阿魏酸鈉阻斷NF-κB 降低NALP3 誘導(dǎo)的矽肺成纖維細(xì)胞增殖

韓靜茵 王淑娟 賈仰民 干曉瑜

矽肺是塵肺病中危害最為嚴(yán)重的一種類(lèi)型，由于長(zhǎng)期吸入游離的二氧化硅（SiO2）粉塵引起的肺組織彌漫性間質(zhì)纖維化，導(dǎo)致肺功能?chē)?yán)重受損和呼吸困難的肺部疾病[1]。矽肺的重要病理學(xué)改變是肺成纖維細(xì)胞大量增殖，且成纖維細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）和基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）表達(dá)量相比正常成纖維細(xì)胞增多，說(shuō)明SiO2促進(jìn)了肺成纖維細(xì)胞的增殖。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，阿魏酸鈉（SF）可作用于核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3（NALP3）/轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）/平滑肌肌動(dòng)蛋白α（α-SMA）通路，抑制矽肺模型小鼠成纖維細(xì)胞增殖，從而緩解矽肺病肺損傷和纖維化[2]，而核因子κB（NF-κB）激活能夠誘導(dǎo)NALP3 表達(dá)，可見(jiàn)全身抑制NF-κB 的活化能夠降低SiO2誘導(dǎo)的肺損傷[3-4]。有研究證明，NALP3炎癥小體是通過(guò)NF-κB 途徑合成膠原蛋白所必需的[5]。本研究旨在探討SF 對(duì)成纖維細(xì)胞的作用機(jī)制及為矽肺防治提供分子學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性C57BL/6 小鼠（4～5 周齡）3 只，飼養(yǎng)在溫度22 ℃、濕度55%、12 h 明暗交替的房間中。所有小鼠可以自由飲水和取食。小鼠統(tǒng)一購(gòu)買(mǎi)自杭州醫(yī)學(xué)院[生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（浙）2019-0002]。本研究得到浙江百越生物科技有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（審查編號(hào)：ZJBYLA-IACUC-20211125）。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 小鼠飼料（批號(hào)2017041021，北京科澳協(xié)力飼料有限公司，中國(guó)）；MTT 細(xì)胞活力檢測(cè)試 劑 盒（V13154，Thermo Fisher Scientific，USA）；Cell-Light EdU Apollo488 體外試劑盒（C10310-3，廣州銳博生物有限公司，中國(guó)）；白介素1β（IL-1β）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒（PI301，碧云天生物有限公司，中國(guó)）；半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋 白 酶-1 （Caspase -1）ELISA 檢 測(cè) 試 劑 盒（MBS282353，艾美捷科技有限公司，中國(guó)）；TRIzol 試劑（12183555，Thermo Fisher Scientific，USA）；RIPA蛋白裂解液（R0278，Sigma-Aldrich，USA）；BCA 試劑盒（55R-1544，F(xiàn)itzgerald，USA）；Lipofectamine3000 轉(zhuǎn)染試劑（L3000001，Thermo Fisher Scientific，USA）；聚偏氟乙烯（PVDF）膜（24937，Sigma-Aldrich，中國(guó)）；實(shí)驗(yàn)所用抗體均由Abcam 公司（USA）提供：核轉(zhuǎn)錄因子p65（p65）（ab32536，65kDa）、抑制因子κB（IkB）（ab32518，35kDa）、NALP3（ab263899，118kDa）、膠原蛋白-1（collagen-1）（ab260043，139kDa）、α-SMA（ab5694，42kDa）、GAPDH（ab8245，36kDa）、山羊抗兔二抗（ab6721）、兔抗鼠二抗（ab6728）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 電子稱(chēng)（BSA124S，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司，中國(guó)）；高速智能梯度PCR 儀（Sure－Cycler 8800，Agilent Technologies，USA）；熒光顯微鏡（PA53 FS6，Motic China Group co.，ltd，中國(guó)）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 矽肺模型的建立和成纖維細(xì)胞處理 3 只小鼠一次性灌注50 g/L 生理鹽水稀釋的SiO2混懸液以建立矽肺小鼠模型。所有小鼠飼養(yǎng)4 周后采用1%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，頸椎脫位處死小鼠。收集肺纖維組織并提取肺纖維細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)。肺組織塊經(jīng)胰蛋白酶消化，在此過(guò)程中隨時(shí)吸取少量消化液，在顯微鏡下觀察是否有分散的細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，若有則終止消化，并將消化的細(xì)胞離心后棄上清液，加入含有10%血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)反復(fù)吹打搖勻后制成細(xì)胞懸液。在無(wú)菌條件下將長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)瓶的細(xì)胞反復(fù)清洗，再加入0.3%胰蛋白酶消化。顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)由回縮變?yōu)閳A形后，傳代培養(yǎng)至3代的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 細(xì)胞分組 （1）將成纖維細(xì)胞分為Control 組、0.1 mg/mL 組和0.28 mg/mL 組（細(xì)胞分別經(jīng)0、0.1 和0.28 mg/mL SF 處理48 h）。（2）將成纖維細(xì)胞分為Control 組（細(xì)胞正常培養(yǎng)），SF 組（細(xì)胞經(jīng)過(guò)0.28 mg/mL SF 處理48 h），NF-κB 激活劑（Prostratin）組（細(xì)胞經(jīng)過(guò)100 nmol 的Prostratin 處理48 h），SF+Prostratin 組（細(xì)胞經(jīng)0.28 mg/mL SF 和100 nmol Prostatin 聯(lián)合處理48 h）。（3）將成纖維細(xì)胞分成Normal 組（成纖維細(xì)胞正常培養(yǎng)），shNALP3 組（細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 敲減質(zhì)粒），shNC 組（細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 的陰性對(duì)照），Prostratin 組（細(xì)胞經(jīng)過(guò)100 nmol Prostratin 處理48 h），Prostratin+shNALP3 組（細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 敲減質(zhì)粒并經(jīng)100 nmol 的Prostratin 處理48 h），Prostratin+shNC 組（細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 陰性對(duì)照并經(jīng)100 nmol Prostratin 處理48 h）。

2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 NALP3 敲減質(zhì)粒（shNALP3）及陰性對(duì)照（shNC）由生工生物工程（上海）有限公司合成。復(fù)蘇后常規(guī)培養(yǎng)的細(xì)胞按照3×105/孔的數(shù)量接種于6 孔板，置于37 ℃二氧化碳培養(yǎng)箱中過(guò)夜。將無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋后的質(zhì)粒與Lipofectamine3000 轉(zhuǎn)染試劑混合，隨后加入無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2.4 細(xì)胞活力和增殖檢測(cè) 根據(jù)MTT 試劑盒說(shuō)明，細(xì)胞在96 孔板中培養(yǎng)48h 后，將20μL 濃度為2mg/mL的MTT 試劑加入平板孔中。37 ℃孵育2 h 后，完全抽吸含MTT 試劑的培養(yǎng)基并烘干孔。每孔加入100 μL DMSO 溶解形成的甲醛晶體，在酶標(biāo)儀570 nm 處記錄吸光度。計(jì)算細(xì)胞存活率，數(shù)值以百分比表示。

根據(jù)Cell-Light EdU Apollo488 體外試劑盒說(shuō)明，細(xì)胞接種于96 孔板，每孔5×103個(gè)細(xì)胞。將EdU溶液稀釋到細(xì)胞培養(yǎng)基中，稀釋比例為1∶1000，取稀釋后的EdU（濃度：50 μmol/L）注入平板，每孔100 μL。孵育2 h，固定后，用染色反應(yīng)液和Hoechst 33342 溶液處理細(xì)胞。使用熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果。

2.5 ELISA 首先按照說(shuō)明書(shū)配制溶液，然后將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品稀釋?zhuān)⒃O(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和待測(cè)樣品孔，分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本。板覆蓋膜，在37 ℃培養(yǎng)90 min。洗滌后，加入相應(yīng)抗體與生物素化的孵化工作液在37 ℃下孵育60 min。將酶標(biāo)抗體工作液加入培養(yǎng)板后置于37 ℃孵育30 min。酶標(biāo)板洗滌4 次后，每個(gè)反應(yīng)孔添加100 μL 彩色顯影劑，在37 ℃避光的孵化器中孵育20 min。最后，每孔添加100 μL 終止液，混合后用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450 nm 處測(cè)量吸光度。

2.6 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)（QRT-PCR）使用TRIzol 試劑從細(xì)胞中提取總RNA。利用納米滴分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA 的濃度和純度。當(dāng)A260/A280 比值在1.8～2.0 之間時(shí)，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并在-20 ℃保存?zhèn)溆?。以cDNA為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。NALP3 的上游引物序列為5'-GCAAGTCAGACTGGAACTACTGA-3'，下游引物序列為5'-GTACAGGCAGTAGAACAGTTCCA-3'。內(nèi)參使用甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH），采用2-ΔΔCT方法計(jì)算NALP3 的相對(duì)表達(dá)量。

2.7 蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot） 將處理過(guò)的細(xì)胞加入RIPA 蛋白裂解液，置于冰上充分裂解。12000 r/min，4 ℃離心10 min，收集上清。采用BCA法測(cè)定蛋白含量。蛋白質(zhì)經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離，電移至PVDF膜，并用5%脫脂牛奶在室溫下密封。用三羥甲基氨基甲烷緩沖液（TBST）沖洗膜后，一抗4 ℃孵育12 h。再次使用TBST 洗凈膜后，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗，室溫孵育。沖洗膜后，加入ECL發(fā)光液進(jìn)行顯影，凝膠成像系統(tǒng)拍照，用ImageJ 軟件分析蛋白條帶的灰度值。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組數(shù)據(jù)的差異比較采用單因素方差分析和邦弗朗尼（Bonferroni）事后檢驗(yàn)法分析；計(jì)數(shù)資料均以百分?jǐn)?shù)（%）的形式表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 NF-κB 通路參與SF 調(diào)控的矽肺小鼠成纖維細(xì)胞增殖 采用Western blot 檢測(cè)經(jīng)SF 處理的矽肺小鼠纖維細(xì)胞中p65、IkB、NALP3、collagen-1 和α-SMA 蛋白表達(dá)量。如圖1 和表1 所示，0.28 mg/mL 的SF 抑制p65、IkB、NALP3、collagen-1 和α-SMA 蛋白的表達(dá)（P<0.05）。后續(xù)采用Prostratin 處理矽肺小鼠成纖維細(xì)胞。MTT、EdU 和ELISA 檢測(cè)結(jié)果顯示，與Control 組比較，SF 組細(xì)胞的活力和增殖被抑制，Caspase-1 和IL-1β 活性降低，Prostratin 組結(jié)果相反；和SF 組比較，SF+Prostratin 組的細(xì)胞活力、增殖、Caspase-1 和IL-1β 活性顯著升高（P<0.05），見(jiàn)表2。Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，和Control 組比較，SF 組細(xì)胞中p65、IkB、NALP3、collagen-1 和α-SMA 蛋白的表達(dá)被抑制，Prostratin 組的上述蛋白表達(dá)水平上調(diào)；進(jìn)一步和SF 組比較，SF+Prostratin 組細(xì)胞中p65、IkB、NALP3、collagen-1 和α-SMA 蛋白水平顯著上調(diào)（P<0.05），見(jiàn)圖2、表3。

表1 各組細(xì)胞的相對(duì)蛋白表達(dá)量（±s）

表1 各組細(xì)胞的相對(duì)蛋白表達(dá)量（±s）

注：Control 組、0.1 mg/mL 組和0.28 mg/mL 組細(xì)胞分別經(jīng)過(guò)濃度為0、0.1 和0.28 mg/mL 的阿魏酸鈉處理48 h；p65 為核轉(zhuǎn)錄因子p65；IkB 為抑制因子κB；NALP3 為核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3；collagen-1 為膠原蛋白-1；α-SMA 為平滑肌肌動(dòng)蛋白α；與Control 組比較，aP<0.05

組別Control 組0.1 mg/mL 組0.28 mg/mL 組實(shí)驗(yàn)次數(shù)333 p65 1.00±0.08 0.80±0.06a 0.51±0.04a IkB 1.00±0.09 0.81±0.06a 0.46±0.04a NALP3 1.00±0.08 0.86±0.06 0.54±0.05a collagen-1 1.00±0.09 0.77±0.06a 0.49±0.04a α-SMA 1.00±0.08 0.92±0.08 0.62±0.05a

表2 各組細(xì)胞的活力、增殖和細(xì)胞因子含量（±s）

表2 各組細(xì)胞的活力、增殖和細(xì)胞因子含量（±s）

注：Control 組細(xì)胞正常培養(yǎng)；SF 組細(xì)胞給予0.28 mg/mL 阿魏酸鈉處理48 h；Prostratin 組細(xì)胞給予100 nmol Prostratin 處理48 h；SF+Prostratin組細(xì)胞給予0.28 mg/mL 阿魏酸鈉和100 nmoL Prostatin 聯(lián)合處理48 h；Caspase-1 為半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-1；IL-1β 為白介素1β；與Control 組比較，aP<0.05；與Prostratin 組比較，bP<0.05；與SF 組比較，cP<0.05

組別Control 組SF 組Prostratin 組SF+Prostratin 組實(shí)驗(yàn)次數(shù)3333相對(duì)細(xì)胞活力（%）100.00±8.01 56.33±3.99a 122.25±10.00a 80.26±5.00bc細(xì)胞增殖（%）7.70±0.50 1.80±0.10a 10.60±1.00a 3.80±0.25bc Caspase-1（pg/mL）124.33±10.00 54.28±4.00a 173.69±10.00a 111.02±7.00bc IL-1β（pg/mL）80.47±6.00 19.28±2.01a 105.69±8.00*74.05±5.01bc

表3 各組的相對(duì)蛋白表達(dá)量（±s）

表3 各組的相對(duì)蛋白表達(dá)量（±s）

注：Control 組細(xì)胞正常培養(yǎng)；SF 組細(xì)胞給予0.28 mg/mL 阿魏酸鈉處理48 h；Prostratin 組細(xì)胞給予100 nmol Prostratin 處理48 h；SF+Prostratin組細(xì)胞給予0.28 mg/mL 阿魏酸鈉和100 nmol Prostatin 聯(lián)合處理48 h；p65 為核轉(zhuǎn)錄因子p65；IkB 為抑制因子κB；NALP3 為核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3；collagen-1 為膠原蛋白-1；α-SMA 為平滑肌肌動(dòng)蛋白α；與Control 組比較，aP<0.05；與Prostratin 組比較，bP<0.05；與SF 組比較，cP<0.05

組別Control 組SF 組Prostratin 組SF+Prostratin 組實(shí)驗(yàn)次數(shù)3333 p65 1.00±0.08 0.22±0.03a 1.26±0.10a 1.03±0.09bc IkB 1.00±0.08 0.34±0.03a 1.58±0.11a 1.06±0.09bc NALP3 1.00±0.09 0.33±0.03a 1.95±0.14a 1.10±0.09bc collagen-1 1.00±0.08 0.36±0.03a 1.56±0.11a 1.03±0.09bc α-SMA 1.00±0.08 0.25±0.03a 1.56±0.11a 1.12±0.09bc

圖1 Western blot 檢測(cè)經(jīng)阿魏酸鈉處理的矽肺小鼠纖維細(xì)胞中p65、IkB、NALP3、collagen-1 和α-SMA 蛋白表達(dá)量

圖2 Western blot 檢測(cè)經(jīng)prostratin 和阿魏酸鈉處理的矽肺小鼠纖維細(xì)胞中p65、IkB、NALP3、collagen-1 和α-SMA 蛋白表達(dá)量

3.2 NALP3 參與NF-κB 通路介導(dǎo)的矽肺小鼠成纖維細(xì)胞增殖 繼續(xù)構(gòu)建shNALP3 質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染于模型成纖維細(xì)胞，通過(guò)qRT-PCR 檢測(cè)shNALP3 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染shNALP3 的細(xì)胞中NALP3 含量明顯低于shNC（P<0.05），見(jiàn)表4。MTT、EdU 和ELISA檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和Prostratin+shNC 組比較，Prostratin+shNALP3 組的細(xì)胞活力、增殖、Caspase-1 和IL-1β 的活性水平均降低（P<0.05），見(jiàn)表5。Western blot 檢測(cè)collagen-1 和α-SMA 蛋白水平顯示，和Prostratin+shNC 組比較，Prostratin+shNALP3 組細(xì)胞中collagen-1和α-SMA 蛋白表達(dá)被抑制（P<0.05），見(jiàn)圖3、表6。

表4 shNALP3 的轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)（±s）

表4 shNALP3 的轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)（±s）

注：Normal 組細(xì)胞正常培養(yǎng)；shNALP3 組細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 敲減質(zhì)粒；shNC 組細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 的陰性對(duì)照；NALP3 為核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3；與shNC 組比較，aP<0.05

組別Normal 組shNC 組shNALP3 組實(shí)驗(yàn)次數(shù)333 NALP3 1.00±0.06 0.95±0.09 0.34±0.03a

表5 各組細(xì)胞的活力、增殖和細(xì)胞因子含量（±s）

表5 各組細(xì)胞的活力、增殖和細(xì)胞因子含量（±s）

注：Prostratin 組細(xì)胞給予100 nmol Prostratin 處理；Prostratin+shNALP3 組細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 敲減質(zhì)粒并給予100 nmol Prostratin 處理；Prostratin+shNC 組細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 陰性對(duì)照并給予100 nmol Prostratin 處理；Caspase-1 為半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-1；IL-1β 為白介素1β；與Prostrain+shNC 組比較，aP<0.05

組別Prostrain 組Prostrain+shNC 組Prostrain+shNALP3 組實(shí)驗(yàn)次數(shù)333相對(duì)細(xì)胞活力（%）100.00±7.01 98.58±6.99 53.33±4.99a細(xì)胞增殖（%）12.12±1.03 11.35±1.11 4.30±0.58a Caspase-1（pg/mL）172.36±10.01 174.87±9.99 120.25±7.89a IL-1β（pg/mL）104.33±6.99 105.25±6.47 74.05±5.01a

表6 各組的相對(duì)細(xì)胞蛋白表達(dá)量（±s）

表6 各組的相對(duì)細(xì)胞蛋白表達(dá)量（±s）

注：Prostratin 組 細(xì) 胞 給 予100 nmol Prostratin 處 理；Prostratin+shNALP3 組細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 敲減質(zhì)粒并給予100 nmol Prostratin 處理；Prostratin+shNC 組細(xì)胞轉(zhuǎn)染NALP3 陰性對(duì)照并給予100 nmol Prostratin 處理；collagen-1 為膠原蛋白-1；α-SMA 為平滑肌肌動(dòng)蛋白α；與Prostrain+shNC 組比較，aP<0.05

組別Prostrain 組Prostrain+shNC 組Prostrain+shNALP3 組實(shí)驗(yàn)次數(shù)333 collagen-1 1.00±0.08 1.01±0.09 0.66±0.05a α-SMA 1.00±0.09 0.94±0.07 0.64±0.05a

圖3 Western blot 檢測(cè)成纖維細(xì)胞相關(guān)蛋白collagen-1 和α-SMA 的表達(dá)

4 討 論

本研究在前期研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究SF 在治療矽肺過(guò)程中可能涉及的內(nèi)在分子機(jī)制[2]。本研究結(jié)果證實(shí)，SF 治療矽肺的過(guò)程中可能阻斷NF-κB 通路，并且證實(shí)該通路參與治療過(guò)程并影響矽肺模型成纖維細(xì)胞的增殖。此外，通過(guò)探究NF-κB 通路作用矽肺模型小鼠成纖維細(xì)胞的分子機(jī)制證實(shí)NALP3是一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控基因。

目前已有研究報(bào)道NF-κB 與矽肺進(jìn)展相關(guān)，全身抑制的NF-κB 活化能夠降低SiO2誘導(dǎo)的肺損傷[6-8]。在化合物治療矽肺的研究中，有研究報(bào)道，槲皮素通過(guò)抑制NF-κB 通路減少大鼠炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)腫瘤壞死因子α（TNF-α）等釋放，減輕炎癥反應(yīng)，緩解肺纖維化[9]。通過(guò)對(duì)模型細(xì)胞內(nèi)相關(guān)蛋白的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SF 能夠抑制p65、IkB、NALP3、collagen-1 和α-SMA蛋白的表達(dá)，說(shuō)明在SF 治療矽肺的過(guò)程中可能阻斷NF-κB 通路，并且該通路參與治療過(guò)程。王焱等[10]研究顯示，NF-κB 可與其他因子共同參與大鼠矽肺纖維化的形成，并且干預(yù)NF-κB 形成可以改變大鼠矽肺纖維化程度。在本研究中我們選擇能夠激活NFκB 的試劑Prostratin 處理經(jīng)SF 處理的成纖維細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Prostratin 逆轉(zhuǎn)SF 抑制的細(xì)胞活力和細(xì)胞增殖，這說(shuō)明NF-κB 通路可參與SF 的治療過(guò)程。

往往一條信號(hào)通路發(fā)揮作用機(jī)制的過(guò)程涉及其他基因的調(diào)控。研究顯示，腫瘤壞死因子2 型受體（TNFR2）可激活NF-κB 信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制，進(jìn)而影響心力衰竭進(jìn)程[11]。在大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的研究中NF-κB 激活能夠誘導(dǎo)NALP3 表達(dá)[4]。NALP3 是研究最多、特征最明確的炎癥小體[12]，其在矽肺的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用[2]。為了進(jìn)一步探究NF-κB 通路作用矽肺模型小鼠成纖維細(xì)胞的分子機(jī)制，我們基于以往的研究，構(gòu)建NALP3 敲減質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染于模型成纖維細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Prostratin 促進(jìn)的細(xì)胞活力受到shNALP3 的逆轉(zhuǎn)，這說(shuō)明NF-κB 通路通過(guò)NALP3 參與矽肺小鼠成纖維細(xì)胞的增殖。

綜上所述，SF 通過(guò)阻斷NF-κB 途徑降低NALP3 誘導(dǎo)的矽肺成纖維細(xì)胞增殖，可為矽肺纖維化的治療提供新途徑。