SIRT1基因啟動(dòng)子區(qū)rs3758391位點(diǎn)突變與不同分級(jí)老年高血壓易感性及療效關(guān)系

徐煒棉,楊凱瑞,李 寧,王國(guó)峰

目前,一般認(rèn)為高血壓與飲食習(xí)慣、年齡、遺傳以及環(huán)境等因素密切關(guān)聯(lián),但具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,研究[1]認(rèn)為,血管活性物質(zhì)的異常表達(dá)使得外周血管平滑肌過(guò)度收縮,進(jìn)而增加外周阻力,參與高血壓的發(fā)生發(fā)展。其中,內(nèi)皮型一氧化氮(nitric oxide,NO)合酶是機(jī)體重要的血管舒張因子,于血管內(nèi)皮中產(chǎn)生NO,刺激血管擴(kuò)張,進(jìn)而降低血壓,從而發(fā)揮良好的心血管保護(hù)作用[2-3]。近年研究[4]發(fā)現(xiàn),沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1,SIRT1)對(duì)血管衰老具有明顯保護(hù)作用,其通過(guò)上調(diào)內(nèi)皮型NO合酶而誘導(dǎo)NO產(chǎn)生,發(fā)揮血管舒張作用,從而有效緩解或者遏制血壓升高。國(guó)內(nèi)外研究[5-6]報(bào)道,通過(guò)藥物基因?qū)W研究尋找與高血壓易感性、療效相關(guān)的基因多態(tài)性,可指導(dǎo)臨床個(gè)性化精準(zhǔn)治療,從而提高療效。SIRT1基因多態(tài)性已被證實(shí)與高血壓的發(fā)生、發(fā)展密切關(guān)聯(lián),但其與老年高血壓病人不同分級(jí)易感性的關(guān)系及對(duì)治療效果的預(yù)測(cè)價(jià)值尚不明確,本研究通過(guò)分析老年高血壓病人SIRT1基因啟動(dòng)子區(qū)rs3758391位點(diǎn)多態(tài)性,從分子水平研究其與高血壓易感性和療效關(guān)系,以期為臨床個(gè)性化治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018-2020年收治的老年高血壓病人220例作為觀察組,其中男126例,女94例,年齡60～88歲;選取同期健康體檢者185名作為對(duì)照組,其中男95名,女90名,年齡60～86歲。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)高血壓病人符合診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],病人連續(xù)3次測(cè)量血壓≥140/90 mmHg;(2)對(duì)照組無(wú)高血壓治療史,且入組時(shí)測(cè)量血壓<140/90 mmHg;(3)年齡≥60歲;(4)依從性好,無(wú)明顯認(rèn)知障礙,病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)各種原因?qū)е碌睦^發(fā)性高血壓;(2)惡性腫瘤、糖尿病、甲狀腺疾病;(3)嚴(yán)重心、肝、腎等功能障礙;(4)伴隨免疫、血液、神經(jīng)系統(tǒng)疾病;(5)無(wú)法配合研究或隨訪者。2組受試者性別、年齡等一般資料具有可比性。本研究獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 基因檢測(cè) 采集受試者外周肘靜脈血(EDTA抗凝),DNA提取試劑盒[凱杰生物工程(深圳)有限公司]提取全血基因組DNA,DYY-10C型瓊脂糖電泳儀(北京六一儀器廠)、OneC型紫外可見分光光度計(jì)(美國(guó)賽默飛世爾公司)檢測(cè)DNA質(zhì)量和濃度,將DNA樣本稀釋至同一濃度,4 °C保存。根據(jù)GenBank、NCBI等數(shù)據(jù)庫(kù)尋找SIRT1基因序列號(hào),借助Primer 5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物,SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)引物序列:5′-ACG CAG GTA ATT GAT GCA GT-3′(上游),5′-CGT GAG CTA TCT AGC CGT T-3′(下游)。PCR反應(yīng)體系共20 μL,包括上、下游引物各1 μL,0.5 μL Taq酶,1 μL Ready Reaction Premix,3.5 μL BigDye sequencing Buffer,2 μL DNA模版,無(wú)菌水定容至20 μL。PCR擴(kuò)增條件,94 ℃×15 min;94 ℃×20 s,56 ℃×30 s,72 ℃×1 min,共40個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后,應(yīng)用ABI3730測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序,使用BLAST軟件同源性分析測(cè)序結(jié)果。

1.3 血壓檢測(cè)與分級(jí) 檢測(cè)2組受試者收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。觀察組病人均口服硝苯地平緩釋片20 mg/d進(jìn)行治療,共5周,治療后血壓<140/90 mmHg表明控制良好。高血壓分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[7]:1級(jí),SBP 140～<159 mmHg,DBP 90～<99 mmHg;2級(jí),SBP 160～<179 mmHg,DBP 100～<109 mmHg;3級(jí),SBP≥180 mmHg,DBP≥110 mmHg。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t檢驗(yàn)、方差分析、q檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 2組基因型和等位基因頻率分布比較 SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)存在T、C 2種等位基因,2組基因型和等位基因頻率分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表1)。

表1 2組基因型和等位基因分布比較

2.2 觀察組不同高血壓分級(jí)病人基因型和等位基因頻率分布比較 觀察組不同高血壓分級(jí)病人的基因型和等位基因頻率分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表2)。

表2 觀察組不同分級(jí)病人基因型和等位基因頻率分布比較

2.3 觀察組不同高血壓分級(jí)病人治療前后血壓比較 觀察組1～3級(jí)高血壓病人經(jīng)硝苯地平治療后,SBP、DBP均較治療前明顯降低(P<0.01)。治療前,1～3級(jí)不同基因型病人SBP和DBP差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),治療后,TT基因型病人SBP和DBP均低于CT、CC基因型(P<0.05～P<0.01)(見表3～5)。

表3 1級(jí)高血壓病人治療前后血壓比較

表4 2級(jí)高血壓病人治療前后血壓比較

表5 3級(jí)高血壓病人治療前后血壓比較

2.4 rs3758391位點(diǎn)基因型對(duì)老年高血壓療效預(yù)測(cè) 觀察組220例病人中,控制良好者186例,控制不良者34例,其中TT型病人的控制良好率(90.16%,110/122)高于CT+CC型病人(77.55%,76/98)(χ2=2.56,P<0.05)。

3 討論

高血壓的主要特點(diǎn)為體循環(huán)動(dòng)脈血壓持續(xù)升高,可導(dǎo)致心、腦、腎等組織器官發(fā)生器質(zhì)性病變(冠心病、腦卒中、腎功能不全等),既往研究[8-9]證實(shí),老年性高血壓已成為多種心腦血管事件的危險(xiǎn)因素。高血壓屬于多因素遺傳性疾病,具體發(fā)病機(jī)制仍處于研究中,有研究[10]認(rèn)為,機(jī)體衰老可增加高血壓發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),且隨著年齡增長(zhǎng),高血壓發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈增加趨勢(shì),可能原因?yàn)槔夏耆巳旱难芙Y(jié)構(gòu)改變以及功能減退,如大動(dòng)脈彈性下降、血管粥樣硬化等。另外,也有研究[11]認(rèn)為老年人群的生理機(jī)能減退,腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)反應(yīng)性降低,從而導(dǎo)致高血壓的發(fā)生發(fā)展。研究[12]發(fā)現(xiàn),SIRT1基因與與年齡相關(guān)疾病存在相關(guān)性,SIRT1基因多態(tài)性可影響血壓水平以及冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。SIRT1可上調(diào)內(nèi)皮型NO合酶活性以及抑制血管緊張素受體1,從而促進(jìn)NO合成,舒張血管,發(fā)揮心血管保護(hù)功能。

本次研究結(jié)果顯示,SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)存在T、C 2種等位基因,觀察組和對(duì)照組的基因型、等位基因頻率分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,觀察組不同高血壓分級(jí)的基因型和等位基因頻率分布差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可能rs3758391位點(diǎn)的T→C突變導(dǎo)致SIRT1基因轉(zhuǎn)錄活性降低,進(jìn)而下調(diào)SIRT1基因mRNA表達(dá)以及降低SIRT1蛋白表達(dá),使血管舒張活性減退,故而與高血壓的發(fā)生密切相關(guān)。有研究[13]發(fā)現(xiàn),C等位基因與轉(zhuǎn)錄因子p53的親和力明顯降低,進(jìn)而使得SIRT1基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性降低,參與高血壓的進(jìn)展。臨床研究[14]發(fā)現(xiàn),與健康對(duì)照組比較,高血壓組具有更高的C等位基因頻率,SIRT1基因mRNA相對(duì)表達(dá)量更低。以上研究提示SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)突變導(dǎo)致SIRT1基因表達(dá)降低,該位點(diǎn)多態(tài)性與老年高血壓易感性存在相關(guān)性。

良好控制血壓對(duì)于減少心血管事件以及改善預(yù)后具有重要臨床價(jià)值[15]。硝苯地平是常用降壓藥物,臨床研究[16-17]發(fā)現(xiàn),硝苯地平降壓效果存在明顯的個(gè)體差異,不同個(gè)體給予相同劑量降壓效果存在差異。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療理念的推進(jìn)以及基因組測(cè)序技術(shù)發(fā)展,越來(lái)越多研究關(guān)注基因多態(tài)性與降壓效果關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果顯示,1～3級(jí)老年高血壓病人經(jīng)硝苯地平治療后,TT基因型病人SBP、DBP均低于CT和CC基因型(P<0.05),提示SIRT1基因rs3758391位點(diǎn)TT基因型病人對(duì)硝苯地平的敏感性較高。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),TT型病人的血壓控制良好率高于CT+CC型病人,提示TT基因型病人的降壓效果較好,臨床上可結(jié)合rs3758391位點(diǎn)基因型預(yù)測(cè)病人預(yù)后,CC基因型病人可通過(guò)聯(lián)用或換用其他降血壓藥物以達(dá)到良好的血壓控制效果。

綜上,SIRT1基因啟動(dòng)子區(qū)rs3758391位點(diǎn)突變與不同分級(jí)老年高血壓易感性以及血壓控制效果密切相關(guān),含有C等位基因的病人高血壓分級(jí)相對(duì)較高,血壓控制效果相對(duì)較差,SIRT1可幫助預(yù)測(cè)高血壓病人治療效果。