小口徑容器天麻配制酒前處理方式研究

楊川鵬 鄧濟(jì)承 曾建威 程俐 張大全 牟志芬 鄒旭東

摘要 ［目的］探索小口徑容器中泡酒天麻較優(yōu)前處理方式。［方法］利用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)不同前處理下小口徑容器中天麻配制酒天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量進(jìn)行檢測(cè)分析。［結(jié)果］該配制酒中天麻素含量隨著時(shí)間推移不斷增加，于35 d開始逐步趨于穩(wěn)定；除個(gè)別處理對(duì)羥基苯甲醇含量隨時(shí)間推移有增加外，大多處理對(duì)羥基苯甲醇含量于7 d已趨于穩(wěn)定。不同前處理方式對(duì)小口徑容器天麻配制酒中天麻素的析出、酒體色澤均具有較大影響，對(duì)對(duì)羥基苯甲醇的析出影響不大。［結(jié)論］綜合考慮小口徑容器天麻配制酒藥效成分含量和酒體色澤差異，以蒸鍋蒸制20～25 min為較優(yōu)前處理工藝；天麻浸泡時(shí)間應(yīng)不低于35 d。

關(guān)鍵詞 天麻配制酒；小口徑容器；前處理方式；天麻素；對(duì)羥基苯甲醇

中圖分類號(hào) R 286? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A? 文章編號(hào) 0517-6611（2023）23-0147-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.23.035

Study on Pretreatment of Gastrodiae Rhizoma Wine in Small-caliber Containers

YANG Chuan-peng1， DENG Ji-cheng1， ZENG Jian-wei2 et al

（1.Leshan Academy of Agricultural Sciences， Leshan， Sichuan 614000；2. Leshan Cash Crops Station， Leshan， Sichuan 614000）

Abstract ［Objective］To find the better pretreatment of Gastrodiae rhizoma wine in small-caliber containers.［Method］The gastrodin and p-hydroxybenzyl calcohol content of Gastrodiae rhizoma wine in small-caliber containers were determined by high performance liquid chromatography （HPLC）. ［Result］ The content of gastrodin in the prepared wine increased with time and gradually stabilized at 35 days;the content of P-hydroxybenzyl alcohol in most of the treatments tended to be stable after 7 days， except that the content of p-hydroxybenzyl alcohol in some treatments increased with time. Different pretreatment methods had a great effect on the precipitation of gastrodin and color of in Gastrodiae rhizoma wine in small-caliber container， but had little effect on the precipitation of p-hydroxybenzyl alcohol.［Conclusion］ Considering the differences in the content of pharmacodynamics ingredients and the color of Gastrodiae rhizoma wine in small-caliber containers， steaming 20-25 minutes is the best pre-processing;the soaking time of Gastrodiae rhizoma should not be less than 35 days.

Key words Gastrodiae rhizome wine;Small-caliber containers;Gastrodin;P-hydroxybenzyl calcohol

基金項(xiàng)目 四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2019YFN0075）；四川省樂山市市級(jí)農(nóng)業(yè)科研育種項(xiàng)目（51110023T000009143534-2023）。

作者簡(jiǎn)介 楊川鵬（1996—），男，四川犍為人，助理農(nóng)藝師，碩士，從事藥用兩用類中藥材產(chǎn)品開發(fā)與應(yīng)用研究。*通信作者，高級(jí)農(nóng)藝師，從事食品加工研究。

收稿日期 2022-11-23；修回日期 2023-01-31

天麻，蘭科植物天麻（Gastrodia elata Bl.）的干燥根莖，我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，其味甘、性平，具有息風(fēng)止痙、祛風(fēng)通絡(luò)之功效［1］。雖然天麻未被藥食兩用類中藥材名錄所收錄，但在民間人們常用天麻浸泡白酒，或用之與各種肉類共同蒸、煮之后食用。小口徑容器天麻酒是指將特定栽培基質(zhì)直接裝入小口徑容器中，之后接種蜜環(huán)菌和天麻種子，在特定培養(yǎng)條件下，實(shí)現(xiàn)了天麻在小口徑容器中直接栽培，收獲后的天麻通過清洗、前處理、灌裝、滅菌、包裝等工藝而形成的天麻配制酒產(chǎn)品。目前針對(duì)天麻配制酒尤其是新鮮天麻配制酒的研究相對(duì)較少，民間和市面上現(xiàn)有天麻酒多由干燥后的天麻切片或打粉后經(jīng)高度白酒浸泡所得［2］，質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)欠缺。天麻具有多種功能性活性成分，其中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇為其中主要2種，也是國(guó)家藥典規(guī)定的特征性指標(biāo)檢出物，其含量往往能代表天麻及其炮制品質(zhì)量［3-5］?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，不同炮制處理方法對(duì)天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量具有較大影響［6-11］。該研究在前人研究的基礎(chǔ)上，以天麻配制酒中代表性藥效成分天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量以及酒體色澤為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選小口徑容器中天麻較優(yōu)前處理方式，以期為小口徑容器天麻配制酒企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的制定和產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器。Agress1100高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）；Ar124CN分析天平（上海奧豪斯有限公司）；KM-250DE臺(tái)式超聲儀（昆山美美超聲儀器有限公司）；DHG-9005恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海覽浩儀器設(shè)備有限公司）；電磁爐。

1.1.2 試劑。天麻素對(duì)照品（批號(hào)PS012130）、對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品（批號(hào)PS012049）均購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司；磷酸、無(wú)水乙醇、甲醇、乙腈均為分析純；實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

1.1.3

藥材。天麻藥材取自樂山市金口河區(qū)森寶野生植物開發(fā)有限公司天麻栽培基地生產(chǎn)的小口徑容器瓶裝天麻，經(jīng)鑒定為天麻（Gastrodia elata Bl.）的干燥根莖。試驗(yàn)浸泡天麻用基酒為市售52%白酒。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理。隨機(jī)抽取50瓶小口徑容器培養(yǎng)天麻稱重取平均值，以整塊天麻浸入750 mL基酒中為基準(zhǔn)，換算出浸入200 mL基酒中所需天麻鮮重為34.3 g。樣品共設(shè)11個(gè)處理：T1，生樣，即將洗凈天麻切塊稱重至指定重量后直接浸酒；T2，熱浸處理，即將洗凈天麻切塊稱重至指定重量后浸酒，置入70 ℃恒溫水浴鍋中1 h后浸泡；T3，蒸鍋蒸制20 min，即普通蒸鍋，水燒沸后，將洗凈天麻蒸制至20 min后取出，切塊稱重至指定重量后浸酒；T4，蒸鍋蒸制25 min；T5，蒸鍋蒸制30 min；T6，蒸鍋蒸制20 min后烘干，即普通蒸鍋，水燒沸后，將洗凈天麻蒸制至20 min取出，切塊稱重至指定重量后置于60 ℃烘箱中烘至干燥后浸酒；T7，蒸鍋蒸制25 min后烘干；T8，蒸鍋蒸制30 min后烘干；T9，高壓蒸汽處理10 min，即將洗凈天麻置錫箔紙上放入高壓蒸汽鍋中105 ℃進(jìn)行蒸制，達(dá)到10 min冷卻降壓取出，切塊稱重至指定重量；T10，高壓蒸汽處理15 min；T11，高壓蒸汽處理20 min。將各預(yù)處理天麻按上述要求處理后分別浸入200 mL 52%白酒中即得供試品，每個(gè)處理3次重復(fù)。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備。

分別取天麻素、對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品適量，精密稱定后加入乙腈∶水（3∶97）混合溶液制備成50 μg/mL天麻素、25 μg/mL對(duì)羥基苯甲醇的對(duì)照品溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.3 供試品溶液的制備。

精密量取供試品2.5 mL置于25 mL錐形瓶中蒸干，加入12.5 mL乙腈-水（3∶97）混合溶液，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液，儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 色譜條件的選擇。色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸水溶液（3∶97），等度洗脫；流速為0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm；進(jìn)樣量為40 μL；柱溫為30 ℃。由天麻素對(duì)照品和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品色譜圖（圖1）可知，該試驗(yàn)色譜條件下的對(duì)照品基線平穩(wěn)，均為單峰，呈對(duì)稱正態(tài)分布，且無(wú)雜峰干擾，說明在此試驗(yàn)條件下的檢測(cè)結(jié)果良好。

1.2.5

線性關(guān)系考察。分別配制濃度為12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL的天麻素和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品溶液。按照“1.2.4”色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出天麻素和對(duì)羥基苯甲醇在各自線性范圍內(nèi)的回歸方程。

1.2.6

精密度試驗(yàn)。精密吸取天麻素和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品溶液，按照“1.2.4”色譜條件分別重復(fù)進(jìn)樣6次，按照線性回歸方程計(jì)算天麻素、對(duì)羥基苯甲醇峰面積的RSD，分析儀器的精密度情況。

1.2.7

重復(fù)性試驗(yàn)。精密吸取同一處理?xiàng)l件下的天麻配制酒供試品溶液6份，按照“1.2.3”供試品溶液的制備方法操作，進(jìn)樣40 μL，在“1.2.4”色譜條件下測(cè)定天麻素、對(duì)羥基苯甲醇峰面積的RSD，分析該方法的重復(fù)性情況。

1.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取制備的同一處理的供試品溶液，隔24和48 h后按“1.2.4”色譜條件分別進(jìn)樣40 μL并進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算同一批供試樣品中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇峰面積的RSD，分析天麻素和對(duì)羥基苯甲醇在間隔48 h內(nèi)穩(wěn)定性情況。

1.2.9

加樣回收率試驗(yàn)。精密吸取同一批供試品溶液5份，分別添加適量不同質(zhì)量濃度水平的天麻素和對(duì)羥基苯甲醇混合對(duì)照品溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，依據(jù)樣品檢測(cè)結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)添加量計(jì)算加標(biāo)回收率，分析方法和操作的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系考察

按照“1.2.5”方法操作，得出天麻素和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品溶液的線性回歸方程如表1所示，結(jié)果顯示，天麻素和對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品溶液在12.5～200.0 μg/mL呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（R2≥0.999 9）。

2.2 精密度試驗(yàn)

按照“1.2.6”方法操作，計(jì)算得出天麻素、對(duì)羥基苯甲醇峰面積的RSD分別為0.95%、1.94%，表明儀器精密度良好。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

按照“1.2.7”方法操作，測(cè)得天麻素、對(duì)羥基苯甲醇峰面積的RSD分別為1.57%、3.95%，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照“1.2.8”方法操作，經(jīng)分析檢測(cè)顯示，同一批供試樣品檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯變化，其中天麻素、對(duì)羥基苯甲醇峰面積的RSD分別為1.05%、0.81%，表明供試樣品中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇在48 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定，穩(wěn)定性良好。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

按照“1.2.9”方法操作，對(duì)天麻配制酒樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定，結(jié)果如表2所示。從表2可以看出，5個(gè)加標(biāo)濃度下，天麻素和對(duì)羥基苯甲醇加標(biāo)回收率分別為93.66%～100.75%、93.78%～102.88%，RSD分別為2.79%和3.68%，符合試驗(yàn)分析檢測(cè)要求。

2.6 樣品含量測(cè)定

2.6.1

浸泡時(shí)間對(duì)小口徑容器天麻配制酒中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇析出的影響。由表3可知，不同前處理下，小口徑容器天麻配制酒中天麻素的含量均隨著時(shí)間推移不斷增加，于35 d前后逐漸趨于穩(wěn)定，隨著時(shí)間再次推移，個(gè)別處理還出現(xiàn)了天麻素含量下降的現(xiàn)象，這可能是由于浸泡時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致天麻素降解造成的。對(duì)相同處理不同浸泡時(shí)間下天麻素含量進(jìn)行多重比較發(fā)現(xiàn)，35～56 d除T1、T9外各處理下天麻配制酒中天麻素含量差異均不顯著，說明天麻素析出已基本穩(wěn)定。

由表4可知：T1、T6、T7、T8處理下天麻配制酒中對(duì)羥基苯甲醇含量隨著時(shí)間推移有較大幅度增加，T1處理下7～21 d以及T6、T7處理下7 d對(duì)羥基苯甲醇含量與其他時(shí)間差異達(dá)到顯著水平，T8處理下56 d對(duì)羥基苯甲醛含量與其他時(shí)間差異達(dá)到顯著水平；其余處理下天麻配制酒中對(duì)羥基苯甲醇含量在浸泡7 d之后即基本趨于穩(wěn)定，多重比較結(jié)果顯示不同浸泡時(shí)間下對(duì)羥基苯甲醇含量差異不顯著。

2.6.2

不同前處理對(duì)小口徑容器天麻配制酒中天麻素含量的影響。由表3可知，不同前處理對(duì)小口徑容器天麻配制酒中天麻素含量有較大影響，且各處理在相同浸泡時(shí)間下呈現(xiàn)出一致規(guī)律。以浸泡35 d的天麻酒為例（圖2）：不經(jīng)過前處理的天麻樣品（T1）直接浸泡，天麻素難以析出，含量最低，僅為20.71 μg/mL，遠(yuǎn)低于其余處理，方差分析結(jié)果顯示與其余處理的差異均達(dá)到顯著水平；普通蒸鍋蒸制處理（T3～T8）下，蒸20 min（T3、T6）和25 min（T4、T7）后，無(wú)論直接浸泡白酒或烘干后浸泡白酒，天麻素含量在207.91 ～312.25 μg/mL，均高于蒸制30 min（T5、T8）的處理，由此可見蒸制時(shí)間過久，反而會(huì)導(dǎo)致天麻素含量的下降；高壓蒸15和20 min處理（T10、T11）后生產(chǎn)的配制酒中天麻素含量最高，分別達(dá)到了513.05和519.44 μg/mL，顯著高于其余處理。

2.6.3

不同前處理對(duì)小口徑容器天麻配制酒中對(duì)羥基苯甲醇含量的影響。由表4和圖3可知，除T10處理天麻配制酒中對(duì)羥基苯甲醇含量顯著高于其余處理外，其余處理間差異不顯著，可見多數(shù)前處理對(duì)對(duì)羥基苯甲醇析出的影響不大。

2.6.4

不同前處理對(duì)小口徑容器天麻配制酒色澤的影響。從圖4可以看出，不同前處理方式對(duì)小口徑容器天麻配制酒色澤影響較大。未經(jīng)前處理的生樣（T1）直接泡酒，隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)酒體色澤逐漸成為褐色和深褐色；高壓蒸汽蒸制后3個(gè)處理（T9～T11），天麻表皮發(fā)紅，浸泡后隨著時(shí)間推移，酒體色澤逐漸變?yōu)楹稚蜕詈稚黄溆嗲疤幚硐碌奶炻榻莼坪?，隨著浸泡時(shí)間延長(zhǎng)，酒體色澤變化不大，始終呈現(xiàn)淡黃色。在生產(chǎn)實(shí)際中，蒸鍋蒸制20～25 min直接浸制所得天麻配制酒酒體色澤呈現(xiàn)淡黃色（圖5），穩(wěn)定性好，具有較好的觀感。

3 結(jié)論與討論

該研究所用檢測(cè)方法線性關(guān)系、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性及精密性均表現(xiàn)良好，可廣泛用于天麻配制酒中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇定性和定量檢測(cè)。

該研究基于小口徑容器天麻配制酒的生產(chǎn)，研究發(fā)現(xiàn)：該配制酒中天麻素含量隨著時(shí)間推移不斷增加，于35 d開始逐步趨于穩(wěn)定；除個(gè)別處理對(duì)羥基苯甲醇含量隨時(shí)間推移有增加外，大多處理對(duì)羥基苯甲醇含量于7 d已趨于穩(wěn)定。為獲得較高含量的天麻藥效成分，小口徑容器天麻配制酒天麻浸泡時(shí)間不應(yīng)低于35 d。不同前處理對(duì)小口徑容器天麻配制酒中天麻素含量影響較大，浸泡時(shí)間在35 d時(shí)，高壓蒸汽蒸制15和20 min處理下天麻素含量較高，遠(yuǎn)高于其余處理，但高壓蒸汽處理后，天麻表皮褐化，從而導(dǎo)致浸泡后酒體顏色呈現(xiàn)褐色和紅褐色，極大影響了觀感；普通蒸鍋蒸制20和25 min，無(wú)論是趁鮮泡酒或烘干后再泡酒，天麻素含量均僅次于高壓蒸汽處理，且處理后浸泡所得配制酒酒體呈現(xiàn)淡黃色，觀感極佳；蒸制30 min處理下天麻素含量與蒸制20和25 min相比均呈現(xiàn)一定程度下降，說明蒸制時(shí)間過久反而導(dǎo)致其含量下降；小口徑容器中天麻不能取出，在瓶中將其烘干需要更多能耗，故蒸鍋蒸制后鮮樣直接浸泡處理為較優(yōu)選擇；除高壓蒸汽處理15和20 min會(huì)導(dǎo)致小口徑容器天麻配制酒中對(duì)羥基苯甲醇大幅增加外，其余前處理對(duì)其含量的影響不明顯。因此，蒸鍋蒸制20～25 min直接用基酒浸泡，所得天麻配制酒藥效成分含量高、酒體色澤觀感佳，是小口徑容器天麻配制酒較優(yōu)前處理方式。

傳統(tǒng)的天麻炮制也需要蒸制處理，以蒸透為準(zhǔn)，20～25 min為常用蒸制時(shí)間，但其天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量遠(yuǎn)低于高壓蒸汽處理15～20 min的處理，高壓蒸汽處理可嘗試作為天麻飲片炮制的新方法。

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