研究的方向和策略。本研究利用研究室自制的2種禽偏肺病毒滅活疫苗進(jìn)行攻毒保護(hù)評(píng)估，結(jié)果表明2種禽偏肺病毒滅活疫苗都能夠?qū)MPV野毒產(chǎn)生80%的保護(hù)力，這為下一步規(guī)?；B(yǎng)禽場(chǎng)制定科學(xué)合理的aMPV防控措施和免疫程序提供了參考。

1 材料與方法

試驗(yàn)疫苗：偏肺滅活疫苗1# 和偏肺滅活疫苗2# 為研究院自行研制。

攻毒用毒株：B型aMPV RPVA0201 株F4 代，病毒含量為105.89TCID50/0.1 mL，由瑞普生物家禽研究中心提供。

商品化SPF種蛋和SPF雞均購自北京勃林格殷格翰維通生物技術(shù)有限公司。

檢測(cè)試劑盒：禽偏肺病毒ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒購自IDEXX公司；QiAamp viral RNA Mini kit 購自QiAamp。

試驗(yàn)耗材：酒精棉、剪刀、鑷子、手術(shù)刀片、離心管、1mL 注射器均由瑞普生物動(dòng)物評(píng)價(jià)中心提供。

2 實(shí)驗(yàn)分組及方法

將40 只21 日齡SPF 雞隨機(jī)分成4 組，每組10 只，第1耀5 組按表1進(jìn)行免疫，第6 組不免疫作對(duì)照。免后21 d采血，ELISA 檢測(cè)血清抗體；同時(shí)各組進(jìn)行滴鼻/點(diǎn)眼攻毒，0.4 mL/只（約含4伊105.5TCID50），攻毒后第5 天各組采集咽拭子，進(jìn)行PCR 檢測(cè)，活疫苗組進(jìn)行病毒分離。攻毒后觀察14 d，每天觀察雞只是否有精神沉郁、采食和飲水下降、氣管啰音，打噴嚏，流鼻液，眶下竇腫脹和頸下水腫，嚴(yán)重者咳嗽、甩頭等癥狀并記錄。攻毒后第14 天進(jìn)行剖檢，觀察氣管、喉頭是否有出血點(diǎn)及黏液；肺臟是否出現(xiàn)淤血、實(shí)變、萎縮等臨床癥狀。動(dòng)物分組、免疫及攻毒情況見表1。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 臨床觀察結(jié)果

攻毒后連續(xù)觀察14 d，第1組在攻毒后14 d內(nèi)保護(hù)率為90%（9/10），其中1 只于攻毒后第5 天出現(xiàn)流鼻涕。第2 組在攻毒后14 d內(nèi)保護(hù)率為80%（8/10），其中2 只于攻毒后第7 天出現(xiàn)流鼻涕。第3組在攻毒后14 d內(nèi)發(fā)病率為40%（4/10），其中2只于第5天出現(xiàn)流鼻涕；2只于第6天在采咽拭子時(shí)喉頭有黏液。第4 組臨床無異常。

3.2 剖檢結(jié)果

攻毒后14 d剖檢，第1組保護(hù)率為80%（8/10），其中1 只喉頭氣管出現(xiàn)黏液，1 只肺臟出現(xiàn)淤血；第2 組保護(hù)率為80%（8/10），其中1 只喉頭出現(xiàn)黏液，1 只喉頭氣管有出血點(diǎn)；第3 組病變率為50%（5/10），其中4 只喉頭出現(xiàn)黏液，1 只出現(xiàn)肺臟實(shí)變；第4 組無異常。剖檢發(fā)病匯總結(jié)果見表2，剖檢病變典型照片見圖1。

3.3 不同疫苗免疫后21 d雞血清抗體測(cè)定結(jié)果

免疫后21 d采血，分離血清，并進(jìn)行ELISA 抗體檢測(cè)，結(jié)果見表4。第1 組平均抗體滴度為42 446，第2 組平均抗體滴度為33480，第3 組平均抗體滴度為0，第4 組平均抗體滴度為0，第3 和第6 組抗體均為陰性。抗體檢測(cè)結(jié)果見表3。

4 結(jié)果分析

從臨床癥狀看，免疫滅活苗1# 組雞保護(hù)率為80%，免疫滅活苗2# 組雞保護(hù)率為80%，攻毒對(duì)照組發(fā)病率60%，說明滅活苗能產(chǎn)生一定的保護(hù)力。

從病理變化看，免疫滅活苗1# 組雞保護(hù)率為80%，免疫滅活苗2#組雞保護(hù)率為80%，攻毒對(duì)照組50%有病理變化。從抗體檢測(cè)結(jié)果看，雞免疫滅活苗后均可以產(chǎn)生ELISA抗體。免疫后21 d，免疫滅活苗1# 組雞平均ELISA 抗體滴度為42 446，免疫滅活苗2# 組雞平均ELISA 抗體滴度為33 480，攻毒對(duì)照組沒有檢測(cè)到ELISA抗體。

5 討論

aMPV 禽偏肺病毒已成為危害世界養(yǎng)禽業(yè)的重要疫病之一[3]，特別是在火雞養(yǎng)殖業(yè)由aMPV 引起的呼吸道疾病所造成的危害僅次于禽流感病毒，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。禽偏肺病毒通?？梢砸痣u的呼吸道感染，而且是導(dǎo)致肉雞腫頭綜合征的重要誘因之一[4]。有研究表明，aMPV感染雞后，可引發(fā)特異性抗體反應(yīng)，但并不一定會(huì)導(dǎo)致發(fā)病[5]。雖然aMPV可以引起商品雞的產(chǎn)蛋下降和SHS的發(fā)生，但其帶來的經(jīng)濟(jì)損失遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于火雞。

由于aMPV對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害較大，也引起了人們對(duì)該病毒的防控工作的關(guān)注和重視。用于火雞和雞的aMPV疫苗也正在開發(fā)中。傳統(tǒng)的減毒活疫苗易出現(xiàn)病毒返強(qiáng)現(xiàn)象，有造成病毒擴(kuò)散的潛在風(fēng)險(xiǎn)，滅活疫苗的研究和開發(fā)是防控aMPV 的一個(gè)重要的策略和途徑。利用研究室自制的2 種滅活疫苗進(jìn)行攻毒保護(hù)評(píng)估實(shí)驗(yàn)，初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明滅活疫苗免疫能夠產(chǎn)生較高的ELISA 抗體，并且對(duì)aMPV野毒都可以達(dá)到80%的免疫保護(hù)力。

雖然目前針對(duì)禽偏肺病毒感染尚無有效的治療方法，但落地的生物安全措施、科學(xué)的飼養(yǎng)管理及安全有效的免疫有助于防止禽偏肺病毒感染。通過我們的初步研究，對(duì)雞群進(jìn)行禽偏肺病毒滅活疫苗的免疫，能夠加強(qiáng)對(duì)aMPV 的預(yù)防和控制，是當(dāng)前規(guī)?；B(yǎng)殖面對(duì)aMPV的威脅可以采取的一項(xiàng)有效措施。

參考文獻(xiàn)：

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