基于轉(zhuǎn)錄組學(xué)的丁香及甘草醇提取物對(duì)尖孢鐮刀菌的影響

摘要：枯萎病是多種作物的重要土傳病害之一，孢子或者病殘?bào)w可在土壤中長(zhǎng)期存活，導(dǎo)致該病防治困難，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成極大的危害。為了對(duì)丁香、甘草2 種醇提取物抑制枯萎病機(jī)制的進(jìn)一步解析提供思路以及數(shù)據(jù)支撐，試驗(yàn)采用轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序分析研究2 種植物提取物處理后對(duì)尖孢鐮刀菌基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果表明，測(cè)序錯(cuò)誤率均小于0.025%，且樣本組內(nèi)與組間相關(guān)系數(shù)差距較大，故測(cè)序數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度高、生物學(xué)重復(fù)性較好。

甘草提取物處理后差異基因在GO 數(shù)據(jù)庫(kù)中主要富集到膜的組成成分和膜的固有成分，其中53.27% 上調(diào)，在KEGG 通路中苯丙氨酸代謝途徑富集最為顯著；丁香提取物處理后，在GO 數(shù)據(jù)庫(kù)中顯著富集的途徑與甘草相同，有33.98% 上調(diào)，KEGG 通路中差異基因在嘌呤代謝途徑的富集最為顯著。研究結(jié)果說(shuō)明，甘草提取物對(duì)尖孢鐮刀菌的主要抑菌機(jī)制可能是在翻譯水平上促進(jìn)真菌細(xì)胞膜的多種成分的生成與代謝，與此同時(shí)減弱尖孢鐮刀菌DNA 的損傷修復(fù)功能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸的生成與代謝水平；而丁香提取物可能使得參與菌絲細(xì)胞生長(zhǎng)或者菌絲抵御機(jī)制的基因過(guò)表達(dá)、RNA 代謝旺盛，促進(jìn)細(xì)胞膜的生長(zhǎng)代謝，導(dǎo)致菌絲不能正常生長(zhǎng)。綜上，抑菌效果顯著的2 種植物提取物對(duì)同種尖孢鐮刀菌可能具有不同的抑菌機(jī)制。

關(guān)鍵詞：尖孢鐮刀菌；無(wú)參轉(zhuǎn)錄組測(cè)序；丁香提取物；甘草提取物；差異基因分析

中圖分類號(hào)：S432.4＋4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1002?2481（2023）06?0682?08

植物枯萎病廣泛分布于世界各地，該病害是植物病害中嚴(yán)重的土傳性病害，一旦發(fā)生較難防控[1]。

其可造成植物50%～80% 的減產(chǎn)[2]甚至絕收，是危害蔬果類植物最嚴(yán)重的病害之一[3]，罹病植物常出現(xiàn)多器官及組織的腐爛[4-5]。目前枯萎病的防治主要是從化學(xué)農(nóng)藥的使用、生物菌劑（如哈茨木霉）、抗病育種、農(nóng)業(yè)措施（如嫁接、輪作）等方面入手[6]。

目前，在全球倡導(dǎo)綠色農(nóng)業(yè)的形勢(shì)下，天然來(lái)源的植物源殺菌劑在實(shí)踐中發(fā)揮了重要作用[7]。植物源殺菌劑是由植物的天然化學(xué)成分或生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物加工而成，主要通過(guò)抑制呼吸代謝、破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、影響核酸及蛋白合成等方面達(dá)到環(huán)保、高效[8]、低毒害、低殘留的防治效果[9]。

RONGAI 等[10]的研究表明，石榴中的抗菌活性成分石榴鞣花酸，能減少番茄體內(nèi)的枯萎病菌的數(shù)量，對(duì)番茄枯萎病具有良好的防治效果；萬(wàn)壽菊根、茼蒿莖葉[11]的乙醇提取物可以增加真菌細(xì)胞膜的通透性，導(dǎo)致細(xì)胞電解質(zhì)加速外滲，抑制菌絲的生長(zhǎng)[12]。山西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物源農(nóng)藥團(tuán)隊(duì)前期研究表明，八角[13]、瑞香狼毒、結(jié)香花等植物提取物可以破壞菌絲的正常代謝途徑，打破原有的穩(wěn)態(tài)，且對(duì)多種枯萎菌均有一定的防治效果[14]。也有研究表明，山豆根[15]、小棗、枇杷[16]、洋蔥[17]、黃連、苦參[18]等多種植物的次生代謝成分對(duì)石榴枯萎病菌具有良好的抑菌效果。綜上所述，多種植物的次生代謝產(chǎn)物能夠在一定程度上有效地防治植物病害，并減少對(duì)環(huán)境及人畜的危害程度以及化學(xué)農(nóng)藥的依賴性，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)具有發(fā)展?jié)摿Φ木G色防控措施[19-20]。

近年來(lái)，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展，以及生物學(xué)研究的不斷深入，在植物源農(nóng)藥的研究中不斷涌現(xiàn)出新的思路以及方法[21-22]。本試驗(yàn)基于轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)研究丁香、甘草提取物對(duì)尖孢鐮刀菌的抑菌機(jī)制，可為尖孢鐮刀菌的防治以及植物源農(nóng)藥的篩選提供重要的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

尖孢鐮刀菌菌株、甘草及丁香2 種植物的乙醇提取物均由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 儀器與試劑

電子天平（1702-MP8，上海拓衡實(shí)業(yè)有限公司，精確度至0.001 g）、單人凈化工作臺(tái)（SW-CJ-1D，蘇州普愛德凈化設(shè)備科技有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（上海皓莊儀器有限公司）、立式自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器（立德泰勀科學(xué)儀器有限公司）、核酸濃度檢測(cè)儀（Agilent 2100 RNA 6000 Nano Kit，安捷倫，美國(guó)）等。

Trizol、氯仿、異丙醇、RNase-free ddH2O、無(wú)水乙醇、β-巰基乙醇、瓊脂糖等，均購(gòu)自索萊寶公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌絲體制備與RNA 的提取、質(zhì)檢 在75 mL的PDB 培養(yǎng)基中加入5 個(gè)直徑5 mm 的菌餅以及終質(zhì)量濃度為1 mg/mL 的甘草、丁香醇提物，置于搖床中25 ℃、150 r/min 培養(yǎng)5 d。取培養(yǎng)液放置于無(wú)酶離心管中，4 ℃下 11 000 r/min 10 min、7 000 r/min5 min、5 000 r/min 1 min 梯度離心并去除上清。設(shè)置2 個(gè)生物學(xué)重復(fù)，取培養(yǎng)5 d 后的菌液約800 mg置于試管中，液氮速凍1 h，-80 ℃冰箱保存。使用TRIzol（Invitrogen）法提取菌體樣品RNA 后利用Nanodrop 2000 對(duì)所提RNA 的濃度和純度進(jìn)行檢測(cè)，1% 瓊脂糖凝膠、電壓5 V，15 min 電泳檢測(cè)RNA 完整性，Agilent 2100 測(cè)定RIN 值。

1.3.2 cDNA 文庫(kù)的構(gòu)建及測(cè)序 cDNA 文庫(kù)的構(gòu)建及測(cè)序由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成，樣品檢測(cè)合格后，利用帶有Oligo（dT）的磁珠與真核生物mRNA 末端的ployA 進(jìn)行A-T 堿基配對(duì)，從總RNA 中分離出mRNA。加入Fragmentationbuffer，將mRNA 隨機(jī)斷裂，通過(guò)磁珠篩選分離出300 bp 左右的小片段。在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，生成雙鏈cDNA 后進(jìn)行文庫(kù)富集。PCR 擴(kuò)增15 個(gè)循環(huán)；2%瓊脂糖膠回收目的條帶；TBS380 定量，按數(shù)據(jù)比例混合上機(jī)；cBot上進(jìn)行橋式PCR 擴(kuò)增，生成Clusters；Illumina 平臺(tái)測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)分析

1.4.1 轉(zhuǎn)錄組優(yōu)化組裝與質(zhì)量評(píng)估 通過(guò)Illumina平臺(tái)將測(cè)序獲得的圖像信號(hào)經(jīng)過(guò)Base Calling 轉(zhuǎn)換成文字，形成Fastq 格式的原始數(shù)據(jù)。利用Fastx_toolkit 軟件對(duì)利用index 區(qū)分獲得的每一個(gè)樣本的原始測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估和后續(xù)分析。使用軟件SeqPrep 對(duì)原始測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控，從而得到高質(zhì)量的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)（Clean data）。然后利用Fastx 進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估。利用Trinity 進(jìn)行從頭組裝生成重疊群（Contig）和單一序列（Singleton），利用BUSCO進(jìn)行組裝評(píng)估和優(yōu)化。

1.4.2 表達(dá)量及差異基因分析 利用表達(dá)定量軟件RSEM 對(duì)基因的表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。通過(guò)計(jì)算表達(dá)量指標(biāo)TPM，確定基因的表達(dá)量并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，獲得基因的Read counts 數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，之后用DESeq2 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，基于差異基因的篩選條件為Plt;0.05 且上下調(diào)差異倍數(shù)gt;2，比較組間的差異基因。使用Goatools 軟件對(duì)差異基因進(jìn)行KEGG 和GO 通路富集分析，當(dāng)矯正后的Plt;0.05 時(shí)，確認(rèn)的功能基因認(rèn)為存在顯著富集。

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)序原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估

丁香和甘草的乙醇提取物處理的尖孢鐮刀菌作為試驗(yàn)組進(jìn)行RNA 序列的組裝與測(cè)序，由表1可知，6 個(gè)樣品數(shù)據(jù)中，空白處理的Q20 的范圍在98.32%～98.73%，Q30 的最低值不低于94.89%，GC 含量穩(wěn)定在52.45%～52.51%；丁香處理組的Q20 在98.43%～98.65%，Q30 的最低值不低于95.13%，GC 含量穩(wěn)定在53.55%～53.65%；甘草處理組的Q20 在98.15%～98.75%，Q30 的最低值不低于94.40%，GC 含量穩(wěn)定在52.49%～52.69%，測(cè)序質(zhì)量較高。

2.2 樣品間相關(guān)性分析

樣本間相關(guān)性熱圖分析如圖1 所示。

在RNA 組學(xué)研究中經(jīng)常利用相關(guān)性熱圖展示樣本之間的關(guān)系，由圖1 可知，2 個(gè)空白組生物學(xué)重復(fù)之間的基因表達(dá)水平的相關(guān)性系數(shù)是0.927，丁香處理組生物學(xué)重復(fù)之間的基因表達(dá)水平的相關(guān)性系數(shù)是0.836，甘草處理組生物學(xué)重復(fù)之間的基因表達(dá)水平的相關(guān)性系數(shù)是0.904，表明生物學(xué)的重復(fù)性較好?？瞻讓?duì)照與丁香處理組相關(guān)性系數(shù)最大為0.699，最小為0.631，空白對(duì)照與甘草處理組相關(guān)性系數(shù)最大為0.854，最小為0.831，表明空白對(duì)照與丁香處理組之間的差異較大，與甘草處理組之間差異較小，表明丁香處理對(duì)尖孢鐮刀菌具有較大的影響，在實(shí)驗(yàn)室前期研究中也表明[23]，相同濃度下丁香提取物的抑菌效果優(yōu)于甘草提取物。2 種提取物均可以進(jìn)行后續(xù)分析，同時(shí)借助樣本間PCA 分析表明（圖2），處理組與對(duì)照組的RNA-Seq 數(shù)據(jù)可靠[24-25]。

2.3 表達(dá)差異及表達(dá)量分析

對(duì)植物提取物處理的及未處理的尖孢鐮刀菌測(cè)序后所得到基因進(jìn)行差異基因的篩選后，進(jìn)行表達(dá)量統(tǒng)計(jì)及VENN 分析，由圖3 可知，丁香提取物處理后產(chǎn)生6 570 個(gè)差異基因，其中，3 552 個(gè)差異基因顯著上調(diào)，占差異表達(dá)基因總數(shù)的54.06%；3 018 個(gè)差異基因顯著下調(diào)，占差異表達(dá)基因總數(shù)的45.94%。通過(guò)差異基因的VENN 分析得到處理后共有的差異變化的基因2 236 個(gè)，與甘草提取物處理有關(guān)的差異基因有1 591 個(gè)，與丁香處理有關(guān)的差異基因有4 334 個(gè)，丁香處理的差異基因最多。

從盒形圖的結(jié)果來(lái)看（圖4），甘草處理組的整體表達(dá)水平最高，均值為0.78，其次是對(duì)照，均值為0.73，最后是丁香處理組，均值為0.63。結(jié)果表明，甘草處理后基因表達(dá)偏高，甘草會(huì)促進(jìn)尖孢鐮刀菌中基因過(guò)表達(dá)。丁香處理后的基因表達(dá)偏低，丁香會(huì)抑制尖孢鐮刀菌的基因表達(dá)，從而達(dá)到抑制真菌生長(zhǎng)的目的[26]。

2.4 GO 和KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異基因富集分析

2.4.1 甘草提取物處理后GO 與KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)差異基因富集分析 從圖5 可以看出，空白對(duì)照和甘草處理中的3 826 個(gè)差異基因共得到108 個(gè)GO 功能注釋，在細(xì)胞組成（CC）中主要富集在膜的組成成分、膜的固有成分、膜部分等途徑，這些基因中有448 個(gè)上調(diào)，其中膜的組成成分中上調(diào)基因有442 個(gè)。在分子功能（MP）中包括13 個(gè)term，主要為磷脂酰肌醇磷脂酶C 活性、磷脂酶C 活性、金屬離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性、磷脂酶、醌結(jié)合、磷酸二酯水解酶活性等途徑，且參與這些途徑的85 個(gè)基因中有33 個(gè)表達(dá)上調(diào)。在生物過(guò)程（BP）中包含2 個(gè)term，主要為DNA 連接和DNA 連接與DNA 修復(fù)，且參與這些途徑的基因一共有4 個(gè)，全部下調(diào)。

研究結(jié)果表明，甘草處理后，尖孢鐮刀菌的細(xì)胞膜生成代謝的基因轉(zhuǎn)錄水平提高，尤其是膜的組成成分含量上升。而尖孢鐮刀菌關(guān)于DNA 的連接與修復(fù)的基因出現(xiàn)下調(diào)，細(xì)胞的損傷修復(fù)減緩，不能正常的生長(zhǎng)。結(jié)合基因的表達(dá)量分布圖，可以了解到甘草的基因表達(dá)量提高，但是表達(dá)量提高的基因主要集中在細(xì)胞膜的基因中，蛋白質(zhì)的合成不足，因此，推測(cè)甘草提取物可能會(huì)使尖孢鐮刀菌在翻譯水平上出現(xiàn)異常，從而引起菌絲的不正常生長(zhǎng)。

KEGG 的功能富集分析發(fā)現(xiàn)，共有976 個(gè)差異Unigenes 富集在113 條KEGG 代謝通路中，共有499 個(gè)差異基因。這些差異基因中170 個(gè)上調(diào)，329 個(gè)下調(diào)。由圖5 可知，在20 條富集度最高的KEGGPasyway 中一共有227 個(gè)基因，有64 個(gè)差異基因上調(diào)，163 個(gè)差異基因下調(diào)。有15 條通路的差異基因的First Category 主要集中在新陳代謝中，有50 個(gè)上調(diào)，129 個(gè)下調(diào)，且在苯丙氨酸代謝、酪氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、色氨酸代謝途徑中的富集最為顯著。在這些下調(diào)的差異基因中主要是一些氨基酸代謝的基因，與對(duì)照相比表達(dá)水平降低了72%，其減少意味著真菌生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不能得到有效的供給，會(huì)導(dǎo)致真菌的生長(zhǎng)受阻，與GO分析的結(jié)果一致[27]。

2.4.2 丁香提取物處理后GO 與KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)差異基因富集分析 丁香提取物的差異基因GO 富集分析及KEGG 富集分析如圖6 所示。

由圖6 可知，丁香提取物處理后富集在前20 條途徑中共有2 066 個(gè)差異基因，在細(xì)胞組成中的差異基因最多有1 384 個(gè)，主要集中在膜的組成成分、膜的固有成分、膜部分、前核糖體和核仁的途徑，這些基因中有702 個(gè)上調(diào)，其中膜的組成成分中占上調(diào)基因的有442 個(gè)。在分子功能中包括3 個(gè)term，包括轉(zhuǎn)移酶活性、轉(zhuǎn)移含磷基團(tuán)、DNA 定向RNA 聚合酶活性、激酶活性，且參與這些途徑的基因一共有228 個(gè)，有129 個(gè)上調(diào)。在生物過(guò)程中包含12 個(gè)term，主要為ncRNA 加工、rRNA 加工、ncRNA 代謝過(guò)程、rRNA 代謝過(guò)程、磷脂代謝過(guò)程、磷脂酰肌醇代謝過(guò)程等，參與這些途徑的基因一共有238 個(gè)，161 個(gè)差異基因上調(diào)。結(jié)合基因的表達(dá)量分布圖，可以了解到丁香的基因表達(dá)量下降，因此，導(dǎo)致丁香處理的尖孢鐮刀菌在轉(zhuǎn)錄水平上引起菌絲不能正常生長(zhǎng)。

由圖6 可知，在20 條KEGG Pathway 中一共有374 個(gè)基因，有221 個(gè)差異基因上調(diào)，153 個(gè)差異基因下調(diào)。有11 條通路的差異基因的First Category主要集中在新陳代謝中，有131 個(gè)上調(diào)，78 個(gè)下調(diào)，且在嘌呤代謝、泛醌和其他萜類醌的生物合成、嘧啶代謝、丙酸鹽代謝途徑中的富集最為顯著。有7 條通路的差異基因的First Category 主要集中在遺傳信息處理中，有91 個(gè)上調(diào)，29 個(gè)下調(diào)，且在真核生物中核糖體的生物發(fā)生、DNA 復(fù)制、聚合酶、氨酰tRNA 生物合成途徑中的富集最為顯著；在這些上調(diào)的差異基因中主要是一些氨基酸代謝的基因，表達(dá)水平相比對(duì)照升高了59.09%，其上升意味著真菌在生長(zhǎng)過(guò)程中出現(xiàn)了急速分泌的現(xiàn)象，使得菌絲過(guò)表達(dá)，與GO 分析的結(jié)果一致。

3 結(jié)論與討論

在本研究中，通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序來(lái)研究丁香、甘草提取物對(duì)尖孢鐮刀菌的作用機(jī)制并獲得高質(zhì)量的有效數(shù)據(jù)。植物在與有害生物長(zhǎng)期的協(xié)同進(jìn)化過(guò)程中，產(chǎn)生了種類豐富的高活性次生代謝產(chǎn)物，因其成分復(fù)雜，病蟲對(duì)其不易產(chǎn)生抗藥性，因此，選用丁香、甘草2 種植物的乙醇提取物作為試驗(yàn)材料，可為之后大田中的實(shí)際生產(chǎn)提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

甘草處理后尖孢鐮刀菌較CK 基因表達(dá)水平提高，通過(guò)TPM 方法分析C 和G 樣品，鑒定出3 827 個(gè)差異基因，在與對(duì)照組的表達(dá)差異分析中，顯著上調(diào)的主要有甲基轉(zhuǎn)移酶活性、膜的組成成分、次生代謝產(chǎn)物的生物合成、運(yùn)輸和分解代謝，顯著下調(diào)的是生物合成過(guò)程、轉(zhuǎn)移酶活性、水解酶活性，作用于酯鍵、磷酸乙烯結(jié)合、葡萄孢素生物合成、跨膜運(yùn)輸和RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性。其中次生代謝產(chǎn)物的增多與生物合成產(chǎn)物的減少形成鮮明的對(duì)比，通過(guò)該結(jié)果可推測(cè)，由于次生代謝產(chǎn)物的增多可能使菌絲內(nèi)部形成大量附著物，而生物合成的減少使得真菌的生長(zhǎng)減緩。結(jié)合GO 的富集分析，參與膜的組成成分的差異基因顯著上調(diào)，可能導(dǎo)致尖孢鐮刀菌細(xì)胞膜徒長(zhǎng)、通透性增加，使得真菌的菌絲內(nèi)壁出現(xiàn)空洞，徒留細(xì)胞膜，以上結(jié)論與實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)果相一致[28]。而且有學(xué)者針對(duì)蔗糖月桂酸酯對(duì)金黃色葡萄球菌的細(xì)胞膜的損壞機(jī)制的研究表明，蔗糖月桂酸酯會(huì)使葡糖球菌的邊緣模糊，菌體粗糙，使得菌體的細(xì)胞膜電勢(shì)增加，出現(xiàn)物質(zhì)泄漏。另外，枯茗酸也會(huì)使菌絲細(xì)胞膜通透性和甘油含量顯著增加，表明植物提取物會(huì)使得真菌的細(xì)胞膜的通透性增加，與甘草對(duì)尖孢鐮刀菌的作用機(jī)制相似[29-30]。

與未處理的尖孢鐮刀菌相比較，丁香處理的尖孢鐮刀菌的差異基因較多，鑒定出6 570 個(gè)差異基因，這些基因參與上調(diào)的主要是糖酵解/糖異生、免疫過(guò)程和溶菌酶過(guò)程，參與下調(diào)的主要是膜的成分以及氮化合物的代謝過(guò)程。在表達(dá)差異分析中，2 種數(shù)據(jù)庫(kù)均顯示藥劑會(huì)造成膜的組成成分的差異基因顯著上調(diào)，與甘草對(duì)細(xì)胞膜的作用機(jī)制相同。

同時(shí)丁香處理的尖孢鐮刀菌的RNA 的合成與代謝的差異基因顯著上調(diào)，可能由于丁香的外界干擾，使得其代謝活躍來(lái)抵抗本身產(chǎn)生的變化。丁香還會(huì)造成真菌磷代謝的差異基因顯著上調(diào)，從而使得磷代謝加快。有學(xué)者研究表明，磷的增加有助于真菌的侵染，而磷代謝的加快會(huì)抑制真菌的侵染速率，從而導(dǎo)致丁香處理的尖孢鐮刀菌在轉(zhuǎn)錄水平上引起菌絲不能正常生長(zhǎng)[31]。糖酵解、糖異生過(guò)程在真核生物中發(fā)生在細(xì)胞質(zhì)中，其主要是關(guān)于對(duì)葡萄糖和蛋白質(zhì)的利用能力[32]。在表達(dá)差異分析中糖酵解、糖異生的Unigenes 顯著上調(diào)，且占比較大。

結(jié)合KEGG 富集分析，丁香處理后，氨基酸代謝水平顯著提高。糖酵解、糖異生的過(guò)程中蛋白質(zhì)的含量顯著上升，因此，在初期上升時(shí)，尖孢鐮刀菌對(duì)葡萄糖的利用率可能會(huì)上升，在生物活性測(cè)定中表現(xiàn)為初期真菌菌絲的生長(zhǎng)較密[28]，但隨之蛋白含量上升，對(duì)葡萄糖的利用率下降，從而達(dá)到抑制真菌生長(zhǎng)的目的。

在2 種植物提取物處理后，膜的組成成分和膜的固有成分的差異基因在GO 數(shù)據(jù)庫(kù)與KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)中顯著富集，推測(cè)2 種植物提取物主要作用于尖孢鐮刀菌的細(xì)胞膜。在甘草處理中參與苯丙氨酸途徑的基因表達(dá)多數(shù)降低，表明甘草對(duì)尖孢鐮刀菌的作用方式可能是抑制或提高氮代謝通路以達(dá)到防治的效果。在丁香參與嘌呤代謝途徑的作用方式可能是抑制或提高磷代謝以達(dá)到防治的目的。

后續(xù)可通過(guò)熒光定量PCR，驗(yàn)證相應(yīng)基因是否下降或上升，進(jìn)一步驗(yàn)證、判斷2 種植物提取物的抑菌機(jī)制。