CD4+/CD8+聯(lián)合缺氧誘導(dǎo)因子-1α檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值

裴建灰，朱樂恒，朱曉龍

平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院普外科，河南平頂山 467000

世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）報(bào)道，結(jié)直腸癌是發(fā)病率僅次于肺癌的全球第二大惡性腫瘤，好發(fā)于40 歲以上中老年人群[1]，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前多認(rèn)為與環(huán)境、飲食習(xí)慣及遺傳等因素有關(guān)[2]。手術(shù)是目前針對(duì)結(jié)直腸癌最為有效的治療手段，能夠有效延長患者的生存時(shí)間，提高其生活質(zhì)量[3]。然而研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者術(shù)后仍有較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)其預(yù)后產(chǎn)生不利影響。因此，尋求有效的臨床指標(biāo)評(píng)估結(jié)直腸癌患者的術(shù)后復(fù)發(fā)情況，對(duì)改善患者預(yù)后尤為重要。CD4+和CD8+T 淋巴細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，在腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮積極的免疫調(diào)節(jié)作用[4]。缺氧誘導(dǎo)因子（hypoxia-inducible factor，HIF）-1α是一種具有轉(zhuǎn)錄活性的DNA 結(jié)合蛋白，與細(xì)胞增殖和凋亡具有緊密聯(lián)系[5]。相關(guān)研究報(bào)道，CD4+/CD8+和HIF-1α均是結(jié)直腸癌手術(shù)患者預(yù)后的重要影響因素[6-7]。本研究探討CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年5 月至2021 年5 月于平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院行腹腔鏡手術(shù)治療的結(jié)直腸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合結(jié)直腸癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，經(jīng)病理檢查確診為結(jié)直腸癌；接受腹腔鏡手術(shù)且術(shù)前檢查及術(shù)后病理證實(shí)未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；合并心、肺等器官嚴(yán)重疾病；既往有腹部重大手術(shù)史。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究納入124 結(jié)直腸癌患者，腫瘤類型：結(jié)腸癌55 例，直腸癌69 例；臨床分期：Ⅰ期60 例，Ⅱ期64 例；分化程度：低分化8 例，中分化73 例，高分化43 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過，所有患者均知情同意。

1.2 檢測(cè)方法

術(shù)前采集所有患者空腹靜脈血2 ml，分別取100 μl 抗凝全血加入2 個(gè)試管中，2 個(gè)試管各加入CD4、CD8 抗體20 μ l，室溫避光孵育15 min，然后分別加入500 μl 細(xì)胞裂解液，振蕩混勻后室溫避光孵育10 min，采用免疫熒光標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)上層血清中CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞水平，計(jì)算CD4+/CD8+。

術(shù)前采集所有患者空腹靜脈血2 ml，3000 r/min離心10 min 后取上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清HIF-1α水平。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同臨床特征結(jié)直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平。根據(jù)復(fù)發(fā)情況將患者分為未復(fù)發(fā)組（n=100）和復(fù)發(fā)組（n=24），比較兩組患者的CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+，分析結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素。分析CD4+/CD8+、HIF-1α單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 23.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；采用Logistic 回歸模型分析結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，分析CD4+/CD8+、HIF-1α單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者CD4+/CD8+和HIF-1α水平的比較

Ⅱ期結(jié)直腸癌患者的CD4+/CD8+明顯低于Ⅰ期患者，HIF-1α水平明顯高于Ⅰ期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.196、5.934，P＜0.01）。不同分化程度結(jié)直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=76.704、21.812，P＜0.01），CD4+/CD8+隨分化程度的升高而升高，HIF-1α水平隨分化程度的升高而降低。（表1）

表1 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者的CD4+/CD8+和HIF-1α水平

2.2 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較

復(fù)發(fā)組患者的CD4+水平及CD4+/CD8+均低于未復(fù)發(fā)組，CD8+、HIF-1α水平均高于未復(fù)發(fā)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較（±s）

表2 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者CD4+、CD8+、HIF-1α水平及CD4+/CD8+的比較（±s）

組別復(fù)發(fā)組（n=24）未復(fù)發(fā)組（n=100）t值P值CD4+（%）25.57±5.15 41.62±5.43 16.228＜0.01 CD8+（%）35.45±5.85 21.64±4.72 12.267＜0.01 CD4+/CD8+1.18±0.24 1.35±0.31 2.320＜0.05 HIF-1α（ng/ml）67.54±7.25 63.42±7.38 2.293＜0.05

2.3 結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的多因素Logistic 回歸分析

多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，CD8+、HIF-1α均是結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.01），而CD4+和CD4+/CD8+均是結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.01）。（表3）

表3 結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值

ROC 曲線顯示，CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測(cè)評(píng)估結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積為0.872，高于CD4+/CD8+、HIF-1α單獨(dú)檢測(cè)的0.784、0.790。（表4、圖1）

圖1 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC曲線

表4 CD4+/CD8+、HIF-1α單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值

3 討論

結(jié)直腸癌作為病死率位居全球第二的惡性腫瘤，已對(duì)人類的生活質(zhì)量和生命健康造成嚴(yán)重威脅[9]。研究證實(shí)，結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高，而常規(guī)檢查方法（如CT、B 超檢查等）對(duì)患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估具有一定的局限性，因此需借助血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估[10]。張靜等[11]研究指出，CD4+T 細(xì)胞對(duì)機(jī)體抗腫瘤免疫功能具有調(diào)節(jié)作用，而CD8+T 細(xì)胞可對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行特異性殺滅，因此CD4+/CD8+可直接反映機(jī)體的抗腫瘤免疫力。楊寧波等[12]研究表明，HIF-1α在多種類型腫瘤中呈高表達(dá)，可直接參與腫瘤進(jìn)展、血管生成及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等過程。然而CD4+/CD8+與HIF-1α聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值少有報(bào)道，因此本研究探討CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的評(píng)估價(jià)值，旨在為臨床治療結(jié)直腸癌及評(píng)估其預(yù)后提供參考。

本研究結(jié)果顯示，Ⅱ期結(jié)直腸癌患者的CD4+/CD8+明顯低于Ⅰ期患者，HIF-1α水平明顯高于Ⅰ期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；CD4+/CD8+隨分化程度的升高而升高，HIF-1α水平隨分化程度的升高而降低。表明CD4+、CD8+及HIF-1α在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。相關(guān)研究指出，免疫功能低下是導(dǎo)致結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的因素之一[13]。劉夢(mèng)瑤等[14]研究發(fā)現(xiàn)，CD4+T 細(xì)胞通過識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面抗原，激活免疫系統(tǒng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。于曉潔和丘木水[15]的研究表明，CD4+T 細(xì)胞可調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫平衡，其水平與結(jié)直腸癌患者的預(yù)后呈正相關(guān)。CD8+T 細(xì)胞可分化出具有殺傷效應(yīng)的細(xì)胞毒性T 細(xì)胞和具有免疫調(diào)節(jié)功能的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞，進(jìn)而提高機(jī)體免疫力，殺滅腫瘤細(xì)胞[16-17]。HIF-1α可直接對(duì)腫瘤細(xì)胞的缺氧耐受性進(jìn)行調(diào)控，通過激活機(jī)體內(nèi)糖酵解相關(guān)因子，提高腫瘤細(xì)胞的缺氧耐受性及侵襲性，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移[18]。孫艷麗等[19]研究指出，HIF-1α通過結(jié)合靶基因序列調(diào)控機(jī)體缺氧反應(yīng)基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞能量代謝平衡，保持腫瘤細(xì)胞供血供氧穩(wěn)定。本研究結(jié)果還顯示，復(fù)發(fā)組患者的CD4+水平及CD4+/CD8+均低于未復(fù)發(fā)組，CD8+、HIF-1α水平均高于未復(fù)發(fā)組，與相關(guān)研究報(bào)道的結(jié)果相似[20-21]。表明CD4+、CD8+T 細(xì)胞及HIF-1α均可能與結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)有關(guān)。本研究的多因素Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，CD8+、HIF-1α均是結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.01），而CD4+和CD4+/CD8+均是結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.01），與孫國鋼和宋新江[22]的研究結(jié)果部分相同。本研究的ROC 曲線顯示，CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測(cè)評(píng)估結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積為0.872，高于CD4+/CD8+、HIF-1α單獨(dú)檢測(cè)的0.784、0.790。表明CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)具有一定的評(píng)估價(jià)值。

綜上所述，CD4+/CD8+聯(lián)合HIF-1α檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)具有一定的評(píng)估價(jià)值，可為臨床干預(yù)及治療提供參考。