蒺藜生藥粉長期毒性實(shí)驗(yàn)研究*

尤力都孜·買買提，阿不都吉力力·阿布都艾尼，艾西木江·熱甫卡提，竇 勤，李治建

（1. 新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆 烏魯木齊 830011； 2. 新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830011； 3. 新疆維吾爾自治區(qū)第二人民醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830049）

蒺藜為蒺藜科植物蒺藜Tribulus terrestrisL. 的干燥成熟果實(shí)，維吾爾藥名為“歐葛日提坎”，是我國中醫(yī)學(xué)（包括維吾爾醫(yī)學(xué)等）和民間醫(yī)學(xué)常用藥材。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，其味辛、苦，性微溫，有小毒，歸肝經(jīng)，有平肝解郁、活血祛風(fēng)功效，可用于明目、止癢，治頭痛眩暈、胸脅脹痛、乳閉乳癰、目赤翳障、風(fēng)疹瘙癢等證［1］。維吾爾醫(yī)認(rèn)為，本品性干熱，具有排石、利尿、止咳、抗白癜風(fēng)、壯陽等功效［2］。蒺藜含有皂苷類、黃酮類等化合物［3］，現(xiàn)代臨床應(yīng)用和毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其有肝毒性［4-7］。原國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品評價中心早在2005 年第9 期藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)中便發(fā)布了含蒺藜復(fù)方（白蝕丸）的（肝損害）藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)，提示臨床應(yīng)用含蒺藜制劑需重點(diǎn)監(jiān)測肝腎功能相關(guān)指標(biāo)，但尚無蒺藜安全性評價的文獻(xiàn)報(bào)道。為此，本研究中依據(jù)《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》［8］、《藥物重復(fù)給藥毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［9］等指導(dǎo)原則，利用大鼠進(jìn)行蒺藜生藥粉長期毒性實(shí)驗(yàn)，對蒺藜的安全性作出初步評價，為其進(jìn)一步開展實(shí)驗(yàn)研究提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：TC3K - H 型電子天平（常熟雙杰測試儀器廠，精度為0.01 g）；TGL - 5 - A 型低速大容量離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；XT - 2000iv 型全自動血液分析儀（日本Sysmex株式會社）；Thrombolyzer Compact X型全自動血凝分析儀（德國Behnk Elektronik GmbH）；7100 型全自動生化分析儀（日本Hitachi 公司）；IMS -972 型電解質(zhì)儀（深圳市希萊恒醫(yī)用電子有限公司）；TP1020型脫水機(jī)、RM2245型切片機(jī)、DM4000型顯微鏡（德國Leica 公司）；KD - BMII 型生物組織自動包埋機(jī)（浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司）；KZPG - 1 型攤片烤片機(jī)（天津天利航空機(jī)電有限公司）；E7 型全自動染色封片機(jī)（寧波察微生物科技有限公司）。

試藥：蒺藜生藥粉（黃綠色粉末，南通飛宇生物科技有限公司，批號為FY200619）；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST，批號為140220011），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT，批號為140120011），堿性磷酸酶（ALP，批號為140320010），尿素（UREA，批號為141320012），肌酐（CREA，批號為141120020），總蛋白（TP，批號為140820007），白蛋白（Alb，批號為148320002），總膽紅素（TBiL，批號為140620009），γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT，批號為140420006），葡萄糖（GLU，批號為141520012），總膽固醇（TC，批號為141620011），三酰甘油（TG，批號為141720010），磷酸肌酸激酶（CK，批號為142520012）的檢測試劑盒，均購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；電解質(zhì)分析儀A 標(biāo)準(zhǔn)液（批號為20191105）、B標(biāo)準(zhǔn)液（批號為20191016），均購自深圳市希萊恒醫(yī)用電子有限公司；FBA 溶血劑（批號為R0507）、丙酮酸激酶（PK）稀釋液（批號為G9283），均購自西森美康醫(yī)用電子（上海）有限公司。

動物：SPF級SD大鼠120只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，購于新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號SCXK（新）2018-0002。在溫度20～26 ℃，相對濕度40%～70%，明暗交替（12 h/ 12 h）環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。實(shí)驗(yàn)獲新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所倫理委員會批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)編號：nGLP-2020017），實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)施過程嚴(yán)格遵循3R原則。

1.2 方法

將120 只SD 大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為對照組（等體積飲用水）及蒺藜生藥粉低、中、高劑量組（簡稱低、中、高劑量組，2.13，4.25，8.50 g/ kg），每組30 只，雌雄各半。給藥劑量按人體推薦（生藥）劑量0.17 g/kg計(jì)，相當(dāng)于成人（按體質(zhì)量60 kg計(jì)）日用劑量的12.5，25，50倍。連續(xù)灌胃給藥30 d，每天1次，給藥劑量為15 mL/kg［9-12］。

1.3 觀察指標(biāo)

1）每日觀察大鼠的一般形態(tài)外觀、行為活動、飲食情況、分泌物、排泄物等，以及其給藥期間中毒反應(yīng)（如有）的癥狀、起始時間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時間、是否可逆，并填寫一般狀態(tài)觀察記錄表。2）每4 d 測定大鼠體質(zhì)量1 次，并調(diào)整給藥劑量，記錄體質(zhì)量平均值。3）分別于末次給藥后及末次給藥30 d 后檢測大鼠血液細(xì)胞指標(biāo)［紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、紅細(xì)胞比容（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、血紅蛋白（Hb）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）及淋巴細(xì)胞（LYMPH）、中性粒細(xì)胞（NEUT）、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)（MONO）、嗜酸性粒細(xì)胞（EO）、嗜堿性粒細(xì)胞（BASO）、網(wǎng)織紅細(xì)胞（RET）的百分比］，血液生化指標(biāo)［TP，Alb，TBiL，AST，ALT，ALP，GGT，CK，CREA，UREA，GLU，TC，TG］，血清電解質(zhì)［鉀、鈉、氯離子（K+，Na+，Cl-）］，凝血指標(biāo)［凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶時間（TT）、纖維蛋白原（Fib）］。4）以蘇木素-伊紅（HE）染色，觀察肝臟組織病理學(xué)變化，以組織病理學(xué)觀察正常計(jì)為-，改變較輕、較重、嚴(yán)重分別計(jì)為+，++，+++。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

給藥組（低、中、高劑量）大鼠給藥期間及末次給藥30 d后一般形態(tài)外觀行為活動等均未見異常，且均未見死亡及明顯毒性反應(yīng)。

2.2 體質(zhì)量

實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠體質(zhì)量均呈自然增長趨勢。且與對照組比較，低、中、高劑量組大鼠末次給藥及末次給藥30 d 后；體質(zhì)量變化均無顯著差異（P> 0.05）。結(jié)果見圖1（d為用藥天數(shù)，d'為停藥天數(shù)）。

圖1 大鼠體質(zhì)量變化情況A.Female rats B.Male ratsFig.1 Changes in body mass of rats

2.3 肝臟組織病理學(xué)

結(jié)果見表1（其中A期指末次給藥后，B期指末次給藥30 d 后；表2 至表8 同）和圖2、圖3。末次給藥后，低、中、高劑量組肝臟組織均可見灶狀炎性細(xì)胞浸潤，但低劑量組病變范圍小，病理改變較輕，且低、中劑量組均未見肝細(xì)胞脂肪變性，高劑量組可見大量肝細(xì)胞脂肪變性。末次給藥30 d 后，低、中劑量組肝臟組織病變程度明顯較給藥期減輕，未見脂肪變性；高劑量組可見少量炎性細(xì)胞浸潤及少量脂肪細(xì)胞，有可逆性。

表1 各組大鼠肝臟組織病理變化程度（n=30）Tab.1 Pathological changes of liver tissue in each group（n = 30）

表2 各組雌性大鼠血液細(xì)胞指標(biāo)比較（）Tab.2 Comparison of blood cell indicators of female rats in each group（）

注：與對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01。表3、表4同。Note：Compared with those in the control group，*P < 0.05，**P < 0.01（for Tab.2 - 4）.

指標(biāo)RBC（×1012/L）HCT（%）MCV（fL）Hb（g/L）MCH（pg）MCHC（g/L）PLT（×109/L）WBC（×109/L）LYMPH（%）NEUT（%）MONO（%）EO（%）BASO（%）RET（%）對照組A期（n=10）7.46±0.29 38.2±1.3 51.3±1.6 149±7 19.9±0.7 389±8 1 271±144 3.60±1.24 82.9±5.0 14.1±4.5 1.6±0.7 1.4±0.5 0.0±0.0 3.11±0.51 B期（n=5）7.76±0.28 39.3±0.9 50.6±1.2 145±5 18.7±0.4 370±5 1 208±70 5.19±3.04 86.9±1.8 10.1±1.6 1.9±0.8 1.1±0.3 0.0±0.0 2.48±0.62低劑量組A期（n=10）7.65±0.43 38.7±2.2 50.6±2.1 149±8 19.5±0.5 386±9 1 200±144 3.46±0.76 84.5±3.0 12.6±3.4 1.6±0.7 1.3±0.6 0.0±0.0 2.60±0.48 B期（n=5）7.50±0.32 39.2±0.8 52.3±2.4 144±4 19.2±0.8 367±3 1 164±101 3.01±1.05 87.4±2.6 10.3±3.0 1.4±0.6 0.9±0.7 0.0±0.0 2.62±0.74中劑量組A期（n=10）7.58±0.34 38.8±1.6 51.2±1.0 148±7 19.5±0.5 382±8 1 246±152 3.70±0.96 85.0±3.9 11.8±3.6 2.0±0.7 1.3±0.5 0.0±0.0 3.19±0.82 B期（n=5）7.59±0.34 38.5±1.6 50.7±1.2 142±7 18.7±0.5 369±4 1 124±93 3.20±1.62 85.3±5.5 11.9±5.0 1.3±0.3 1.5±0.5 0.0±0.0 2.86±0.54高劑量組A期（n=10）7.63±0.43 39.0±2.5 51.1±1.7 151±10 19.8±0.4 387±9 1 241±122 3.49±0.54 83.6±4.6 13.5±4.1 1.7±0.7 1.2±0.5 0.0±0.0 3.10±0.58 B期（n=5）7.51±0.54 40.1±2.7 53.4±1.4*147±11 19.6±0.4 367±6 1 196±122 3.28±0.99 80.8±6.0 16.5±5.5 1.4±0.2 1.3±0.6 0.0±0.0 3.12±0.61

表3 各組雄性大鼠血液細(xì)胞指標(biāo)比較（）Tab.3 Comparison of blood cell indicators of male rats in each group（）

表3 各組雄性大鼠血液細(xì)胞指標(biāo)比較（）Tab.3 Comparison of blood cell indicators of male rats in each group（）

指標(biāo)RBC（×1012/L）HCT（%）MCV（fL）Hb（g/L）MCH（pg）MCHC（g/L）PLT（×109/L）WBC（×109/L）LYMPH（%）NEUT（%）MONO（%）EO（%）BASO（%）RET（%）對照組A期（n=10）7.54±0.37 40.2±1.2 53.4±2.3 152±4 20.2±0.8 379 ±6 1208±108 4.80±1.62 81.1±3.4 16.5±3.1 1.6±1.0 0.9±0.4 0.0±0.0 3.94±0.76 B期（n=5）7.98±0.30 39.2±1.4 49.1±0.7 148±4 18.6±0.2 378±7 1160±123 3.46±0.49 70.1±4.7 26.7±4.7 2.3±0.3 0.9±0.2 0.0±0.0 3.77±0.85低劑量組A期（n=10）8.10±0.41**40.7±0.9 50.4±2.6*156±4*19.3±0.9**383±4*1188±125 4.78±1.03 82.3±3.6 15.3±3.1 1.7±0.6 0.7±0.3 0.0±0.0 3.27±0.55*B期（n=5）8.26±0.40 40.9±0.9 49.5±1.8 154±4 18.6±0.4 377±7 1170±77 4.15±1.59 75.8±2.7*21.3±2.9 1.7±0.6 1.2±0.2 0.0±0.0 3.49±0.19中劑量組A期（n=10）7.78±0.35 40.3±1.0 51.8±1.9 152±4 19.5±0.6*376±4 1219±122 4.70±0.97 81.4±2.8 15.7±2.7 1.9±0.6 1.1±0.3 0.0±0.0 4.14±0.54 B期（n=5）8.10±0.23 39.9±0.9 49.3±1.1 149±3 18.4±0.5 373±4 1120±37 3.88±1.28 70.8±4.0 25.9±4.3 2.1±0.7 1.2±0.4 0.0±0.0 3.36±0.29高劑量組A期（n=10）7.96±0.37*41.0±0.9 51.6±1.9 157±5*19.8±0.5 383±7 1178±82 4.86±1.06 80.1±6.1 17.2±6.0 1.6±0.6 1.1±0.5 0.0±0.0 3.97±0.64 B期（n=5）8.37±0.79 40.5±2.6 48.6±1.9 152±10 18.2±0.7 375±2 1195±126 4.09±0.36 76.4±1.8*21.0±2.3 1.4±0.4 1.1±0.5 0.0±0.0 3.10±0.75

表4 各組雌性大鼠血液生化指標(biāo)比較（）Tab.4 Comparison of blood biochemical indicators of female rats in each group（）

表4 各組雌性大鼠血液生化指標(biāo)比較（）Tab.4 Comparison of blood biochemical indicators of female rats in each group（）

指標(biāo)TP（g/L）Alb（g/L）TBiL（μmol/L）AST（U/L）ALT（U/L）ALP（U/L）GGT（U/L）CK（U/L）CREA（μmol/L）UREA（mmol/L）GLU（mmol/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）57.6±3.3 34.3±1.5 0.9±0.3 84.6±7.7 77.4±14.5 215.6±79.6 0.82±0.38 342±138 32.5±2.4 6.7±0.8 7.78±0.66 1.54±0.33 0.46±0.10 51.2±3.4 30.8±2.2 0.7±0.3 96.8±17.9 57.4±10.5 179.5±47.9 0.48±0.28 500±236 27.6±2.9 7.3±2.0 7.17±0.49 1.56±0.44 0.35±0.08 58.1±2.7 34.9±2.0 0.9±0.1 84.4±13.7 64.0±7.4 99.6±43.3**0.52±0.12 332±140 34.6±2.6 6.5±0.5 7.68±0.53 1.59±0.21 0.46±0.08 53.2±3.8 32.0±2.4 0.5±0.3 96.3±25.6 53.1±14.7 145.7±46.2 0.44±0.24 413±193 29.3±3.5 7.5±1.2 7.03±0.53 1.65±0.44 0.47±0.31 55.9±4.2 33.8±2.3 1.1±0.2 97.4±19.9 52.4±11.6 70.0±11.6***0.50±0.15 450±281 32.4±3.9 6.4±0.8 7.62±0.67 1.65±0.20 0.42±0.16 52.1±4.0 31.2±2.5 0.7±0.5 98.4±16.9 51.3±13.2 133.0±23.8*0.53±0.32 506±224 29.3±2.5 6.34±1.2 7.21±0.55 1.36±0.30 0.38±0.15 52.0±3.4 31.4±1.9 1.0±0.2 88.8±18.8 62.2±19.2 113.0±33.7**0.35±0.25**361±168 31.1±2.3 6.7±1.1 7.66±0.32 1.75±0.23 0.10±0.04 52.1±2.7 31.2±1.6 0.7±0.3 108.2±18.9 55.4±9.3 191.4±54.3 0.55±0.28 579±234 28.3±2.3 7.3±0.8 7.36±0.53 1.43±0.32 0.39±0.10 B期（n=5）對照組A期（n=10）B期（n=5）低劑量組A期（n=10）B期（n=5）中劑量組A期（n=10）B期（n=5）高劑量組A期（n=10）

表5 各組雄性大鼠血液生化指標(biāo)比較（）Tab.5 Comparison of blood biochemical indicators of male rats in each group（）

表5 各組雄性大鼠血液生化指標(biāo)比較（）Tab.5 Comparison of blood biochemical indicators of male rats in each group（）

指標(biāo)TP（g/L）Alb（g/L）TBiL（μmol/L）AST（U/L）ALT（U/L）ALP（U/L）GGT（U/L）CK（U/L）CREA（μmol/L）UREA（mmol/L）GLU（mmol/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）對照組A期（n=10）50.5±2.2 30.0±1.2 0.7±0.2 107.2±21.1 58.7±10.8 327.1±26.0 0.53±0.25 703±236 22.7±3.0 5.7±1.1 6.78±0.50 1.42±0.18 0.43±0.13 B期（n=5）50.6±0.9 30.2±0.4 1.0±0.2 124.8±22.6 64.8±9.9 211.2±32.0 0.61±0.37 733±188 31.8±4.8 6.6±0.8 6.39±0.46 1.41±0.11 0.57±0.33低劑量組A期（n=10）50.2±2.4 30.0±0.9 0.7±0.2 118.3±20.2 58.1±9.6 325.2±38.1 0.39±0.16 676±215 22.5±2.8 6.0±1.5 6.73±0.59 1.30±0.20 0.401±0.13 B期（n=5）50.4±1.8 30.0±1.0 1.2±0.1 124.4±32.4 61.6±7.5 279.2±80.2 1.61±2.63 749±200 29.9±3.9 6.6±1.0 7.03±0.39 1.45±0.18 0.52±0.11中劑量組A期（n=10）50.8±2.8 30.1±1.2 0.6±0.3 115.9±12.1 65.5±16.6 317.4±70.2 0.49±0.44 697±169 23.8±3.8 6.3±0.9 6.29±1.39 1.36±0.16 0.59±0.24 B期（n=5）50.9±1.8 30.5±1.1 1.0±0.3 138.2±22.3 69.0±11.1 224.4±37.3 0.37±0.23 843±228 29.2±3.9 6.5±1.1 6.58±0.57 1.24±0.11 0.36±0.09高劑量組A期（n=10）51.0±2.9 30.1±1.3 0.6±0.3 135.6±31.5 61.0±12.9 311.1±60.3 0.48±0.29 773±273 24.2±2.9 6.1±0.9 6.91±0.61 1.46±0.25 0.48±0.19 B期（n=5）52.4±2.4 31.0±1.1 0.8±0.3 131.0±19.0 62.4±7.6 274.3±49.1 0.27±0.15 876±298 28.3±4.5 7.5±1.9 7.64±1.09 1.57±0.33 0.54±0.37

表6 各組雌性大鼠血清電解質(zhì)指標(biāo)比較（，mmol/L）Tab.6 Comparison of serum electrolyte indicators of female rats in each group（，mmol / L）

表6 各組雌性大鼠血清電解質(zhì)指標(biāo)比較（，mmol/L）Tab.6 Comparison of serum electrolyte indicators of female rats in each group（，mmol / L）

指標(biāo)B期（n=5）3.78±0.11 143±1 106±2 B期（n=5）3.89±0.36 142±1 106±1 K+Na+Cl-對照組A期（n=10）3.85±0.21 138±2 104±2低劑量組A期（n=10）3.84±0.24 139±1 105±2 B期（n=5）3.75±0.07 142±2 107±4中劑量組A期（n=10）3.84±0.30 138±1 104±2高劑量組A期（n=10）3.85±0.15 137±1 103±1 B期（n=5）3.83±0.31 143±1 107±1

表7 各組雄性大鼠血清電解質(zhì)指標(biāo)比較（，mmol/L）Tab.7 Comparison of serum electrolyte indicators of male rats in each group（，mmol / L）

表7 各組雄性大鼠血清電解質(zhì)指標(biāo)比較（，mmol/L）Tab.7 Comparison of serum electrolyte indicators of male rats in each group（，mmol / L）

指標(biāo)B期（n=5）4.30±0.18 143±2 106±2 Na+Cl-B期（n=5）4.30±0.22 144±2 108±1對照組A期（n=10）4.04±0.28 139±1 105±2低劑量組A期（n=10）3.95±0.20 139±2 105±2 B期（n=5）4.15±0.25 143±2 106±2中劑量組A期（n=10）4.17±0.22 139±2 106±1 B期（n=5）4.19±0.16 144±1 106±2高劑量組A期（n=10）4.16±0.17 139±1 105±2 K+

表8 各組雌性大鼠凝血指標(biāo)比較（）Tab.8 Comparison of coagulation indicators of female rats in each group（）

表8 各組雌性大鼠凝血指標(biāo)比較（）Tab.8 Comparison of coagulation indicators of female rats in each group（）

指標(biāo)PT（s）APTT（s）TT（s）Fib（g/L）對照組A期（n=10）17.2±1.1 17.8±1.4 37.6±3.7 1.40±0.08 B期（n=5）16.4±0.4 16.6±1.5 34.3±3.6 1.55±0.12 B期（n=5）16.6±0.8 16.0±2.3 34.0±4.7 1.56±0.08中劑量組A期（n=10）16.9±0.7 17.8±0.8 37.0±2.5 1.46±0.14低劑量組A期（n=10）17.0±0.6 18.4±1.2 39.4±3.3 1.43±0.10高劑量組A期（n=10）17.2±0.6 18.0±1.4 37.4±4.2 1.46±0.09 B期（n=5）16.3±1.1 14.9±1.7 34.9±5.2 1.51±0.13 B期（n=5）16.0±1.3 17.4±3.2 32.9±3.9 1.60±0.16

圖2 末次給藥后大鼠肝臟組織病理形態(tài)變化（HE，×20）Fig.2 Pathomorphological changes of liver tissue after the last administration（HE，× 20）

圖3 末次給藥30 d后大鼠肝臟組織病理形態(tài)變化（HE，×20）Fig.3 Pathomorphological changes of liver tissue 30 d after the last administration（HE，× 20）

2.4 血液細(xì)胞指標(biāo)

與對照組比較，雌鼠末次給藥30 d 后高劑量組MCV 顯著升高；雄鼠末次給藥后低、高劑量組RBC，Hb水平均顯著升高，低劑量組MCHC顯著升高，MCV，RET水平顯著降低，低、中劑量組MCH顯著降低（P<0.05），且末次給藥30d后低、高劑量組LYMPH顯著升高（P<0.05）。詳見表2和表3。

2.5 血生化指標(biāo)

與對照組比較，雌鼠末次給藥后中劑量組ALP 水平顯著降低（P< 0.05）；末次給藥30 d 后，低、中、高劑量組ALP 水平均顯著降低，中劑量組GGT 水平顯著降低（P<0.05）。且雄鼠各劑量組各時間各血液生化指標(biāo)無顯著變化（P>0.05）。詳見表4、表5。

2.6 血清電解質(zhì)及凝血指標(biāo)

與對照組比較，末次給藥后及末次給藥30 d 后，低、中、高劑量組雌鼠、雄鼠各電解質(zhì)及凝血指標(biāo)均無顯著變化（P>0.05）。詳見表6至表9。

表9 各組雄性大鼠凝血指標(biāo)比較（）Tab.9 Comparison of coagulation indicators of male rats in each group（）

表9 各組雄性大鼠凝血指標(biāo)比較（）Tab.9 Comparison of coagulation indicators of male rats in each group（）

指標(biāo)PT（s）APTT（s）TT（s）Fib（g/L）對照組A期（n=10）20.8±1.6 18.6±1.2 32.5±1.5 1.61±0.11 B期（n=5）18.1±1.0 19.7±1.1 34.1±1.2 1.73±0.07低劑量組A期（n=10）20.4±2.0 19.6±1.1 34.5±3.1 1.59±0.05 B期（n=5）17.6±0.6 20.0±1.2 35.0±0.9 1.74±0.16中劑量組A期（n=10）20.6±1.6 18.8±0.8 33.9±1.6 1.60±0.08 B期（n=5）17.6±1.5 19.2±3.0 39.5±5.7 1.76±0.15高劑量組A期（n=10）20.3±1.9 19.4±1.3 35.4±4.2 1.59±0.10 B期（n=5）17.2±2.2 19.0±4.4 36.3±5.6 1.79±0.10

3 討論

隨著國家對中藥產(chǎn)業(yè)及現(xiàn)代化研發(fā)力度的加大，中藥用藥安全性也備受關(guān)注，加強(qiáng)藥物安全性研究，預(yù)測藥物對人體產(chǎn)生的不良反應(yīng)、判斷藥物毒性損傷的靶器官、推測藥物安全劑量對臨床用藥具有重要指導(dǎo)意義［13］。長期毒性實(shí)驗(yàn)是藥物安全性評價的主要內(nèi)容之一，是臨床試驗(yàn)的主要依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，末次給藥后各劑量組雌鼠各血液細(xì)胞指標(biāo)均無顯著變化；雄鼠中低劑量組血液細(xì)胞指標(biāo)RBC，HGB，MCHC，MCV，RET，MCH，中劑量組MCH，高劑量組RBC，HGB 等均有顯著變化。但上述改變均未見劑量相關(guān)性，且末次給藥30 d后，雖有個別指標(biāo)（LYMPH，MCV）顯著升高，但均在正常范圍內(nèi)，且無劑量相關(guān)性，故認(rèn)為該變化無生物學(xué)意義。血液生化指標(biāo)，與對照組比較，末次給藥后中劑量組雌鼠ALP，以及末次給藥30 d后低、中、高劑量組雌鼠ALP，中劑量組雌鼠GGT 等均有顯著變化，但這些變化亦未見量效關(guān)系，無毒理學(xué)意義。肝臟組織病理學(xué)檢查可見，低、中劑量組灶狀炎性細(xì)胞浸潤，高劑量組灶狀炎性細(xì)胞浸潤及大量肝細(xì)胞脂肪變性；末次給藥30 d后，低、中劑量組病變程度比給藥期明顯減輕，未見肝細(xì)胞脂肪變性；高劑量組可見少量炎性細(xì)胞浸潤及少量脂肪細(xì)胞，其臟器損傷基本恢復(fù)。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，長期（≥30 d）給予高劑量（≥8.5 g/kg）的蒺藜生藥粉會對大鼠肝臟組織產(chǎn)生一定的毒性作用，但停藥后肝毒性可能自行消失。提示臨床使用蒺藜生藥粉應(yīng)注意用藥時長及密切監(jiān)測肝臟組織的各項(xiàng)指標(biāo)變化。同時，對于蒺藜肝毒性的定性、定量及相關(guān)物質(zhì)基礎(chǔ)還需進(jìn)一步深入研究。