響應(yīng)面法優(yōu)化黑木耳液體菌種發(fā)酵配方及條件

摘要：液體菌種已在黑木耳菌包工廠化生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用并取得較好效果，但提高黑木耳液體菌種發(fā)酵生產(chǎn)效率仍是菌包生產(chǎn)企業(yè)的重要技術(shù)需求。為深入探究發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)條件、環(huán)境條件及其交互作用對(duì)黑木耳液體菌種生產(chǎn)效率的影響，為黑木耳液體菌種高效生產(chǎn)提供有益參考。試驗(yàn)以國(guó)家認(rèn)定品種黑木耳2 號(hào)為試驗(yàn)菌株，以發(fā)酵醪中菌絲量為響應(yīng)值，采用經(jīng)典的響應(yīng)面法對(duì)液體菌種發(fā)酵過程進(jìn)行研究。結(jié)果表明，發(fā)酵基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境條件對(duì)黑木耳菌絲生物量具有顯著影響，試驗(yàn)范圍均出現(xiàn)影響峰值；基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)條件中的碳源濃度、環(huán)境條件中與溶氧水平密切相關(guān)的裝液量和搖床轉(zhuǎn)速都與其他發(fā)酵條件有很強(qiáng)的交互作用。結(jié)合單因素試驗(yàn)、響應(yīng)面試驗(yàn)分析和驗(yàn)證試驗(yàn)，確定最佳配方為葡萄糖22.3 g/L、蛋白胨2.7 g/L、KH2PO4 2.0 g/L、MgSO4·7H2O 1.5 g/L，同時(shí)添加羧甲基纖維素鈉3 g/L，菌絲生物量達(dá)13.22 g/L，與預(yù)測(cè)值13.05 g/L 相比，相對(duì)誤差為1.3%；最佳發(fā)酵條件為溫度30 ℃、時(shí)間7 d、搖床轉(zhuǎn)速165 r/min、裝液量105 mL（250 mL 錐形瓶），菌絲生物量達(dá)到14.32 g/L，與預(yù)測(cè)值14.11 g/L 相比，相對(duì)誤差為1.49%。研究結(jié)果表明，此液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方及調(diào)控條件有效可行、菌絲得率高。

關(guān)鍵詞：黑木耳；液體菌種；響應(yīng)面法；交互作用；發(fā)酵配方；發(fā)酵條件

中圖分類號(hào)：S646.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1002?2481（2023）06?0653?10

黑木耳（Auricularia heimuer F.WU，B.K.Cui amp;Y.C.Dai）[1]屬于擔(dān)子菌綱木耳目木耳科木耳屬[2]，是一種食藥兼用大型膠質(zhì)真菌，含有豐富的膳食纖維、多糖、必需氨基酸、微量元素和維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[3]；具有抗腫瘤[4]、抗輻射[5]、改善肝損傷[6]、降血脂[7]、抗氧化[8]等多種功效。據(jù)中國(guó)食用菌協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)，2020 年我國(guó)黑木耳產(chǎn)量已達(dá)到706.43 萬t[9]，成為第二大食用菌品種。

近年來，隨著黑木耳栽培量逐漸上升，液體菌種因具有制種周期短、發(fā)菌點(diǎn)多、代謝旺盛、菌齡整齊以及接種方便等[10]優(yōu)點(diǎn)受到青睞，在黑木耳工廠化生產(chǎn)中應(yīng)用比例越來越高。液體發(fā)酵技術(shù)是20 世紀(jì)40 年代由于抗生素生產(chǎn)需要而生，1948 年，HUMFELD[11]首次使用液體發(fā)酵法成功培養(yǎng)出蘑菇菌絲體，自此液體發(fā)酵技術(shù)在食用菌生產(chǎn)中得到進(jìn)一步應(yīng)用。黑木耳液體菌種的研究在1983 年已有報(bào)道，當(dāng)時(shí)萬國(guó)昌等[12]對(duì)黑木耳、香菇等6 種食用菌的液體菌種進(jìn)行了初步的研究。此后，黑木耳液體菌種研究逐漸成為熱點(diǎn)，目前對(duì)黑木耳液體菌種的優(yōu)化方法主要有單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)及響應(yīng)面試驗(yàn)。錢雪婷等[13]通過響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化黑木耳液體菌種配方，結(jié)果表明，最佳配方為葡萄糖2.16%、牛肉粉0.48%、馬鈴薯15%、KH2PO4 0.33%、MgSO4·7H2O 0.1%，為黑木耳液體菌種配方提供了理論依據(jù)。解修超等[14]通過響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化發(fā)酵工藝，得到最優(yōu)值為葡萄糖50.27 g/L、KH2PO4 4.93 g/L、初始pH 值5.1。

本研究以應(yīng)用廣泛的國(guó)家認(rèn)定品種黑木耳2 號(hào)菌株為試材，在試驗(yàn)過程中加入具有調(diào)節(jié)發(fā)酵液黏度和可能具有誘導(dǎo)纖維素酶活力的輔助原料羧甲基纖維素鈉（CMC-Na），系統(tǒng)調(diào)整液體培養(yǎng)基狀態(tài)，采用單因素及響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，擬通過以上試驗(yàn)得到最優(yōu)培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件，并詳細(xì)分析營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境因子的交互作用，旨在為黑木耳液體菌種發(fā)酵生產(chǎn)提供更高效、更適用的技術(shù)參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌種 國(guó)家認(rèn)定黑木耳品種黑木耳2 號(hào)（黑29），由黑龍江省科學(xué)院微生物研究所提供。

1.1.2 培養(yǎng)基配方 改良PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g/L、葡萄糖 20 g/L、蛋白胨 3 g/L、KH2PO42 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、瓊脂15 g/L、pH 自然。

液體培養(yǎng)基：馬鈴薯 200 g/L、葡萄糖 20 g/L、蛋白胨 3 g/L、KH2PO4 2 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、CMC-Na（羧甲基纖維素鈉）3 g/L、pH 自然。

1.1.3 試劑與儀器 葡萄糖、KH2PO4、MgSO4 ·7H2O（分析純），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；蛋白胨、瓊脂（生物試劑），北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；CMC-Na（分析純），福晨（天津）化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

GI54DWS 立式自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器（致微（廈門）儀器有限公司），ZHJH-C1115B 超凈工作臺(tái)、ZWY-111B 恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器制造有限公司），GHP-9080 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），TGL-20M 高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司），GZX-9030MBE 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），LT302C 電子天平（常熟市天量?jī)x器有限責(zé)任公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種活化與液體菌種制備 將黑木耳黑29菌種接種到改良PDA 平板上，28 ℃恒溫培養(yǎng)8 d。

取約2 cm2 菌塊用接種針分割為25 小塊后，接種至裝有100 mL 液體培養(yǎng)基的錐形瓶（容量250 mL）中，28 ℃、160 r/min 搖床中培養(yǎng)8 d。

1.2.2 培養(yǎng)基成分單因素試驗(yàn) 根據(jù)前期黑29 品種營(yíng)養(yǎng)條件和環(huán)境條件影響水平的研究結(jié)果，以1.1.2 液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，試驗(yàn)檢測(cè)不同葡萄糖質(zhì)量濃度（10、15、 20、25、30 g/L）、不同蛋白胨質(zhì)量濃度（2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 g/L）、不同KH2PO4 質(zhì)量濃度（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 g/L）和不同MgSO4·7H2O質(zhì)量濃度（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L）對(duì)菌絲生物量的影響，并確定不同組分的最適質(zhì)量濃度。

1.2.3 響應(yīng)面法優(yōu)化液體培養(yǎng)基配方 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以菌絲生物量為響應(yīng)值，采用Box-Behnken Design 進(jìn)行4 因素3 水平試驗(yàn)優(yōu)化液體培養(yǎng)基配方（表1）。

1.2.4 培養(yǎng)基發(fā)酵條件單因素試驗(yàn) 利用1.2.3 優(yōu)化培養(yǎng)基，以發(fā)酵溫度28 ℃、轉(zhuǎn)速160 r/min、裝液量100 mL 和發(fā)酵8 d 為基礎(chǔ)，研究不同溫度（24、26、28、30、32 ℃）、不同轉(zhuǎn)速（140、150、160、170、180 r/min）、不同裝液量（90、100、110、120、130 mL）和不同發(fā)酵時(shí)間（6、7、8、9、10 d）對(duì)菌絲生物量的影響，確定最適發(fā)酵條件。

1.2.5 響應(yīng)面法優(yōu)化發(fā)酵條件 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以菌絲生物量為響應(yīng)值，采用Box-BehnkenDesign 進(jìn)行4 因素3 水平試驗(yàn)優(yōu)化液體菌種發(fā)酵條件（表2）。

1.2.6 菌絲生物量測(cè)定 本研究菌絲生物量以菌絲干質(zhì)量計(jì)，根據(jù)戴建清[15]的方法微調(diào)。將黑木耳液體發(fā)酵醪液4 000 r/min 離心10 min，收集沉淀置于65 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒質(zhì)量，稱得菌絲干質(zhì)量。

1.3 數(shù)據(jù)分析采用SPSS Statistics 23 進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著性分析，采用Design-Expert 12 軟件進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)和分析，采用Origin 2019 軟件作圖。所有試驗(yàn)均重復(fù)3 次，結(jié)果取平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 液體培養(yǎng)基配方單因素試驗(yàn)

從圖1 可以看出，葡萄糖質(zhì)量濃度對(duì)菌絲生物量影響顯著（Plt;0.05），菌絲生物量隨葡萄糖質(zhì)量濃度增加呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為20 g/L 時(shí)，菌絲生物量達(dá)到最高。因此，確定20 g/L 為葡萄糖最適質(zhì)量濃度。

圖1 結(jié)果顯示，菌絲生物量隨蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O 質(zhì)量濃度增加均呈先上升后下降的趨勢(shì)。其中，蛋白胨質(zhì)量濃度為2.5 g/L 與3.0 g/L間菌絲生物量差異不顯著，當(dāng)?shù)鞍纂藶?.5 g/L 時(shí)菌絲生物量最高，確定其為最適質(zhì)量濃度；KH2PO4對(duì)菌絲生物量影響顯著（Plt;0.05），當(dāng)質(zhì)量濃度為1.5 g/L 時(shí)菌絲生物量最高；MgSO4·7H2O 質(zhì)量濃度為1.0 g/L 時(shí)菌絲生物量最高。因此，確定蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O 的最適質(zhì)量濃度分別為2.5、1.5、1.0 g/L。

2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化液體培養(yǎng)基配方

2.2.1 響應(yīng)面法優(yōu)化配方試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 由表3可知，不同質(zhì)量濃度營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)菌絲生物量具有一定影響，菌絲生物量最低為10.02 g/L，最高為13.06 g/L。

2.2.2 模型建立與方差分析 通過Design-Expert12 軟件進(jìn)行二次多項(xiàng)回歸擬合，得到菌絲生物量回歸方程如下。

Y=-15.321 42+1.562 47A1+7.248 33B1+1 .6 0 1 C 1—0 .7 7 6 D 1 + 0 .1 5 3 A 1 B 1—0 .0 1 8 A 1 C 1 +0.168A1 D1—0.33B1 C1 —0.85B1 D1+ 1.01C1 D1—0.048 97A12—1.637B12—0.462C12—0.792D12 （1）

由表4 可知，回歸模型Plt;0.01，表現(xiàn)為極顯著；失擬項(xiàng)Pgt;0.05，表現(xiàn)為不顯著，表明該模型預(yù)測(cè)值與實(shí)際值誤差小。該模型R2=0.902 7 能解釋90.27% 的響應(yīng)值變化差異。以上結(jié)果均表明，該模型擬合度良好。

由表4 可知，培養(yǎng)基配方組分對(duì)菌絲生物量的影響大小依次為A1gt;B1gt;D1gt;C1，即葡萄糖gt;蛋白胨gt;MgSO4·7H2Ogt;KH2PO4。其中，A1D1、B12 對(duì)菌絲生物量影響顯著（Plt;0.05），A1、B1、A12 對(duì)菌絲生物量影響極顯著（Plt;0.01）。

2.2.3 響應(yīng)曲面分析 配方雙因素交互作用對(duì)菌絲生物量的影響如圖2 所示。

響應(yīng)面曲面圖及等高線圖是回歸模型具體形象的呈現(xiàn)，響應(yīng)面圖能夠直觀地反映各個(gè)因素與響應(yīng)值之間的關(guān)系以及各個(gè)因素之間的交互作用[16-17]。當(dāng)響應(yīng)面三維圖的坡度越陡峭、二維圖中等高線越密集、等高線呈橢圓時(shí)，表明兩因素交互作用較顯著[18]。如圖2-a、b、c 所示，三維曲面圖陡峭，等高線密集且為橢圓形，說明葡萄糖與蛋白胨、葡萄糖與KH2PO4、葡萄糖與MgSO4·7H2O 之間交互作用明顯；而圖2-d、e、f 則顯示，蛋白胨與KH2PO4、蛋白胨與MgSO4·7H2O、KH2PO4 與MgSO4·7H2O之間雖具有一定交互作用，但作用不明顯?？梢?，在配方優(yōu)化試驗(yàn)中，主要是碳源葡萄糖與蛋白胨和微量元素KH2PO4 及MgSO4·7H2O 等3 種營(yíng)養(yǎng)原料之間交互作用對(duì)菌絲生物量影響更明顯。

2.2.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)回歸模型預(yù)測(cè)及實(shí)際生產(chǎn)狀況微調(diào)得到最佳配方：葡萄糖22.3 g/L、蛋白胨2.7 g/L、KH2PO4 2.0 g/L、MgSO4·7H2O 1.5 g/L，菌絲生物量預(yù)測(cè)值為13.05 g/L。驗(yàn)證試驗(yàn)所得菌絲生物量為13.22 g/L，與預(yù)測(cè)值相對(duì)誤差為1.3%。證明采用響應(yīng)面法優(yōu)化液體培養(yǎng)基配方有效可行。

2.3 液體發(fā)酵條件單因素試驗(yàn)

基于2.2.4 中最佳配方進(jìn)行液體發(fā)酵條件單因素試驗(yàn)及優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果如圖3 所示，發(fā)酵溫度、轉(zhuǎn)速、裝液量和發(fā)酵時(shí)間等對(duì)菌絲生物量影響顯著（Plt;0.05），菌絲生物量均呈先上升后下降的趨勢(shì)，最適發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度28 ℃、發(fā)酵時(shí)間8 d、轉(zhuǎn)速170 r/min、裝液量100 mL。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

2.4 響應(yīng)面法優(yōu)化液體發(fā)酵條件

2.4.1 響應(yīng)面法優(yōu)化液體發(fā)酵條件試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 從表5 可以看出，不同發(fā)酵條件對(duì)菌絲生物量具有一定影響，菌絲生物量最低為8.81 g/L，最高為13.94 g/L。

2.4.2 模型建立與方差分析 通過Design-Expert12 軟件進(jìn)行二次多項(xiàng)回歸擬合得到菌絲生物量回歸方程如下。

Y=-555.459 92+21.003 58A2+5.519 33B2+2 . 4 9 0 3 2 C 2 + 0 . 6 1 0 0 8 3 D 2—0 . 2 8 2 5 A 2 B 2—0.018 13A2C2—0.007 375A2D2+0.037 5B2C2—0 . 0 2 B 2 D 2 + 0 . 0 0 6 5 2 5 C 2 D 2—0.255 563A22—0.107 25B22—0.008 772C22—0.006 297D22 （2）

由表6 可知，回歸模型Plt;0.01，表現(xiàn)為極顯著；失擬項(xiàng)Pgt;0.05，表現(xiàn)為不顯著，表明該模型預(yù)測(cè)值與實(shí)際值誤差小。該模型R2=0.945 1，能解釋94.51% 的響應(yīng)值變化差異。綜上所述，表明該模型擬合度良好。

從表6 可以看出，發(fā)酵條件影響順序依次為A2gt;D2gt;C2gt;B2，即發(fā)酵溫度gt;裝液量gt;轉(zhuǎn)速gt;發(fā)酵時(shí)間。其中，A2B2、C2D2 對(duì)菌絲生物量影響顯著（Plt;0.05），A2、C2、D2、A22、C22、D22 對(duì)菌絲生物量影響極顯著（Plt;0.01）。

2.4.3 響應(yīng)曲面分析 由圖4-a 可知，三維曲面圖陡峭，等高線疏散且無法觀察形狀，說明溫度與發(fā)酵時(shí)間交互作用不顯著。由圖4-b、c、d 可知，溫度與轉(zhuǎn)速、溫度與裝液量、發(fā)酵時(shí)間與轉(zhuǎn)速之間具有一定交互作用，但不明顯；圖4-e、f 三維曲面圖陡峭，等高線密集且為橢圓形，說明發(fā)酵時(shí)間與裝液量、轉(zhuǎn)速與裝液量之間交互作用明顯。綜上，在發(fā)酵條件優(yōu)化試驗(yàn)中，發(fā)酵時(shí)間與裝液量、轉(zhuǎn)速與裝液量之間交互作用對(duì)菌絲生物量影響明顯。

2.4.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)回歸模型分析及實(shí)際應(yīng)用得到最佳發(fā)酵條件為：溫度30 ℃ 、時(shí)間7 d、轉(zhuǎn)速165 r/min、裝液量105 mL，預(yù)測(cè)值14.11 g/L。驗(yàn)證試驗(yàn)所得菌絲生物量為14.32 g/L，相對(duì)誤差為1.49%。

表明此發(fā)酵條件有效可靠，可用于實(shí)際生產(chǎn)中。

3 結(jié)論與討論

優(yōu)化黑木耳液體菌種配方及發(fā)酵條件是提高黑木耳液體發(fā)酵效率的重要前提，本研究采用單因素試驗(yàn)與響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)黑木耳液體菌種配方及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。單因素試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，菌絲生物量隨各營(yíng)養(yǎng)因素濃度增高均呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，并具有顯著性差異，該結(jié)果與劉俊梅等[19]試驗(yàn)結(jié)果一致，表明營(yíng)養(yǎng)缺乏或過量均會(huì)抑制菌絲生物量積累，使用適量濃度的營(yíng)養(yǎng)有利于菌絲生物量積累。

響應(yīng)面優(yōu)化培養(yǎng)基配方試驗(yàn)研究表明，碳源物質(zhì)葡萄糖是影響最大的因素，該結(jié)果與李超等[20]、于海洋等[21]試驗(yàn)結(jié)果一致，可能與葡萄糖易被吸收利用有關(guān)。而通過響應(yīng)面法優(yōu)化得到的最佳配方與選用復(fù)合碳氮源的結(jié)果存在一定差異，如盛立柱等[22]以黑山菌株為試材，確定碳源玉米粉最適量為2.5 g/L、氮源豆粕最適量為2.0 g/L，可能與所用菌種特性及玉米粉和豆粕的復(fù)合營(yíng)養(yǎng)有關(guān)。

發(fā)酵溫度會(huì)影響黑木耳菌絲代謝活性，進(jìn)而影響菌絲對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用。本研究發(fā)現(xiàn)，菌絲生物量隨發(fā)酵條件變化也呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，該研究結(jié)果與李玉梅等[23]、車星星等[24]試驗(yàn)結(jié)果一致，表明發(fā)酵條件對(duì)液體菌種發(fā)酵過程具有顯著影響。響應(yīng)面法優(yōu)化液體發(fā)酵條件試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵溫度對(duì)菌絲生物量影響最大，該結(jié)果與孟麗君等[25]利用冀誘1 號(hào)研究結(jié)果一致。王謙等[26]利用自有菌株研究表明，pH 影響最大、溫度影響最小。戴肖東等[27]在栽培特性研究中發(fā)現(xiàn)，pH 對(duì)黑29 菌絲生長(zhǎng)影響不大。王志偉等[28]研究發(fā)現(xiàn)，pH對(duì)大白樁菇菌絲體干質(zhì)量、多酚、黃酮、粗多糖的積累具有較大的影響，可能是由于菌株種類不同造成的差異。綜上，推測(cè)最優(yōu)發(fā)酵配方和發(fā)酵條件與菌種生物學(xué)特性和培養(yǎng)基原料種類有關(guān)，后續(xù)試驗(yàn)研究中應(yīng)根據(jù)不同菌種特性需求確定最優(yōu)發(fā)酵配方及發(fā)酵條件。

響應(yīng)面曲面分析形象反映了不同營(yíng)養(yǎng)因子和不同環(huán)境因子兩兩之間交互作用對(duì)發(fā)酵效果的影響。在液體培養(yǎng)基配方優(yōu)化試驗(yàn)中，碳源葡萄糖與蛋白胨、KH2PO4 及MgSO4·7H2O 都有較強(qiáng)的交互作用，而氮源沒有顯現(xiàn)出與微量元素的顯著交互作用，推測(cè)微量元素可能會(huì)在更大程度上影響碳源的消耗和利用。在發(fā)酵條件優(yōu)化試驗(yàn)中，發(fā)酵時(shí)間與裝液量之間、轉(zhuǎn)速與裝液量之間交互作用顯著，而培養(yǎng)基裝液量和搖床轉(zhuǎn)速都與發(fā)酵液的溶解氧水平緊密相關(guān)，這種交互作用顯示在黑木耳液體發(fā)酵過程中溶解氧的需求強(qiáng)烈，嚴(yán)重影響黑木耳菌絲生長(zhǎng)過程，包括發(fā)酵效率和發(fā)酵終點(diǎn)的判定。目前，關(guān)于溶氧量的研究鮮有報(bào)道，研究發(fā)酵液中溶解氧水平與菌絲量變化之間的相關(guān)性對(duì)提高黑木耳液體發(fā)酵效率和液體菌種生產(chǎn)技術(shù)具有重要意義。

綜上所述，響應(yīng)面法能有效對(duì)黑木耳黑29 菌種液體培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，從而提升黑木耳液體菌種發(fā)酵效率。同時(shí)，本研究證明該發(fā)酵工藝可靠有效，可為黑木耳液體菌種生產(chǎn)提供重要參考，并支撐黑木耳工廠化和規(guī)?；a(chǎn)。