一例鴨疫里默氏桿菌的感染診斷與防控策略分析

田樹娟

（山東省臨沂市沂南縣畜牧發(fā)展促進(jìn)中心 山東臨沂 276399）

鴨疫里默氏桿菌病，又稱鴨敗血癥或鴨傳染性漿膜炎，是由鴨疫里默氏桿菌（riemerella anatipestifer，RA）引起的一種急性、慢性接觸性傳染病，屬于黃桿菌科革蘭氏陰性短桿菌，能感染鴨、鵝、火雞、雞等禽類，并產(chǎn)生全身敗血癥的重要致病菌，尤其對1～6 周齡的雛鴨致病力最強(qiáng)，近些年來也有新聞報道雞感染鴨疫里默氏桿菌的案例[1-2]。鴨疫里默氏桿菌目前已發(fā)現(xiàn)21 個血清型，其中1、2、6、10 型是在我國許多地區(qū)流行的血清型[3-5]，山東地區(qū)以1 型居多，福建地區(qū)以2 型居多。且不同時間內(nèi)地域分布有一定差異，這給該病的有效防控帶來較大壓力。

1904 年，Riemer 最先描述“鵝滲出性敗血癥”，美國學(xué)者Hendrickson 和Hilbert 于1932 年在紐約鴨場發(fā)現(xiàn)該病[2]。我國于1975年首次報道在廣州存在本病，郭玉璞等[6]在首次于1982 年在我國分離到RA。該病在我國以及世界許多國家的水禽中廣泛存在，給肉鴨、肉鵝等養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展造成嚴(yán)重危害[7]。以后在江西、江蘇、浙江、上海、安徽、四川、河南、山東等我國大部分省市地區(qū)均有該病報道新聞。迄今為止，鴨疫里默氏桿菌在全球范圍內(nèi)流行，幾乎所有養(yǎng)鴨國家和地區(qū)均有該病發(fā)生的報道。

本文結(jié)合山東臨沂地區(qū)某肉鴨養(yǎng)殖場發(fā)生一起鴨疫里默氏桿菌感染病例進(jìn)行研究，對其發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢變化、實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行分析，并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐對鴨疫里默氏桿菌的防控策略進(jìn)行了探討，以期為肉鴨產(chǎn)業(yè)健康養(yǎng)殖及做好疫病防控工作提供參考。

1 發(fā)病情況

山東省臨沂市肉鴨養(yǎng)殖戶郭xx 于2023 年3 月19 日購進(jìn)雛鴨苗2 300 只，上苗后第13 天出現(xiàn)發(fā)病情況，連續(xù)在3 日內(nèi)累計(jì)死亡雛鴨105 只，郭xx 解剖病死雛鴨后，發(fā)現(xiàn)有脾壞死癥狀，但未引起足夠重視。待25 日齡時，雛鴨死亡率進(jìn)一步增加，養(yǎng)殖戶隨即電話求助縣畜牧發(fā)展促進(jìn)中心。中心隨即安排獸醫(yī)上門檢查，指導(dǎo)投藥進(jìn)行治療。

2 臨床癥狀

通過觀察發(fā)病雛鴨，主要表現(xiàn)為精神萎靡、倦怠縮頸，站立困難、雙腳軟弱無力，不愿走動或行動跟不上，運(yùn)動失調(diào)食欲不振；眼、鼻有漿性或黏液性分泌物，鼻孔常因分泌物干涸而堵塞，部分雛鴨在瀕死狀態(tài)時展現(xiàn)出較為直觀的神經(jīng)病癥：頭頸震顫，角弓反張，尾部輕輕搖擺，最終抽搐而死。

3 剖檢病變

通過對7 只病死雛鴨解剖發(fā)現(xiàn)，主要病變?yōu)槿頋{膜呈現(xiàn)淡黃色，以心包、肝臟表面和氣囊最為明顯；纖維素氣囊炎也比較普遍，常常波及腹腔和胸腔氣囊。脾臟腫大，呈斑駁樣（見圖1）。病例變化為漿膜表面的纖維素滲出物，表現(xiàn)為心包炎、纖維素性心囊炎（見圖2）等，鼻竇內(nèi)有黏液性膿性滲出物，輸卵管可見干酪樣滲出物。部分病死雛鴨存在跗關(guān)節(jié)腫脹、腦膜炎等問題。

圖1 病死雛鴨剖檢脾臟腫大

圖2 剖檢發(fā)現(xiàn)心包炎、肝周炎、心肌出血

4 細(xì)菌分離鑒定

4.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌條件下取腦部劃線接種于TSA 平皿培養(yǎng)基（含3%新生牛血清），置于37 ℃恒溫培養(yǎng)環(huán)境、5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。觀察細(xì)菌菌落形態(tài)（見圖3）。

圖3 鴨疫里默氏桿菌分離

4.2 染色鏡檢

培養(yǎng)結(jié)束后，通過革蘭氏染色鏡檢對純培養(yǎng)物的染色特性和形態(tài)進(jìn)行分析。挑取TSA 平皿培養(yǎng)基中呈圓形隆起、邊緣整齊、表面濕潤、露珠狀半透明的單菌落制作細(xì)菌抹片，分別進(jìn)行瑞氏染色和革蘭氏染色，應(yīng)用顯微鏡100×油鏡觀察細(xì)菌形態(tài)。

4.3 鴨疫里默氏桿菌PCR 鑒定

挑取培養(yǎng)基中單菌落，在無菌條件下選擇1～2 mL 分離菌的純培養(yǎng)物，加入無菌PBS 緩沖液中，混勻，以菌液作PCR 模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。Es Taq MasterMix 聚合酶PCR 反應(yīng)體系20 μL，其中2×Es Taq MasterMix 10 μL，上下游引物各1 μL，細(xì)菌模板2 μL，加滅菌超純水6 μL。

擴(kuò)增反應(yīng)程序設(shè)置：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，51 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，在進(jìn)行30 次循環(huán)后開展72 ℃延伸5 min。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠對擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，均擴(kuò)增出502 bp 的片段與目的條帶大小一致[8]（見圖4），由此說明鴨疫里默氏桿菌檢測結(jié)果為陽性。

圖4 RA PCR 產(chǎn)物電泳

5 確診

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化及實(shí)驗(yàn)室診斷，可初步確定養(yǎng)殖戶郭xx 所養(yǎng)的肉鴨感染了鴨疫里默氏桿菌。但此處要注意的是，該病應(yīng)與大腸桿菌病、沙門氏菌病、巴氏桿菌病、糞鏈球菌病、鴨支原體病、鴨考諾尼亞菌病等引起的敗血癥疾病相鑒別。

6 治療與討論

1）本病的治療首選根據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)進(jìn)行藥物治療。實(shí)驗(yàn)人員采用藥敏實(shí)驗(yàn)方法，對16 種藥物進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)頭孢喹肟、阿莫西林、新霉素、卡那霉素敏感性較高。由此，選擇使用阿莫西林+克拉維酸鉀，治療4 日后雛鴨死亡明顯下降，群體精神狀態(tài)良好，采食逐漸恢復(fù)。

2）目前鴨疫里默氏桿菌是對肉鴨養(yǎng)殖危害最嚴(yán)重的傳染病之一。該病主要通過黏膜傷口、消化道、呼吸道途徑感染發(fā)病，污染種蛋亦可帶菌。北京鴨、櫻桃谷鴨、番鴨易感，死亡率高。商品肉鴨25～30 d 發(fā)病高峰。肉種鴨雛鴨易感，育成期反復(fù)發(fā)作，種鴨目前在30～60 周都有檢出漿膜炎的病例，主要引起產(chǎn)蛋量顯著下降，嚴(yán)重的可引起發(fā)病死亡。此外，慢性局灶感染常見于皮膚，少見于關(guān)節(jié)。皮膚病變表現(xiàn)為壞死性皮炎，見于腹部或肛門周圍。

3）目前全球已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的鴨疫里默氏桿菌血清型有21 個，從區(qū)域分布上可知，有研究者調(diào)查區(qū)域涉及全國29 個省份，其中四川、重慶、廣西均有15 種血清型，廣東、福建、北京均有14 種血清型，為血清型相對較多的省份；新疆、黑龍江、吉林、甘肅、云南五省均存在6 種血清型為血清型相對較少的省份，這可能與我國南方地區(qū)水禽養(yǎng)殖密度較大，國內(nèi)市場有效疫苗供給不足，防控力度不夠有關(guān)。而在整個調(diào)查區(qū)域中1、2、3、4 型均存在，表明1、2、3、4 型鴨疫里默氏桿菌目前為全國性流行。近兩年由于限抗，飼料中預(yù)防性藥物添加劑不再添加，青年鴨、產(chǎn)蛋鴨漿膜炎病例開始增多。此外，從養(yǎng)殖環(huán)境看，養(yǎng)殖密度大，通風(fēng)不良，墊料更換不及時，飼料營養(yǎng)不全，氣候變化大等都是本病發(fā)生的重要誘因。

7 防控策略分析

7.1 重視預(yù)防工作，貫徹防重于治理念

防控鴨疫里默氏桿菌病最有效的預(yù)防措施是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、搞好環(huán)境衛(wèi)生、減少各種應(yīng)激因素。經(jīng)常消毒鴨舍，在完全封閉的衛(wèi)生設(shè)施中，使用消毒劑包括甲醛熏蒸，有助于防止感染[9]。

7.2 抗生素和磺胺藥可用于該病預(yù)防

預(yù)防可在飼料或飲水中添加02%～0.25%的磺胺二甲基嘧啶，或在飼料中添加0.025%～0.05%的磺胺喹噁啉。治療可采用慶大霉素、林可霉素、大觀霉素、青霉素、環(huán)丙沙星等藥物。當(dāng)發(fā)生細(xì)菌病感染時應(yīng)及時采取實(shí)驗(yàn)室診斷，依據(jù)檢測結(jié)果進(jìn)行精準(zhǔn)用藥，這樣既可提高防治效率、防止延誤病程，同時又能確保生產(chǎn)成績，保障最終食品安全。在藥物預(yù)防和治療過程中，應(yīng)預(yù)先進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，以確定首選藥物。該菌很容易產(chǎn)生耐藥性，在治療時應(yīng)注意交替用藥。

7.3 重視場區(qū)生物安全，做好管理和環(huán)境衛(wèi)生工作

從疫區(qū)引進(jìn)雛鴨，可將鴨疫里默氏桿菌帶入本場，若從多個來源引進(jìn)雛鴨，易使本場流行的血清型過多，增加控制難度。目前疫苗接種是防控鴨疫里默氏桿菌的重要方式。如青島易邦生物工程有限公司，先后研發(fā)生產(chǎn)了鴨傳染性漿膜炎、大腸桿菌病二聯(lián)滅活疫苗（2 型RA BYT06 株+O78 型EC BYT01 株）、鴨傳染性漿膜炎三價滅活疫苗（1 型YBRA01 株+2 型YBRA02 株+4 型YBRA04株)，致力于預(yù)防由鴨疫里默氏桿菌引起的鴨傳染性漿膜炎，這對進(jìn)一步助力防控鴨疫里默氏桿菌病成效顯著。

隨著水禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，鴨疫里默氏桿菌的血清型將越來越趨向多樣化，同一地區(qū)同一禽類也可能分離到血清型不同的菌株，且該病主要感染2～8 周齡雛鴨，市場上目前有效疫苗供應(yīng)不足，給本病的防治增加了難度。因此了解各區(qū)域RA 血清型的種類，研制開發(fā)流行型的多價疫苗或聯(lián)苗，為預(yù)防控制該病的發(fā)生，顯得尤為重要。此外，頻繁的禽苗交易、臨床上抗生素的濫用、其他禽病的混合感染是造成鴨疫里默氏桿菌血清型增多的主要原因，所以保障禽苗來源健康，使用有效疫苗防疫，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理是杜絕新病的傳入的關(guān)鍵。■