肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞系在過敏性疾病中的研究進(jìn)展①

劉慶梅 楊永仕 劉 艷 劉光明 孫勁旅 （變態(tài)過敏反應(yīng)科，疑難重癥及罕見病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京協(xié)和醫(yī)院，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，北京 100730）

全球范圍內(nèi)受過敏性疾病困擾的人群愈來愈多，世界衛(wèi)生組織將過敏性疾病列為21世紀(jì)重點(diǎn)防治的三大疾病之一，是當(dāng)前世界性的重大衛(wèi)生學(xué)問題［1-2］。我國過敏性疾病的發(fā)病率也越來越高［3-6］。過敏性疾病是指機(jī)體接觸致敏物質(zhì)而引起的過敏反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)疾病，主要包括過敏性鼻炎、過敏性哮喘、特應(yīng)性皮炎、蕁麻疹、過敏性腸炎以及食物或藥物所引發(fā)的特異性過敏反應(yīng)等［7］。過敏性疾病多數(shù)反應(yīng)迅速、癥狀反復(fù)，發(fā)生過程分為致敏階段和效應(yīng)階段。機(jī)體初次接觸過敏原后產(chǎn)生特異性IgE，過敏原的再次接觸會(huì)與IgE 結(jié)合并激活過敏反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞（肥大、嗜酸及嗜堿性粒細(xì)胞），同時(shí)釋放過敏介質(zhì)，如組胺、肥大細(xì)胞蛋白酶、白三烯等，引發(fā)機(jī)體全身性過敏癥狀及炎癥反應(yīng)［8］。

肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞是Ⅰ型超敏反應(yīng)的重要效應(yīng)細(xì)胞，是食物過敏、哮喘、特應(yīng)性皮炎、克羅恩病、炎癥性腸病和潰瘍性結(jié)腸炎等疾病的關(guān)鍵因素［9-11］。越來越多的研究利用肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞系作為診斷分析過敏反應(yīng)的工具，以評估過敏原組分的致敏性、過敏原檢測及活性功能因子對過敏反應(yīng)的防控效果［12］。在過敏反應(yīng)中，肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞再次與特異性過敏原蛋白接觸時(shí)，IgE 會(huì)與之交聯(lián)，誘發(fā)細(xì)胞的激活并脫顆粒，過敏反應(yīng)的嚴(yán)重程度取決于這兩種效應(yīng)細(xì)胞的脫顆粒和介質(zhì)釋放程度。因此，良好的細(xì)胞評價(jià)模型對于過敏反應(yīng)的發(fā)病機(jī)制及防控藥物研究極其重要。本文歸納肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的細(xì)胞系基本特征，闡明多種細(xì)胞系之間的異同點(diǎn)和應(yīng)用范圍，以期為過敏性疾病的機(jī)制和防控研究提供新的思路。

1 人源效應(yīng)細(xì)胞系

目前獲得的無限增殖的人肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞系較少?，F(xiàn)有報(bào)道主要包括人肥大細(xì)胞-1（HMC-1）、LAD-1、LAD-2、LUVA、ROSA 和KU812 嗜堿性粒細(xì)胞等細(xì)胞系，由于這幾種細(xì)胞系的表型特征不同，適用的研究方向也有所不同。

1.1 人肥大細(xì)胞 HMC-1 細(xì)胞系最初來自于1 例肥大細(xì)胞白血病患者的外周血，其表型是典型的未成熟肥大細(xì)胞，但也表現(xiàn)出一些肥大細(xì)胞的特征，比如其表面表達(dá)CD2、CD18、CD40 和CD54 等，胞內(nèi)含有內(nèi)源性顆粒包含組胺、β-類胰蛋白酶、肝磷脂等，然而，HMC-1 細(xì)胞系缺乏功能性的IgE 高親和力受體FcεRⅠ、α-類胰蛋白酶和糜蛋白酶類。Kit 受體（CD117）是肥大細(xì)胞表面另一個(gè)關(guān)鍵標(biāo)志，是由原癌基因c-kit編碼的酪氨酸激酶受體，Kit信號通路的激活在肥大細(xì)胞分化、增殖和生存過程發(fā)揮至關(guān)重要的作用［13-14］。HMC-1 細(xì)胞表達(dá)具有構(gòu)型活性的Kit 亞型，是由于受體細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的點(diǎn)突變引起的。據(jù)CD117 突變方面的不同可將HMC-1 分為HMC-1.1 和HMC-1.2，HMC-1.1 在鄰近膜區(qū)域和催化域同時(shí)具有V560G 和V816A 點(diǎn)突變，而HMC-1.2僅有V560G 點(diǎn)突變［15］。V816A 突變常常存在于成人散發(fā)性肥大細(xì)胞增多癥和骨髓增生性疾病患者中，是代表HMC-1.1 的一個(gè)關(guān)鍵特征，HMC-1.1 和HMC-1.2 顯示出不同的增殖速率和其他生長特征［16］。因此，HMC-1細(xì)胞系能夠用于更好地了解Kit對肥大細(xì)胞調(diào)節(jié)、增殖和存活的作用，還可用于Kit受體抑制劑的篩選和機(jī)理探究，且由于其Kit 突變位點(diǎn)的存在，HMC-1 細(xì)胞系培養(yǎng)無須添加干細(xì)胞因子（stem cell factor，SCF）刺激，大大降低了實(shí)驗(yàn)成本。HMC-1 細(xì)胞系表面不表達(dá)IgE 高親和力受體FcεRⅠ和低親和力的FcεRⅡ，F(xiàn)cεRⅠ β 鏈mRNA以低水平表達(dá)，而γ 鏈的基因高表達(dá)于HMC-1 細(xì)胞系［17］。與所有缺乏功能FcεRⅠ的細(xì)胞一致，HMC-1不能由IgE 介導(dǎo)產(chǎn)生脫顆?，F(xiàn)象，這是該細(xì)胞系在過敏相關(guān)研究中的一個(gè)關(guān)鍵限制因素。然而，由鈣離子激活劑A23187、Compound 48/80 等進(jìn)行非免疫刺激后，HMC-1 已被用于脫顆粒和抗炎癥研究［18］。趙洪偉等［19］報(bào)道芝麻素能通過PKCα/NFκB 信號通路抑制HMC-1 細(xì)胞的活化；LU 等［20］利用HMC-1 細(xì)胞系解析了hsa-miR-20a-5p 緩解過敏性炎癥的作用機(jī)理；WANG 等［21］報(bào)道稱芍藥苷能夠通過抑制NFκB 和MAPK 信號通路發(fā)揮治療過敏性鼻炎的生物活性；同樣的作用機(jī)制還表現(xiàn)在香葉醇抑制HMC-1的炎癥反應(yīng)中［22］。由于HMC-1 細(xì)胞系相對容易培養(yǎng)，并且不需SCF 即可增殖，XIA 等［23］通過轉(zhuǎn)染人FcεRⅠα 基因進(jìn)入HMC-1 細(xì)胞中，獲得穩(wěn)定表達(dá)人FcεRⅠα 的HMC-1 亞型（HMC-α），實(shí)驗(yàn)證明該細(xì)胞系能夠與IgE 交聯(lián)結(jié)合，并在抗原刺激后釋放細(xì)胞因子IL-6、IL-8 等，但卻不能在免疫激活后脫顆粒，原因可能在于FcεRⅠ的特殊形式（αγ2 與αβγ2）之間的比率產(chǎn)生影響?？傊?，HMC-α 細(xì)胞系朝著更具代表性的人肥大細(xì)胞模型邁進(jìn)了一步。

1.2 LAD肥大細(xì)胞 2003年，KIRSHENBAUM等［24］報(bào)道了兩種新型的人肥大細(xì)胞系，即LAD-1和LAD-2，這兩株細(xì)胞系源于1 例肥大細(xì)胞肉瘤患者的骨髓，目前僅有LAD-2 細(xì)胞系是可用的。與HMC-1 細(xì)胞系不同，LAD-2 細(xì)胞不表達(dá)Kit 的激活突變體，其生長依賴于培養(yǎng)基中的SCF，與CD34+干細(xì)胞衍生的人類肥大細(xì)胞的原代培養(yǎng)極為相似。LAD-2細(xì)胞系表達(dá)成熟肥大細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征，如CD14、CD45、CD64、CD103、CD117、CD132、CXCR4、CCR5 以及胞質(zhì)內(nèi)組胺、胰蛋白酶和裂解酶，也表達(dá)功能性FcεRⅠ和FcγRⅠ受體，能夠在IgE 介導(dǎo)的受體交聯(lián)后脫顆粒［25］。

LAD-2能夠作為研究IgE-FcεRⅠ交聯(lián)及其下游信號通路以及抗過敏新藥物的模型工具。MI 等［26］利用LAD-2 細(xì)胞系結(jié)合非標(biāo)蛋白質(zhì)組學(xué)解析了吐溫-80 誘發(fā)過敏反應(yīng)的作用機(jī)制；通過LAD-2 細(xì)胞系，LIU 等［27］證實(shí)了麻醉藥物鹽酸哌替啶和枸櫞芬太尼誘發(fā)的藥物過敏與肥大細(xì)胞MRGPRX2之間的相互關(guān)系；也有學(xué)者利用LAD-2 細(xì)胞組胺釋放指數(shù)評估藥物的過敏反應(yīng)［28］；WANG 等［29］發(fā)現(xiàn)n-3 多不飽和脂肪酸能夠調(diào)控LAD-2 細(xì)胞FcεRⅠ的脂質(zhì)閥穿梭及其下游信號通路。LAD-2細(xì)胞系在抗過敏活性物質(zhì)的篩選和機(jī)理探究方面也多有報(bào)道，LV等［30］建立了LAD-2 細(xì)胞膜色譜與UHPLC-ESI-MS/MS 的耦合系統(tǒng)，以LAD-2 細(xì)胞組胺釋放量為指標(biāo)成功篩選出黃芪中的抗過敏活性有效組分-芒柄花黃素；利用DNP-BSA 建立IgE 介導(dǎo)的LAD-2 細(xì)胞模型，DING等［31］解析了槲皮苷的抗過敏作用機(jī)制，主要在于抑制IgE 誘導(dǎo)的Lyn/PLCγ/IP3R-Ca2+、Lyn/ERK1/2、Lyn/NF-κB信號通路；此外，該團(tuán)隊(duì)同時(shí)證實(shí)了山柰酚對于IgE 介導(dǎo)LAD-2 細(xì)胞激活的作用機(jī)制［32］；在特應(yīng)性皮炎的免疫性治療研究中，有報(bào)道稱人臍帶血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞能夠抑制激活的LAD-2 細(xì)胞釋放TNF-α［33］。由此可知，LAD-2 細(xì)胞是過敏性疾病研究中的強(qiáng)大工具，但由于其培養(yǎng)成本高、增殖緩慢，也在一定程度上限制了其適用性。

1.3 LUVA肥大細(xì)胞 LUVA細(xì)胞系建立于2011年，從患有阿司匹林加重性呼吸道疾病的供體中提取的CD34+單個(gè)核細(xì)胞，利用SCF、IL-6 和IL-3 培養(yǎng)8 周獲得的肥大細(xì)胞系，其能夠在沒有添加任何生長因子的情況下存活和增殖約2 年［34］。LAIDLAW等［34］發(fā)現(xiàn)LUVA 細(xì)胞系含有對類胰蛋白酶、組織蛋白酶及羧肽酶有免疫反應(yīng)性的胞內(nèi)顆粒，細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)編碼FcεRⅠ、c-Kit、白三烯Ⅰ型受體等蛋白的轉(zhuǎn)錄基因，用流式細(xì)胞術(shù)也驗(yàn)證了LUVA 細(xì)胞表面FcεRⅠ、c-Kit、FcγRⅡ的均勻表達(dá)，并且能夠由IgE交聯(lián)誘導(dǎo)β-氨基己糖苷酶、前列腺素D2、炎癥蛋白1β等過敏炎癥介質(zhì)的釋放。LUVA細(xì)胞是能夠無限增殖的人肥大細(xì)胞系，高表達(dá)FcεRⅠ、c-Kit，且不需要SCF 刺激增殖，對于過敏性疾病和肥大細(xì)胞功能學(xué)研究意義重大。

由于LUVA 細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)較晚，其相關(guān)研究還較少。FOSTER 等［35］對比了LAD-2 和LUVA 兩株人肥大細(xì)胞的白三烯E4 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)情況，發(fā)現(xiàn)CysLT1 是LAD-2 細(xì)胞中誘發(fā)白三烯E4 有效應(yīng)答的受體，但并非LUVA 細(xì)胞的，將LUVA 細(xì)胞過表達(dá)CysLT1 后能夠增強(qiáng)白三烯E4 誘導(dǎo)的胞內(nèi)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；利用LUVA 細(xì)胞和人肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)。REEVES 等［36］證實(shí)引起呼吸道哮喘或感染的RSV 病毒是通過透明質(zhì)酸與細(xì)胞外基質(zhì)的直接相互作用，從而增強(qiáng)肥大細(xì)胞結(jié)合并促進(jìn)肥大細(xì)胞蛋白酶的表達(dá)；LUVA細(xì)胞可用于模擬結(jié)締組織表型肥大細(xì)胞或黏膜表型肥大細(xì)胞，有學(xué)者利用LUVA 細(xì)胞更好地闡明了肥大細(xì)胞亞型的調(diào)節(jié)因子及其不同的效應(yīng)功能［37］；通過LUVA 細(xì)胞激活模擬過敏性哮喘反應(yīng)，SZYMCZAK-PAJOR 等［38］發(fā)現(xiàn)維生素D 能夠調(diào)節(jié)LUVA 胞內(nèi)多種磷酸酯的表達(dá)，為維生素D 用于哮喘治療的發(fā)展提供了理論依據(jù)。

1.4 ROSA肥大細(xì)胞 上述3種肥大細(xì)胞系為肥大細(xì)胞及相關(guān)過敏性疾病的研究提供了有利的工具，然而，這些均未單獨(dú)表達(dá)D816V 突變的Kit 受體或同時(shí)表達(dá)功能性FcεRⅠ和D816V 突變的Kit 受體。在肥大細(xì)胞增多癥影響的患者中，D816V 突變會(huì)導(dǎo)致肥大細(xì)胞異常增殖和介質(zhì)異常釋放，因此表達(dá)功能性FcεRⅠ和D816V突變的Kit受體細(xì)胞系是研究此類疾病的有效工具。2014年，SALEH 等［39］建立了正常表達(dá)KIT 受體（KIT WT）的SCF 依賴型肥大細(xì)胞系（ROSAKITWT）和表達(dá)FcεRI 并包含D816V KIT 的SCF 依賴型亞克?。≧OSAKITD816V）。ROSAKITWT細(xì)胞來源于正常人臍帶血CD34+細(xì)胞，表達(dá)功能齊全的IgE受體和正常的Kit 受體，能夠經(jīng)IgE 介導(dǎo)后脫顆粒，同時(shí)釋放組胺、TNF-α 和前列腺素D2 等介質(zhì)，用A23187 誘導(dǎo)也可釋放高達(dá)80%的β-氨基己糖苷酶［39-40］。ROSAKITWT細(xì)胞能夠在SCF 存在下無限期生存，成長周期快，非常有利于過敏性疾病的基礎(chǔ)研究和抗過敏藥物篩選及機(jī)理探究，但至今未見ROSAKITWT細(xì)胞用于過敏性疾病研究的報(bào)道。

1.5 KU812嗜堿性粒細(xì)胞 KU812細(xì)胞是來自1例慢性髓細(xì)胞白血病患者的嗜堿性粒細(xì)胞，具有嗜堿性粒細(xì)胞前體的表型特征，胞內(nèi)含有少量組胺和胰蛋白酶的堿性顆粒。KU812細(xì)胞低表達(dá)FcεRⅠ，不表達(dá)FcεRⅡ。MAGNUSSON［41］及其團(tuán)隊(duì)探究了IgE與KU812 結(jié)合的特異性，發(fā)現(xiàn)盡管KU812 細(xì)胞表面的FcεRⅠ豐度不高，但I(xiàn)gE 與其結(jié)合具有高度特異性，該細(xì)胞為研究IgE/FcεRⅠ相互作用提供了獨(dú)特的模型。

KU812 是唯一的人嗜堿性粒細(xì)胞系，作為研究抗原依賴性的嗜堿性細(xì)胞脫顆粒的模型，廣泛應(yīng)用于過敏性疾病的基礎(chǔ)研究中。ZHONG 等［42］利用KU812 細(xì)胞探究過敏原對嗜堿性粒細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)Toll 樣受體9 表達(dá)可能與包括過敏性鼻炎在內(nèi)的Th2 型過敏性炎癥有關(guān)。ZHANG 等［43］利用KU812細(xì)胞表面CD63 和CD203c 表達(dá)情況，評估不同分子大小的糖對白蝦原肌球蛋白糖基化作用后的致敏性差異，發(fā)現(xiàn)去糖基化后的原肌球蛋白會(huì)表現(xiàn)出更強(qiáng)的KU812 激活現(xiàn)象［44］，為白蝦引起的食物過敏脫敏防控提供新的見解；利用KU812 細(xì)胞的IgE 結(jié)合能力和炎癥介質(zhì)分泌來判定過敏原的致敏性，有研究發(fā)現(xiàn)超聲輔助輻射能夠降低β-乳球蛋白的致敏性，同時(shí)以此模型作為熱加工對花生過敏原致敏性影響的評估體系［45-46］。

此外，有不少學(xué)者利用KU812 細(xì)胞模型檢測天然來源活性物質(zhì)的抗過敏活性及機(jī)理。異槲皮苷能夠抑制KU812 細(xì)胞MAPK 和NF-κB 通路，從而降低組胺和促炎因子的產(chǎn)生［47］；利用A23187 和PMA刺激KU812 細(xì)胞，MOTOJIMA 等［48］驗(yàn)證了阿克替甙抑制Ⅰ型過敏反應(yīng)的機(jī)理在于下調(diào)嗜堿性粒細(xì)胞的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶/活化T 細(xì)胞核因子（phosphatase calcineurin/nuclear factor of an activated T cell，NFAT）和JNK MAPK 信號通路；IgE 交聯(lián)結(jié)合FcεRⅠ誘導(dǎo)了KU812細(xì)胞mTOR 和p70S6K的磷酸化，紅參提取物被證明是一種潛在的針對p70S6K 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的過敏性皮膚炎癥治療物質(zhì)［49］；LIU 等［50］也報(bào)道龍須菜硫酸多糖能夠抑制KU812 細(xì)胞p38 MAPK 信號分子的磷酸化，發(fā)揮抗過敏作用。

2 嚙齒類動(dòng)物細(xì)胞系

由于缺乏完全成熟、易于培養(yǎng)的人肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞的細(xì)胞株，嚙齒動(dòng)物來源的細(xì)胞系幾乎涵蓋了整個(gè)過敏性疾病的肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞的相關(guān)研究。但不同物種的肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞在生理特性上存在著重要差異，也會(huì)表現(xiàn)出癥狀上的明顯不同。現(xiàn)將目前應(yīng)用于過敏性疾病研究的幾種常用嚙齒類動(dòng)物細(xì)胞系的主要特征介紹如下。

2.1 RBL-2H3 RBL 細(xì)胞系來自白血病大鼠的嗜堿性粒細(xì)胞，包括RBL-1 和RBL-2H3 細(xì)胞系，1974年KULCZYCKI 等［51］獲得的能夠釋放組胺的RBL-2H3細(xì)胞系使用最廣泛。RBL-2H3細(xì)胞同時(shí)具有黏膜肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的特征，其表面穩(wěn)定表達(dá)FcεRI，分別由1 個(gè)α、1 個(gè)β 和2 個(gè)γ 亞基（αβγ2）組成四聚體結(jié)構(gòu)，并以高親和力結(jié)合IgE，對免疫或非免疫刺激均產(chǎn)生脫顆粒反應(yīng)，其方式與原代肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的脫顆粒動(dòng)力學(xué)非常相似［52］。RBL-2H3 細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于過敏性疾病的基礎(chǔ)研究。AYO 等［53］利用該細(xì)胞系，明確了Munc13-4基因是RBL-2H3 激活和釋放TNF-γ 的關(guān)鍵；利用Mrgprb3（大鼠中與人Mrgprx2同源的基因）敲除RBL-2H3 細(xì)胞系，WANG 等［54］報(bào)道稱黃芩苷能夠通過Mrgprx2 誘導(dǎo)假性過敏反應(yīng)；一種基于VAMP-8-EGFP 的RBL-2H3 細(xì)胞模型也被用于多種不同過敏原的快速檢測中［55］。在過敏性疾病的防控藥物研究中，RBL-2H3 細(xì)胞系有舉足輕重的影響。余潔等［56］報(bào)道木犀草能夠抑制RBL-2H3 肥大細(xì)胞脫顆粒，且通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度與AKT 活性參與其中；MATSUDA 等［57］系統(tǒng)綜述了能夠抑制RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒的藥用植物如類黃酮、芪類、姜黃素等，并闡明它們抗過敏活性的結(jié)構(gòu)要求以及作用機(jī)制；本課題組也利用IgE 介導(dǎo)的RBL-2H3 細(xì)胞模型，篩選得到多種有效抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的海洋來源活性物質(zhì)，并初步解析作用機(jī)理，以期應(yīng)用于抗過敏特殊食品或藥品的研發(fā)［58-63］。

2.2 人源化RBL 嚙齒動(dòng)物的FcεR不能識(shí)別人類的免疫球蛋白，無法用于人類過敏性疾病的研究中。將人FcεRⅠ的αβγ 基因轉(zhuǎn)染至RBL-2H3 細(xì)胞后，該細(xì)胞顯示了交聯(lián)人IgE 并刺激脫顆粒的能力。其中，RBL-SX38 細(xì)胞表達(dá)所有3 個(gè)αβγ 亞基，可直接用于患者血清致敏后過敏原刺激效應(yīng)細(xì)胞的激活［64］；MILLS等［65］利用RBL-SX38細(xì)胞系驗(yàn)證了維生素E 對塵螨過敏患者嗜堿性粒細(xì)胞應(yīng)答的抑制作用；在食物過敏研究領(lǐng)域，也有學(xué)者利用該細(xì)胞系探究了小麥過敏原熱加工前后的致敏性變化［66］；STARKL 等［67］將RBL-SX38 細(xì)胞系用于驗(yàn)證花生過敏原Ara h2還原或烷基化后刺激效應(yīng)細(xì)胞激活能力的變化。人源化RBL 細(xì)胞系除了RBL-SX38 之外，還有RBL-hEIα-2B12和RBL-30/25細(xì)胞系，這兩種細(xì)胞系只表達(dá)人FcεR 的α 亞基，盡管不表達(dá)人源β 和γ 亞基，其胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)包括磷酸肌醇水解、鈣離子內(nèi)流、酪氨酸磷酸、組胺/花生四烯酸代謝等也是完整的。人的FcεRⅠα 可與大鼠本身β 和γ 亞基締合，使得人IgE 敏化后的RBL-hEIα-2B12 細(xì)胞系能夠被抗人IgE 所激活，說明該細(xì)胞系有望應(yīng)用于檢測人血清中FcεRⅠα 可結(jié)合的IgE［68］；REESE 等［69］利用RBL-30/25 細(xì)胞系探究對蝦主要過敏原-原肌球蛋白的突變體VR9-1 的免疫應(yīng)答，發(fā)現(xiàn)VR9-1 激活效應(yīng)細(xì)胞的能力下降了90%～98%。

FcεRⅠ亞基的差異表達(dá)使不同RBL 嵌合體細(xì)胞對IgE 的結(jié)合能力也有所不同，有報(bào)道稱RBLSX38 的結(jié)合能力最強(qiáng)，其次是RBL-30/25 和RBLhEIα-2B12。經(jīng)IgE 介導(dǎo)激活后，三種細(xì)胞系的脫顆粒效率分別為94%、84%和54%。利用1 例花生過敏患者血清來源的純化IgE 敏化三種細(xì)胞系，經(jīng)過花生提取物的刺激后，發(fā)現(xiàn)三種細(xì)胞系均能夠發(fā)生脫顆粒，脫顆粒效率分別是65%、18%和40%～45%，而其他3 例花生過敏患者的血清敏化后不能誘導(dǎo)RBL-hEIα-2B12 的脫顆粒，另有1 例患者的血清敏化后，能刺激RBL-SX38和RBL-30/25的60%和30%脫顆粒效率［12］。此外，國內(nèi)也有建立穩(wěn)定表達(dá)人FcεRⅠ-αβγ 的RBL 細(xì)胞株，但具體應(yīng)用仍有待深入［70］。由此可知，人源化的RBL 嵌合體細(xì)胞系生長速度、培養(yǎng)成本等方面與RBL-2H3 有相同的優(yōu)勢，然而這類細(xì)胞系在安全性評估、免疫反應(yīng)性預(yù)測和可重復(fù)性方面的實(shí)用性還需進(jìn)一步探究。

2.3 NCL-2 2014 年，HIRAGUN 等［71］建立了Kit 受體未突變的源自NC 小鼠骨髓的肥大細(xì)胞系，NCL-2細(xì)胞表達(dá)FcεRⅠ和Kit，被抗原刺激后能釋放組胺和白三烯。NCL-2 是不貼壁的非腫瘤細(xì)胞系，培養(yǎng)過程中無須添加IL-3 和SCF［72］。因此，有研究認(rèn)為NCL-2 細(xì)胞系可能是分析正常肥大細(xì)胞增殖、分化和功能的有用工具［71-72］，然而至今尚未被廣泛用于實(shí)驗(yàn)研究中。

3 總結(jié)

肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞是過敏、炎癥和先天免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞，然而其研究往往由于缺乏現(xiàn)成的模型系統(tǒng)而受到阻礙，現(xiàn)有的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞系數(shù)量有限，而且這些細(xì)胞系的培養(yǎng)條件、增殖周期、受體表達(dá)及刺激激活能力不盡相同，也不能完全代表典型肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞特征。此外，無限增殖的細(xì)胞系容易出現(xiàn)變異或其他異常特征，有可能無法反映機(jī)體原代初級細(xì)胞的生理學(xué)現(xiàn)象。本篇綜述對現(xiàn)有的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞系的來源、FcεRⅠ表達(dá)、Kit 受體情況進(jìn)行了歸納總結(jié)（表1），并系統(tǒng)概述了這些細(xì)胞系在過敏性疾病實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用?，F(xiàn)有應(yīng)用較多的是RBL-2H3 和HMC-1 細(xì)胞，針對IgE 介導(dǎo)過敏反應(yīng)的優(yōu)勢明顯的是LAD-2 和LUVA，但也都有各自的不足和缺陷，而近些年新發(fā)現(xiàn)的ROSA 以及人源化的RBL-SX38 對于過敏性疾病的檢測、診斷和防控研究來說更為適宜。隨著對效應(yīng)細(xì)胞系特征和功能的深入了解，可知過敏性疾病的相關(guān)研究需要開發(fā)一種新的細(xì)胞系，該細(xì)胞系能夠由IgE 介導(dǎo)激活并表達(dá)FcεRⅠ的αβγ 亞基，且具備培養(yǎng)成本較低、增殖周期短的特點(diǎn)。此外，原代培養(yǎng)的效應(yīng)細(xì)胞系（比如原代人外周血來源的肥大細(xì)胞和小鼠骨髓來源肥大細(xì)胞）也可用于過敏性疾病的研究。

表1 過敏性疾病主要效應(yīng)細(xì)胞系一覽表Tab.1 List of main effector cell lines for allergic diseases