• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    藍色刺孢霉QY229產天然藍色素液態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化

    2023-12-29 04:27:40黃露文朱麗萍顏世敢
    齊魯工業(yè)大學學報 2023年6期
    關鍵詞:色價裝瓶氮源

    黃露文,朱麗萍,顏世敢

    齊魯工業(yè)大學(山東省科學院) 生物工程學部,山東 濟南 250353

    食用色素可以根據來源不同,分成天然色素和人工合成色素兩大類[1]。在以往的研究中,天然色素已經被證明具有良好的著色性能和促進健康的作用,但運用于工業(yè)生產仍然存在著成本較高、來源有限等挑戰(zhàn)[2]。近年來,合成色素在食品工業(yè)中被廣泛應用,但所有的人工合成色素幾乎都不是營養(yǎng)物質,部分甚至有致癌危險。因此,天然色素再次回歸大眾的視野[3]。在天然色素中,天然藍色素出現的頻率遠低于紅色、綠色或黑色[4]。目前市面上所使用的藍色素,例如常被用來裝點食物的輝煌藍(FD&C Blue No.1)和靛青(FD&C Blue No.2)大多是由人工合成[5]。雖然在一定程度上這些人造藍色素被認為是安全的,但消費者無疑更喜歡天然的東西[6]。因此,從自然界中分離出稀有的天然藍色素,并找到大規(guī)模的生產方法具有重要的現實意義和巨大的市場前景[7]。

    大多數天然色素是從植物組織中提取,但考慮到工業(yè)應用,這類原材料的獲取將受到眾多自然因素的制約[8]。近年來,利用微生物發(fā)酵代謝的方式獲取天然色素受到了廣泛關注[9]。然而,目前所研究的產色素的菌種中只有極少數能夠產生藍色素,所以開發(fā)新的生產藍色素的菌種是當今市場的一個主要需求[10]。本研究采用由實驗室保藏的藍色刺孢霉菌株在液態(tài)搖瓶培養(yǎng)條件下生產藍色素,并對其發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進行系統(tǒng)優(yōu)化,旨在為天然藍色素的規(guī)?;a奠定基礎。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    實驗所采用的藍色刺孢霉QY229為本實驗室保藏菌株;碳源(葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉和果糖)、氮源(蛋白胨、硝酸銨、硫酸銨、酵母膏、牛肉膏和硝酸鈉)、瓊脂粉、無機鹽等試劑均購自國藥集團化學試劑有限公司。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 微生物培養(yǎng)方法

    斜面培養(yǎng)基采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA);種子培養(yǎng)基:40 g/L葡萄糖、20 g/L蛋白胨、1.0 g/L NaCl、1.0 g/L MgSO4、1.0 g/L KH2PO4、pH為5.5~6.0。初始發(fā)酵培養(yǎng)基:60 g/L葡萄糖、30 g/L蛋白胨、1.0 g/L NaCl、1.0 g/L MgSO4、1.0 g/L KH2PO4、pH為5.5~6.0。

    取藍色刺孢霉QY229劃線接種到PDA斜面培養(yǎng)基,35 ℃下恒溫培養(yǎng)5~7 d。吸取5 mL無菌水反復沖洗斜面制備孢子懸浮液,并將其添加到30 mL的種子培養(yǎng)基中(250 mL錐形瓶),于32 ℃恒溫培養(yǎng)振蕩器(150 r/min)上培養(yǎng)48 h,獲得種子培養(yǎng)液。最后,以體積分數5%的接種量將種子培養(yǎng)液轉移到100 mL的發(fā)酵培養(yǎng)基中(250 mL錐形瓶),6層紗布封口,在32 ℃的恒溫培養(yǎng)振蕩器(180 r/min)上培養(yǎng)6 d,獲得含藍色素的發(fā)酵液。

    1.2.2 發(fā)酵液的預處理與色價測定方法

    收集含藍色素的發(fā)酵液于4 ℃下離心20 min(6 000×g),棄去沉淀,上清液用蒸餾水定容至原發(fā)酵液體積。

    參照已報道的方法進行發(fā)酵液色價的測定[11]。每毫升含藍色素的發(fā)酵上清液,稀釋合適倍數后,在pH為9,于580 nm下測定吸光度,吸光度值為0.1時相當于1個色素效價相對單位(U/mL),藍色素發(fā)酵液色價計算公式如下:

    色價=總稀釋倍數×OD_580 nm。 (1)

    1.2.3 單因素試驗設計

    以初始發(fā)酵培養(yǎng)基成分為基礎,添加不同種類的碳源(乳糖、蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、麥芽糖、果糖)和氮源(硝酸銨、硫酸銨、酵母膏、蛋白胨、硝酸鈉、牛肉膏),檢測其對藍色刺孢霉產藍色素的影響。

    1.2.4 Plackett-Burman試驗設計

    在單因素試驗結果的基礎上,選取葡萄糖質量濃度、蛋白胨質量濃度、溫度、裝瓶量、時間、接種量、初始pH、轉速、種齡9種因素作為考察對象,以發(fā)酵液色價(Y)為響應值,通過Design-Expert 8.0軟件中Plackett-Burman篩選影響發(fā)酵液色價的顯著性因素。各因素試驗設計水平如表1所示。

    表1 Plackett-Burman設計的因素與水平

    1.2.5 最陡爬坡試驗

    根據Plackett-Burman試驗分析結果,將篩選出的影響發(fā)酵液色價的顯著性因素進行最陡爬坡試驗設計,得到關鍵因子的最佳水平范圍。爬坡試驗的方向通過回歸方程關鍵因素系數的正負確定,爬坡試驗的步長依據響應值的變化進行設計,旨在快速、經濟地逼近最大響應區(qū)域。

    1.2.6 Box-Behnken試驗設計

    以最陡爬坡試驗設計得出的試驗結果為依據進行3因素3水平Box-Behnken試驗,利用Minitab 18軟件將得到的數據構建二次多項式數學模型同時進行回歸分析,最終確定藍色刺孢霉QY229產天然藍色素的最佳發(fā)酵參數,優(yōu)化后各因素間的交互關系通過三維響應面圖呈現。

    1.2.7 試驗驗證

    將Box-Behnken分析得到的藍色刺孢霉最佳發(fā)酵參數進行3次重復試驗,3次試驗得到的結果取平均值,進而驗證該試驗模型及試驗設計應用是否合理可行,并得出最終優(yōu)化結果。

    2 結果與分析

    2.1 單因素試驗結果

    2.1.1 培養(yǎng)基碳源種類的影響

    碳源的種類直接關系到微生物的生長和代謝物質的產生[12]。果糖、葡萄糖是常見碳源里能被微生物直接利用的單糖,尤其是葡萄糖,也是發(fā)酵培養(yǎng)基中最常被選擇作為碳源和能源的糖類物質之一[13]。其他雙糖或多糖類物質如蔗糖、麥芽糖和淀粉在水解后也可被微生物逐步利用[14]。本試驗以初始發(fā)酵培養(yǎng)基為基礎,更換不同種類的碳源測定其對發(fā)酵液色價的影響,試驗結果見圖1。

    注:不同字母代表兩組數據之間存在顯著性差異(p<0.05);相同字母代表兩組數據之間不存在顯著性差異(p>0.05)。碳源質量濃度為60 g/L。

    由圖1可知,當碳源質量濃度均為60 g/L時,以葡萄糖為發(fā)酵培養(yǎng)基碳源,發(fā)酵液色價達到167.7 U/mL,顯著(p<0.05)高于其它底物作為碳源時的色價。因此,本研究選擇葡萄糖作為藍色刺孢霉液態(tài)發(fā)酵生產藍色素的最優(yōu)碳源。

    2.1.2 培養(yǎng)基氮源種類的影響

    氮源參與各類微生物細胞重要成分的構建,應用于培養(yǎng)基中的無機氮源在發(fā)酵過程早期可以被微生物快速利用,同時能夠促使培養(yǎng)基的pH發(fā)生變化[15]。而有機氮源如牛肉膏、酵母膏和蛋白胨等工業(yè)副產品,除提供氮源外,還可以提供大量的無機鹽及生長因子[16]。該過程以葡萄糖為碳源(最佳碳源),結合初始發(fā)酵培養(yǎng)基其他條件,研究不同氮源對菌株發(fā)酵液色價的影響,依據發(fā)酵液色價值的高低選擇出最佳氮源,實驗結果見圖2。

    由圖2可知,蛋白胨作為培養(yǎng)基的氮源色價達到164.4 U/mL,普遍高于其他物質作為氮源時發(fā)酵液的色價,其次是酵母膏。而硝酸鈉、硫酸銨、硝酸銨作為氮源,色價均在60 U/mL以下,與有機氮源存在顯著(p<0.05)差異性,這就說明與無機氮源相比,有機氮源更能促使該菌株代謝產生藍色素。因此,本實驗中蛋白胨可以作為藍色刺孢霉液態(tài)發(fā)酵獲取藍色素的最優(yōu)氮源。

    注:氮源質量濃度為30 g/L。

    2.2 Plackett-Burman試驗設計

    Plackett-Burman試驗設計對菌株發(fā)酵關鍵影響因素的篩選結果如表2所示。采用Minitab 18軟件對試驗數據進行擬合分析,獲得發(fā)酵液色價Y(響應值)對X1~X9(自變量的編碼值)9個因素的一次回歸方程:

    Y=149.28+8.57X1+11.33X2+62.96X3-26.03X4-5.51X5+6.53X6+7.24X7+1.12X8+1.04X9。

    表2 Plackett-Burman試驗設計與結果

    經分析,該回歸方程顯著(p=0.010 3),相關系數R2=0.997 7,這表明該回歸模型的可信度較高,該方程可以對試驗中99.77%的數據作出解釋,模型試驗誤差合理可靠。

    另外,根據表3中效應值的大小可知影響藍色刺孢霉產天然藍色素的關鍵因素依次為溫度、蛋白胨質量濃度、裝瓶量。其中溫度和蛋白胨質量濃度對發(fā)酵液色價的影響達到了極顯著水平(p<0.01),裝瓶量對發(fā)酵液色價的影響達到了顯著水平(p<0.05),其余因素的影響均不顯著(p>0.05)。因此后續(xù)試驗選取X2(蛋白胨質量濃度)和X3(溫度)、X4(裝瓶量)為關鍵因素。

    2.3 最陡爬坡試驗

    由Plackett-Burman回歸方程可知X2(蛋白胨質量濃度)和X3(溫度)對Y(發(fā)酵液色價)具有正效應,X4(裝瓶量)對Y(發(fā)酵液色價)具有負效應。梯度增加溫度和蛋白胨質量濃度,同時梯度降低裝瓶量,進行最陡爬坡試驗,進而確定3個關鍵因素的最佳水平范圍,試驗設計及結果如表4所示。由表4可知,試驗的最優(yōu)點在試驗4附近。因此,以試驗4的條件設置作為后續(xù)響應面試驗的中心點,實現以最少試驗量快速逼近最大發(fā)酵液色價區(qū)域的目的。

    表4 最陡爬坡試驗設計及試驗結果

    2.4 Box-Behnken試驗優(yōu)化確定最佳因素水平

    在最陡爬坡實驗結果的基礎上,以蛋白胨質量濃度(X2)、溫度(X3)及裝瓶量(X4)作為響應因素,發(fā)酵液色價(Y)作為響應值,共計進行15次試驗,優(yōu)化確定最佳因素水平,試驗設計與結果見表5和表6。

    表5 Box-Behnken設計的因素與水平

    表6 Box-Behnken試驗設計與結果

    表7 Box-Behnken試驗設計回歸分析結果

    采用Design-Expert 8.0軟件,對Box-Behnken試驗建立的回歸模型中各因素交互作用結果進行響應曲面作圖,結果見圖3。從圖3(a)可以看出,以蛋白胨質量濃度和溫度二因素交互生成的三維響應面圖中,隨著蛋白胨質量濃度和溫度的增加,發(fā)酵液色價先升高后降低。其中蛋白胨質量濃度的曲面坡度較緩慢于培養(yǎng)溫度的曲面坡度,說明發(fā)酵液色價受培養(yǎng)溫度的影響更大[18]。圖3(b)為蛋白胨質量濃度與裝瓶量交互生成的三維響應面圖,圖中等高線的形狀為橢圓形,表明二因素交互作用明顯,同時驗證了方差分析交互項中分析結果的顯著性[19]。圖3(c)為溫度和裝瓶量交互生成的三維響應面圖,溫度和裝瓶量交互作用顯著,且溫度的曲面坡度比裝瓶量的曲面坡度陡峭,可知溫度對發(fā)酵液色價的影響更大[20]。對模型最優(yōu)點進行分析,得到上述關鍵因素的最佳水平:培養(yǎng)溫度為31.67 ℃,蛋白胨質量濃度為34.61 g/L,裝瓶量為72.33 mL,對應發(fā)酵液色價的預測值為350.4 U/mL。

    (a)蛋白胨質量濃度與培養(yǎng)溫度之間的相互作用

    (b)裝瓶量與蛋白胨質量濃度之間的相互作用

    2.5 試驗驗證

    為了驗證Box-Behnken分析方法所建模型的預測值與實際值是否能夠較好的擬合,將上述優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件:蛋白胨質量濃度34.61 g/L,溫度為31.67 ℃,裝瓶量72.33 mL,進行3次試驗,3次試驗結果的平均值為348.2 U/mL,與理論預測值350.4 U/mL相接近,說明本試驗設計的優(yōu)化模型切實可靠,可應用于藍色刺孢霉的發(fā)酵條件優(yōu)化。經分析,優(yōu)化后的發(fā)酵液色價是優(yōu)化前色價的2.1倍,得出該方案可以明顯提高藍色刺孢霉QY229液態(tài)發(fā)酵條件下藍色素的產量。

    3 結 論

    本研究對藍色刺孢霉產天然藍色素的液態(tài)發(fā)酵工藝進行系統(tǒng)優(yōu)化。以單因素試驗結果為基礎,采用Plackett-Burman試驗設計從9種考察因素中篩選出關鍵影響因素:氮源質量濃度(蛋白胨)、培養(yǎng)溫度、裝瓶量。利用最陡爬坡實驗設計和Box-Behnken試驗對篩選出的3個關鍵影響因素進行響應面分析,結果表明當蛋白胨質量濃度為34.61 g/L,溫度為31.67 ℃,裝瓶量為72.33 mL時,發(fā)酵液色價達348.2 U/mL,是優(yōu)化前色價的2.1倍。試驗驗證顯示,預測值與試驗值之間沒有顯著差異,表明優(yōu)化后的條件是合理可行的。由此可見,藍色刺孢霉液態(tài)QY229發(fā)酵產藍色素作為稀有天然藍色素的又一新來源,具有廣闊的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

    猜你喜歡
    色價裝瓶氮源
    高色價紅曲米液態(tài)制種的培養(yǎng)條件優(yōu)化
    草莓酒的加工技術
    農家之友(2019年4期)2019-06-13 06:43:14
    梔子黃色素提取工藝及品質評價
    瓶栽杏鮑菇配料至接種環(huán)節(jié)技術淺析
    可口可樂剝離在華裝瓶資產 中糧太古接手將平分
    果膠酶法提取紫甘藍花青素工藝條件研究
    無機氮源對紅曲霉調控初探
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:11
    中藥渣生產蛋白飼料的氮源優(yōu)化研究
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:03
    響應面分析法和氮源改進優(yōu)化L-賴氨酸發(fā)酵工藝
    理化因子對紅曲色素色價的影響及桔霉素的光降解性
    食品科學(2013年15期)2013-03-11 18:25:25
    欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲综合精品二区| 哪个播放器可以免费观看大片| 赤兔流量卡办理| 乱人伦中国视频| 久久久国产一区二区| 国产精品.久久久| 18禁动态无遮挡网站| freevideosex欧美| 久久精品国产亚洲网站| 一区二区av电影网| 精品国产露脸久久av麻豆| 一级爰片在线观看| 久久久久网色| 国产精品免费大片| 国产一区二区三区av在线| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久网色| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产免费福利视频在线观看| 免费人成在线观看视频色| 亚洲综合精品二区| 黑人猛操日本美女一级片| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲三级黄色毛片| 成年人午夜在线观看视频| 国产精品三级大全| 亚洲熟女精品中文字幕| 永久网站在线| 欧美激情国产日韩精品一区| 婷婷色av中文字幕| 精品国产国语对白av| 人人妻人人澡人人看| 久久99一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久久国产欧美日韩av| 99热6这里只有精品| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 少妇人妻久久综合中文| 五月玫瑰六月丁香| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲精品国产成人久久av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产黄片美女视频| 国产欧美亚洲国产| 久久鲁丝午夜福利片| 国产成人精品福利久久| 插逼视频在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 九九在线视频观看精品| 这个男人来自地球电影免费观看 | 99精国产麻豆久久婷婷| 国产伦精品一区二区三区视频9| 18禁在线播放成人免费| a级毛色黄片| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲一区二区三区欧美精品| 日本av手机在线免费观看| 青春草国产在线视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 啦啦啦在线观看免费高清www| 成人无遮挡网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 日韩成人伦理影院| 欧美日韩精品成人综合77777| 中国国产av一级| 最近2019中文字幕mv第一页| 人人妻人人看人人澡| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 99热6这里只有精品| av视频免费观看在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 在线观看三级黄色| 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美97在线视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚州av有码| 大香蕉97超碰在线| 日韩欧美一区视频在线观看 | 免费看av在线观看网站| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲精品自拍成人| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av在线观看美女高潮| 黄色配什么色好看| 亚洲伊人久久精品综合| 一级毛片我不卡| 又爽又黄a免费视频| 亚洲成色77777| 成人国产麻豆网| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 丝瓜视频免费看黄片| 黄色一级大片看看| 精品一区二区免费观看| 简卡轻食公司| 尾随美女入室| 日本色播在线视频| 毛片一级片免费看久久久久| 丁香六月天网| av网站免费在线观看视频| 国产男女内射视频| 精品少妇内射三级| 中文字幕久久专区| 久久热精品热| 亚洲色图综合在线观看| 丁香六月天网| 男人舔奶头视频| 国产高清国产精品国产三级| 欧美日韩亚洲高清精品| 五月开心婷婷网| 欧美bdsm另类| 最近手机中文字幕大全| 日韩视频在线欧美| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲国产欧美在线一区| 少妇熟女欧美另类| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久久久久大av| 性色avwww在线观看| av线在线观看网站| 精品一品国产午夜福利视频| 伦精品一区二区三区| 内射极品少妇av片p| 大香蕉久久网| 插逼视频在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| av福利片在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 一级a做视频免费观看| 成人特级av手机在线观看| 视频中文字幕在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品久久久久久久久免| 精品一区二区三卡| 99国产精品免费福利视频| av有码第一页| 久久热精品热| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 午夜久久久在线观看| 一本一本综合久久| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产高清不卡午夜福利| 人人妻人人澡人人看| 日本色播在线视频| 亚洲天堂av无毛| 高清不卡的av网站| 国产在线一区二区三区精| 久久女婷五月综合色啪小说| 街头女战士在线观看网站| 国产精品女同一区二区软件| 热99国产精品久久久久久7| 少妇精品久久久久久久| 久久久国产精品麻豆| 国产精品偷伦视频观看了| 青春草亚洲视频在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 丰满迷人的少妇在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 三级经典国产精品| 欧美bdsm另类| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产在线免费精品| 久久国产乱子免费精品| 大码成人一级视频| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 免费看av在线观看网站| 赤兔流量卡办理| 久久久国产精品麻豆| 日韩av不卡免费在线播放| 日本vs欧美在线观看视频 | 午夜免费观看性视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美精品国产亚洲| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩一区二区三区影片| 乱人伦中国视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精华霜和精华液先用哪个| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 嫩草影院入口| 欧美xxxx性猛交bbbb| 老女人水多毛片| 成人免费观看视频高清| 少妇人妻一区二区三区视频| √禁漫天堂资源中文www| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲av不卡在线观看| 国产在线男女| 日本黄大片高清| 久久久久精品久久久久真实原创| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品亚洲成国产av| .国产精品久久| 国产免费福利视频在线观看| 一级毛片 在线播放| 国精品久久久久久国模美| 免费在线观看成人毛片| 日韩一区二区视频免费看| 国产成人精品福利久久| 亚洲国产av新网站| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产爽快片一区二区三区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 大陆偷拍与自拍| 国产黄频视频在线观看| 一级毛片电影观看| 99久国产av精品国产电影| 国产在线一区二区三区精| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲自偷自拍三级| 91精品国产国语对白视频| 成人二区视频| 蜜桃在线观看..| 美女大奶头黄色视频| 亚洲av男天堂| 国模一区二区三区四区视频| 又爽又黄a免费视频| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 黑人高潮一二区| 在线观看免费高清a一片| 男女国产视频网站| 国产乱来视频区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 中文字幕av电影在线播放| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产高清不卡午夜福利| 一区二区av电影网| 久久ye,这里只有精品| 热re99久久精品国产66热6| 免费人成在线观看视频色| 男人舔奶头视频| 午夜福利视频精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 七月丁香在线播放| 日韩免费高清中文字幕av| 美女中出高潮动态图| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 婷婷色麻豆天堂久久| 一级毛片电影观看| 欧美丝袜亚洲另类| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | av在线观看视频网站免费| 美女国产视频在线观看| 精品国产国语对白av| 国产深夜福利视频在线观看| 岛国毛片在线播放| 人人妻人人澡人人看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲精品中文字幕在线视频 | av在线观看视频网站免费| 黄色怎么调成土黄色| 啦啦啦啦在线视频资源| av有码第一页| av福利片在线| 中文字幕av电影在线播放| 久久久久久久国产电影| 夫妻性生交免费视频一级片| 成人美女网站在线观看视频| 午夜日本视频在线| 国产精品一区二区在线不卡| 青春草国产在线视频| 在线精品无人区一区二区三| 国产成人91sexporn| 老司机影院成人| 两个人免费观看高清视频 | 最后的刺客免费高清国语| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日本-黄色视频高清免费观看| 桃花免费在线播放| 简卡轻食公司| 国产探花极品一区二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 日本爱情动作片www.在线观看| 极品教师在线视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲av成人精品一二三区| 日韩亚洲欧美综合| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲真实伦在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲av不卡在线观看| 国产av码专区亚洲av| 午夜激情久久久久久久| 高清不卡的av网站| 中文在线观看免费www的网站| 高清黄色对白视频在线免费看 | 男人添女人高潮全过程视频| 久久久亚洲精品成人影院| 高清av免费在线| 春色校园在线视频观看| 高清毛片免费看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品免费大片| 性色av一级| 久久久久国产网址| 色吧在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 插逼视频在线观看| 最近手机中文字幕大全| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 大片免费播放器 马上看| 在线精品无人区一区二区三| 天美传媒精品一区二区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 中国国产av一级| 久久久精品免费免费高清| 午夜激情久久久久久久| 国产免费又黄又爽又色| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 91成人精品电影| 2022亚洲国产成人精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩人妻高清精品专区| 国产成人aa在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 日韩欧美精品免费久久| 国产一区二区三区综合在线观看 | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 三级国产精品片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 高清av免费在线| 99热这里只有是精品在线观看| 国产精品.久久久| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美3d第一页| 波野结衣二区三区在线| 2018国产大陆天天弄谢| 免费在线观看成人毛片| 免费av不卡在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 如何舔出高潮| 人妻夜夜爽99麻豆av| 青春草亚洲视频在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩av不卡免费在线播放| 精品少妇内射三级| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品福利在线免费观看| 99久久综合免费| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久午夜欧美精品| 一本大道久久a久久精品| 久久毛片免费看一区二区三区| 日本wwww免费看| 三级国产精品片| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久午夜综合久久蜜桃| 丝瓜视频免费看黄片| 成人毛片60女人毛片免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产91av在线免费观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久久精品94久久精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 成人影院久久| 国产毛片在线视频| 国产高清有码在线观看视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 高清不卡的av网站| 久久国产精品大桥未久av | 永久网站在线| 在线 av 中文字幕| 男的添女的下面高潮视频| 久久久久网色| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产69精品久久久久777片| 国产精品成人在线| 嘟嘟电影网在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 乱人伦中国视频| 我的女老师完整版在线观看| 精品一区二区三卡| 亚洲精品国产成人久久av| 欧美97在线视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产片特级美女逼逼视频| 国产成人freesex在线| 国产成人91sexporn| 97精品久久久久久久久久精品| 色94色欧美一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 黄色一级大片看看| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲电影在线观看av| 老司机亚洲免费影院| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 妹子高潮喷水视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精品一区蜜桃| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 少妇裸体淫交视频免费看高清| 伊人久久精品亚洲午夜| 好男人视频免费观看在线| 熟女电影av网| 黄色视频在线播放观看不卡| 在线观看免费日韩欧美大片 | 五月开心婷婷网| 精品国产国语对白av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩人妻高清精品专区| 婷婷色av中文字幕| 极品人妻少妇av视频| 少妇精品久久久久久久| 激情五月婷婷亚洲| kizo精华| 午夜激情久久久久久久| 亚洲国产精品国产精品| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产精品熟女久久久久浪| 三级经典国产精品| 丰满迷人的少妇在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 少妇丰满av| 亚洲不卡免费看| 日日撸夜夜添| 久热这里只有精品99| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 免费观看av网站的网址| 51国产日韩欧美| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 嘟嘟电影网在线观看| 精品国产一区二区久久| 成人综合一区亚洲| 9色porny在线观看| 亚洲久久久国产精品| 一二三四中文在线观看免费高清| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久热久热在线精品观看| 色吧在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 校园人妻丝袜中文字幕| 插逼视频在线观看| 午夜老司机福利剧场| 黄色日韩在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 午夜免费男女啪啪视频观看| 午夜久久久在线观看| 黄色欧美视频在线观看| 日本vs欧美在线观看视频 | 日本vs欧美在线观看视频 | 久久人妻熟女aⅴ| 国产黄色视频一区二区在线观看| 日本午夜av视频| 国产乱人偷精品视频| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲无线观看免费| 亚洲高清免费不卡视频| 在线看a的网站| a 毛片基地| 日本与韩国留学比较| 91精品国产九色| 国产成人免费观看mmmm| 在线观看免费视频网站a站| 青春草亚洲视频在线观看| 看免费成人av毛片| 一本大道久久a久久精品| 男女边摸边吃奶| 18禁动态无遮挡网站| 极品人妻少妇av视频| 亚洲图色成人| 亚洲av成人精品一二三区| 男人狂女人下面高潮的视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 精品视频人人做人人爽| av免费在线看不卡| 亚洲国产精品国产精品| 精品一区二区免费观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 26uuu在线亚洲综合色| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久精品国产自在天天线| 亚洲人成网站在线播| 观看av在线不卡| 欧美日韩亚洲高清精品| 美女主播在线视频| 日日啪夜夜爽| 亚洲美女视频黄频| 国产乱人偷精品视频| 久久久久久久久大av| 观看免费一级毛片| 亚洲综合色惰| 九九爱精品视频在线观看| 一区在线观看完整版| 欧美日韩亚洲高清精品| 少妇丰满av| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产色婷婷99| 日本vs欧美在线观看视频 | www.色视频.com| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜久久久在线观看| 看免费成人av毛片| 久久久久网色| 国产一区二区在线观看日韩| 男女无遮挡免费网站观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产亚洲一区二区精品| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美日韩亚洲高清精品| 一区在线观看完整版| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 久久精品国产亚洲网站| 日韩av不卡免费在线播放| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产亚洲5aaaaa淫片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 成人影院久久| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品国产三级国产专区5o| www.色视频.com| 欧美高清成人免费视频www| 一区二区三区免费毛片| 久久久午夜欧美精品| 97在线人人人人妻| 丰满迷人的少妇在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 99热这里只有是精品在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲性久久影院| 一级毛片我不卡| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 丝袜喷水一区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲精品,欧美精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美日韩在线观看h| 中文字幕制服av| 日日撸夜夜添| 免费少妇av软件| av一本久久久久| 伦精品一区二区三区| 免费观看性生交大片5| 夫妻性生交免费视频一级片| 在现免费观看毛片| 亚洲一区二区三区欧美精品| 性色av一级| 亚洲欧洲国产日韩| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产成人精品婷婷| av视频免费观看在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 国产欧美亚洲国产| 在现免费观看毛片| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 欧美日韩av久久| 亚洲精品视频女| 嘟嘟电影网在线观看| 国产成人91sexporn| 国产一区有黄有色的免费视频| 免费av中文字幕在线| 一个人看视频在线观看www免费| 91久久精品国产一区二区成人| 国产精品一区二区性色av| 免费黄色在线免费观看| 国产精品无大码| 99久久人妻综合| 在线观看三级黄色| 国产成人午夜福利电影在线观看| 免费观看性生交大片5| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产淫片久久久久久久久| 国产黄频视频在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 黑人高潮一二区| 亚洲无线观看免费| 男男h啪啪无遮挡| 国产免费福利视频在线观看| 久久精品夜色国产| 欧美精品一区二区免费开放| 中文字幕免费在线视频6| 十分钟在线观看高清视频www | 亚洲美女视频黄频| 久久av网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产一区二区在线观看av| 免费观看性生交大片5| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久国产欧美日韩av| av在线播放精品| 日韩av在线免费看完整版不卡| 乱码一卡2卡4卡精品| 成人漫画全彩无遮挡| 天天操日日干夜夜撸| 国产日韩欧美亚洲二区| av国产精品久久久久影院| 国产黄色免费在线视频| 日本欧美视频一区|