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    辣木葉多酚提取及抗氧化能力研究

    2023-12-02 09:29:04李天嬌程碧君張芳瑋張峻旗董禹辰
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2023年20期
    關(guān)鍵詞:辣木木葉自由基

    李天嬌,程碧君,張芳瑋,張峻旗,董禹辰

    (吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院食品工程學(xué)院,吉林吉林 132101)

    辣木,廣泛分布于熱帶地區(qū),在廣東、海南等地區(qū)有種植區(qū)。種子可以提取高級(jí)潤(rùn)滑油,辣木葉子可以作為湯的調(diào)味料,味道鮮美。新采摘的辣木葉還可以作為野菜食用[1]。辣木有許多藥用價(jià)值,如用于治療偏頭痛、頭暈、呼吸不暢、上火、尿黃、胃脹氣、食欲不振、胃腸區(qū)痙攣,以及各種癌癥[2-3]。辣木葉富含礦質(zhì)元素、維生素、糖苷和多酚類化合物等活性物質(zhì)。辣木葉具有良好的抗氧化、抑菌、降低血壓、血脂和血糖,并改善機(jī)體的內(nèi)臟器官、抑制人體內(nèi)的DNA 分子損傷、良好的調(diào)節(jié)胃腸道微生物等多種生物活性[4-5]。選擇辣木葉為研究對(duì)象對(duì)辣木葉多酚進(jìn)行提取。經(jīng)過試驗(yàn)獲得了最佳工藝條件,采用DPPH 自由基清除、羥自由基清除試驗(yàn)研究辣木葉多酚抗氧化性能。探索辣木葉多酚的提取方法,并研究辣木葉多酚的抗氧化能力,對(duì)辣木葉多酚的開發(fā)利用提供借鑒。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    辣木葉,市售;沒食子酸、福林酚、DPPH、鄰苯三酚等,天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司提供。

    1.2 儀器與設(shè)備

    AL204 型電子天平,梅特勒- 托利公司產(chǎn)品;ST-02A 型多功能粉碎機(jī),上海樹立儀器儀表有限公司產(chǎn)品;DHG-9240A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品;UV-8000A 型可見分光光度計(jì),尤尼柯儀器有限公司產(chǎn)品。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 辣木葉多酚的提取

    將新買的新鮮辣木葉子洗凈,除去表面的異物,放在托盤中,用保鮮膜包起來,在表面上打幾個(gè)小孔,保持通風(fēng)。最后,放入干燥箱中,干燥至恒定質(zhì)量,取出干燥的辣木葉子,用破碎機(jī)粉碎,過篩(40 目),放入密封袋中,放在陰涼干燥地方備用。稱取辣木葉粉1.0 g,按不同的料液比加入不同體積分?jǐn)?shù)乙醇。放入試管中,用玻璃棒攪拌均勻,在恒溫水浴中振蕩提取。然后放入離心機(jī)中,以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心10 min。上清液放入50 mL 容量瓶中為后續(xù)測(cè)試做準(zhǔn)備[6]。

    1.3.2 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

    沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL,取出6 個(gè)15 mL 比色管,6 個(gè)比色管依次加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL 沒食子酸溶液,各管補(bǔ)加蒸餾水至1 mL,然后在每個(gè)比色管中加入1.5 mL 福林酚試劑,加入3 mL 的質(zhì)量濃度為75 g/mL 碳酸鈉試劑,最后加入蒸餾水至體積為10 mL,靜置2 h,在波長(zhǎng)752 nm 處測(cè)定其吸光度,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,以1 號(hào)管測(cè)得的吸光度為空白,以沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),最后得到多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y[7]。

    1.3.3 多酚得率計(jì)算

    辣木葉多酚產(chǎn)量按照以下公式計(jì)算[8]:

    式中:C——提取液中多酚的質(zhì)量濃度,mg/mL;

    V——提取液的體積,mL;

    M——稱取的辣木葉粉的質(zhì)量,mg。

    1.3.4 單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)

    分別考查乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、浸提時(shí)間、浸提溫度對(duì)辣木葉多酚得率的影響。根據(jù)單因素結(jié)果,設(shè)計(jì)四因素三水平正交試驗(yàn),根據(jù)辣木葉片多酚的得率,確定最佳提取條件。

    辣木葉多酚提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

    表1 辣木葉多酚提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    1.3.5 體外抗氧化試驗(yàn)

    (1) DPPH 自由基清除試驗(yàn)。準(zhǔn)確配制DPPH 濃度為0.2 mo1/L,辣木葉多酚溶液1 mL 加入到干凈的試管中,加入3 mL DPPH 溶液,混合均勻,放在黑暗中靜置30 min,在波長(zhǎng)517 nm 處測(cè)得吸光度為A1。另一試管中加入3 mL 無水乙醇溶液,并將1 mL不同質(zhì)量濃度的辣木葉多酚溶液加入試管中,混合均勻后,在黑暗中靜置30 min,在波長(zhǎng)517 nm 處測(cè)定吸光度為A2。另取試管放入3 mL DPPH 溶液和1 mL無水乙醇溶液,混合后,將其置于黑暗中30 min,在波長(zhǎng)517 nm 處的吸光度為A0,以相同濃度的維C 作為對(duì)照試驗(yàn)[9]。

    (2) 羥基自由基清除試驗(yàn)。量取1 mL 不同質(zhì)量濃度的辣木葉多酚溶液,分別加入5 個(gè)試管中,依次加入濃度為9 mmol/L 的FeSO4溶液1 mL 和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.8%的H2O2溶液1 mL,濃度為9 mmol/L 的水楊酸溶液1 mL,振蕩至完全混合,然后在37 ℃的水浴中放置30 min,在波長(zhǎng)510 nm 處測(cè)量吸光度為A1,另外取5 個(gè)試管用蒸餾水代替H2O2,其他條件不變,吸光度為A2。取另一試管用蒸餾水代替辣木葉多酚溶液,其他條件不變,測(cè)定吸光度為A0,以相同濃度的維C 代替作為對(duì)照試驗(yàn)[10]。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s) 表示,使用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析,以p<0.05差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

    線性回歸方程:Y=9.628 6X-0.004 8,R2=0.998 5。

    沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

    圖1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

    2.2 辣木葉多酚提取結(jié)果

    2.2.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)辣木葉多酚得率的影響見圖2。

    圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    由圖2 可知,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為55%時(shí),辣木葉片中的多酚被提取。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)小于65%時(shí),可以連續(xù)提取辣木葉片中的多酚,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)大于65%時(shí),從辣木葉片中提取多酚的量減少,而不是先前的增加??赡苁怯捎谝掖俭w積分?jǐn)?shù)增加,從辣木葉中提取其他物質(zhì),類似脂類或醇溶性物質(zhì),與多酚競(jìng)爭(zhēng)溶解,導(dǎo)致多酚溶解的最終原因[11]。

    2.2.2 料液比對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    料液比對(duì)辣木葉多酚得率的影響見圖3。

    圖3 料液比對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    由圖3 可知,當(dāng)料液比為1∶20(g∶mL) 時(shí),辣木葉中多酚的得率最大,料液比為1∶10~1∶15(g∶mL) 時(shí),辣木葉片中的多酚可以連續(xù)提取,當(dāng)料液比1∶20(g∶mL) 時(shí),辣木葉片中多酚的得率會(huì)下降,可能是由于料液比增加,乙醇體積分?jǐn)?shù)增加,更多的乙醇可溶性物質(zhì)被提取出來,會(huì)減少多酚溶于乙醇的量[12]。

    2.2.3 提取溫度對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    提取溫度對(duì)辣木葉多酚得率的影響見圖4。

    圖4 提取溫度對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    由圖4 可知,辣木葉片中的多酚在35~65 ℃的提取溫度下可以連續(xù)提取,在65~75 ℃時(shí),辣木葉片中的多酚得率減少??赡苁怯捎诶蹦救~中物質(zhì)的破壞或辣木葉中多酚的破壞,導(dǎo)致辣木葉中多酚的得率降低[13]。

    2.2.4 提取時(shí)間對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    提取時(shí)間對(duì)辣木葉多酚得率的影響見圖5。

    圖5 提取時(shí)間對(duì)辣木葉多酚得率的影響

    由圖5 可知,提取時(shí)間為30~120 min 時(shí),辣木葉片中的多酚可以連續(xù)提取,在120~150 min 時(shí),辣木葉片中的多酚得率減少??赡苁怯捎谔崛r(shí)間太長(zhǎng)而無法破壞辣木葉片中的物質(zhì)或辣木葉片中的多酚,導(dǎo)致從辣木葉片中提取多酚得率降低[14]。

    2.2.5 辣木葉多酚提取正交試驗(yàn)結(jié)果

    辣木葉多酚提取正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。

    表2 辣木葉多酚提取正交試驗(yàn)結(jié)果

    由表2 可知,影響辣木葉片多酚得率的因素為A>B>D>C,說明最佳提取條件為A3B1C3D2,即最佳條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,料液比1∶15(g∶mL),提取時(shí)間120 min,提取溫度65 ℃。根據(jù)這種組合進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。此時(shí)得率為0.515 4%。

    2.3 辣木葉多酚體外抗氧化試驗(yàn)

    2.3.1 DPPH 自由基清除測(cè)定

    DPPH 自由基清除測(cè)定見圖6。

    圖6 DPPH 自由基清除測(cè)定

    由圖6 可知,在不同質(zhì)量濃度的辣木葉多酚條件下,清除率呈現(xiàn)良好的上升狀態(tài),且無拐點(diǎn)出現(xiàn)。選擇抗氧化劑維C 作為試驗(yàn)的對(duì)照品。在維C的質(zhì)量濃度逐漸提高,清除率呈上升狀態(tài),說明維C具有一定的清除DPPH 的能力,但辣木葉多酚清除DPPH 的效果優(yōu)于維C。因此可以看出,辣木葉多酚溶液具有很強(qiáng)的清除DPPH 自由基的能力。

    2.3.2 羥基自由基清除測(cè)定

    羥基自由基清除測(cè)定見圖7。

    圖7 羥基自由基清除測(cè)定

    由圖7 可知,在不同質(zhì)量濃度的辣木葉多酚條件下,清除率呈良好的上升狀態(tài)。維C的質(zhì)量濃度逐漸提高,清除率呈上升狀態(tài),表明維C對(duì)羥基自由基具有一定的清除能力,但維C對(duì)羥基自由基的清除效果不如辣木葉多酚。

    3 結(jié)論

    選用辣木葉片為原料,采用乙醇提取辣木葉片中的多酚。試驗(yàn)表明,乙醇提取辣木葉多酚的最佳工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,料液比1∶15(g∶mL),提取時(shí)間120 min,提取溫度65 ℃。在此條件下,多酚的得率可達(dá)0.515 4%。經(jīng)過DPPH 自由基和羥自由基清除抗氧化能力試驗(yàn)表明,辣木葉片多酚具有較強(qiáng)的抗氧化能力,為辣木葉片多酚的體外抗氧化試驗(yàn)提供了應(yīng)用指導(dǎo),為抗氧化產(chǎn)品的開發(fā)提供了技術(shù)依據(jù),為合理開發(fā)辣木葉資源提供了有效途徑。

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