基于指紋圖譜結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別對(duì)狗脊藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)

賈天寧，劉 芳，陳 鵬，李先寬，馬 琳*，黃欽華

1. 天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300381

2. 國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300381

3. 天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617

4. 廈門醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，福建 廈門 361021

狗脊為蚌殼蕨科植物金毛狗脊Cibotium barometz(L.) J. Sm.的干燥根莖，別名“金毛狗脊”。主產(chǎn)于廣西、廣東、福建、湖北等地，具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝之功效。臨床上可治療風(fēng)濕痹痛、腰膝酸軟、下肢無力等癥狀[1]。近年來對(duì)狗脊化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)其化學(xué)成分主要有蕨素類，水溶性酚酸類、鞣質(zhì)、淀粉、揮發(fā)油、糖及糖苷類等化合物[2]。本課題組對(duì)國(guó)家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目-生血寶合劑標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)進(jìn)行研究，狗脊是生血寶七味藥之一，對(duì)狗脊進(jìn)行質(zhì)量控制不可忽視?！吨袊?guó)藥典》2020 年版[3]，僅對(duì)其原兒茶酸這單一指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定，也曾有文獻(xiàn)對(duì)狗脊中原兒茶醛等5 個(gè)成分進(jìn)行含量測(cè)定[4]，但中藥成分復(fù)雜，無論是單一成分或多成分測(cè)定，都難以全面反映狗脊整體質(zhì)量的優(yōu)劣。而指紋圖譜在中藥分析方面具有整體、靈敏反映樣品特征的優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別對(duì)指紋圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù)降維、識(shí)別和分類，尋找藥材間的差異性，用于篩選質(zhì)量差異標(biāo)志物。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，狗脊的指紋圖譜和化學(xué)模式識(shí)別的文獻(xiàn)較少，故本實(shí)驗(yàn)以狗脊為研究對(duì)象，通過高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別技術(shù)整合分析指紋圖譜中提取共有峰的面積數(shù)據(jù)，得到不同產(chǎn)地的特征化學(xué)成分并含量測(cè)定，建立狗脊有效成分以期為狗脊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、相關(guān)制劑的質(zhì)量控制以及資源開發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

島津高效液相色譜儀Shimadzu SPD-20AT，色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；AB135-S 型十萬分之一電子分析天平（Mettler Toledo 公司）；KQ5200B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀有限公司）。

1.2 試劑

對(duì)照品5-羥甲基糠醛（批號(hào)20051201）、原兒茶醛（批號(hào)20082402）、原兒茶酸（批號(hào)20082901）、紫云英苷（批號(hào)19042203）成都曼思特生物科技有限公司；咖啡酸（批號(hào)110885-201703）中國(guó)食品藥品檢定研究所，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%。分析純甲醇購(gòu)自天津市化學(xué)試劑供銷公司，色譜純甲醇購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司，冰醋酸（分析純，天津市化學(xué)試劑供銷公司），水為娃哈哈純凈水。

1.3 藥材

狗脊藥材采自廣東、廣西、浙江、福建等，共16 批次。經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)馬琳教授鑒定為蚌殼蕨科植物金毛狗脊C.barometz(L.) J. Sm.的干燥根莖。狗脊樣品來源見表1。

表1 16 批次狗脊來源Table 1 Sample information of C. barometz

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），流動(dòng)相1%冰醋酸水溶液（A）-甲醇（B），流動(dòng)相梯度洗脫程序?yàn)?～17 min，93%～85% A；17～25 min，85%～76% A；25～30 min，76%～74% A；30～45 min，74%～65% A；45～52 min，65%～40% A；52～55 min，40%～10% A；55～65 min，10%～93%A；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 分別取對(duì)照品5-羥甲基糠醛（5-HMF）、原兒茶醛、原兒茶酸、咖啡酸、紫云英苷適量，精密稱定，置量瓶中，加入甲醇-1%冰醋酸水溶液（70∶30）制成含5-HMF 679 μg/mL、原兒茶醛 24.0 μg/mL、原兒茶酸 15.0 μg/mL、咖啡酸42.5 μg/mL、紫云英苷45.0 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品粉末（過三號(hào)篩）約2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-1%冰醋酸水溶液（70∶30）混合溶液50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30min，放冷，用甲醇-1%冰醋酸水溶液（70∶30）混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.22 μm 的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗(yàn) 取同一狗脊供試品（S1）溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，進(jìn)樣量20 μL，以5-HMF 為參照峰（S），計(jì)算其他各個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD，考察儀器的精密度，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD 值分別為0.42%、0.82%、0.54%、0.69%、0.76%，各色譜峰相對(duì)峰面積的RSD 值分別為0.55%、1.29%、0.84%、1.47%、1.53%，均小于2.0%。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一狗脊供試品（S1），按“2.2.1”項(xiàng)下制備6 份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量20 μL，以5 -HMF為參照峰（S），計(jì)算其他特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD，考察方法的重復(fù)性。各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD 值分別為0.82%、1.76%、0.73%、0.51%、0.74%，各色譜峰相對(duì)峰面積的RSD值分別為0.16%、1.57%、1.04%、0.92%、1.24%，均小于2.0%。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一狗脊供試品（S1）溶液，分別于配制后0、2、5、10、15、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量20 μL，以5-HMF 為參照峰，計(jì)算其他特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD，考察供試品溶液的穩(wěn)定性，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD 值分別為0.17%、0.72%、1.01%、1.02%、1.25%，各色譜峰相對(duì)峰面積的RSD 值分別為0.62%、0.73%、0.89%、1.41%、1.85%，均小于2.0%。

2.4 狗脊指紋圖譜的建立

2.4.1 狗脊對(duì)照指紋圖譜的生成 分別精密稱定16 批 狗脊樣品約2.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，采用國(guó)家藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012.130723 版）軟件”，對(duì)16 批狗脊樣品HPLC 圖譜進(jìn)行分析，以S1 為參照?qǐng)D譜，采用中位數(shù)法，時(shí)間窗的寬度默認(rèn)為0.1 min，經(jīng)過多點(diǎn)校正之后進(jìn)行自動(dòng)匹配，生成16 批狗脊藥材的HPLC 指紋圖譜和對(duì)照?qǐng)D譜（R），見圖1、2。

圖1 狗脊HPLC 指紋圖譜Fig. 1 HPLC fingerprints of C. barometz

圖2 樣品色譜圖 (A) 與對(duì)照品色譜圖 (B)Fig. 2 Chromatograms of sample (A) and reference (B)

2.4.2 特征峰的指認(rèn) 16 批狗脊藥材有10 個(gè)共有峰，其中指認(rèn)1、2、3、5 和10 號(hào)，5 個(gè)主要特征峰：分別為5-HMF，原兒茶酸，原兒茶醛，咖啡酸，紫云英苷。

2.4.3 相似度評(píng)價(jià) 對(duì)16 批狗脊樣品的指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算分析，選取樣品中出峰時(shí)間穩(wěn)定、分離度好5-HMF 作為參照峰（S），以其保留時(shí)間和峰面積為1，計(jì)算16 批狗脊樣品的共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD 值均小于 2.0%，相對(duì)峰面積的 RSD 在64.81%～86.64%，說明不同批次樣品中各成分含量差異較大，相對(duì)峰面積結(jié)果見表2。16 批狗脊樣品色譜圖與對(duì)照指紋圖譜的相似度在0.695～0.954，表明各個(gè)產(chǎn)地狗脊差異較大，這可能與狗脊野生狀態(tài)種植有關(guān)。相似度結(jié)果見表3。

表2 16 批狗脊指紋圖譜相對(duì)峰面積Table 2 Relative peak area of common peaks in fingerprints of 16 batches of C. barometz

表3 16 批狗脊指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)果Table 3 Results of similarity evaluation of 16 batches of C.barometz

2.5 化學(xué)模式識(shí)別分析

2.5.1 聚類分析 16 批樣品HPLC 指紋圖譜的10個(gè)共有峰的峰面積導(dǎo)入SPSS 軟件進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析（hierarchical clustering analysis，HCA），采用組間連接的聚類方法，以平方歐式距離進(jìn)行分析，結(jié)果見圖3。當(dāng)分類距離10 時(shí)，顯示16 批樣品可共聚為兩類，其中來自廣西的S1 和S2 聚為一類，其余地產(chǎn)可聚為一類。

圖3 狗脊樣品聚類分析圖Fig. 3 Cluster analysis diagram of C. barometz samples

2.5.2 主成分分析（principal component analysis，PCA）分析 為了進(jìn)一步區(qū)分各不同產(chǎn)地狗脊，將16 批樣品的指紋圖譜的10 個(gè)共有峰的峰面積為原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 軟件進(jìn)行處理，進(jìn)行PCA。首先，進(jìn)行降維因子分析，結(jié)果顯示KMO 值為0.773，大于0.5，表明各變量相關(guān)性較好，以特征值大于1提取主成分，得到2 個(gè)主要成分，累積方差貢獻(xiàn)率為88.298%，見表4；其次，用碎石圖轉(zhuǎn)折點(diǎn)檢驗(yàn)保留主成分個(gè)數(shù)，進(jìn)一步說明可提取前2 個(gè)主成分，見圖4。成分矩陣（表5）結(jié)果顯示，第1 個(gè)主成分信息主要來自1～7 號(hào)峰和9 號(hào)峰，其中1～3 號(hào)峰分別為5-HMF，原兒茶酸，原兒茶醛，5 號(hào)峰為咖啡酸，第2 個(gè)主成分信息主要來自第10 號(hào)峰（紫云英苷）。最后，將16 批樣品的10 個(gè)共有峰峰面積導(dǎo)入SIMCA 14.1 軟件，得到16 批不同產(chǎn)地樣品的主成分得分圖，見圖5，R2X（cum）為0.75，Q2（cum）為0.645，說明該模型可靠。結(jié)果顯示2 個(gè)主成分能反映不同產(chǎn)地狗脊的主要特征，與上述聚類分析結(jié)果一致，提示不同產(chǎn)地的狗脊在化學(xué)成分含量上存在差異。

表4 特征值和方差貢獻(xiàn)率Table 4 Eigenvalues and variance contributions

圖4 主成分分析碎石圖Fig. 4 Scree plot of PCA

圖5 狗脊PCA 得分圖Fig. 5 PCA scores of C. barometz

表5 成分矩陣Table 5 Component matrix

初始因子載荷矩陣見表5，由表可見，第1 主成分主要反映了除峰8 和10 的信息，即原始指標(biāo)色譜峰1～7、9 的信息，第2 主成分主要反映來自原始指標(biāo)色譜峰10 的信息（載荷值＞0.7）。其中峰1 為5-HMF，峰2 為原兒茶酸，峰3 為原兒茶醛，峰5 為咖啡酸，峰10 為紫云英苷。以降維得到的2個(gè)主成分得分作為X、Y、Z 軸，得到10 個(gè)樣品的PCA 得分圖，結(jié)果見圖5，S1、S2、S8 均與其他樣品偏離，與聚類分析結(jié)果大致相同，說明廣西來源的2 個(gè)樣品雖然聚類分析是一類，但是可能因?yàn)樯L(zhǎng)環(huán)境或者采收季節(jié)的原因，經(jīng)過PCA 分析，仍可以將S1 和S2 區(qū)別開。

2.5.3 偏最小二乘法-判別分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA） 建立PLS-DA 模型，可以更好地分析不同產(chǎn)地樣本間的組內(nèi)差異。結(jié)果顯示，所有排列在左邊的R2（cum）和Q2（cum）值都低于右邊的原始點(diǎn)，并且Q2（cum）點(diǎn)的藍(lán)色回歸線有負(fù)截距，說明原始PLS-DA 模型有效，確認(rèn)該分析內(nèi)容在統(tǒng)計(jì)學(xué)層面上可信。PLS-DA 得分圖及3D 圖，見圖6、7。結(jié)果結(jié)果顯示16 批樣品分可為4 組，廣西2 個(gè)樣品S1 和S2 以及廣東樣品S3 3 個(gè)產(chǎn)地各為一組，其余一組。結(jié)合變量重要性投影值（variable importance in projection，VIP）（圖8）可知VIP＞1 的色譜峰（數(shù)值由高到低）分別為2、3、10、8 和1 號(hào)峰（原兒茶酸、原兒茶醛紫云英苷、未知化合物和5-HMF），說明這些化學(xué)成分是不同產(chǎn)地狗脊樣品的差異性標(biāo)志物。

圖6 狗脊樣品PLS-DA 得分圖Fig. 6 PLS-DA scores of C. barometz

圖7 狗脊樣品PLS-DA 分析3D 圖Fig. 7 3D image of C. barometz by PLS-DA

圖8 狗脊樣品PLS-DA 的VIP 圖Fig. 8 VIP value from PLS-DA load diagram of C.barometz

2.6 狗脊中有效成分的含量測(cè)定

PCA 分析表明指紋圖譜中1～3、5 號(hào)峰是影響不同產(chǎn)地狗脊質(zhì)量的特征化學(xué)成分，分別為5-HMF、原兒茶酸、原兒茶醛、咖啡酸，是影響不同產(chǎn)地狗脊質(zhì)量的特征化學(xué)成分。PLS-DA 結(jié)果顯示，有5 個(gè)成分VIP＞1，分別對(duì)應(yīng)2（原兒茶酸）、3（原兒茶醛）、10（紫云英苷）、1（5-HMF）4 個(gè)成分，以及8 號(hào)峰（未知成分）。說明不同產(chǎn)地這些成分含量差異較大，是產(chǎn)地的差異性特征有效成分，故本實(shí)驗(yàn)篩選5-HMF、原兒茶醛、原兒茶酸、紫云英苷作為狗脊指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定。

2.6.1 線性關(guān)系考察 精密吸取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液混合對(duì)照品溶液1、2、5、15、50、100 μL，成，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定5-HMF、原兒茶醛、原兒茶酸、紫云英苷的峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)（r）。結(jié)果見表6。

表6 對(duì)照品的線性方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍Table 6 Linear equation, correlation coefficient and linear range of reference substance

2.6.2 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品，按“2.1”項(xiàng)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)得5 -HMF、原兒茶醛、原兒茶酸、紫云英苷峰面積的RSD 值分別為1.07%、1.28%、1.12%、0.98%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取S1 樣品共6 份，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)5-HMF、原兒茶醛、原兒茶酸、紫云英苷含量，RSD 值分別為1.16%、2.26%、2.12%、1.28%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取混合對(duì)照品，分別于配制后0、2、5、10、15、24 h 進(jìn)樣測(cè)定，按“2.1”項(xiàng)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)得5-HMF、原兒茶醛、原兒茶酸、紫云英苷峰面積的RSD 值分別為1.29%、2.07%、1.18%、1.73%，結(jié)果表明樣品穩(wěn)定性良好。

2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 取測(cè)定的S1 號(hào)狗脊樣品粉末6 份各1.000 g，精密稱定，分別加入等量的上述4 種有效成分混合對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)制備供試液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，5-HMF、原兒茶酸、原兒茶醛、紫云英苷加樣回收率分別為99.27%、98.21%、99.62%、101.18%，RSD 分別為0.84%、1.89%、0.48%、1.50%。

2.6.6 樣品含量測(cè)定 根據(jù)“2.2.2”項(xiàng)下方法制備狗脊藥材供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得5-HMF、原兒茶醛、原兒茶酸、紫云英苷的含量，結(jié)果見表7。由結(jié)果可知，《中國(guó)藥典》規(guī)定狗脊中的原兒茶酸應(yīng)大于0.02%，16 批狗脊樣品中原兒茶酸含量差異較大，部分樣品中的原兒茶酸的含量尚未達(dá)到《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)。

表7 16 批狗脊4 種指標(biāo)性成分含量測(cè)定結(jié)果Table 7 Content determination of four chemical components in 16 batches of C. barometz

3 討論

《中國(guó)藥典》2020 年版采用乙腈-1%醋酸作為流動(dòng)相，本實(shí)驗(yàn)還考察了0.1%甲酸水-乙腈、0.05%磷酸水-乙腈、1%甲酸水-甲醇等流動(dòng)相體系，在結(jié)合文獻(xiàn)基礎(chǔ)上對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行優(yōu)化[5-7]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以1%醋酸（A）-甲醇（B）為流動(dòng)相梯度洗脫，樣品的分離效果較好，最后采用1%醋酸-甲醇進(jìn)行梯度洗脫。

中藥材的內(nèi)在質(zhì)量受生長(zhǎng)環(huán)境（海拔、土壤、水源、光照等）、采收時(shí)間以及加工方法、炮制方法等多方面影響。僅采用單成分或者多成分考察某種藥材的質(zhì)量，難以體現(xiàn)不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣，為了更好地區(qū)分產(chǎn)地對(duì)質(zhì)量的影響，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用相似度評(píng)價(jià)、聚類分析、PCA 分析和PLS-DA 的化學(xué)計(jì)量學(xué)方法對(duì)不同產(chǎn)地狗脊進(jìn)行質(zhì)量研究。聚類分析可知，9 個(gè)產(chǎn)地的狗脊樣品可聚為2 類，其中廣西狗脊聚為一類，其他產(chǎn)地狗脊聚為一類，說明產(chǎn)地的生態(tài)環(huán)境、氣候條件等因素相關(guān)造成不同的差異性。在PCA 分析中可看出，9 個(gè)產(chǎn)地的狗脊樣品可分成3 類，化學(xué)成分存在一定的差異，PCA 分析與聚類分析大致相同，說明廣西來源的兩個(gè)樣品雖然通過聚類分析是一類，但是經(jīng)過PCA 分析，仍可以將S1 和S2 區(qū)別開，可能與生長(zhǎng)環(huán)境或者采收季節(jié)的原因有關(guān)。PLS-DA 分析也可以看出，廣西2 個(gè)樣品有所區(qū)別，廣東和廣西產(chǎn)地的3 個(gè)樣品S1、S2和S8，分別偏離其他產(chǎn)地的樣品。這兩個(gè)產(chǎn)地的狗脊化學(xué)成分與其他產(chǎn)地的樣品存在一定的差異。16批狗脊樣品HPLC 指紋圖譜，指認(rèn)出10 個(gè)共有峰，其中《中國(guó)藥典》2020 年版的狗脊以原兒茶酸為含量測(cè)定指標(biāo)，說明以原兒茶酸具有特征性。本研究在此基礎(chǔ)上，結(jié)合PCA 分析和PLS-DA 化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，發(fā)現(xiàn)5-HMF、原兒茶醛、紫云英苷是產(chǎn)地的差異性特征有效成分，在考察狗脊質(zhì)量時(shí)可以增加這些成分的考察。PCA 結(jié)合PLS-DA 結(jié)果分析，篩選出5-HMF、原兒茶醛、原兒茶酸、紫云英苷作為狗脊的有效成分。

5-HMF 具有廣泛的藥理活性，如抗氧化、抗炎、降血糖改善慢性炎癥性疾病、阿爾茨海默病等，5-HMF 其本身不存在嚴(yán)重的健康風(fēng)險(xiǎn)，但其代謝產(chǎn)物5-磺甲基糠醛具有一定的毒副作用，如腎毒性、黏膜刺激、橫紋肌損傷等，如何控制其轉(zhuǎn)化以及控制一定的含量還需深入研究[8]。

通過文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，原兒茶酸、原兒茶醛、咖啡酸[1]以及紫云英苷是狗脊發(fā)揮祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)腰膝功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。原兒茶酸、原兒茶醛、咖啡酸以及紫云英苷均為酚酸類成分。已經(jīng)證實(shí)，原兒茶酸具有抗炎、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫力、修復(fù)缺血損傷、抑制血小板凝集等藥理作用[9]。近年來，還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，原兒茶酸可減輕退變軟骨細(xì)胞的損傷[10]。而原兒茶醛體現(xiàn)了更多活血化瘀類的作用，如擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、抑制血小板聚集、抑制單核細(xì)胞趨化游走和趨化游走過程中產(chǎn)生的IL-8 活性等作用[11]。紫云英苷是黃酮類成分，黃酮類成分在治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[12]、預(yù)防骨質(zhì)疏松[13]以及抗缺血損傷、抗驚厥、抗癡呆等多種神經(jīng)保護(hù)作用[14]。選取5-HMF、原兒茶酸、原兒茶醛、紫云英苷作為狗脊的有效成分不僅僅是化學(xué)模式識(shí)別的結(jié)果，也符合其祛風(fēng)濕，補(bǔ)肝腎，強(qiáng)腰膝的作用機(jī)制。

本研究建立了16 批不同產(chǎn)地狗脊的HPLC 指紋圖譜，確立了10 個(gè)共有峰，結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別評(píng)價(jià)方法，在5 個(gè)已知化合物中篩選出了4 個(gè)影響狗脊質(zhì)量的差異性標(biāo)志物，并對(duì)這4 個(gè)成分進(jìn)行了含量測(cè)定。本研究建立的HPLC 指紋圖譜、化學(xué)模式識(shí)別方法以及含量測(cè)定方法穩(wěn)定、可靠，為狗脊藥材的質(zhì)量控制和相關(guān)資源開發(fā)的深入研究奠定基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突