基于指紋圖譜和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的筋骨痛消液質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)*

王艷平，陳 菲，王小龍，黃 麗，王鵬飛，田 杰△

（1.寧夏回族自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院暨中醫(yī)研究院，寧夏 銀川 750021； 2.寧夏回族自治區(qū)中藥制劑創(chuàng)新工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750021）

筋骨痛消液由續(xù)斷、乳香、生桃仁、紅花、大黃、杏仁、天葵子、龍血竭、山楂、薄荷、冰片11味中藥材組方，具有活血化瘀通絡(luò)、祛寒散結(jié)止痛功效。適用于血瘀證，氣滯血瘀，肝、腎不足引起的各種脊柱退行性疾病，以及肩周炎、膝骨性關(guān)節(jié)炎等各部位骨性關(guān)節(jié)炎，臨床療效顯著。筋骨痛消液由多藥味組方，其藥味配伍關(guān)系和成分較復(fù)雜，檢測(cè)其中任何一種成分均不能代表其整體藥效，中藥復(fù)方制劑的復(fù)雜性導(dǎo)致中藥質(zhì)量控制指標(biāo)與其有效性關(guān)聯(lián)度低，且專屬性差。劉昌孝院士于2016 年首次提出質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）概念，旨在更好地控制中藥材和中成藥產(chǎn)品的質(zhì)量［1］。中藥指紋圖譜作為綜合、可量化的色譜鑒定手段，能較客觀地反映全方位的物質(zhì)基礎(chǔ)和化學(xué)成分群的整體信息，較好地體現(xiàn)成分的復(fù)雜性和相關(guān)性，廣泛用于整體評(píng)價(jià)藥材和制劑的質(zhì)量［2-3］。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于大數(shù)據(jù)的分析平臺(tái)，通過(guò)篩選中藥材中有效化合物成分，結(jié)合相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)中疾病的相關(guān)信息，篩選出藥物作用于疾病的靶點(diǎn)及機(jī)制網(wǎng)絡(luò)，行挖掘藥物作用及機(jī)制的相關(guān)數(shù)據(jù)，能直觀反映藥物與疾病的關(guān)聯(lián)程度［4-5］，揭示成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)關(guān)系圖可直觀反映藥物發(fā)揮藥效的特點(diǎn)。本研究中應(yīng)用中藥指紋圖譜并結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，對(duì)筋骨痛消液進(jìn)行質(zhì)量控制，并預(yù)測(cè)筋骨痛消液中潛在的Q-Marker，為后期深入研究其作用機(jī)制和質(zhì)量控制提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260 Infinity 型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司），配有G1311B 型四元泵，G4212B 型二極管陣列（DAD）檢測(cè)器，G1316A 型柱溫箱；Quintix224 -1CN 型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器< 北京> 有限公司，精度為萬(wàn)分之一）；DV215CD 型電子分析天平（美國(guó)Ohaus 公司，精度為萬(wàn)分之一）；KQ-500DB 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為250 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

11 - 羰基-β- 乙酰乳香酸對(duì)照品（批號(hào)為111760 - 201502，純度≥99.3%），川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品（批號(hào)為111685-201707，純度≥90.9%），苦杏仁苷對(duì)照品（批號(hào)為110820-201808，純度≥88.2%），羥基紅花黃色素A 對(duì)照品（批號(hào)為111637-201609，純度≥91.9%），大黃酸對(duì)照品（批號(hào)為110757 - 201607，純度≥99.3%），龍血素B 對(duì)照品（批號(hào)為111558 -201407，純度≥99.9%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；筋骨痛消液（中試樣品，寧夏回族自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院暨中醫(yī)研究院制劑室提供，批號(hào)分別為20211230，20211231，20211232，20220101，20220102，20220103，20220104，20220105，20220206，20220207，20220208，20220309，20220310，20220311，20220312，20220313，20220414，編號(hào)為S1-S17）；乙腈、甲醇均為色譜純，購(gòu)于美國(guó)Thermo Scientific 公司）；磷酸（色譜純，上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司）；甲酸（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：WondaSilTMC18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～10 min時(shí)8%A～11%A，10～30 min時(shí)11%A～15%A，30～70 min 時(shí)15%A～42%A，70～100 min 時(shí)42%A～57%A，100～110 min 時(shí)57%A～85%A，110～125 min 時(shí)85%A～90%A，125～130 min 時(shí)90%A～8%A；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；記錄時(shí)間：130 min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

分別取各對(duì)照品適量，精密稱定，置25 mL 容量瓶中，加甲醇適量，超聲（功率為250 W，頻率為40 kHz）使溶解，加甲醇定容，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。取對(duì)照品貯備液適量，制成質(zhì)量濃度分別為11-羰基-β-乙酰乳香酸0.118 mg/mL、川續(xù)斷皂苷Ⅵ0.331 mg/mL、苦杏仁苷0.396 mg/mL、羥基紅花黃色素A 0.153 mg/mL、大黃酸對(duì)照品0.785 mg/ mL、龍血素B 0.153 mg/ mL的混合對(duì)照品溶液。

精密量取中試樣品10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，超聲（功率為250 W，頻率為40 kHz）30 min，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

參照峰選擇：龍血竭中主要有效成分為龍血素B，其含量較高，化學(xué)性質(zhì)、峰面積穩(wěn)定，峰形較佳，分離度較好，保留時(shí)間適中，故選擇龍血素B為參照峰，以計(jì)算其余峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間。

精密度試驗(yàn)：取同批樣品適量，精密稱定，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6 次，記錄色譜圖，以峰27（龍血素B）作為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.13%（n= 6），相對(duì)峰面積的RSD均小于2.32%（n= 6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同批樣品6 份，按2.2 項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以峰27（龍血素B）作為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.19%（n= 6），相對(duì)峰面積的RSD均小于2.62%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同批樣品，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0，4，8，12，24，36，48 h 時(shí)按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以27 號(hào)峰（龍血素B）作為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于0.79%（n=7），相對(duì)峰面積的RSD均小于2.60%（n=7），表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 指紋圖譜建立

指紋圖譜建立：取17 批（編號(hào)為S1-S17）樣品，適量依法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，將所得圖譜導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012A 版），選擇供試品溶液（編號(hào)為S6 號(hào)）圖譜為參照?qǐng)D譜，采用平均數(shù)法，時(shí)間窗設(shè)為0.1，進(jìn)行全峰匹配，得到17 批樣品的高效液相色譜疊加指紋圖譜。詳見(jiàn)圖1。

圖1 17批筋骨痛消液高效液相色譜疊加指紋圖譜Fig.1 HPLC fingerprint of 17 batches of Jingu Tongxiao Tincture

相似度分析：將17批（編號(hào)為S1-S17）樣品的指紋圖譜導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012A版），計(jì)算相似度。結(jié)果相似度分別為0.988，0.995，0.995，0.997，0.998，0.998，0.997，0.989，0.996，0.999，0.995，0.998，0.981，0.993，0.987，0.989，0.992，均大于0.980，表明各批次樣品的相似度良好，共有成分基本一致，制劑質(zhì)量穩(wěn)定、均一。

共有峰指認(rèn)及歸屬：按2.2項(xiàng)下方法制備混合對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。經(jīng)Mark峰匹配后，共標(biāo)定29個(gè)共有峰（圖2），通過(guò)對(duì)比供試品溶液色譜峰和混合對(duì)照品溶液色譜峰的保留時(shí)間及DAD 光譜圖（圖3 至圖4），對(duì)供試品溶液色譜圖中的共有峰進(jìn)行歸屬，確認(rèn)6 個(gè)指紋峰。其中，2號(hào)峰為苦杏仁苷，5號(hào)峰為羥基紅花黃色素A，18號(hào)峰為川續(xù)斷皂苷Ⅵ，24 號(hào)峰為大黃酸，27 號(hào)峰為龍血素B，29號(hào)峰為11-羰基-β-乙酰乳香酸。

圖2 17批筋骨痛消液高效液相色譜圖共有模式Fig.2 Common patterns of HPLC chromatograms of 17 batches of Jingu Tongxiao Tincture

2.苦杏仁苷 5.羥基紅花黃色素A 18.川續(xù)斷皂苷Ⅵ 24.大黃酸 27.龍血素B 29.11 - 羥基- β-乙酰乳香酸圖3 混合對(duì)照品溶液高效液相色譜圖2.Amygdalin 5.Hydroxysafflor yellow A 18.Asperosaponin Ⅵ 24.Rhein 27.Loureirin B 29.Acetyl - 11 - keto - β - boswellic acidFig.3 HPLC chromatogram of the mixed reference solution

A，C，E，G，I，K.對(duì)照品溶液（苦杏仁苷、羥基紅花黃色素A、川續(xù)斷皂苷Ⅵ、大黃酸、龍血素B、11 - 羰基- β - 乙酰乳香酸）B，D，F(xiàn)，H，J，L.供試品溶液（苦杏仁苷、羥基紅花黃色素A、川續(xù)斷皂苷Ⅵ、大黃酸、龍血素B、11 - 羰基- β - 乙酰乳香酸）圖4 共有峰DAD光譜圖A.C，E，G，I，K.Reference solution（amygdalin，hydroxysafflor yellow A，asperosaponin Ⅵ，rhein，loureirin B，acetyl - 11 - keto - β - boswellic acid）B.D，F(xiàn)，H，J，L.Test solution（amygdalin，hydroxysafflor yellow A，asperosaponin Ⅵ，rhein，loureirin B，acetyl - 11 - keto - β - boswellic acid）Fig.4 DAD spectrograms of common peaks

2.5 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)分析

2.5.1 基于可測(cè)性和可溯性的候選化合物的活性成分靶點(diǎn)收集

11-羰基-β-乙酰乳香酸能活血、行氣、生肌、解毒、消腫、止痛，具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛效果［6-7］；川續(xù)斷皂苷Ⅵ可明顯減輕骨關(guān)節(jié)炎軟骨損傷及骨關(guān)節(jié)炎軟骨的炎性反應(yīng)，作用機(jī)制可能與上調(diào)miR-19a 的表達(dá)進(jìn)而激活人性別決定區(qū)Y 框蛋白（SOX9）mRNA 及蛋白、抑制核因子κB（NF-κB）mRNA 及蛋白有關(guān)，且能誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞［8-9］；羥基紅花黃色素A可促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化，有利于壞死股骨頭骨組織的修復(fù)，對(duì)激素性股骨頭缺血性壞死有較好的治療效果，還具有一定鎮(zhèn)痛作用［10-13］；大黃酸能抑制骨關(guān)節(jié)炎滑膜中炎性細(xì)胞的增生，減少軟骨Ⅱ型膠原蛋白細(xì)胞的丟失，抑制和延緩軟骨細(xì)胞凋亡，并能激活骨骼肌組織中相關(guān)通路，顯著延長(zhǎng)肥胖小鼠的力竭運(yùn)動(dòng)距離和時(shí)間，增加其抗疲勞性，改善運(yùn)動(dòng)耐力［14-16］；苦杏仁苷能有效抑制關(guān)節(jié)炎模型大鼠外周血中炎性因子及滑膜蛋白的表達(dá)，干擾對(duì)關(guān)節(jié)滑膜的損傷，起到抗炎鎮(zhèn)痛和保護(hù)軟骨作用［17-18］。結(jié)合筋骨痛消液的組方及功能主治，上述成分均可得到指認(rèn)和測(cè)定，且具有可溯性，通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）、PubChem、Swiss Target Predict等，共得到苦杏仁苷、羥基紅花黃色素A、川續(xù)斷皂苷Ⅵ、大黃酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸5個(gè)候選化合物相關(guān)的146個(gè)作用靶點(diǎn)。龍血竭為方中佐藥，其主要成分龍血素B未納入候選化合物。

2.5.2 疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集建立

以“osteoarthritis”為關(guān)鍵詞，檢索OMIM，TTD，Gene-Cards 數(shù)據(jù)庫(kù)自建庫(kù)起至2022 年5 月9 日的相關(guān)信息，去重后共獲得疾病靶點(diǎn)1 512 個(gè)。利用Venny 2.1 在線作圖工具平臺(tái)，輸入146 個(gè)藥物靶點(diǎn)、1 512 個(gè)疾病靶點(diǎn)，繪制維恩圖，取交集后獲得藥物- 疾病共有靶點(diǎn)50個(gè)，詳見(jiàn)圖5。

圖5 5種化合物-骨關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)維恩圖Fig.5 Venn diagram of five compound - osteoarthritis targets

2.5.3 蛋白-蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：// string - db.org/）構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)入篩選的50 個(gè)共有靶點(diǎn)，選擇物種為“Homosapiens”，最低相互作用閾值為0.4，詳見(jiàn)圖6。將得到的數(shù)據(jù)用.tsv格式導(dǎo)入Cystoscap 3.8.2軟件中，通過(guò)NetworkAnalyzer 工具進(jìn)行拓?fù)浞治?，根?jù)度值大小排序，選取度值大于平均分的基因作為核心靶點(diǎn)進(jìn)行排序，使用R 4.0.5 軟件繪制條形圖，詳見(jiàn)圖7。結(jié)果顯示，筋骨痛消液治療骨關(guān)節(jié)炎的核心靶點(diǎn)包有白蛋白（ALB）、JUN、酪氨酸激酶（SRC 蛋白）、環(huán)加氧酶2（PTGS2）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等有關(guān)。

圖6 筋骨消痛液治療骨關(guān)節(jié)炎的PPI網(wǎng)絡(luò)Fig.6 PPI network of Jingu Tongxiao Tincture in the treatment of osteoarthritis

圖7 基于PPI拓?fù)浞治龅暮诵陌悬c(diǎn)排序Fig.7 Sorting of key targets based on PPI topology analysis

2.5.4 基因本體論（GO）功能富集分析

利用David 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)上述獲得的共有靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析，包括生物過(guò)程（BP）、細(xì)胞組分（CC）、分子功能（MF），各篩選前10 條重要通路，并使用R 語(yǔ)言對(duì)富集結(jié)果進(jìn)行可視化，選取每部分P值排名前10 的通路繪制氣泡圖，詳見(jiàn)圖8。結(jié)果顯示，交集基因富集至197條BP、35條CC、64條MF相關(guān)的過(guò)程中。其中，BP包括蛋白質(zhì)水解（proteolysis）、膠原分解代謝過(guò)程（collagen catabolic process）、MAPK 活性負(fù)調(diào)控（negative regulation of MAP kinase activity）等；CC 包括細(xì)胞外區(qū)（extracellular region）、細(xì)胞外間隙（extracellular space）、ficolin-1-rich顆粒腔（ficolin-1-rich granule lumen）等；MF 包括絲氨酸型內(nèi)肽酶活性（serine - type endopeptidase activity）、酶結(jié)合（enzyme binding）、MAPK 活性（MAP kinase activity）等。

圖8 筋骨痛消液治療骨關(guān)節(jié)炎的GO富集分析P值排名前10的通路氣泡圖Fig.8 Bubble chart of the pathway with the top 10 P - value ranking in GO enrichment analysis for Jingu Tongxiao Tincture in the treatment of osteoarthritis

2.5.5 京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析

利用David 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行KEGG 通路富集分析，設(shè)置P<0.01，選取P值排名前20 的通路繪制KEGG 通路富集的氣泡圖（圖9），各通路富集靶點(diǎn)見(jiàn)表1。將50 個(gè)共有靶點(diǎn)經(jīng)David 數(shù)據(jù)庫(kù)KEGG 通路富集分析后，共得到90 條KEGG 通路。- log10（P- value）代表富集的顯著性，顏色越紅，顯著性越高。結(jié)果顯示，筋骨痛消液治療骨關(guān)節(jié)炎與脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化（Lipid and atherosclerosis）、松弛素（Relaxin signaling pathway）、白細(xì)胞介素17（IL - 17 signaling pathway）、破骨細(xì)胞分化（Osteoclast differentiation）、凋亡（Apoptosis）、C 型凝集素受體信號(hào)通路（C-type lectin receptor signaling pathway）、Th17 細(xì)胞分化（Th17 cell differentiation）等信號(hào)通路相關(guān)。

表1 KEGG通路富集分析筋骨痛消液治療骨關(guān)節(jié)炎P值排名前20的通路富集靶點(diǎn)Tab.1 Target genes of the pathway with the top 20 P - value ranking in KEGG pathway enrichment analysis for Jingu Tongxiao Tincture in the treatment of osteoarthritis

2.5.6 成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及Q-Marker 分析

將筋骨痛消液中5個(gè)化合物、對(duì)應(yīng)的核心靶點(diǎn)和通路導(dǎo)入Cystoscap 3.8.2 軟件，構(gòu)建成分- 靶點(diǎn)- 通路網(wǎng)絡(luò)（圖10）。結(jié)果顯示，11-羰基-β-乙酰乳香酸（度值25）、川續(xù)斷皂苷Ⅵ（度值21）、羥基紅花黃色素A（度值19）、大黃酸（度值19）、苦杏仁苷（度值21）與各靶點(diǎn)連接度較高，表明上述5種成分可能為筋骨痛消液主要活性成分潛在的Q -Marker。ALB（度值38）、JUN（度值28）、SRC（度值27）、雌激素受體1（ESR1，度值24）、PTGS2（度值21）、膜聯(lián)蛋白A5（ANXA5，度值19）、MAPK14（度值18）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARG，度值18）、MAPK8（度值17）、一氧化氮合酶（NOS3，度值17）等核心靶點(diǎn)，通過(guò)作用于脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、松弛素、IL - 17、破骨細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、C 型凝集素受體、Th17 細(xì)胞分化、MAPK、Toll 樣受體、T 淋巴細(xì)胞受體、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、NOD 樣受體等信號(hào)通路，共同影響膝骨關(guān)節(jié)炎及骨質(zhì)疏松的發(fā)生與發(fā)展。

圖10 筋骨痛消液治療骨關(guān)節(jié)炎的成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)Fig.10 Component - target - pathway network of Jingu Tongxiao Tincture in the treatment of osteoarthritis

3 討論

本研究中分別考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水溶液及乙腈-0.1%甲酸水溶液4 種不同流動(dòng)相下色譜峰的分離情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲醇- 水、乙腈- 0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相時(shí)指紋圖譜色譜峰的峰形較差，分離度不好；乙腈- 0.1 %磷酸水溶液作為流動(dòng)相時(shí)色譜峰分離效果較乙腈- 水好，且基線較平穩(wěn)，故選擇乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。分別于210，220，230，240，250，260，270 nm 波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)210 nm 和220 nm 波長(zhǎng)處指紋圖譜的色譜峰多，但220 nm 波長(zhǎng)處出峰更穩(wěn)定，分離度好，基線平穩(wěn)，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm?？疾炝酥鶞兀?5，30，35 ℃），流速（0.8，1.0，1.2 mL/min），以及不同類型色譜柱［WondaSilTMC18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm），Luna?C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Agilent Eclipse-Plus C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）］對(duì)色譜行為的影響。最終確定2.1項(xiàng)下色譜條件。

通過(guò)建立筋骨痛消液指紋圖譜色譜條件，對(duì)17 批筋骨痛消液高效液相色譜指紋圖譜相似度進(jìn)行評(píng)價(jià)，共標(biāo)定了29 個(gè)共有峰，并對(duì)6 個(gè)峰的成分進(jìn)行指認(rèn)和歸屬，并運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)了11-羰基-β-乙酰乳香酸、川續(xù)斷皂苷Ⅵ、羥基紅花黃色素A、大黃酸、苦杏仁苷5 個(gè)Q-Marker。本研究中利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法闡述了筋骨痛消液治療骨關(guān)節(jié)炎的潛在作用機(jī)制。PPI網(wǎng)絡(luò)結(jié)果顯示，不同靶點(diǎn)間存在密切的相互作用，更易產(chǎn)生級(jí)聯(lián)效應(yīng)。上述靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)于筋骨痛消液中的多個(gè)組成部分，這一點(diǎn)充分體現(xiàn)了中藥多靶點(diǎn)、多組分的特點(diǎn)。通過(guò)度值篩選發(fā)現(xiàn)，ALB，JUN，SRC，ESR1，PTGS2，ANXA5，MAPK14，PPARG，MAPK8，NOS3 等具有較高度值，位于靶點(diǎn)間相互作用網(wǎng)絡(luò)的核心位置，可能是骨關(guān)節(jié)炎的易感基因。指紋圖譜作為質(zhì)量控制的手段，還需結(jié)合多指標(biāo)成分的含量測(cè)定、出膏率、大類成分含量測(cè)定等方法對(duì)經(jīng)典名方的質(zhì)量進(jìn)行全方位控制。

綜上所述，本研究中建立的筋骨痛消液高效液相色譜指紋圖譜對(duì)制劑的整體質(zhì)量進(jìn)行把控，為全面控制其質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)；結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果，筋骨痛消液能作用于軟骨細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等與骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的細(xì)胞；同時(shí)，筋骨痛消液具有多靶點(diǎn)、多通道的特點(diǎn)，對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎有較好的治療作用；其中，11 - 羰基-β- 乙酰乳香酸、川續(xù)斷皂苷Ⅵ、羥基紅花黃色素A、大黃酸、苦杏仁苷5 個(gè)成分均具有傳遞性和溯源性，初步預(yù)測(cè)可作為筋骨痛消液的潛在Q - Marker。未來(lái)研究中需開(kāi)展基礎(chǔ)研究進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步明確筋骨痛消液Q - Marker 的準(zhǔn)確性。