氣相色譜法測(cè)定艾草貼中桉油精的含量

翁曉君

（深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院，廣東深圳 518110）

艾草貼是以艾葉為主要原料，與其他藥物提取物或生藥細(xì)末混合成膏，攤涂在無(wú)紡布上，覆蓋離型紙，經(jīng)切片包裝而成的敷貼，敷貼于皮膚、孔竅、穴位等可治療疾病。艾葉為菊科植物艾的干燥葉，有特殊香氣，味苦、性涼，具有散寒止痛、溫經(jīng)止血、祛濕止癢等功效，臨床常用于治療呼吸系統(tǒng)疾病、婦科疾病、消化系統(tǒng)疾病以及外科疾病[1]。艾葉含有揮發(fā)油、黃酮、有機(jī)酸和三萜類(lèi)等多種化學(xué)成分，其中桉油精、樟腦、龍腦、松油醇等為艾葉揮發(fā)油的主要共有成分[2]。

桉油精，又名1,8-桉葉(油)素、桉葉素，具有類(lèi)樟腦氣味的無(wú)色液體，是一種從桉樹(shù)屬植物中提取的單萜烯類(lèi)氧化物，天然存在于桉樹(shù)屬、菊科的蒿屬、樟科的月桂屬，以及唇形科的鼠尾草屬、薰衣草屬、百里香屬、迷迭香屬等芳香植物中。桉油精具有抑菌、抗病毒、抗寄生蟲(chóng)、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、改善組織纖維化及屏障功能、神經(jīng)保護(hù)、肝保護(hù)、解痙、鎮(zhèn)痛、抗膽固醇降血脂、防治糖尿病并發(fā)癥等藥理作用，對(duì)呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)均有一定的保護(hù)作用[3-4]，在醫(yī)藥、生活用品、化妝品領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛。

桉油精是艾草貼中的主要成分，但目前未發(fā)現(xiàn)檢測(cè)艾草貼中桉油精含量的報(bào)道。本研究參考相關(guān)資料建立艾草貼中桉油精含量的檢測(cè)方法[5-7]，以期為企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制提供良好的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890B 氣相色譜儀（配有FID 氫火焰離子化檢測(cè)器），美國(guó)Agilent 公司； QUINTIX313-1CN 型千分之一分析天平，德國(guó)賽多利斯公司；QUINTIX224-1CN 型萬(wàn)分之一分析天平，德國(guó)賽多利斯公司；AS10200ADT 超聲萃取儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；MS3 Digital 旋渦振蕩器，德國(guó)IKA 公司。

桉油精（CAS：470-82-6；純度：99.7%），德國(guó)Aldrich 公司；正己烷、乙酸乙酯、無(wú)水乙醇，HPLC 級(jí)，德國(guó)Merck 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取桉油精標(biāo)準(zhǔn)品0.017 0 g（精確稱(chēng)量至0.000 1 g）于100 mL 容量瓶中，用正己烷溶解、定容，配制成質(zhì)量濃度為169 mg/L 的儲(chǔ)備液。以桉油精標(biāo)準(zhǔn)溶液為母液，以正己烷為稀釋液配制成質(zhì)量濃度為0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2 樣品前處理1.2.2.1 樣品的制備

取市售艾草貼，剪碎混勻，裝入潔凈的可密封盛樣容器中，密封并標(biāo)明標(biāo)記。

1.2.2.2 樣品的提取

稱(chēng)取剪碎均勻的樣品0.4 g（精確稱(chēng)量至0.001 g）置于50 mL 離心管中，精密加入正己烷40 mL，稱(chēng)定重量，超聲2 h 后，再稱(chēng)定重量，用正己烷補(bǔ)足重量，渦旋搖勻，9 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心2 min，取上清液，用0.22 μm 濾膜過(guò)濾后，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3 氣相色譜條件

色譜柱：HP-INNOWAX 毛細(xì)管柱（30 m×250 μm，0.25 μm）；柱溫：程序升溫，初始溫度70 ℃，保持4 min，以5 ℃/min 升溫至140 ℃，保持1 min，再以60 ℃/min 升溫至260 ℃，保持3 min；進(jìn)樣口溫度200 ℃；FID 檢測(cè)器溫度250 ℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比5 ∶1，進(jìn)樣量1 μL；載氣（氮?dú)猓?.0 mL/min，氫氣：40 mL/min；空氣：350 mL/min。

1.2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

取濃度為10 mg/L的桉油精標(biāo)準(zhǔn)工作液，按“1.2.3”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定儀器精密度；取同一批艾草貼陽(yáng)性樣，按“1.2.2”方法制備6 份試樣溶液并測(cè)定，比較每次測(cè)定數(shù)據(jù)之間的差異，并計(jì)算6 次測(cè)定值之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定方法重復(fù)性。

1.2.5 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

在已知桉油精含量的艾草貼樣品中添加169 mg/L的桉油精標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，添加量依次為0.24 mL、0.48 mL、2.40 mL，按“1.2.2”方法制備試樣溶液后測(cè)定含量，并計(jì)算回收率。

1.2.6 樣品測(cè)定

取8 批次市售艾草貼，按“1.2.2”方法制備試樣溶液后進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理?xiàng)l件的選擇

2.1.1 提取溶劑的選擇

桉油精與艾草貼中其他天然成分的化學(xué)性質(zhì)不同，在不同溶劑中的溶解度也存在差異。本文以艾草貼陽(yáng)性樣為樣品，使用3 種有機(jī)溶劑（乙酸乙酯、正己烷、無(wú)水乙醇）提取桉油精，超聲時(shí)間均為1 h，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，正己烷作為提取液時(shí)，提取效果最好，分離度好，且雜質(zhì)干擾小。

圖1 提取溶劑對(duì)樣品中桉油精含量的影響

2.1.2 提取時(shí)間的選擇

本文考察了超聲提取時(shí)間（0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h）對(duì)提取率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取時(shí)間越長(zhǎng)，提取率越高，但考慮到超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致提取溶劑損失過(guò)多，且超聲3 h 和超聲2 h 的結(jié)果相差不大。因此本文選取超聲時(shí)間為2 h，該條件下提取率高，適用于艾草貼中桉油精的提取。

2.2 儀器條件的優(yōu)化

艾草貼中揮發(fā)性成分復(fù)雜，雜質(zhì)較多，為了更好地分離桉油精，本文在測(cè)試檢測(cè)方法時(shí)發(fā)現(xiàn)采用聚乙二醇作為固定相的強(qiáng)極性HP-INNOWAX 毛細(xì)管柱能更好地分離桉油精和其他雜質(zhì)；通過(guò)改變氣體流速和色譜柱程序升溫等條件優(yōu)化艾草貼中桉油精含量測(cè)定的氣相色譜條件，使其在保證桉油精分離效果良好的前提下，控制檢測(cè)時(shí)間在25 min 以?xún)?nèi)，可提高檢測(cè)效率，優(yōu)化后的色譜條件見(jiàn)1.2.3。桉油精標(biāo)樣和樣品中桉油精的氣相色譜圖如圖2、圖3 所示。

圖2 桉油精標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖3 樣品中桉油精色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

由圖4 可知，線性回歸方程為y=2.520 21x-0.199 648，相關(guān)系數(shù)r=0.999 96，桉油精在0.5 ～50.0 mg/L 的濃度范圍內(nèi)與其峰面積積分線性關(guān)系良好。以取樣量0.40 g 計(jì)，本方法對(duì)樣品的檢出限為0.05 g/kg（S/N＞3），定量限為0.1 g/kg（S/N＞10）。

圖4 桉油精的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.4 精密度

按1.2.4 測(cè)定儀器精密度，得到桉油精峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.93%，表明儀器精密度良好。按1.2.4測(cè)定方法重復(fù)性，得到桉油精峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.47%，表明方法的重復(fù)性較好。

2.5 加標(biāo)回收率

如表1 所示，在桉油精的低、中、高3 個(gè)濃度下的平均回收率在91.3%～93.6%，RSD為2.00%～4.46%，說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度良好。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.6 樣品測(cè)定

由表2 可知，市售艾草貼中桉油精含量差異較大。可能有以下幾個(gè)原因：（1）不同生產(chǎn)企業(yè)使用了不同的原料，如艾草的品種、產(chǎn)地和種植環(huán)境不同；（2）不同企業(yè)在生產(chǎn)艾草貼時(shí)采用的加工工藝或生產(chǎn)流程也有所不同，可能導(dǎo)致桉油精含量的差異；（3）不同生產(chǎn)企業(yè)在質(zhì)量控制方面可能存在差異，有些企業(yè)可能會(huì)嚴(yán)格監(jiān)控產(chǎn)品中桉油精的含量。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本研究建立了氣相色譜法檢測(cè)艾草貼中桉油精含量的分析方法。結(jié)果表明，采用本方法測(cè)定桉油精含量線性范圍較寬、靈敏度高、準(zhǔn)確度高，在實(shí)際樣品檢測(cè)中具有可行性，操作簡(jiǎn)單、高效，可為企業(yè)控制產(chǎn)品質(zhì)量提供較為理想的分析方法。